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- 堪 蒯
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1 中 華 民 國 第 五 十 一 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 科 別 : 生 物 科 組 別 : 高 中 組 作 品 名 稱 : 不 給 糖 就 搗 蛋 - 蛀 牙 細 菌 的 抑 制 關 鍵 詞 :Bacillus horikoshii 轉 糖 鏈 球 菌 蛀 牙 編 號 :
2 摘 要 : 本 實 驗 的 目 的 是 希 望 能 找 出 人 類 牙 齒 上 的 主 要 菌 種 牙 齒 的 疾 病, 是 由 某 些 細 菌 會 形 成 難 以 破 壞 的 生 物 膜, 導 致 細 菌 能 長 期 滋 長, 並 破 壞 牙 齒 的 琺 瑯 質, 使 牙 齒 中 的 鈣 質 流 失, 最 後 導 致 蛀 牙 的 情 形 ; 本 實 驗 主 要 內 容 是 採 取 牙 齒 上 的 垢 物 進 行 培 養, 然 後 加 以 定 序 找 出 細 菌 種 類 與 名 稱, 再 以 拮 抗 菌 的 概 念, 希 望 能 找 出 能 有 效 抑 制 導 致 蛀 牙 細 菌 的 菌 種, 以 菌 種 間 互 相 制 衡 的 方 式, 抑 制 其 生 長, 進 而 研 發 菌 劑, 使 服 用 後 可 減 少 蛀 牙 發 生 機 率 壹 研 究 動 機 : 牙 痛 不 是 病, 痛 起 來 要 人 命, 相 信 很 多 人 對 於 牙 痛, 都 有 著 不 堪 回 首 的 經 驗 ; 齲 齒 ( 蛀 牙 ) 是 目 前 國 人 從 老 到 少 皆 常 見 到 的 口 腔 疾 病, 每 當 看 牙 醫 時, 那 高 頻 的 鑽 牙 器 具 所 發 出 的 聲 音 也 往 往 令 人 對 看 牙 齒 敬 而 遠 之, 也 因 此 讓 很 多 人 就 算 蛀 牙 也 不 願 意 去 看 牙 醫, 導 致 蛀 牙 情 況 惡 化, 最 終 甚 至 要 抽 神 經 或 拔 牙 記 得 之 前 看 過 一 則 恐 佈 的 新 聞, 一 位 四 十 多 歲 的 壯 年 男 子, 因 為 忍 住 牙 痛, 遲 遲 不 肯 就 醫, 導 致 細 菌 流 入 血 液 胸 腔, 引 發 敗 血 症 而 身 亡 蛀 牙 不 治 療, 小 心 出 人 命, 因 為 小 看 或 害 怕 而 不 去 看 牙 醫, 很 容 易 讓 自 己 曝 入 在 危 險 之 中, 蛀 牙 絕 非 小 事, 但 治 療 時 的 疼 痛 卻 也 讓 許 多 人 無 法 忍 耐 減 少 蛀 牙 最 常 使 用 的 方 法 就 是 飲 食 過 後 立 即 的 刷 牙 漱 口, 但 是 週 遭 同 學 中 有 些 人 就 算 不 常 刷 牙 也 依 然 有 一 口 好 牙 齒, 沒 有 蛀 牙 的 困 擾 ; 但 是 有 些 人 卻 是 飯 後 立 即 刷 牙, 卻 依 然 有 蛀 牙 產 生 ; 我 們 對 於 這 種 情 形 相 當 好 奇, 於 是 開 始 去 尋 找 蛀 牙 的 成 因 與 機 制 在 查 詢 相 關 的 資 料 後, 我 們 得 知 蛀 牙 主 要 是 受 到 轉 糖 鏈 球 菌 ( streptococcus mutans) 的 影 響, 它 會 形 成 一 種 生 物 膜 而 使 牙 齒 開 始 蛀 蝕, 由 於 不 清 楚 它 的 作 用 機 制 及 形 成 的 原 因, 我 們 開 始 深 入 的 研 究, 後 來 我 們 從 台 大 微 生 物 學 研 究 所 張 家 瑜 的 碩 士 論 文 中, 得 知 轉 糖 鏈 球 菌 可 代 謝 多 種 糖 類 產 生 乳 酸, 而 使 得 牙 菌 斑 (dental plaque) 局 部 環 境 ph 值 降 到 4 以 下, 因 而 造 成 牙 釉 質 的 脫 鈣 而 造 成 齲 齒 另 外 在 一 篇 江 俊 斌 副 教 授 的 文 章 中 我 們 也 得 知 會 引 起 人 類 牙 齒 蛀 牙 之 細 菌, 主 要 是 