荧光定量PCR
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- 彤冰 唐
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1 荧 光 定 量 PCR 荧 光 定 量 PCR 原 理 荧 光 定 量 PCR 最 早 称 TaqMan PCR, 后 来 也 叫 Real-Time PCR, 是 美 国 PE(Perkin Elmer) 公 司 1995 年 研 制 出 来 的 一 种 新 的 核 酸 定 量 技 术 该 技 术 是 在 常 规 PCR 基 础 上 加 入 荧 光 标 记 探 针 或 相 应 的 荧 光 染 料 来 实 现 其 定 量 功 能 的 其 原 理 是 : 随 着 PCR 反 应 的 进 行,PCR 反 应 产 物 不 断 累 计, 荧 光 信 号 强 度 也 等 比 例 增 加 每 经 过 一 个 循 环, 收 集 一 个 荧 光 强 度 信 号, 这 样 就 可 以 通 过 荧 光 强 度 变 化 监 测 产 物 量 的 变 化, 从 而 得 到 一 条 荧 光 扩 增 曲 线 图 一 般 而 言, 荧 光 扩 增 曲 线 可 以 分 成 三 个 阶 段 : 荧 光 背 景 信 号 阶 段, 荧 光 信 号 指 数 扩 增 阶 段 和 平 台 期 在 荧 光 背 景 信 号 阶 段, 扩 增 的 荧 光 信 号 被 荧 光 背 景 信 号 所 掩 盖, 无 法 判 断 产 物 量 的 变 化 而 在 平 台 期, 扩 增 产 物 已 不 再 呈 指 数 级 的 增 加,PCR 的 终 产 物 量 与 起 始 模 板 量 之 间 没 有 线 性 关 系, 根 据 最 终 的 PCR 产 物 量 也 不 能 计 算 出 起 始 DNA 拷 贝 数 只 有 在 荧 光 信 号 指 数 扩 增 阶 段, PCR 产 物 量 的 对 数 值 与 起 始 模 板 量 之 间 存 在 线 性 关 系, 我 们 可 以 选 择 在 这 个 阶 段 进 行 定 量 分 析 为 了 定 量 和 比 较 的 方 便, 在 实 时 荧 光 定 量 PCR 技 术 中 引 入 了 两 个 非 常 重 要 的 概 念 : 荧 光 阈 值 和 CT 值 ( 如 图 1 所 示 ) 荧 光 域 值 (threshold) 是 在 荧 光 扩 增 曲 线 上 人 为 设 定 的 一 个 值, 它 可 以 设 定 在 荧 光 信 号 指 数 扩 增 阶 段 任 意 位 置 上, 但 一 般 荧 光 域 值 的 缺 省 设 置 是 PCR 反 应 前 3 ~ 15 个 循 环 荧 光 信 号 标 准 偏 差 的 10 倍, 即 荧 光 域 值 Ct 值 是 指 每 个 反 应 管 内 的 荧 光 信 号 到 达 设 定 域 值 时 所 经 历 的 循 环 数 Ct 值 与 起 始 模 板 的 关 系
2 研 究 表 明, 每 个 模 板 的 Ct 值 与 该 模 板 的 起 始 拷 贝 数 的 对 数 存 在 线 性 关 系, 起 始 拷 贝 数 越 多,Ct 值 越 小, 反 之 亦 然 利 用 已 知 起 始 拷 贝 数 的 标 准 品 可 作 出 标 准 曲 线, 其 中 横 坐 标 代 表 起 始 拷 贝 数 的 对 数, 纵 坐 标 代 表 Ct 值 如 下 图 所 示 因 此, 只 要 获 得 未 知 样 品 的 Ct 值, 即 可 从 标 准 曲 线 上 计 算 出 该 样 品 的 起 始 拷 贝 数 荧 光 定 量 检 测 图 2. Ct 值 与 起 始 模 板 的 关 系 荧 光 定 量 检 测 根 据 所 使 用 的 标 记 物 不 同 可 分 为 荧 光 探 针 和 荧 光 染 料 荧 光 探 针 又 包 括 Beacon 技 术 ( 分 子 信 标 技 术, 以 美 国 人 Tagyi 为 代 表 ) TaqMan 探 针 ( 以 美 国 ABI 公 司 为 代 表 ) 和 FRET 技 术 ( 以 罗 氏 公 司 为 代 表 ) 等 ; 荧 光 染 料 包 括 饱 和 荧 光 染 料 和 非 饱 和 荧 光 染 料, 非 饱 和 荧 光 染 料 的 典 型 代 表 就 是 现 在 最 常 用 的 SYBR GreenⅠ; 饱 和 荧 光 染 料 有 EvaGreen LC Green 等 嵌 合 荧 光 染 料 法 (SYBR GreenⅠ) SYBR Green I 是 荧 光 定 量 PCR 最 常 用 的 DNA 结 合 染 料, 与 双 链 DNA 非 特 异 性 结 合 在 游 离 状 态 下,SYBR Green I 发 出 微 弱 的 荧 光, 但 一 旦 与 双 链 DNA 结 合, 其 荧 光 增 加 1000 倍 所 以, 一 个 反 应 发 出 的 全 部 荧 光 信 号 与 出 现 的 双 链 DNA 量 呈 比 例, 且 会 随 扩 增 产 物 的 增 加 而 增 加
3 图 3. SYBR Green I 荧 光 染 料 与 DNA 双 链 的 结 合 双 链 DNA 结 合 染 料 的 优 点 : 实 验 设 计 简 单, 仅 需 要 2 个 引 物, 不 需 要 设 计 探 针, 无 需 设 计 多 个 探 针 即 可 以 快 速 检 验 多 个 基 因, 且 能 够 进 行 熔 点 曲 线 分 析, 检 验 扩 增 反 应 的 特 异 性, 低 的 初 始 成 本, 通 用 性 好, 因 此 国 内 外 在 科 研 中 使 用 比 较 普 遍 荧 光 探 针 法 (Taqman 技 术 ) PCR 扩 增 时, 加 入 一 对 引 物 的 同 时 再 加 入 一 个 特 异 性 的 荧 光 探 针 该 探 针 为 一 直 线 型 的 寡 核 苷 酸, 两 端 分 别 标 记 一 个 荧 光 报 告 基 团 和 一 个 荧 光 淬 灭 基 团, 探 针 完 整 时, 报 告 基 团 发 射 的 荧 光 信 号 被 淬 灭 基 团 吸 收,PCR 仪 检 测 不 到 荧 光 信 号 ; PCR 扩 增 时 ( 在 延 伸 阶 段 ), Taq 酶 的 5' - 3' 酶 切 活 性 将 探 针 酶 切 降 解, 使 报 告 荧 光 基 团 和 淬 灭 荧 光 基 团 分 离, 从 而 荧 光 监 测 系 统 可 接 收 到 荧 光 信 号, 即 每 扩 增 一 条 DNA 链, 就 有 一 个 荧 光 分 子 形 成, 实 现 了 荧 光 信 号 的 累 积 与 PCR 产 物 形 成 完 全 同 步, 这 也 是 定 量 的 基 础 所 在 其 过 程 如 下 图 所 示 图 4. 荧 光 探 针 法 示 意 图
