产品简介本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统, 从 100 μl-1 ml 血液中分离纯化高质量基因组 DNA 独特包埋的磁珠, 在一定条件下对核酸具有很强的亲和力, 而当条件改变时, 磁珠释放吸附的核酸, 能够达到快速分离纯化核酸的目的整个过程不涉及有机试剂, 安全便捷, 提取

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俸郗
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Order: 010-59822688 Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057 TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO.

1 Order: Toll-free: / TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD 版本号 : DP Magnetic Blood Genomic DNA Kit 磁珠法血液基因组 DNA 提取试剂盒目录号 :DP329 产品内容产品组成 DP DP (50 preps) (200 preps) 裂解液 GHL(Buffer GHL) 20 ml 80 ml 缓冲液 GDA(Buffer GDA) 25 ml 90 ml 漂洗液 PWD(Buffer PWD) 20 ml 2 40 ml Proteinase K 1 ml 4 1 ml 磁珠悬浮液 G (MagAttract Suspension G) 1 ml 4 1 ml 洗脱缓冲液 TB(Buffer TB) 15 ml 30 ml 储存条件该试剂盒置于室温 (15-25 ) 干燥条件下, 可保存 12 个月, 更长时间的保存可置于保存条件下, 若溶液产生沉淀, 使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间, 必要时可在 37 水浴中孵育 10 min, 以溶解沉淀本产品仅供科研使用请勿用于医药临床治疗食品及化妆品等用途

2 产品简介本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统, 从 100 μl-1 ml 血液中分离纯化高质量基因组 DNA 独特包埋的磁珠, 在一定条件下对核酸具有很强的亲和力, 而当条件改变时, 磁珠释放吸附的核酸, 能够达到快速分离纯化核酸的目的整个过程不涉及有机试剂, 安全便捷, 提取的基因组 DNA 片段大, 纯度高, 质量稳定可靠, 尤其适合高通量工作站的自动化提取使用本试剂盒纯化的 DNA 可适用于各种常规操作, 包括酶切 PCR 荧光定量 PCR 文库构建 Southern 杂交, 芯片检测高通量测序等实验产品特点简便快捷 :1 h 内即可获得超纯的基因组 DNA 高通量 : 可整合移液法自动化仪器和磁棒法自动化仪器进行高通量提取实验安全无毒 : 无需酚 / 氯仿等有机试剂纯度高 : 获得的 DNA 纯度高, 可直接用于芯片检测高通量测序等实验提取得率样本提取量 (μl) DNA 得率 (μg) 新鲜血液脐带血陈旧血液注意事项请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项 1. 本产品适用于手工提取或自动化仪器整合 2. 自备试剂 : 异丙醇, 乙醇 3. 最适上样量 : 建议血液上样量为 μl 最佳, 如果要从 250 μl-1 ml 的血液中提取基因组, 需自备细胞裂解液 CL(TIANGEN,RK151) 和缓冲液 GS(TIANGEN,RK152) 4. 样品应避免反复冻融, 否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降 5. 若裂解液 GHL 中有沉淀, 可在 37 水浴中重新溶解, 摇匀后使用 2

3 操作步骤使用前请先在缓冲液 GDA 和漂洗液 PWD 中加入无水乙醇, 加入体积请参照瓶子上的标签一手工操作步骤 : 1. 取 200 µl 血液样品至 2 ml 离心管 ( 自备 ) 中注意 : 本试剂盒可从 100 µl-1 ml 血液中分离纯化高质量基因组 DNA 当血液样品处理量为 µl 时 : 按下表加入裂解液和异丙醇用量血液起始量裂解液用量异丙醇用量 100 µl 150 µl 200 µl 150 µl 250 µl 320 µl 200 µl 300 µl 350 µl 250 µl 300 µl 350 µl 当血液样品处理量为 250 µl-1 ml 时 : 需细胞裂解液 CL(TIANGEN,RK151) ( 自备 ) 处理, 具体步骤如下 : 在样品中加入倍血液样品体积的细胞裂解液 CL, 颠倒混匀, 10,000 rpm (~11,500 g ) 离心 1 min, 吸去上清, 留下细胞核沉淀 ( 如果裂解不彻底, 可加入倍血液样品体积的细胞裂解液 CL 重复裂解一次 ), 向细胞核沉淀中加 50 µl 缓冲液 GS(TIANGEN,RK152) ( 自备 ), 振荡至彻底混匀, 再进行下一步实验 2. 加入 20 µl Proteinase K 溶液 3. 加入 300 µl 裂解液 GHL, 振荡混匀注意 : 当样本数目比较大时, 可以按每 300 µl 裂解液 GHL 加入 20 µl Proteinase K 的比例预先混合, 混合后每个样本用量为 320 µl, 混合后的溶液室温放置不要超过 1 h, 最好现用现配 4. 将离心管置于 65, 孵育 15 min, 期间颠倒混匀 3 回, 每回 3-5 次 5. 室温放置 5 min 6. 加入 350 µl 异丙醇, 振荡混匀 10 sec 7. 加入 20 µl 磁珠悬浮液 G, 振荡混匀 1 min, 共静置 9 min, 每 3 min 振荡混匀 1 min 注意 : 为了确保磁珠彻底重悬, 请在使用前振荡混匀 3