突 變 型 鏈 球 菌 ( 或 稱 轉 糖 鏈 球 菌 ) 黏 性 放 線 菌 和 乳 酸 桿 菌 血 鏈 球 菌 緩 鏈 球 菌 糞 腸 球 菌 和 乳 酸 桿 菌 等 因 此, 我 們 決 定 以 我 們 的 牙 齒 為 樣 本, 找 出 是 否 存 在 著 這 些 細 菌, 及 是 否 有 其 他 的 細 菌 能 抑 制 這 些 造 成 蛀 牙 的 細 菌 我 們 決 定 以 各 自 的 牙 齒 為 實 驗 對 象, 分 析 其 上 可 能 附 著 生 長 的 微 生 物, 實 驗 進 行 以 本 組 同 學 狀 態 不 同 的 牙 齒 來 分 析, 當 中 有 一 個 人 一 個 禮 拜 沒 刷 牙, 希 望 藉 此 能 保 留 下 更 完 整 的 細 菌 菌 相 若 能 在 我 們 的 牙 齒 上 找 到 能 拮 抗 造 成 蛀 牙 的 細 菌 的 結 抗 菌, 表 示 這 可 能 此 細 菌 可 能 附 著 或 存 在 於 日 常 食 物 當 中, 進 而 可 以 將 此 類 食 物 推 薦 給 大 眾, 或 是 針 對 蛀 牙 菌 的 拮 抗 菌 製 成 生 物 製 劑, 讓 預 防 齲 齒 不 再 費 神 困 難 貳 研 究 目 的 : 一 比 對 找 出 口 腔 中 常 見 的 細 菌 二 找 出 抑 制 蛀 牙 菌 拮 抗 菌 種 三 檢 測 此 拮 抗 菌 可 否 對 其 它 次 要 的 蛀 牙 菌 產 生 抑 制 四 瞭 解 轉 糖 鏈 球 菌 的 作 用 機 制 1
3 參 研 究 設 備 及 器 材 : 一 實 驗 原 料 : 組 員 A 一 週 無 刷 牙 組 員 B 僅 白 天 刷 牙 組 員 C 日 夜 皆 刷 牙 牙 垢 牙 垢 牙 垢 二 實 驗 藥 品 : Genomic DNA Lysozyme buffer Extraction solution Proteinase K stock solution RNaseA Protein Precipitation solution Isopropanol Ethanol Ligatoin PEG 4000 solution TA vector DNA Ligase Extract plasmid Solution 1 Solution 2 Solution 3 Washing solution A Washing solution B ddh2o F'primer R'primer buffer dntp Taq ddh2o IPTG Xgal ddh2o Mgcl2 Cacl2 DFbuffer Wash buffer ddh2o PCR 藍 白 篩 Transform PCR elution 三 實 驗 設 備 器 材 : 微 量 吸 管 2µl 20µl 200µl 1000µl 2
4 一 高 壓 滅 菌 器 二 製 冰 機 三 -20 度 冰 箱 四 -80 度 冰 箱 3
5 五 37 度 培 養 箱 六 56 度 培 養 箱 七 大 型 離 心 機 八 PCR 機 器 4
6 九 電 泳 用 具 十 無 菌 操 作 台 肆 研 究 過 程 或 方 法 : 一 流 程 圖 : 摳 牙 垢 基 因 轉 殖 到 載 體 塗 盤 挑 菌 落 藍 白 篩 定 序 抽 genome DNA PCR 檢 測 是 否 對 次 要 蛀 牙 菌 產 生 抑 菌 圈 看 結 果 Ligation 5
7 實 驗 說 明 : 一 挑 選 細 菌 將 所 摳 下 的 牙 垢 已 序 式 析 列 分 別 塗 盤 由 其 中 挑 選 幾 個 獨 立 的 菌 落 以 液 態 培 養 在 Lb broth 內 二 抽 genome DNA 取 2.5ml 菌 離 心 13000rpm 2min 去 上 清 液 加 入 180μl Lysozyme buffer,vortex 培 養 37 30min 加 入 600μl Extract solution, vortex 加 入 20μl proteinase K stock solution, vortex 56 培 養 1-3 小 時 加 入 RNaseA 4μl min 加 入 200 μl Protein Precipitation solution, vortex 離 心 top speed 3min 取 上 清 液 到 tube, 再 加 入 600 μl isopopanol, 倒 轉 數 次 直 到 DNA 黏 稠 狀 離 心 top speed 1min 去 上 清 液 加 入 1ml 70% 酒 精 離 心 top speed 1min 去 上 清 液 晾 乾 pellet 5-10min 加 入 ddh 2 O 30μl 5min 回 溶 6