4 荧 光 定 量 PCR 的 应 用 分 子 生 物 学 研 究 1. 核 酸 定 量 分 析 对 传 染 性 疾 病 进 行 定 量 定 性 分 析, 病 原 微 生 物 或 病 毒 含 量 的 检 测, 比 如 甲 型 H1N1 流 感 检 测, 转 基 因 动 植 物 基 因 拷 贝 数 的 检 测,RNAi 基 因 失 活 率 的 检 测 等 2. 基 因 表 达 差 异 分 析 比 较 经 过 不 同 处 理 样 本 之 间 特 定 基 因 的 表 达 差 异 ( 如 药 物 处 理 物 理 处 理 化 学 处 理 等 ), 特 定 基 因 在 不 同 时 相 的 表 达 差 异 以 及 cdna 芯 片 或 差 显 结 果 的 确 证 3. SNP 检 测 检 测 单 核 苷 酸 多 态 性 对 于 研 究 个 体 对 不 同 疾 病 的 易 感 性 或 者 个 体 对 特 定 药 物 的 不 同 反 应 有 着 重 要 的 意 义, 因 分 子 信 标 结 构 的 巧 妙 性, 一 旦 SNP 的 序 列 信 息 是 已 知 的, 采 用 这 种 技 术 进 行 高 通 量 的 SNP 检 测 将 会 变 得 简 单 而 准 确 4. 甲 基 化 检 测 甲 基 化 同 人 类 的 许 多 疾 病 有 关, 特 别 是 癌 症,Laird 报 道 了 一 种 称 作 Methylight 的 技 术, 在 扩 增 之 前 先 处 理 DNA, 使 得 未 甲 基 化 的 胞 嘧 啶 变 成 尿 嘧 啶, 而 甲 基 化 的 胞 嘧 啶 不 受 影 响, 用 特 异 性 的 引 物 和 Taqman 探 针 来 区 分 甲 基 化 和 非 甲 基 化 的 DNA, 这 种 方 法 不 仅 方 便 而 且 灵 敏 度 更 高 医 学 研 究 1. 产 前 诊 断 : 人 们 对 遗 传 性 物 质 改 变 引 起 的 遗 传 性 疾 病 还 无 法 治 疗, 到 目 前 为 止, 还 只 能 只 能 通 过 产 前 监 测, 减 少 病 婴 出 生, 以 防 止 各 类 遗 传 性 疾 病 的 发 生, 如 为 减 少 X 连 锁 遗 传 病 患 儿 的 出 生, 从 孕 妇 的 外 周 血 中 分 离 胎 儿 DNA, 用 实 时 荧 光 定 量 PCR 检 测 其 Y 性 别 决 定 区 基 因 是 一 种 无 创 伤 性 的 方 法, 易 为 孕 妇 所 接 受 2. 病 原 体 检 测 : 采 用 荧 光 定 量 PCR 检 测 技 术 可 以 对 淋 球 菌 沙 眼 衣 原 体 解 脲 支 原 体 人 类 乳 头 瘤 病 毒 单 纯 疱 疹 病 毒 人 类 免 疫 缺 陷 病 毒 肝 炎 病 毒 流 感 病 毒 结 核 分 枝 杆 菌 EB 病 毒 和 巨 细 胞 病 毒 等 病 原 体 进 行 定 量 测 定 与 传 统 的 检 测 方 法 相 比 具 有 灵 敏 度 高 取 样 少 快 速 简 便 等 优 点 3. 药 物 疗 效 考 核 : 对 乙 型 肝 炎 病 毒 (HBV) 丙 型 肝 炎 病 毒 (HCV) 定 量 分 析 显 示 : 病 毒 量 与 某 些 药 物 的 疗 效 关 系 HCV 高 水 平 表 达, 干 扰 素 治 疗 作 用 不 敏 感, 而 HCV 低 滴 度, 干 扰 素 作 用 敏 感 ; 在 拉 米 夫 定 治 疗 过 程 中,HBV- DNA 的 血 清 含 量 曾 有 下 降, 随 后 若 再 度 上 升 或 超 出 以 前 水 平, 则 提 示 病 毒 发 生 变 异 4. 肿 瘤 基 因 检 测 : 尽 管 肿 瘤 发 病 的 机 理 尚 未 清 楚, 但 相 关 基 因 发 生 突 变 是 致 癌 性 转 变 的 根 本 原 因 已 被 广 泛 接 受 癌 基 因 的 表 达 增 加 和 突 变, 在 许 多 肿 瘤 早 期 就 可 以 出 现 实 时 荧
5 光 定 量 PCR 不 但 能 有 效 地 检 测 到 基 因 的 突 变, 而 且 可 以 准 确 检 测 癌 基 因 的 表 达 量 目 前 用 此 方 法 进 行 过 端 粒 酶 htert 基 因 慢 性 粒 细 胞 性 白 血 病 WT1 基 因 肿 瘤 ER 基 因 前 列 腺 癌 PSM 基 因 肿 瘤 相 关 的 病 毒 基 因 等 多 种 基 因 的 表 达 检 测 注 意 事 项 1. 在 实 验 过 程 中 要 防 止 RNA 的 降 解, 保 持 RNA 的 完 整 性 在 总 RNA 的 提 取 过 程 中, 注 意 避 免 mrna 的 断 裂 2. 为 了 防 止 非 特 异 性 扩 增, 必 须 设 阴 性 对 照 3. 内 参 的 设 定 : 主 要 为 了 用 于 靶 RNA 的 定 量 常 用 的 内 参 有 GAPDH( 甘 油 醛 -3- 磷 酸 脱 氢 酶 ) β-actin(β- 肌 动 蛋 白 ) 等 其 目 的 在 于 避 免 RNA 定 量 误 差 加 样 误 差 以 及 各 PCR 反 应 体 系 中 扩 增 效 率 不 均 一, 各 孔 间 的 温 度 差 等 所 造 成 的 误 差 4.PCR 不 能 进 入 平 台 期, 出 现 平 台 效 应 与 所 扩 增 的 目 的 基 因 的 长 度 序 列 二 级 结 构 以 及 目 标 DNA 起 始 的 数 量 有 关 故 对 于 每 一 个 目 标 序 列 出 现 平 台 效 应 的 循 环 数, 均 应 通 过 单 独 实 验 来 确 定 5. 防 止 DNA 的 污 染 : 1) 采 用 DNA 酶 处 理 RNA 样 品 2) 在 可 能 的 情 况 下, 将 PCR 引 物 置 于 基 因 的 不 同 外 显 子, 以 消 除 基 因 和 mrna 的 共 线 性
