2 简介 MagPure Plant RNA LQ Kit 为植物或真菌的组织样品总 RNA 提取提供了一个简单快速的解决方案试剂盒基于超顺磁性的磁性粒子纯化技术, 提取过程中无需使用有毒的酚氯仿抽提, 也无需进行耗时的醇类沉淀, 整个提取过程只需 60 分钟得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR, 病毒 RNA 检测等实验原理 MagPure 纯化系统采用高结合力的超顺磁性的磁性粒子为基质, 在高浓度离子化剂 ( 如盐酸胍或异硫氰酸胍 ) 条件下, 纳米磁性粒子可通过氢键和静电吸附核酸, 而蛋白质或其它杂质不被吸附而去除吸附了核酸的纳子粒子经洗涤去除蛋白质和盐, 最后可以用低盐缓冲液 ( 如 Buffer TE) 或水, 洗脱出粒子上的核酸得到的核酸纯度高, 可直接用于各种下游实验 MagPure LQ 系统采用的溶液体系和纯化方式是专门为自动化移液工作站和手工核酸提取而设计的 MagPure Plant RNA LQ Kit 基于高结合力的纳米磁性粒子的纯化方式样品在裂解液和蛋白酶的作用下裂解消化,RNA/DNA 释放到裂解液中加入结合液和磁性粒子吸附 RNA/DNA, 而蛋白质则不被吸附而去除吸附了 DNA/RNA 的粒子经洗涤液洗涤去除蛋白质和其它杂质, 再经含乙醇洗涤去除盐分, 然后加入 DNase 消化去除 DNA, 加入结合液回收 RNA, 最后 RNA 被低盐缓冲液洗脱洗脱的 RNA 可直接用于 RT-PCR 病毒检测等实验第 2 页共 11 页

3 组成 MagPure Plant RNA LQ Kit 产品编号 R R 纯化次数 48 次 96 次 MagPure Particles R 1.5 ml 3.3 ml Proteinase K 32 mg 64 mg Protease Dissolve Buffer 2 ml 5 ml DNase I 160 µl 2 x 160 µl DNase Buffer 15 ml 30 ml Buffer RTL 40 ml 80 ml Buffer PRB 20 ml 40 ml Buffer VHB 44 ml 66 ml Buffer RW2 20 ml 50 ml RNase Free Water 10 ml 30 ml 说明书 1 1 注 :Buffer PRB, Buffer VHB 和 Buffer RW2 使用前须用无水乙醇进行稀释保质期 MagPure Plant RNA LQ Kit 除 MagBind Particles 和 Proteinase K 外, 可在室温下 (15-25 ) 干燥保存 12 个月长期保存时需置于 2-8 低温下, Buffer ATL/Buffer BL 可能会有沉淀形成, 需 55 水浴让沉淀完全溶解 MagBind Particles 和 Proteinase K 干粉在室温下运输收到试剂盒后, 把 Proteinase K 保存于 -20 MagBind Particles 保存于 2-8 第 3 页共 11 页

4 准备工作 70% 乙醇无水乙醇 KingFisher 核酸提取仪和配套的耗材多道移液枪试剂槽溶解 Proteinase K (20mg/ml): 加入适量的 Protease Dissolve Buffer 至 Proteinase K 干粉中至终浓度为 20mg/ml, 轻轻颠倒让蛋白酶 K 充分溶解 Proteinase K 干粉在 2-8 保存一年, 但溶解的 Proteinase K 须分装保存于 -20 反复冻溶 Proteinase K 会影响其活性 Buffer VHB 使用前, 须按瓶子标签所示, 加入无水乙醇进行稀释 Buffer RW2 使用前, 须按瓶子标签所示, 加入无水乙醇进行稀释 Buffer PRB 使用前, 须按瓶子标签所示, 加入无水乙醇进行稀释 MagPure Particles R 初次使用时, 必须剧烈摇晃 1 分钟让磁珠充分分散第 4 页共 11 页

