细胞凋亡检测 doc

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1 [ ] cell apoptosis detection BMS306FI rh Annexin V FITC KIT 300 test 5000 ANNEXIN V rh Annexin V FITC KIT 200 test 4880 BMS306FI/100T rh Annexin V FITC KIT 100 test 2850 BMS306FI/c rh Annexin V FITC KIT 020 test

2 [ ]

3 [ ]

4 [ ] PBS 200g C 1ml 4 30min 4 C 5200g ml PBS

5 [ ] Hoechst

6 [ ] eochst / PI

7 [ ]

8 [ ]

9 [ ]

10 [ ]

11 [ ] PI COULTER BD 2 1 PBS rpm 400l 1 Binding Buffer 2 abcde a 4b 2% 30 Annexin V PI 5c 10l PI 15 6d 5l Annexin-V 15 7e 10l PI 5l Annexin-V 15min 8 400l 1 Binding Buffer 3 1 a Annexin V vs PI R1 2 d FITC FL2 3 3 c PI FL1 4 b 90% 5 e

12 [ ]

13 [ ] DNA

14 [ ]

15 [ ] T DEX DNA SSC

16 [ ]

17 [ ]

18 [ ] ISEL

19 [ ] Dig-11-dUTP DNA 3 -OH 1% Fc FC [ ] [ ] 1 PBSpH7.4 PBS50mmol/LNaCl 200mmol/L 2 K200g/ml K 0.02gPBS 100mlpH % 30%2.0ml 98.0mlpH7.4 4TdT Trizma 3.63g 0.1N HCl ph [CH 3 2AsO 2 Na. 3H 2 O] CoCCl. 2 6H 2 O 5TdT TdT 76lTdT Dig-11-dUTP 6 NaCl 17.4g 8.82g 1000ml 70.05%W:V DAB DAB 5mgPBS 5mlph7.4 H 2 O %V:V 80.5%W:V 0.5g0.1mmol/L 100mlpH % 100%95%90%80%70% 10% 10 ONCOR

20 [ ] [ ] %75% 3 PBS 5 K 20l/ml % PBS 5 2: PBS % l PBS % PBS 5 PBS TdT lTdT 37 1 TdT PBS PBS %DAB % DNase 1mol/L 34 TdT 2 dutp/

21 [ ] Dig-11-dTUP TdT DNA 3 -OH 494nm 525nm DNA DNA DNA [ ] [ ] 1 PBSpH7.4 50mmol/LNaCl 200mmol/L 2 K200 K0.02gPBS 100mlpH % PBSpH %95%90%80%70% RNA 5Trizma ph7.2 Trizma 3.63g 0.1N HCl ph 7.2 [CH 3 2AsO 2 Na. 3H 2 O] 29.96g CoCCl. 2 6H 2 O 0.238g 1000ml 6TdT 76lTdT 32l 7 NaCl 17.4g 8.82g 1000ml 8 FITC 1%BSA PBS 56l ONCOR49l 9 0.1% Triton X-100 PBSTriton X mlPBS 128.7mlpH PI PI 50g RNA mg PBS 10mlpH7.4 [ ] %75% 3 PBS 5 K % PBS PBS /ml 4%

22 [ ]

23 [ ] /ml 4% µl PBS %H 2 O 2 30min 30.15mol/L PBS mol/L PBS 2 5 K mol/L PBS 2 5 8TdT 10min 9TdT 37 1h mol/L PBS 2 5 dutp

24 [ ] [ ] [ ] 1 PBSpH7.4 2 K200g/ml K 0.02gPBS 100mlpH %95%90%80%70% 10% RNA 4TdT ph7.2 5TdT 76µlTdT 32µlDig-11-dUTP 6 µl ONCOR49µl 8 0.1% Triton X-100 PBSTriton X mlPBS 128.7mlpH PI PI50µgRNA mgPBS 10mlpH ml PBS 1% PBS rpm 5 10ml PBS `5 70% rpm 5 1ml PBS 1.5ml 3 2 TdT 50µl TdT ml 1.0ml 5 100µl % Trito X-100 PBS 7 1.0ml nm 620nm PI DNase I 1µM

25 [ ] TdT µl TdT 100mmol/L DTT 0.1mmol/L CoCl5mmol/L BSA0.05mg/ml TdT 20UBiotin-dUTP 1nmoles 2 4SSC1SSC=0.15mol/L 0.015mol/L Triton-X % 5%w/vAvidin-FITC 2.5µg/ml