6 SYBR 实 时 荧 光 定 量 预 混 试 剂 Real SYBR Mixture(With ROX) 产 品 编 号 规 格 价 格 HS ul 100 次 300 元 HS ul 500 次 1200 元 产 品 包 装 试 剂 盒 组 成 HS (100 preps) HS (200 preps) 2 SYBR Mixture (with ROX) 1 ml 5 ml DEPC-H 2 O 1 ml 5 ml 保 存 条 件 -20 避 光 保 存 产 品 简 介 SYBR Mixture(With ROX) 是 专 用 于 染 料 法 (SYBR GreenⅠ) 实 时 荧 光 定 量 PCR 的 预 混 体 系, 包 含 DNA Polymerase PCR 优 化 的 稳 定 剂 和 增 强 剂 dntps SYBR Green I 荧 光 染 料 Mg 2+ 和 ROX 校 正 染 料, 操 作 简 单 方 便, 主 要 用 于 基 因 组 DNA 靶 序 列 和 RNA 反 转 录 后 cdna 靶 序 列 的 检 测 产 品 特 点 1. 高 灵 敏 度 : 荧 光 染 料 SYBR Green I 可 以 与 所 有 的 双 链 DNA 结 合, 可 以 精 确 定 量 低 拷 贝 模 板 ; 2. 高 特 异 性 : 独 特 的 PCR 缓 冲 体 系 与 热 启 动 酶 的 组 合, 有 效 抑 制 非 特 异 性 的 PCR 扩 增 ; 3. 误 差 小 : 所 含 的 ROX 染 料 可 校 正 定 量 PCR 仪 孔 与 孔 之 间 产 生 的 荧 光 信 号 误 差 产 品 应 用 该 试 剂 盒 确 保 DNA 或 cdna 模 板 的 准 确 定 量, 适 用 于 各 种 类 型 荧 光 定 量 PCR 仪
7 SYBR 一 步 法 荧 光 定 量 PCR 试 剂 盒 (With ROX) SYBR One Step RT-qPCR Kit (with ROX) 产 品 编 号 规 格 价 格 产 品 包 装 HS ul 100 次 1300 元 试 剂 盒 组 成 HS0614 (100 preps) 2 SYBR One Step RT-qPCR Buffer (with ROX) 1 ml One Step RT-qPCR Enzyme Mix DEPC-H 2 O 50 ul 1 ml 保 存 条 件 -20 避 光 保 存 产 品 简 介 本 产 品 是 一 步 法 Real-Time qrt-pcr 专 用 试 剂 盒 使 用 本 产 品 进 行 Real Time qrt-pcr 反 应, 逆 转 录 和 定 量 PCR 在 同 一 反 应 体 系 中 进 行, 反 应 过 程 中 无 需 添 加 试 剂, 无 需 打 开 管 盖, 避 免 了 污 染 的 同 时 提 高 了 实 验 效 率 产 品 特 点 1. 方 便 快 捷 : 反 转 录 和 PCR 在 一 个 反 应 管 中 完 成, 最 大 限 度 的 避 免 污 染 ; 2. 高 灵 敏 度 : 荧 光 染 料 SYBR Green I 可 以 与 所 有 的 双 链 DNA 结 合, 可 以 精 确 定 量 低 拷 贝 模 板 ; 3. 误 差 小 : 所 含 的 ROX 染 料 可 校 正 定 量 PCR 仪 孔 与 孔 之 间 产 生 的 荧 光 信 号 误 差
8 TaqMan 实 时 荧 光 定 量 预 混 系 统 TaqMan Mixture (With ROX) 产 品 编 号 规 格 价 格 HS ul 100 次 300 元 HS ul 500 次 1200 元 产 品 包 装 试 剂 盒 组 成 HS (100 preps) HS (500 preps) 2 TaqMan Mixture (with ROX) 1 ml 5 ml DEPC-H 2 O 1 ml 5 ml 保 存 条 件 -20 避 光 保 存 产 品 简 介 TaqMan Mixture(With ROX) 是 专 用 于 探 针 法 实 时 荧 光 定 量 PCR 的 预 混 体 系, 包 含 DNA Polymerase PCR 优 化 的 稳 定 剂 和 增 强 剂 dntps Mg 2+ 和 ROX 校 正 染 料, 操 作 简 单 方 便, 主 要 用 于 基 因 组 DNA 靶 序 列 和 RNA 反 转 录 后 cdna 靶 序 列 检 测, 如 基 因 表 达 分 析, 拷 贝 数 分 析,SNP 基 因 型 分 析 等, 适 用 于 不 同 类 型 探 针 法 荧 光 定 量 产 品 特 点 1. 高 灵 敏 度 : 可 以 精 确 定 量 低 拷 贝 模 板 ; 2. 高 特 异 性 : 最 大 限 度 的 减 少 引 物 二 聚 体 和 非 特 异 性 产 物 ; 3. 有 效 性 : 扩 增 效 率 高,CT 值 更 低
9 TaqMan 探 针 一 步 法 荧 光 定 量 PCR 试 剂 盒 (With ROX) TaqMan One Step RT-qPCR Kit (with ROX) 产 品 编 号 规 格 价 格 产 品 包 装 HS ul 100 次 1300 元 试 剂 盒 组 成 HS0616 (100 preps) 2 One Step RT-qPCR Buffer (with ROX) 1 ml One Step RT-qPCR Enzyme Mix DEPC-H 2 O 50 ul 1 ml 保 存 条 件 -20 避 光 保 存 产 品 简 介 本 产 品 适 用 于 探 针 法 进 行 一 步 法 Real-Time qrt-pcr 的 专 用 试 剂 盒 使 用 本 产 品 进 行 Real Time qrt-pcr 反 应 时, 逆 转 录 和 定 量 PCR 在 同 一 反 应 体 系 中 进 行, 反 应 过 程 中 无 需 添 加 试 剂, 无 需 打 开 管 盖, 避 免 了 污 染 的 同 时 提 高 了 实 验 效 率 本 产 品 的 检 测 灵 敏 度 高, 荧 光 信 号 强, 信 噪 比 高, 非 常 适 合 于 RNA 病 毒 等 微 量 RNA 的 检 测 产 品 特 点 1. 