8 三 PCR ddh 2 O 36μl dntp 5μl 20-25cycl PCR buffer F primer R primer 4μl 2μl 2μl 分 30 秒 30 秒 30 秒 72 Taq 1μl DNA 0.5μl 以 此 方 法 將 所 需 的 DNA 片 段 放 大 數 倍, 始 較 不 易 受 到 汙 染 四 clean up 取 100μl PCR sample 加 入 5 倍 體 積 DF buffer vortex 去 除 濾 液 乾 轉 3min 換 column 到 加 入 40 μl ddh 2 O 靜 置 2min 離 心 架 column 加 入 上 步 驟 之 液 體 離 心 13000rpm 30sec 去 除 濾 液 加 入 wash buffer 600μl 靜 置 1min 離 心 13000rpm 30sec 7
9 五 Ligation 10X ligation 50% PEG4000 solution TA vector DNA ligase buffer 1μl 1μl 1μl 6μl 1μl 2. 放 室 溫 1 小 時 以 4 度,overnight 培 養 六 transform 前 一 天 養 菌 1/100 取 200μl 至 20ml 錐 形 瓶 養 3 小 時 冰 上 放 5min 放 入 50ml 離 心 管 離 心 6000rpm 5min 倒 上 清 液 加 入 MgCl 2 大 力 搖 離 心 6000rpm 5min 倒 上 清 液 加 入 CaCl 2 100μl / 管 加 入 ligation 之 物 冰 上 放 20min 42 1min30sec 冰 上 放 20min 加 入 900μl LB 預 養 1 小 時 離 心 6000rpm 5min 去 上 清 液 塗 盤 加 入 CaCl 2 靜 置 20min 離 心 6000rpm 5min 倒 上 清 液 8
10 七 藍 白 篩 1. 預 養 再 37 度 培 養 箱 一 小 時 2. 1M IPTG 10μl Xgal ddh2o 20μl 70μl 塗 盤 ( 要 避 光 ) 將 轉 殖 完 的 菌 塗 到 PLATE 上 挑 選 白 色 的 菌 落 沒 有 轉 殖 成 功 不 要 轉 殖 成 功 才 取 9
11 八 Extract plasmid 菌 液 離 心 13000rpm 1min 600μl washing solution B 離 心 1min 200μl solution I, vortex 200μl solution II, 輕 搖 5 次 200μl solution III, 輕 搖 5 次 離 心 13000rpm 5min 600μl washing solution B 離 心 1min 去 除 濾 液 空 轉 5min column 換 到 新 tube 60μl ddh 2 O 3min 離 心 3min 架 column 取 上 清 液 並 離 心 1min 500μl washing solution A 離 心 1min 九 檢 測 是 否 對 次 要 蛀 牙 菌 產 生 抑 菌 圈 將 欲 抑 制 的 菌 200μl 塗 到 培 養 皿 上 將 可 能 為 拮 抗 菌 的 菌 液 10μl 滴 在 中 央 紙 片 上 培 養 overnight 若 可 拮 抗 中 央 紙 片 周 圍 會 有 一 圈 澄 清 的 區 域, 即 為 拮 抗 圈 10