4 8. 将离心管放置于磁力架上静置 30 sec, 磁珠完全吸附后, 小心吸去液体 9. 将离心管从磁力架上取下, 加入 700 μl 缓冲液 GDA( 使用前请先检查是否已加入无水乙醇 ), 振荡混匀 5 min 10. 将离心管放置于磁力架上静置 30 sec, 磁珠完全吸附后, 小心吸去液体注意 : 如果对于 DNA 纯度要求更高, 可以重复步骤 9 和 10 一次 11. 将离心管从磁力架上取下, 加入 700 μl 漂洗液 PWD( 使用前请先检查是否已加入无水乙醇 ), 振荡混匀 2 min 12. 将离心管放置于磁力架上静置 30 sec, 磁珠完全吸附后, 小心吸去液体 13. 重复步骤 11 和 12 一次 14. 将离心管于磁力架上, 室温晾干 min 注意 : 乙醇残留会抑制后续的酶反应, 所以晾干时要确保乙醇挥发干净但也不要干燥太长时间, 以免难以洗脱 DNA 15. 将离心管从磁力架上取下, 加入 μl 洗脱缓冲液 TB, 振荡混匀, 置于 56, 孵育 10 min, 期间颠倒混匀 3 回, 每回 3-5 次 16. 将离心管放置于磁力架上静置 2 min, 磁珠完全吸附后, 小心将 DNA 溶液转移至一个新离心管中, 并于适当条件保存 4

5 二移液法自动化仪器提取步骤准备工作及注意事项 : 1. 本产品可整合 Hamilton Microlab STAR Beckman Coulter Biomek FX 和 Capitalbio LabKeeper 等移液法自动化仪器进行高通量血液基因组提取工作 2. 裂解液和 Proteinase K 混合液的配制 : 按照 300 µl 裂解液 GHL 加入 20 µl Proteinase K 的比例预先混合, 混合后每个样本用量为 320 µl 混合后的溶液室温放置不要超过一个小时, 最好现用现配 3. 磁珠稀释液的配制 : 按照 20 µl 磁珠悬浮液 G 加入 80 µl 异丙醇的比例混合, 混合后每个样本用量为 100 µl 4. 对于 Hamilton Microlab STAR 类的仪器, 有放置 2 ml 离心管的板位, 可以不使用异丙醇来稀释磁珠, 异丙醇的加入体积仍为 350 µl 每个离心管可以放入 1 ml 左右的磁珠, 吸取磁珠前吹打混匀 5 次, 直接进行 20 µl 磁珠的分液操作, 分液完成后将磁珠管盖盖好保存 5. 对于 DNA 含量高的脐带血或者是经过细胞裂解液 CL 处理后的较大体积的起始血样, 建议血液裂解后加入异丙醇吹打混匀 5 次以后, 再加入磁珠进行混匀, 避免磁珠聚集后不易进行充分的漂洗 6. 考虑仪器设定温度和 96 孔板内的实际温度有一定的偏差, 在裂解和洗脱时建议仪器设定温度比实际使用温度高出如果超出仪器吸取废液时的最大体积, 可以适当降低裂解液体积至 250 µl 提取步骤 : 1. 在 96 深孔板 ( 自备 ) 中加入 200 µl 血液样本 ( 若为冻存血, 请待完全解冻后再进行 ) 2. 每孔加入 320 µl 裂解液 GHL 和 Proteinase K 的混合液 3. 将深孔板置于 75, 孵育 15 min, 一直振荡混匀 4. 将加热模块温度调至 25, 继续振荡 5 min 5. 每孔加入 270 µl 的异丙醇, 吹吸 6 次, 然后振荡混匀 5 min 6. 每孔加入 100 µl 磁珠稀释液, 吹吸 6 次, 然后振荡混匀 10 min 7. 将深孔板放置于磁力架上静置 2 min, 磁珠完全吸附后, 吸去液体 5

6 8. 将深孔板从磁力架上取下, 加入 100 µl 缓冲液 GDA, 振荡混匀 2 min 然后再加入 600 µl 缓冲液 GDA, 吹吸 6 次, 然后振荡混匀 2 min 9. 将深孔板放置于磁力架上静置 2 min, 磁珠完全吸附后, 吸去液体注意 : 如果对于 DNA 纯度要求更高, 可以重复步骤 8 和 9 一次 10. 将深孔板从磁力架上取下, 加入 100 µl 漂洗液 PWD, 振荡混匀 1 min 然后加入 600 µl 漂洗液 PWD, 吹吸 6 次, 然后振荡混匀 2 min 11. 将深孔板放置于磁力架上静置 2 min, 磁珠完全吸附后, 吸去液体 12. 重复步骤 10 和 11 一次 13. 将深孔板置于磁力架上,37 晾干 5 min 14. 将深孔板从磁力架上取下, 加入 µl 洗脱缓冲液 TB, 置于 65, 振荡混匀 10 min 15. 将深孔板放置于磁力架上静置 2 min, 磁珠完全吸附后, 小心将 DNA 溶液转移至收集板中, 并于适当条件保存 6