快 速 : 可 以 快 速 准 确 地 对 RNA 病 毒 等 微 量 RNA 进 行 分 析 ; 2. 方 便 : 在 一 管 内 连 续 完 成 反 转 录 和 定 量 PCR 扩 增, 最 大 限 度 避 免 污 染 ; 3. 高 效 : 高 效 的 反 转 录 酶 和 热 启 动 聚 合 酶 保 证 扩 增 的 高 效 率 和 高 特 异 性 ; 4. 稳 定 : 实 验 结 果 稳 定 重 复 性 好 荧 光 定 量 PCR 常 见 问 题 分 析 Q:CT 值 出 现 过 晚 A-1: 扩 增 效 率 低, 反 应 条 件 不 够 优 化 设 计 更 好 的 引 物 或 探 针 ; 改 用 三 步 法 进 行 反 应 ; 适 当 降 低 退 火 温 度 ; 增 加 镁 离 子 浓 度 等
10 A-2: PCR 各 种 反 应 成 分 的 降 解 或 加 样 量 的 不 足 A-3: PCR 产 物 太 长 一 般 采 用 bp 的 产 物 长 度 Q: 无 CT 值 ( 信 号 ) 出 现 A-1: 反 应 循 环 数 不 够 一 般 都 要 在 35 个 循 环 以 上, 可 根 据 实 验 情 况 增 加 循 环 ( 如 至 45cycles), 但 高 于 45 个 循 环 会 增 加 过 多 的 背 景 信 号 A-2: 检 测 荧 光 信 号 的 步 骤 有 误 一 般 SG 法 采 用 72 延 伸 时 采 集,Taqman 法 则 一 般 在 退 火 结 束 时 或 延 伸 结 束 采 集 信 号 A-3: 引 物 或 探 针 降 解 可 通 过 PAGE 电 泳 检 测 其 完 整 性 A-4: 引 物 或 探 针 的 设 计, 如 探 针 高 于 引 物 的 温 度 不 够, 造 成 探 针 未 杂 交 上 而 产 物 已 延 伸 的 情 况 A-5: 模 板 量 不 足 对 未 知 浓 度 的 样 品 应 从 系 列 稀 释 样 本 的 最 高 浓 度 做 起 A-6: 模 板 降 解 避 免 样 品 制 备 中 杂 质 的 引 入 及 反 复 冻 融 的 情 况 Q: 标 准 曲 线 的 线 性 关 系 不 佳 A-1: 加 样 存 在 误 差, 使 得 标 准 品 不 呈 梯 度 A-2: 标 准 品 出 现 降 解 应 避 免 标 准 品 反 复 冻 融, 或 重 新 制 备 并 稀 释 标 准 品 A-3: 引 物 或 探 针 不 佳 重 新 设 计 更 好 的 引 物 和 探 针 A-4: 模 板 中 存 在 抑 制 物, 或 模 板 浓 度 过 高 Q: 阴 性 对 照 也 出 现 明 显 的 起 飞 A-1: mix 或 水 被 污 染 A-2: 引 物 二 聚 体 的 出 现 用 SG 法 在 35cycles 以 后 阴 性 出 现 起 飞 属 正 常 情 况, 可 配 合 熔 解 曲 线 进 行 分 析 A-3: 反 应 过 程 中 探 针 的 降 解 用 PAGE 电 泳 对 探 针 进 行 检 测 A-4: 如 果 使 用 了 ROX 校 正, 则 可 能 是 ROX 的 降 解 所 造 成 Q: 在 溶 解 曲 线 前 是 否 插 入 一 个 同 溶 解 程 序 初 始 温 度 相 同 的 一 个 保 温 过 程 A: 如 果 在 熔 解 曲 线 前 没 有 一 个 保 温 过 程, 则 曲 线 会 在 前 几 个 循 环 非 常 陡 峭, 使 真 正 的 熔 解 峰 型 几 乎 看 不 到 Q: 熔 解 曲 线 不 止 一 个 主 峰 A-1: 引 物 设 计 不 够 优 化 应 避 免 引 物 二 聚 体 和 发 夹 结 构 的 出 现 A-2: 引 物 浓 度 不 佳 适 当 降 低 引 物 的 浓 度, 并 注 意 上 下 游 引 物 的 浓 度 配 比 A-3: 镁 离 子 浓 度 过 高 适 当 降 低 镁 离 子 浓 度, 或 选 择 更 合 适 的 mix 试 剂 盒
11 A-4: 模 板 有 基 因 组 的 污 染 RNA 提 取 过 程 中 避 免 DNA 的 引 入, 或 通 过 引 物 设 计 避 免 非 特 异 扩 增 Q: 扩 增 效 率 低 A-1: 反 应 试 剂 中 部 分 成 分 特 别 是 荧 光 染 料 降 解 A-2: 反 应 条 件 不 够 优 化, 可 适 当 降 低 退 火 温 度 或 改 为 三 步 扩 增 法 A-3: 反 应 体 系 中 有 PCR 反 应 抑 制 物 一 般 是 加 入 模 板 时 所 引 入, 应 先 把 模 板 适 度 稀 释, 再 加 入 反 应 体 系 中, 减 少 抑 制 物 的 影 响 Q: 实 验 重 复 性 不 好 A-1: 加 样 不 准 确 A-2: 仪 器 在 样 品 上 温 度 条 件 有 差 异, 即 温 度 均 一 性 不 好 A-3: 模 板 浓 度 低 样 品 初 始 浓 度 越 低, 重 复 性 越 差, 应 减 少 样 品 的 稀 释 倍 数 Q: 变 性 温 度 是 否 合 适 A: 大 部 分 的 双 链 DNA 在 95 C 就 开 始 解 链 了, 在 有 些 情 况 下 在 90 至 94 C 都 不 能 很 好 地 变 性 DNA 由 于 部 分 变 性, 参 加 反 应 的 探 针 和 引 物 相 应 的 减 少 了, 因 此 反 应 效 率 会 下 降 Q: 变 性 时 间 是 否 合 适 A: 15 到 20 秒 对 于 变 性 扩 增 子 是 足 够 了, 然 而, 长 一 点 的 产 物, 可 能 会 需 要 30 秒,60 秒 的 变 性 时 间 通 常 是 不 需 要 的 Q: 退 火 温 度 和 时 间 是 否 合 适 A: 检 查 引 物 和 探 针 的 Tm 值,SYBRGreenI 