26 [ ]

27 [ ]

28 [ ] ISNT ISNT DNA 3 -OH 5 Klenow OH 5-3 DAB DNA

29 [ ] 1 2 2SSC 80 20min 30.5% ph minPBS 4 Buffer A 5min 5 Buffer A 50 2SSC 80 20min DNA I Klenow

30 [ ]

31 [ ] DNA density gradient centrifugation pulse field gel electrophoresispfge field inversion gel electrophoresisfige DNA high-molecular weight DNAHMW DNA 50~300kb HMW 180~200bp DNAlow-molecular weight DNA LMW DNA

32 [ ]

33 [ ] 2RNase TE 10mg/ml10015min DNase

34 [ ] DNA DNA DNA %= DNA / DNA+ 1 10mmol/L Tries1mmol/L EDTA0.2%Triton X-100pH7.5 2 TAE0.001mol/L EDTApH mol/L Triton r/min 5min 2 0.4ml 1h r/min 10min Eppendorf 50% 0.5mol/L NaCl 5min r/min 10min 5 TE100l65 10min 20l 12l 1 PC ph mol/L Na 2 HPO 4 192µl 0.1mol/L citric acid8µl 2 K 1mg/ml

35 [ ] DNA 50300kd DNA DNA DNADNA kb DNA DNA DNA DNA kd DNA [ ] 1PBSpH7.4: K 2 HPO gNaH 2 PO4. H 2 O 0.276gNaCl 8.770g 900ml 0.01N KOH ph ml 2 0.1mol/L EDTApH mol/L Tris-HClpH mmol/L NaCl 310mg/ml K 410% SDS 54mg/ml PMSF4mg PMSF 1ml

36 [ ] 6TE 10mmol/L Tris-HClpH7.61mmol/L EDTA 710mg/ml [ ] 1 PBS % l 5 1cm 2 45l g DNA mg/ml K 1% SDS g/ml PMSF TEpH DNA DNA DNA G 1 Hotz ph7.8 / DNA DNA DNA ladder PI DNA ladder [ ] 1 2 [ ] 1 / ph7.8: 0.2mol/L Na 2 HPO4 A0.1mol/L B 192ml A 8ml B ph % v/vnp40:0.25ml NP ml 31mg/ml RNase A:1mg DNase RNase 1ml 41mg/ml K 5DNA 0.25g 70ml 30ml

37 [ ] 6DNA 100bp DNA ladder 7 10 TBE 54g Tris 27.5g 20ml 0.5mol/L EDTA ph8.0 8 EB11mg/ml [ ] ml 70% g 5 40l / 0.5ml Eppendorf g 5 Eppendorf l 0.25% NP40 3l RNase l K l 0.8% DNA 0.5 TBE 2V/cm l PBS PI FCM DNA ladder DNA 5 DNA DNA DNA 6 DNA DNA ELISA 22 POD DNA DNA POD DAB POD

38 [ ] DNA DNA 22 [ ] [ ] 1 2 1ml POD-DNA 1ml 3 0.1mmol/L ph g 7.35gH 2 O 950ml 1 N HCl 1N NaOH ph ml 4 ph l 9l 0.1mol/l PBS ph7.310 NaCl 80gKCl 2gNa 2 HPO 4 7H2O 11.5gKH 2 PO 4 2g 1000ml :10 137mmol/L NaCl2.7mmol/L KCl 4.3mmol/L Na 2 HPO 4 7H2O1.4mmol/L KH 2 PO %NaN 3 PBSNaN 3 0.5g 1000ml PBS % Tween-201mmol/L EDTA0.25% BSA 0.05%NaN l POD-DNA 9l mg DAB 100ml 0.05mol/L Tris-HClpH % H 2 O

39 [ ] [ ] 3 enrichment factor EF ( ) EF = ( ) [ ] ELISA 15 1/10 3%8% ELISA rpm mmol/L Tris-HClpH7.4400mmol/L NaCl5mmol/L CaCl 210mmol/LMgCl rpm

40 [ ] 1:5 HL-60/CAM ELISA /ml

41 [ ]

42 [ ]

43 [ ] V = V 1 1 V 1 (min µ g ) = ( ) VDNA( µ g)

44 [ ]



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