5 方案 1. 单管式手工操作该方案适合于从 20~100mg 植物或真菌的组织样品中提取总 RNA 1. 用液氮研磨将植物或真菌组织样品研磨成细小的粉末处理批量植物或真菌组织样品时, 推荐使用高通量珠磨仪, 如 FastPrep-24, Tissue Lyser 等 2. 转移 25 ~ 100mg 粉末样品至 1.5ml 离心管立即加入 0.5ml Buffer PRC1/2-Me 至样品中剧烈涡旋打散样品 55ºC 水浴 3~5 分钟使用前, 每 1ml Buffer PRC1 加入 20µl 2- 疏基乙醇或 2M DTT 处理富含多糖类的植物样品, 室温静置代替 55ºC 水浴 3. 室温,14,000 x g 离心 5 分钟去除不溶解的颗粒 4. 转移 400µl 上清液至新的 1.5ml 离心管中加入 400µl Buffer PRB, 涡旋混匀 20 秒 4. 加入 30µl MagPure Particles R 和 30µl Proteinase K 至样品中颠倒混匀 20~30 次室温静置 10 分钟, 其间颠倒混匀数次 5. 转移至磁力架上吸附 3 分钟倒弃或吸弃溶液 6. 加入 600µl Buffer VHB, 涡旋 20 秒重悬磁珠 7. 转移至磁力架上吸附 1 分钟倒弃或吸弃溶液 8. 加入 600µl Buffer RW2, 涡旋 20 秒重悬磁珠 9. 转移至磁力架上吸附 1 分钟倒弃或吸弃溶液 10. 短暂离心收集管壁上的液滴, 转移至磁力架上, 吸弃所有溶液 11. 空气干燥 5 分钟 12. 加入 150µl DNase Mixture( 147µl DNase Buffer +3µl DNase I) 至样品中, 轻轻振荡重悬磁珠 13. 室温或 37 轻轻振荡温育 15 分钟消化去除 DNA 14. 加入 600µl Buffer VHB 至样品, 涡旋混匀 20 秒室温静置 5 分钟, 其间混第 5 页共 11 页

6 匀 2~3 次 15. 转移至磁力架上吸附 1 分钟倒弃或吸弃溶液 16. 加入 600µl Buffer RW2, 涡旋 20 秒重悬磁珠 17. 转移至磁力架上吸附 1 分钟倒弃或吸弃溶液 18. 短暂离心, 收集管壁上的液滴, 转移至磁力架上, 吸弃所有的溶液 19. 室温或 37 o C 干燥 15 分钟 20. 加入 30~100µl RNase Free Water 至样品中, 涡旋打散磁珠室温静置 3 分钟 21. 转移至磁力架上吸附 3 分钟, 把 RNA 转移至新的离心管中第 6 页共 11 页

7 方案孔板高通量手工提取该方案适合于从 20~100mg 植物或真菌的组织样品中提取总 RNA 需要准备的耗材和设备 : Nunc U96 DeepWell Plate(Cat.No ) 96 孔振荡仪, 如 IKA MS3 Vortex, Eppendorf MixMate 96 孔磁力架, MG 用液氮研磨将植物或真菌组织样品研磨成细小的粉末处理批量植物或真菌组织样品时, 推荐使用高通量珠磨仪, 如 FastPrep-24, Tissue Lyser 等 2. 转移 25 ~ 100mg 粉末样品至 1.5ml 离心管立即加入 0.5ml Buffer PRC1/2-Me 至样品中剧烈涡旋打散样品 55ºC 水浴 3~5 分钟使用前, 每 1ml Buffer PRC1 加入 20µl 2- 疏基乙醇或 2M DTT 处理富含多糖类的植物样品, 室温静置代替 55ºC 水浴 3. 室温,14,000 x g 离心 5 分钟去除不溶解的颗粒 4. 转移 400µl 上清液至 Nunc 96 孔深孔板中 4. 每孔加入 400µl Buffer PRB 至样品中,1,200rpm 振荡混匀 3 分钟调整振荡速度让样品达到最佳的混匀效果, 但不能让溶液溢出孔口, 可用同体积的水进行测试 5. 加 30µl MagPure Particles R 和 30µl Proteinase K 至样品中, 1,200rpm 振荡混匀 10 分钟 6. 转移至 96 孔磁力架上吸附 3 分钟将磁力架和 96 孔板扣在一起, 反转 180 度倒弃废液, 然后反扣于一叠吸水纸 1 分钟吸尽残液在反转倒废液时, 让磁力架和 96 孔板紧扣一起不要松动, 以防止磁珠的丢失, 废液倒完后, 反扣于吸水纸上吸尽孔口的残液, 不要让溶液回流到孔中 7. 加入 600µl Buffer VHB 至孔中 1,000~1,200rpm 振荡混匀 2 分钟打散磁珠 8. 转移至磁力架上吸附 2 分钟将磁力架和 96 孔板扣在一起, 反转 180 度倒弃废液, 然后反扣于一叠吸水纸 1 分钟吸尽残液第 7 页共 11 页

8 9. 加入 600µl Buffer RW2 至孔中 1,000~1,200rpm 振荡混匀 2 分钟打散磁珠 10. 转移至磁力架上吸附 2 分钟将磁力架和 96 孔板扣在一起, 反转 180 度倒弃废液, 然后反扣于一叠吸水纸 10 分钟吸尽残液 11. 每孔加入 150µl DNase Mixture( 147µl DNase Buffer +3µl DNase I) 至样品中 400~600rpm 振荡 15 分钟消化去除 DNA 12. 每孔加入 600µl Buffer VHB 至样品 1,000~1,200rpm 振荡混匀 5 分钟 13. 转移至磁力架上吸附 5 分钟将磁力架和 96 孔板扣在一起, 反转 180 度倒弃废液, 然后反扣于一叠吸水纸 1 分钟吸尽残液 14. 加入 600µl Buffer RW2 1,000~1,200rpm 振荡混匀 2 分钟 15. 转移至磁力架上吸附 2 分钟将磁力架和 96 孔板扣在一起, 反转 180 度倒弃废液, 然后反扣于一叠吸水纸 5 分钟吸尽残液 16. 室温或 37 o C 干燥 15 分钟 17. 加入 50~100µl RNase Free Water,900rpm 振荡混匀 5 分钟 18. 转移至磁力架上吸附 3 分钟, 把 RNA 转移至新的 96 孔板中第 8 页共 11 页