的 退 火 时 间 大 约 20 到 35 秒, 双 标 记 探 针 通 常 是 两 步 法, 退 火 和 延 伸 合 并 为 一 步, 时 间 大 约 是 45 到 60 秒, 温 度 通 常 在 60 C, 对 于 FRET 探 针 退 火 步 骤 大 约 20 到 30 秒 Q: 在 哪 一 步 骤 采 集 信 号 A: SYBRGreenI 应 当 在 72 C, 此 时 绝 大 部 分 的 DNA 是 双 链 状 态, 如 上 所 述, 双 标 记 探 针 通 常 是 两 步 检 测, 因 此 信 号 采 集 应 该 在 退 火 延 伸 的 整 合 步 骤 对 于 FRET 检 测, 数 据 应 该 在 退 火 步 骤 检 测 如 果 对 于 信 号 采 集 点 不 确 定, 可 以 多 点 采 集 作 对 比 如 果 监 控 屏 幕 检 测 不 到 信 号, 检 查 程 序 设 定 是 否 存 在 至 少 一 个 的 信 号 采 集 点
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
PCR PCR PCR RT-PCR PCR (Polymerase Chain Reaction,PCR) 80 DNA, DNA PCR PCR PCR DNA PCR -- -- DNA DNA 93 DNA PCR DNA DNA ( ) DNA 55 DNA DNA -- TaqDNA dntp DNA -- -- PCR PCR DNA DNA Y (1 X) n Y DNA X (Y)
从菜鸟到高手-手把手教你qPCR教程II
从 菜 鸟 到 高 手 - 手 把 手 教 你 qpcr 教 程 II --- 定 量 PCR 原 理 常 见 问 题 分 析 和 数 据 统 计 分 析 前 言 由 于 Real-time qpcr 的 众 多 优 点, 现 在 已 经 是 生 命 科 学 领 域 的 一 项 常 规 技 术 越 来 越 多 的 研 究 文 章 中 涉 及 RT-PCR 的 实 验, 也 基 本 上 被 real-time
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PCR 技 术 在 临 床 上 的 应 用 随 着 分 子 医 学 及 分 子 生 物 学 的 发 展, 在 生 物 医 学 实 验 室 诊 断 领 域, 发 生 了 飞 跃 的 变 化, 至 此, 自 第 一 代 的 细 胞 形 态 学 检 验 技 术 之 后, 发 展 到 50 年 代 生 化 指 标 作 临 床 诊 断 疾 病 的 依 据, 到 60 年 代 抗 原 抗 体 酶 标 记 技 术
B B X X C T X X X X X X X X X X X X X X X X X X C T C T X CT C T C T X CT M RI CT H O H MRI MRI MRI M RI C T MRI ECT P ET SP EC TECT C T C T IMI IMI A B M D A B M D D C T I I C B B B B B P PCR
如何迎接 临床基因诊断实验室 验收
如 何 迎 接 临 床 基 因 诊 断 实 验 室 验 收 江 苏 省 临 床 检 验 中 心 许 斌 质 量 管 理 的 历 史 质 量 控 制 (Quality Control,QC) 良 好 实 验 室 实 践 准 则 (Good Laboratory Practice,GLP), 质 量 保 证 (Quality assurance, QA) 质 量 体 系 认 证 及 实 验 室 认 可
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大 綱 最 有 利 標 目 的 及 類 型 最 有 利 標 之 辦 理 方 式 準 用 最 有 利 標 取 最 有 利 標 精 神 最 有 利 標 之 類 型 及 其 相 關 規 定 適 用 最 有 利 標 準 用 最 有 利 標 及 取 最 有 利 標 精 神 作 業 程 序 及 實 務 分 析
最 有 利 標 作 業 程 序 實 務 分 析 交 通 部 採 購 稽 核 小 組 陳 秘 書 牧 民 日 期 :101 年 05 月 21 日 大 綱 最 有 利 標 目 的 及 類 型 最 有 利 標 之 辦 理 方 式 準 用 最 有 利 標 取 最 有 利 標 精 神 最 有 利 標 之 類 型 及 其 相 關 規 定 適 用 最 有 利 標 準 用 最 有 利 標 及 取 最 有 利 標
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國立中山大學學位論文典藏.PDF
國 立 中 山 大 學 中 國 文 學 系 ( 暑 期 專 班 ) 碩 士 在 職 專 班 碩 士 論 文 漢 初 異 姓 諸 侯 王 研 究 研 究 生 : 林 裕 斌 撰 指 導 教 授 : 劉 文 強 教 授 中 華 民 國 97 年 5 月 摘 要 本 篇 論 文 探 究 的 對 象 是 漢 朝 初 年 八 位 異 姓 諸 侯 王, 並 涵 蓋 與 操 縱 他 們 興 盛 殞 落 息 息 相
商 周 三 代 年 代 學 的 研 究 經 過 近 五 年 的 努 力, 完 成 夏 商 周 年 表 本 大 事 概 覽 中 夏 商 周 三 代 的 大 事 紀 年, 即 採 用 夏 商 周 斷 代 工 程 的 考 論 成 果 對 於 無 法 考 證 年 份 的 史 事 或 發 生 在 史 前 時
中 外 歷 史 大 事 概 覽 編 者 說 明 : 1. 傳 說 時 代 與 夏 商 周 年 表 : 人 類 在 未 有 文 字 記 事 之 前, 口 耳 相 傳 的 神 話 傳 說, 是 先 民 對 自 然 變 化 的 體 驗 與 歷 史 經 歷 的 口 述 這 些 傳 說, 或 者 存 有 誇 張 和 穿 鑿, 隨 著 考 古 文 物 的 出 土 與 歷 史 學 家 的 努 力, 汰 偽 存 真,