7 三磁棒法自动化仪器提取步骤 : 准备工作及注意事项 : 1. 本产品既可整合 Thermo KingFisher Flex 等有加热装置的磁棒法自动化仪器进行高通量血液基因组提取工作, 也适用于 Taco 等没有加热装置的磁棒法自动化仪器 2. 裂解液和 Proteinase K 混合液的配制 : 按照 300 µl 裂解液 GHL 加入 20 µl Proteinase K 的比例预先混合, 混合后每个样本用量为 320 µl 混合后的溶液室温放置不要超过 1 h, 最好现用现配 3. 将 700 µl 缓冲液 GDA 700 µl 漂洗液 PWD 和 µl 洗脱缓冲液 TB 分别加到 96 孔板相应的位置上, 将 20 µl 磁珠 G 加入到 700 µl 缓冲液 GDA 中 4. 使用磁棒法仪器也可以按照移液法仪器的操作步骤, 需要裂解步骤完成后, 设置暂停步骤再加入异丙醇提取步骤 : 1. 在 96 深孔板 ( 自备 ) 中加入 200 µl 血液样本 ( 若为冻存血, 请待完全解冻后再进行 ) 2. 每孔加入 320 µl 裂解液 GHL 和 Proteinase K 混合液 3. 将 96 孔板置于自动化提取仪中,75 孵育 15 min, 期间中速和快速间隔拍打混匀 4. 仪器暂停后, 每孔加入 350 µl 异丙醇, 快速拍打混匀 5 min 5. 使用磁力套深入到含有磁珠的缓冲液 GDA 的孔中, 快速拍打混匀 1 min, 吹散磁珠 6. 磁力棒深入到磁力套中, 吸附磁珠 3 次, 每次 20 sec 7. 将磁珠转移到含有血液和裂解液 GHL 的孔中, 释放磁珠, 中速和快速间隔拍打混匀 10 min 8. 磁力棒深入到磁力套中, 吸附磁珠 3 次, 每次 20 sec 9 将磁珠转移到含有第一遍缓冲液 GDA 的孔中, 释放磁珠, 快速拍打混匀 3 min 10. 磁力棒深入到磁力套中, 吸附磁珠 3 次, 每次 20 sec 11. 将磁珠转移到含有第二遍缓冲液 GDA 的孔中, 释放磁珠, 快速拍打混匀 3 min 12. 磁力棒深入到磁力套中, 吸附磁珠 3 次, 每次 20 sec 7

8 TIANGEN 官方微信, 专业服务助力科研 : 可视化操作指南技术公开课合辑全线产品查询在线专家客服微信直播课堂最新优惠活动 13. 将磁珠转移到含有第一遍漂洗液 PWD 的孔中, 释放磁珠, 快速拍打混匀 3 min 14. 磁力棒深入到磁力套中, 吸附磁珠 3 次, 每次 20 sec 15. 将磁珠转移到含有第二遍漂洗液 PWD 的孔中, 释放磁珠, 快速拍打混匀 3 min 16. 磁力棒深入到磁力套中, 吸附磁珠 3 次, 每次 20 sec 17. 磁力棒吸附磁珠后悬空晾干 5 min 18. 将磁珠转移到含有洗脱缓冲液 TB 的孔中,75 孵育, 快速拍打混匀 10 min 19. 磁力棒深入到磁力套中, 吸附磁珠 3 次, 每次 30 sec 20. 将吸附的废弃磁珠转移到含有漂洗液 PWD 的孔中, 拍打混匀 1 min 21. 程序结束后, 小心将 DNA 溶液转移至收集板, 并于适当条件保存 DNA 浓度及纯度检测得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间操作过程中的剪切力等因素有关得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度 DNA 应在 OD 260 处有显著吸收峰,OD 260 值为 1 相当于大约 50 μg/ml 双链 DNA 40 μg/ml 单链 DNA OD 260 /OD 280 比值应为 , 如果洗脱时不使用洗脱缓冲液, 而使用去离子水, 比值会偏低, 因为 ph 值和离子存在会影响光吸收值, 但并不表示纯度低 8

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未命名 -1 TM CommaX Blood Genomic DNA Kit 血液基因组 DNA 提取试剂盒 ( 离心柱型 ) 本说明书 (1.0 版 ) 适用于货号为 MNP002-1 MNP002-2 的产品所有的技术文献均可以从本公司网站 www.biocomma.cn 得到请访问本公司网站以确保您所使用的技术手册为最新版本版本号 :BP024-1 www.biocomma.com 血液基因组 DNA