9 方案 3. 移液工作站流程设计该方案适合于从 20~100mg 植物或真菌的组织样品中提取总 RNA 由于不同的移液工作站的设置和配件都有所不同, 请根据平台进行调整, 以下流程是根据 Haminton 移液工作站而设计的 1. 用液氮研磨将植物或真菌组织样品研磨成细小的粉末处理批量植物或真菌组织样品时, 推荐使用高通量珠磨仪, 如 FastPrep-24, Tissue Lyser 等 2. 转移 25 ~ 100mg 粉末样品至 1.5ml 离心管立即加入 0.5ml Buffer PRC1/2-Me 至样品中剧烈涡旋打散样品 55ºC 水浴 3~5 分钟使用前, 每 1ml Buffer PRC1 加入 20µl 2- 疏基乙醇或 2M DTT 处理富含多糖类的植物样品, 室温静置代替 55ºC 水浴 3. 室温,14,000 x g 离心 5 分钟去除不溶解的颗粒 4. 转移 400µl 上清液至 Nunc 96 孔深孔板中 5. 加入 400µl Buffer PRB 至样品中 1,000~1,400rpm 振荡混匀 5 分钟 6. 加入 30µl MagPure Particles R 和 30µl Proteinase K 至样品中, 1,000~1,400rpm 振荡 10 分钟 5. 转移至 96 孔磁力架上吸附 3 分钟吸弃溶液 6. 加入 600µl Buffer VHB,1,000~1,400rpm 振荡混匀 2 分钟打散磁珠 7. 转移至磁力架上吸附 2 钟吸弃溶液 8. 加入 600µl Buffer RW2,1,000~1,400rpm 振荡混匀 2 分钟打散磁珠 9. 转移至磁力架上吸附 2 钟吸弃溶液 ºC 干燥 5 分钟 11. 加入 150µLDNase Mixture(3ul DNase I+147ul DNase Buffer) 至样品中 500rpm 振荡温育 15 分钟消化去除 DNA 12. 加入 600µl Buffer VHB 至样品中,1,000~1,400rpm 振荡混匀 5 分钟第 9 页共 11 页

10 13. 转移至磁力架上吸附 2 钟吸弃溶液 14. 加入 600µl Buffer RW2,1,000~1,400rpm 振荡混匀 2 分钟打散磁珠 15. 转移至磁力架上吸附 2 钟吸弃溶液 ºC 干燥 15 分钟 17. 加 30~50µl RNase Free Water,800rpm 振荡混匀 5 分钟 18. 转移至磁力架上吸附 3 分钟, 把 RNA 转移至新的 96 孔板中第 10 页共 11 页

11 常见问题解答该列表可能有利于解决提取过程所碰到的问题 Magen 的技术人员也可以随时为您提供服务, 若您对试剂盒存在问题或建议, 或您在分子生物学碰到问题, 都请您联系我们我们将竭尽所能为您排扰难解现象及原因解决方法 DNA 有颜色 Proteinase K 与 Buffer BL 不能预先混合 Proteinase K 活性下降血液贮藏条件不正确 Proteinase K 与 Buffer BL 不能预先混合样品与蛋白酶 K 先进行混匀后, 才能加入 Buffer BL 使用新制备的 Proteinase K Proteinase K 需要分装保存, 用完后, 立即保存于 -20 血液样品因贮藏条件不对, 出现凝固块用移液枪吸打几次打散血液样品的凝固块 DNA 产量低样品中细胞或病毒含量低 Buffer BD 没有加入乙醇稀释 Proteinase K 活性下降 Buffer BW1 中乙醇没有加入或加入量不够 MagPure Particles 没有充分打散洗脱体积不够处理无细胞的体液时可用超滤柱浓缩于 250µl 按说明书或瓶子标签所示, 加入正确的乙醇使用新制备的 Proteinase K Proteinase K 需要分装保存, 用完后, 立即保存于 -20 按说明书或瓶子标签所示, 加入正确的乙醇初步使用 MagPure Particles 时, 必须充分剧烈振荡 1-2 分钟以打散 MagPure Particles 增加洗脱体积以提高洗脱效率第 11 页共 11 页

封底

广州美基生物科技有限公司 Tel: +86 20 22927158 Support:13430287051 magenbio@aliyun.com www.magentec.com.cn HiPure Blood DNA Kits 血液等液体样品 DNA提取试剂盒从血液等液体样品中提取 DNA 目录简介 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

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