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何 祚 庥 : 中 医 理 论 的 核 心 是 伪 科 学 环 球 人 物 记 者 路 琰 何 祚 庥 曾 经 有 言 : 中 国 传 统 文 化 有 90% 是 糟 粕 这 句 话 曾 引 起 的 一 场 笔 战 这 段 时 间, 一 些 学 者 发 布 告 别 中 医 的 言 论 再 次 引 起 了 何 祚 庥 对 中 医 的 关 注 开 始 谈 话 之 前, 他 手 里 拿 着 两 份 资 料
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目 录 第 一 章 认 识 亚 健 康 (1) 第 二 章 亚 健 康 状 况 (19) 第 三 章 与 亚 健 康 相 关 的 疾 病 (57) 第 四 章 防 治 亚 健 康 (65) 第 五 章 新 森 田 疗 法 (112) 摆 脱 亚 健 康 的 困 扰 第 一 章 认 识 亚 健 康 第 一 节 亚 健 康 的 症 状 亚 健 康 状 态 涉 及 的 内 容 很 广 泛, 各 种 内 脏
把生命托付给谁？
把 生 命 托 付 给 谁? 一 个 癌 症 患 者 的 重 生 感 悟 本 报 首 席 评 论 徐 迅 雷 2012-11-11 癌 症, 不 等 于 绝 症 癌 症, 不 等 于 死 亡 著 名 作 家 记 者 凌 志 军, 将 自 己 5 年 抗 癌 的 经 历, 写 成 重 生 手 记 一 个 癌 症 患 者 的 康 复 之 路 一 书, 日 前 出 版 在 有 个 购 书 网 站 上, 我
《中老年男性养生保健》
1 2 2001 1...1...2...12...18...18...20...23...28...41...43...51...51...55...71...78...82...82...91...91...91...98 2... 103... 106... 115... 118... 124... 124... 132... 134... 137... 138... 140... 141...
北京民办教育信息
北 京 民 办 教 育 信 息 第 5 期 北 京 民 办 教 育 协 会 秘 书 处 2013 年 4 月 25 日 目 录 政 府 工 作 西 城 区 政 协 领 导 一 行 莅 临 幸 福 泉 幼 儿 园 视 察 指 导 1 西 城 区 教 委 召 开 民 办 学 校 会 议 部 署 人 感 染 H7N9 禽 流 感 传 染 病 防 控 工 作 1 石 景 山 区 开 展 民 办 学 校 食
（7月专刊）闵行卫生计生动态2016年第11期_s_.docx
2016 年 第 12 期 ( 总 第 286 期 ) 2016 年 07 月 05 日 闵 行 区 卫 生 和 计 划 生 育 委 员 会 编 全 面 实 施 卫 生 改 革 与 发 展 十 三 五 规 划 努 力 实 现 闵 行 卫 生 计 生 事 业 发 展 新 跨 越 闵 行 区 卫 生 计 生 系 统 入 党 那 一 天 征 文 专 刊 编 者 按 在 七 一 建 党 节 来 临 之 际,
中 央 警 察 大 學 九 十 八 年 警 佐 班 第 二 十 九 期 ( 第 二 類 ) 入 學 考 試 憲 法 題 解 壹 單 一 選 擇 題 : (B) 總 統 依 憲 法 之 規 定, 行 使 締 結 條 約 之 權 關 於 憲 法 所 稱 之 條 約, 以 下 敘 述 何 者 錯 誤?(A
中 央 警 察 大 學 九 十 八 年 警 佐 班 第 二 十 九 期 ( 第 二 類 ) 入 學 考 試 國 文 試 題 壹 作 文 題 : 警 察 當 有 的 人 文 精 神 貳 公 文 題 : 中 央 警 察 大 學 訂 於 九 十 八 年 6 月 12 日 上 午 10 時, 假 該 校 大 禮 堂 舉 行 九 十 八 年 畢 業 典 禮, 擬 恭 請 總 統 蒞 校 主 持 請 試 為 內
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目 录 1. 会 议 须 知 2. 大 会 程 序 3. 议 程 4. 主 席 团 名 单 5. 筹 备 工 作 报 告 6. 筹 备 委 员 会 代 表 资 格 审 查 报 告 7. 选 举 监 票 人 名 单 8. 第 三 十 一 届 学 生 会 委 员 会 委 员 选 举 办 法 9. 第 三 十 一 届 学 生 会 委 员 会 委 员 候 选 人 简 介 10. 第 三 十 届 学 生 会
科展作品說明書--情定水果 香邀你我
中 華 民 國 第 四 十 四 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 國 小 組 生 活 與 應 用 科 學 科 080802 臺 北 縣 三 重 市 興 穀 國 民 小 學 指 導 老 師 姓 名 黃 小 紋 黃 書 卿 作 者 姓 名 邵 雅 慈 蔡 旻 真 許 瀚 心 王 澤 雄 黃 一 崧 中 華 民 國 第 四 十 四 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明
标题
1. 眼 底 炎 症 辨 证 论 治 规 律 的 探 讨 湖 南 中 医 学 院 附 二 院 眼 科 一 眼 底 病 变 的 三 个 显 著 特 点 深 精 杂 深 指 它 的 位 置 眼 底 病 变 往 往 外 观 端 好, 中 医 统 称 为 内 障, 从 内 而 蔽, 外 不 见 证 精 指 它 的 组 织 结 构 眼 底 构 造 最 精 细, 有 富 于 血 管 的 脉 络 膜, 有 感 光
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附 件 : 紫 光 古 汉 000590- 置 出 1.72 亿 元 应 收 帐 款 明 细 清 单 客 户 金 额 湖 南 清 华 紫 光 古 汉 药 业 有 限 公 司 16,099,600.00 湖 南 清 华 紫 光 古 汉 药 业 有 限 公 司 14,339,504.00 广 东 省 揭 东 县 新 特 药 公 司 4,610,491.11 衡 阳 市 康 馨 医 药 有 限 责 任 公