12 拮 抗 環 中 央 紙 片 長 滿 菌 落 的 未 拮 抗 區 塊 預 抑 制 的 細 菌 分 為 四 種, 乳 酸 菌 A 乳 酸 菌 B 酵 母 菌 A 酵 母 菌 B 由 於 某 細 菌 許 以 其 最 適 合 的 生 長 環 境 為 準, 因 此 將 培 養 基 分 為 兩 種 1. MRS broth 加 Agar 2. LB broth 加 Agar 加 葡 萄 糖 Glucose 伍 研 究 結 果 : 一 抽 plasmid 後 電 泳 確 認 有 抽 到 plasmid, 表 示 定 序 出 來 之 細 菌 確 實 為 牙 垢 裡 取 出 的 圖 一 Bacillus horikoshii 11
13 二 以 細 菌 16S rrna 的 基 因 定 序 比 對 出 菌 種 : 圖 二 圖 二 將 培 養 的 細 菌 送 去 定 序, 再 到 NCBI 網 站 查 詢, 紅 框 處 的 細 菌 Bacillus horikoshii 根 據 論 文 為 能 抑 制 蛀 牙 菌 - 轉 糖 鏈 球 菌 streptococcus mutans 產 生 生 物 膜 之 拮 抗 菌 圖 三 三 刷 牙 時 間 不 同, 與 找 到 之 細 菌 比 較 Bacillus horikoshii 12
14 一 週 無 刷 牙 僅 白 天 刷 牙 日 夜 皆 有 刷 找 到 可 抑 制 轉 糖 鏈 球 菌 形 成 生 物 膜 的 細 菌 Bacillus horikoshii 無 找 到 與 蛀 牙 相 關 之 細 菌 無 找 到 與 蛀 牙 相 關 之 細 菌 四 檢 測 此 拮 抗 菌 可 否 對 蛀 牙 菌 產 生 抑 制 照 成 蛀 牙 之 細 菌 : 主 要 轉 糖 鏈 球 菌 streptococcus mutans Bacillus horikoshii 抑 制 效 果 可 抑 制 其 生 物 膜 生 長 次 要 : 測 試 四 隻 會 產 酸 破 壞 琺 瑯 質 之 細 菌 細 菌 種 類 抑 制 效 果 酵 母 菌 A 無 效 圖 四 酵 母 菌 B 無 效 圖 五 乳 酸 菌 A 無 效 圖 六 乳 酸 菌 B 無 效 圖 七 圖 四 因 為 無 抑 菌 圈 的 產 生, 所 以 Bacillus horikoshii 無 抑 制 效 用 圖 五 因 為 無 抑 菌 圈 的 產 生, 所 以 Bacillus horikoshii 無 抑 制 效 用 13
15 圖 六 因 為 無 抑 菌 圈 的 產 生, 所 以 Bacillus horikoshii 無 抑 制 效 用 圖 七 因 為 無 抑 菌 圈 的 產 生, 所 以 Bacillus horikoshii 無 抑 制 效 用 14
16 五 轉 糖 鏈 球 菌 的 作 用 機 制 轉 糖 鏈 球 菌 是 一 株 經 常 在 人 類 口 腔 中 被 發 現 的 革 蘭 氏 陽 性 兼 性 厭 氧 菌, 含 有 乳 酸 脫 氫 酶, 能 將 焦 葡 萄 酸 (pyruvic acid) 轉 變 為 乳 酸, 乳 酸 進 而 傷 害 牙 齒 的 琺 瑯 質 它 又 具 有 一 種 glucosyltransferase 的 酶, 可 將 葡 萄 糖 聚 合 成 glucans glucans 是 一 種 細 菌 體 外 的 多 醣 類, 黏 性 很 大, 細 菌 可 藉 此 物 質 集 聚 一 起 並 且 依 附 在 牙 齒 表 面 繁 殖, 形 成 齒 斑 此 外 glucans 又 會 減 低 唾 液 清 洗 口 腔 的 能 力 在 酸 性 條 件 下,S.mutans 仍 然 可 以 生 存 它 還 可 製 造 細 菌 體 內 的 另 一 種 多 醣 類 (amylopectin 之 類 的 化 合 物 ), 這 些 多 醣 類 會 被 轉 化 為 有 機 酸 轉 糖 鏈 球 菌 須 在 固 體 上 才 能 生 長, 因 此 不 會 附 著 於 口 腔 黏 膜 繁 殖 葡 萄 糖 C 6 H 12 O 6 蔗 糖 C 12 H 22 O 11 焦 葡 萄 酸 C 3 H 4 O 3 乳 酸 C 3 H 6 O 3 果 糖 C 6 H 12 O 6 上 述 為 細 菌 將 蔗 糖 代 謝 為 乳 酸 的 過 程 陸 討 論 : 一 經 過 實 驗 之 後, 在 牙 垢 中 發 現 此 株 菌 -Bacillus horikoshii, 且 此 菌 可 能 與 抑 制 蛀 牙 有 關 二 經 過 抑 菌 圈 實 驗 後, 我 們 發 現 Bacillus horikoshii 對 於 引 起 蛀 牙 的 次 要 細 菌 並 無 明 顯 的 抑 制 效 果 三 轉 糖 鏈 球 菌 會 引 發 蛀 牙 的 發 生, 有 文 件 顯 示 本 組 在 牙 垢 中 發 現 的 Bacillus horikoshii, 可 能 可 以 抑 制 轉 糖 鏈 球 菌 的 生 物 膜 的 產 生, 在 日 後 可 能 會 對 防 治 蛀 牙 有 極 大 的 效 果 本 組 組 員 希 望 再 繼 續 進 行 實 驗, 了 解 轉 糖 鏈 球 菌 和 Bacillus horikoshii 之 間 的 抑 制 作 用 15
17 柒 結 論 : 一 我 們 的 牙 垢 當 中 找 到 了 一 隻 能 抑 制 轉 糖 鏈 球 菌 的 細 菌, 證 明 它 應 該 是 藉 由 食 物 傳 入 口 中 的, 而 它 對 轉 糖 鏈 球 菌 的 抑 制 作 用, 能 讓 轉 糖 鏈 球 菌 的 生 物 膜 無 法 生 長, 進 而 使 轉 糖 鏈 球 菌 的 許 多 作 用 無 法 產 生, 讓 其 它 能 分 解 醣 類 的 細 菌 無 法 繼 續 代 謝 出 酸 來 破 壞 琺 瑯 質, 而 達 到 治 療 蛀 牙 的 效 用 二 Bacillus horikoshii 僅 僅 對 轉 糖 鏈 球 菌 有 用, 因 此 要 是 次 要 的 蛀 牙 菌, 有 了 其 他 的 醣 類 來 原, 便 又 能 產 生 破 壞 琺 瑯 質, 使 得 牙 齒 繼 續 蛀 牙 三 未 來 展 望 : 原 本 設 想 是 要 雙 管 齊 下 對 照 進 行 驗 證, 一 方 面 以 定 序 比 對 分 析, 另 一 方 面 是 以 DGGE 的 方 式 進 行 對 照 口 中 所 有 菌 種, 但 由 於 時 間 的 因 素 暫 時 未 能 得 到 結 果, 在 未 來 的 期 望 中, 希 望 能 將 DGGE 的 實 驗 流 程 執 行 完 畢, 就 能 更 有 效 率 的 分 析 出 牙 齒 上 的 菌 種 存 在, 到 時 或 許 就 能 發 現 出 更 多 牙 齒 上 的 秘 辛, 也 能 更 了 解 出 在 牙 齒 上 的 細 菌 戰 是 如 何 發 生 的 ; 而 我 們 的 第 一 部 分 實 驗 也 幸 運 的 篩 選 出 能 拮 抗 轉 糖 鏈 球 菌 的 拮 抗 菌 種, 經 由 口 中 常 見 的 產 酸 菌 種 進 行 拮 抗 實 驗, 以 兩 隻 乳 酸 菌 兩 隻 酵 母 菌, 採 取 五 循 環 的 實 驗 機 制, 卻 無 法 看 出 抑 菌 的 效 果, 抑 菌 圈 也 無 產 生 的 趨 勢 ; 但 我 們 在 論 文 中 有 找 出, 我 們 所 篩 選 出 來 的 Bacillus horikoshii 菌 確 實 能 有 效 抑 制 轉 糖 鏈 球 菌 的 生 物 膜 形 成 在 未 來 的 發 展 上, 正 著 手 於 Bacillus horikoshii 菌 的 生 長, 了 解 其 生 物 抑 制 的 機 制 且 是 否 使 用 過 量 會 危 害 人 類 口 腔 中 的 其 他 機 制 運 作, 位 於 哪 些 可 食 用 的 食 物 蔬 果 上 能 產 生, 要 是 能 查 詢 出 確 切 的 食 物, 或 許 加 以 推 廣 以 天 然 的 方 式 就 能 有 效 的 減 少 國 人 蛀 牙 的 發 生 機 率, 但 如 果 難 以 印 證 或 生 物 體 內 的 量 過 於 稀 少, 導 致 無 法 有 效 的 控 制 蛀 牙 菌 的 生 長, 最 後 的 步 驟 我 們 會 朝 生 物 製 劑 的 方 式 進 行 考 量, 對 於 上 段 所 說 明 的 蛀 牙 主 因 轉 糖 鏈 球 菌 的 菌 種 進 行 拮 抗 實 驗, 先 證 實 確 切 無 誤 的 拮 抗 作 用 能 順 利 產 生, 再 找 尋 出 較 能 符 合 經 濟 效 益 以 及 安 全 範 圍 的 使 用 量 進 行 實 驗, 讓 人 