我 可 以 向 你 们 保 证 以 下 的 内 容 100% 真 实, 请 您 一 定 耐 心 看 完 从 医 15 年 来, 我 也 反 复 告 诉 病 人 这 些 事 实 但 是 没 有 人 愿 意 去 听, 更 没 有 人 愿 意 去 相 信 或 许, 我 们 的 同 胞 们 真 的 需 要
保 健 : 顶 尖 专 家 谈 癌 症 2014-03-22 权 健 3813 服 务 中 心 环 境 污 染 不 良 生 活 方 式 与 现 代 社 会 生 活 造 成 的 精 神 压 力 等 等 原 因, 使 得 我 国 癌 情 汹 涌, 人 们 也 日 益 变 得 谈 癌 色 变 最 新 数 据 显 示, 中 国 每 天 8550 人 成 为 癌 症 患 者 ; 中 国 癌 症 患 者 年 轻
Microsoft Word - 愛吐沙的蛤蜊
編 號 :A311 組 別 : 國 小 組 科 別 : 自 然 科 類 別 : 生 物 作 品 名 稱 : 愛 吐 沙 的 蛤 蠣 作 者 : 黃 柏 慎 黃 映 慈 易 秋 蓉 指 導 老 師 : 賴 敏 婉 李 愛 雯 作 者 學 校 : 桃 園 縣 平 鎮 市 忠 貞 國 民 小 學 桃 園 縣 平 鎮 市 第 46 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 科 別 : 自 然
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第 一 部 分 投 标 邀 请 一. 项 目 名 称 : 北 京 大 学 附 属 中 学 副 食 品 商 店 协 议 供 货 商 招 标 项 目 二. 项 目 内 容 : 北 京 大 学 附 属 中 学 采 购 中 心 现 就 学 校 副 食 品 商 店 的 供 货 协 议 商 进 行 招 标, 中
北 京 大 学 附 属 中 学 副 食 品 商 店 协 议 供 货 商 招 标 项 目 招 标 文 件 招 标 人 : 北 京 大 学 附 属 中 学 二 〇 一 五 年 十 一 月 第 一 部 分 投 标 邀 请 一. 项 目 名 称 : 北 京 大 学 附 属 中 学 副 食 品 商 店 协 议 供 货 商 招 标 项 目 二. 项 目 内 容 : 北 京 大 学 附 属 中 学 采 购 中 心
國立臺東高級中學102學年度第一學期第二次期中考高一國文科試題
國 立 臺 東 高 級 中 學 102 學 年 度 第 一 學 期 第 二 次 期 中 考 高 一 國 文 科 試 題 卷 畫 答 案 卡 : 是 否 ( 班 級 座 號 科 目 代 號 畫 錯 扣 5 分 ) 適 用 班 級 :1-1 1-9 1-11 考 試 範 圍 : 梧 桐 樹 醉 翁 亭 記 古 橋 之 戀 樂 府 詩 選 論 語 選 一 默 寫 : 依 原 文 將 正 確 文 句 填 入
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權 能 的 來 源 安 童 牧 師 事 工 简 介 : -- 摘 自 安 童 牧 師 2013 年 9 月 8 日 主 日 信 息 神 呼 召 他, 最 初 在 街 上 接 納 養 育 得 痲 瘋 的 孩 子, 神 藉 着 一 个 单 纯 顺 服 的 仆 人 做 了 极 大 的 事 工, 現 在,8000 印 度 兒 童 參 與 他 的 服 事 目 前, 二 萬 三 千 多 兒 童 參 與 他 的
秘密大乘佛法(下)
印 度 佛 教 史 (25) 101 / 12 / 24 釋 清 德 秘 密 大 乘 佛 法 ( 下 ) 印 度 佛 教 思 想 史 第 十 章 第 三 節 金 剛 乘 與 天 行 一 秘 密 大 乘 稱 金 剛 乘 採 取 表 徵 主 義 1 三 四 五 方 佛 大 乘 佛 法 興 起, 傳 出 十 方 現 在 的 無 數 佛 名 現 在 有 佛 在 世, 可 以 滿 足 佛 涅 槃 後, 佛 弟
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任 志 强 回 忆 录 哪 怕 一 个 再 渺 小 的 个 人, 也 可 以 为 一 段 历 史, 甚 至 一 段 很 重 要 的 历 史 背 书! 一 个 变 革 的 时 代, 一 群 过 河 的 人, 一 种 野 心 优 雅 的 实 现! 一 部 民 营 企 业 和 创 业 人 生 的 心 灵 史 生 死 书! 平 时 就 很 敢 说 的 任 志 强, 这 次 说 的 更 赤 裸! 历 时 两
对 乙 酰 氨 基 酚 片 片 剂 500mg 12 片 盒 铝 塑 泡 罩 - 华 润 双 鹤 药 业 股 份 有 限 公 司 华 润 双 鹤 药 业 股 份 有 限 公 司 全 市 沪 药 事 药 品 (2012)110 号 对 乙 酰 氨 基 酚 片 片 剂 500mg 12 片 盒 铝 塑
上 海 市 医 疗 机 构 基 本 药 物 集 中 招 标 采 购 中 标 目 录 ( 第 一 批 ) 注 释 : 1 全 市 指 全 市 各 级 各 类 医 疗 机 构 ; 2 非 基 层 指 除 基 层 医 疗 卫 生 机 构 以 外 的 其 他 各 级 各 类 医 疗 机 构 药 品 通 用 名 商 品 名 剂 型 规 格 包 装 单 位 包 装 方 式 中 标 价 ( 元 ) 中 标 企 业
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药 品 名 氢 化 可 的 松 英 文 名 Hydrocortisone 别 名 氢 考 的 松 ; 氢 可 的 松 ; 可 的 索 ; 皮 质 醇 ; 氢 化 考 的 松 ; 氢 化 皮 质 素 ; 考 地 索 ; 氢 可 ;Cortisol 剂 型 1. 片 剂 :10mg,20mg;2. 注 射 剂 : 稀 乙 醇 溶 液 :10mg(2ml), 25mg(5ml);50mg(10ml);100mg(20ml);3.