類 能 成 功 免 於 蛀 牙 菌 的 威 脅, 以 最 天 然 的 生 物 相 剋 的 概 念, 進 行 便 利 且 快 速 的 蛀 牙 治 癒 捌 參 考 資 料 : 一 衛 生 署 國 民 健 康 局 婦 幼 及 生 育 保 健 組 二 碩 士 論 文 轉 糖 鏈 球 菌 酸 敏 感 突 變 株 的 選 殖 及 分 析 張 家 瑜 1998 三 四 Antibiofilm activity of coral-associated bacteria against different clinical M serotypes of Streptococcus pyogenes 五 16
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2004...1...3 2004...5...9 2004...10 2004...13...16...18...19...23...35...39...42...44...46...50 I ...53...54 ( )...57...58...62... 121... 124... 149 ( )... 151... 152... 154... 157... 158... 159... 163...
广西大学（一）.doc
.....1... 11...14...15...16...17...19...19...22 ( )...30 ( )...32...34...39...44 ( )...63...64...67...69 I ...75...77...79...81...87 ( )...88...92...93...95...98... 100... 104... 114... 116... 124 ( )...
根据学校教学工作安排，2011年9月19日正式开课，也是我校迁址蓬莱的第一学期开学
济 南 大 学 泉 城 学 院 2014 届 毕 业 生 就 业 质 量 年 度 报 告 前 言 济 南 大 学 泉 城 学 院 是 国 家 教 育 部 和 山 东 省 人 民 政 府 正 式 批 准 成 立, 实 施 本 科 层 次 学 历 教 育 的 综 合 性 高 等 院 校 自 2005 年 建 校 以 来, 学 院 依 托 济 南 大 学 雄 厚 的 办 学 实 力, 坚 持 以 学 生
山东大学（一）.doc
...1...8...23...27...30 ( )...33...36...40...44...46...52 ( )...53...54...54 I ...55...56...58...59...60 ( )...63...75...88...92...99 ( )... 110... 118... 138... 142... 148 ( )... 152 2004 2006... 156
主 编 : 杨 林 副 主 编 : 张 新 民 邹 兰 曹 纯 纯 周 秋 婷 李 雅 清 黄 囡 囡 评 审 顾 问 : 杨 林 张 新 民 评 审 : 张 新 民 邹 兰 曹 纯 纯 周 秋 婷 李 雅 清 黄 囡 囡 李 忆 萍 徐 如 雪 文 字 编 辑 : 曹 纯 纯 邹 兰 李 雅 清
主 编 : 杨 林 副 主 编 : 张 新 民 邹 兰 曹 纯 纯 周 秋 婷 李 雅 清 黄 囡 囡 评 审 顾 问 : 杨 林 张 新 民 评 审 : 张 新 民 邹 兰 曹 纯 纯 周 秋 婷 李 雅 清 黄 囡 囡 李 忆 萍 徐 如 雪 文 字 编 辑 : 曹 纯 纯 邹 兰 李 雅 清 周 秋 婷 李 忆 萍 徐 如 雪 何 雯 技 术 编 辑 : 李 雅 清 曹 纯 纯 薛 莞 陈 敏
最新文物管理执法全书（十四）.doc
I...1...3...5...8...12...15...19...23...25...28...30...34...37...39...43...47...50...52...55...59...60...63...67...70 ...75...79...82...83...85...90...92...95...99... 103... 106... 113... 117... 119...