幻灯片 1
荧 光 定 量 PCR 解 决 方 案 TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO.,LTD 内 容 概 要 荧 光 定 量 PCR 的 原 理 及 标 记 方 法 荧 光 定 量 PCR 数 据 计 算 方 法 荧 光 定 量 PCR 文 献 解 读 MIQE 标 准 及 实 验 常 见 问 题 分 析 定 量 PCR 引 物 设 计 技 巧 荧 光 定 量 PCR 原 理 -- 定
实验仪器介绍
仪 器 手 册 中 国 科 学 院 心 理 研 究 所 公 用 实 验 室 目 录 1. 动 物 实 验 中 心... 3 1.1 操 作 性 条 件 反 射 箱 (operant conditioning)...3 1.2 高 架 十 字 迷 宫 (cross maze)...4 1.3 徽 透 析 系 统...4 1.4 条 件 性 位 置 偏 爱 箱 (Conditioned Place Preference,CPP)...4
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附 表 一 : 统 一 定 价 药 品 表 金 额 : 元 定 价 目 1 293 追 风 透 骨 片 48 片 追 风 透 骨 片 24 片 追 风 透 骨 片 24 片 ( 薄 膜 追 风 透 骨 片 48 片 ( 薄 膜 ( 瓶 ) 30.0 * ( 瓶 ) 15.4 ( 瓶 ) 16.9 ( 瓶 ) 33.0 追 风 透 骨 丸 水 蜜 丸 6g 袋 1.8 * 追 风 透 骨 丸 水 蜜
32 81233 妇 科 用 药 丹 鳖 胶 囊 0.38g 广 州 潘 高 寿 药 业 股 份 有 限 公 瓶 32.99 45 粒 / 瓶 GMP 深 圳 市 宇 冠 医 药 有 限 167723 33 146787 妇 科 用 药 产 复 康 颗 粒 每 袋 装 5g 深 圳 三 顺 制 药
1 53918 儿 科 用 药 小 儿 消 积 止 咳 口 服 液 10ml 鲁 南 厚 普 制 药 有 限 公 司 盒 12.29 6 支 / 盒 GMP 深 圳 市 健 民 医 药 有 限 167115 2 90265 儿 科 用 药 小 儿 清 热 利 肺 口 服 液 10ml 广 州 潘 高 寿 药 业 股 份 有 限 公 盒 25.13 6 支 / 盒 GMP 深 圳 一 致 药 业 股
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Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System (With RQ Study) SDS 1.3 I. ~ I. 1. : Dell GX280 2.8GHz with Dell 17 Flat monitor 256 MB RAM 40 GB hard drive DVD-RW drive Microsoft Windows XP Operating System
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荧 光 PCR 原 理 及 应 用 周 煜 ZHOU Yu Application Specialist [email protected] ABI 公 司 及 其 荧 光 PCR 仪 器 美 国 ABI 公 司 荧 光 定 量 PCR 仪 发 展 历 史 1995- 世 界 上 第 一 台 定 量 PCR 仪 7700 型 1997- 向 医 院 用 户 推 出
Microsoft PowerPoint - Real-time PCR原理与应用 [兼容模式]
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荧 光 定 量 PCR 技 术 的 原 理 与 应 用 张 晓 辉 张 晓 辉 PCR 产 品 经 理 北 京 元 业 伯 乐 科 技 发 展 有 限 公 司 提 纲 荧 光 定 量 PCR 技 术 原 理 荧 光 化 学 物 质 简 介 定 量 PCR 技 术 延 伸 基 因 分 型 (SNP) 检 测 熔 解 曲 线 分 析 荧 光 定 量 PCR 技 术 应 用 常 规 PCR 技 术 : 常
Primer Express v3.0 中文操作手冊
Primer Express v3.0 Primers and Probe Design For Real-Time PCR Primers/Probes Design Guideline TaqMan Probe Primer Probe Primer 離, PCR 50-150 bp G/C % 30-80 % 列 4 G Tm : 68-70 (Quantification assay) 65-67
第十一章 颈部疾病病人的护理
第 十 一 章 颈 部 疾 病 病 人 的 护 理 学 习 目 标 1. 了 解 颈 部 常 见 肿 块 病 人 的 身 体 状 况 及 处 理 原 则 ; 能 提 出 甲 状 腺 肿 瘤 甲 状 腺 功 能 亢 进 病 人 的 护 理 诊 断 并 制 定 出 护 理 措 施 2. 熟 悉 甲 状 腺 肿 瘤 甲 状 腺 功 能 亢 进 病 人 的 身 体 状 况 手 术 适 应 证 3. 掌 握
Real-time PCR 原理
Real-time PCR Xiao Jin Applied Specialist Molecular & Cellular Biology Real-time PCR 原 理 数 学 原 理 化 学 原 理 Real-time PCR 应 用 绝 对 定 量 相 对 定 量 等 位 基 因 分 型 阴 阳 性 判 定 microrna 荧 光 定 量 PCR 数 学 原 理 基 线 阈 值 Ct
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ISSN 0255-6162 GPN 2006900031 287 93 11 20 161-2 02 26531318 http://www.nlfd.gov.tw 1 2 3 287 4 287 5 44 93 13 1 monocrotophos 0.40 ppm 105 1300 99% 6 3 44 106 93 13 1 0.40 ppm 403 40 7 DNA (HPLC) DNA
(Microsoft Word - 102-3-\245|\247\336\244G\261M-\271A\267~\270s\261M\244G\270\325\303D)
農 業 群 專 業 科 目 ( 二 ) 1. 有 關 生 命 現 象 之 配 對, 下 列 何 者 錯 誤? (A) 光 合 作 用 - 新 陳 代 謝 (B) 金 蟬 脫 殼 - 繁 殖 (C) 趨 光 性 - 感 應 (D) 狗 急 跳 牆 - 運 動 2. 下 列 何 者 是 膜 狀 構 造 的 胞 器? (A) 粒 線 體 (B) 核 糖 體 (C) 中 心 粒 (D) 染 色 體 3. 下
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. ( CIP), 2004 /. 2. : (. ) ISBN 7-5077-2116-7......... : :. R473. 71-44 CIP ( 2004 ) 022284 : : : : : : 2 1 : 100078 : : 787mm 1092mm 16 : 7. 5 : 180 : 2005 3 2 : 2005 3 2 : 00001 10000 : 100. 00 ( 10
避孕篇
避 孕 篇 生 育 后 时 期 的 避 孕 方 法 : 适 用 的 方 法 : 1) 宫 内 节 育 器 类 : 金 属 环 可 放 置 15 年 左 右 ;V 型 环 可 放 置 5-7 年 ;T 型 环 可 放 置 10-15 年 2) 避 孕 药 ( 针 ) 类 : 各 种 短 效 口 服 避 孕 药, 如 妈 富 隆 敏 定 偶 三 相 片 及 达 英 -35 等, 按 规 定 方 法 服
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