园林常识（二）.doc
I...1...1...1...2...32...33...36...38...41...42...43...43...43...44...45...45...46...48...49...56...62...65 ...68...77...84...98... 103 :... 104... 105 :... 107 :... 109... 110...111... 126... 127... 130
前 言 二 一 六 年 四 月 四 日, 兒 童 節, 誕 生 了 一 件 美 事 : 中 國 作 家 曹 文 軒 在 意 大 利 博 洛 尼 亞 國 際 童 書 展 榮 獲 國 際 安 徒 生 文 學 獎, 是 該 獎 創 設 六 十 年 來, 第 一 位 摘 桂 的 中 國 作 家, 意 義 重
目 錄 前 言 i 童 年 1 關 於 肥 肉 的 歷 史 記 憶 ( 節 錄 ) 7 疲 民 15 水 邊 的 文 字 屋 23 海 邊 的 屋 29 紅 葫 蘆 37 追 隨 永 恆 ( 草 房 子 代 跋 一 ) 53 因 水 而 生 草 房 子 寫 作 札 記 59 書 香 人 家 73 朗 讀 的 意 義 79 知 無 涯, 書 為 馬 85 讀 是 誰 91 給 孩 子 講 課 文 學
湖 南 科 技 大 学
I 目 录 第 一 章 2015 年 度 培 训 概 况 1 1 基 本 情 况 1 1.1 项 目 申 报 情 况 1 1.2 项 目 实 施 情 况 3 1.3 学 员 来 源 情 况 5 1.4 项 目 经 费 情 况 7 2 组 织 管 理 9 2.1 学 校 设 立 培 训 项 目 实 施 工 作 领 导 小 组 9 2.2 施 训 学 院 设 立 项 目 实 施 办 公 室 9 3 培
上海外国语大学（二）.doc
...1...3...4...9...10 ( )... 11...12...16...31...33...34...50...56...58...60...62 I II...63...65...68...74...75...75...76...76...78...87...92...96 ( )...96 ( )...97 ( )...98 ( )...99... 100 ( )... 101
2009 陳 敦 德
前 言 : 發 掘 香 港 歷 史 獨 有 的 寶 藏 2010 2009 陳 敦 德 目 錄 前 言 發 掘 香 港 歷 史 獨 有 的 寶 藏 / i 第 一 章 香 港 設 立 八 路 軍 辦 事 處, 青 年 廖 承 志 為 主 任 /1 一 毛 澤 東 認 為, 八 路 軍 駐 香 港 辦 事 處, 是 個 獨 特 的 辦 事 處 /10 二 毛 澤 東 親 自 點 將, 為 小 廖 舉
切 实 加 强 职 业 院 校 学 生 实 践 能 力 和 职 业 技 能 的 培 养 周 济 在 职 业 教 育 实 训 基 地 建 设 工 作 会 议 上 的 讲 话 深 化 教 育 教 学 改 革 推 进 体 制 机 制 创 新 全 面 提 高 高 等 职 业 教 育 质 量 在
目 录 中 华 人 民 共 和 国 职 业 教 育 法... 1 国 务 院 关 于 大 力 推 进 职 业 教 育 改 革 与 发 展 的 决 定... 7 国 务 院 关 于 大 力 发 展 职 业 教 育 的 决 定... 17 教 育 部 财 政 部 关 于 实 施 国 家 示 范 性 高 等 职 业 院 校 建 设 计 划 加 快 高 等 职 业 教 育 改 革 与 发 展 的 意 见...
鸽子（三）
...1...3...5...7....9...12...20...28...30...33...39...52....53...56...60...61...64...67....86 I ...88...90...95.... 102... 107... 112... 115... 125... 127... 128... 134... 139... 149... 151... 152... 156...
兽药基础知识（四）
...1...1...3...4...9...10... 11...13...14...15...16...18...19...23...24...26...29...32...34 I ...36...38...39...40...41...43...45...47...49...50...52...53...54...55...57...59...61...64 E...68...69...72
园林植物卷（十）.doc
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园林植物卷（十七）.doc
I II III 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67
临床手术应用（三）
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家装知识（二十）
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医疗知识小百科
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家庭万事通（一）
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家装知识（三）
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园林绿化（一）
( 20 010010) 7871092 32 162.50 2004 12 1 2004 12 1 11 000 495.00 ( 19.80 ) ...1...2 605...5 84K...7 9...9...12...15...17...18...20...30...32...36...40...40...43...45...50 ( )...52 I ... 106... 113... 121...
园林植物卷（十五）.doc
I II III 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67
最新监察执法全书（一百五十）.doc
................................ I ............................. 2000.................. II ...... III [2002]5 1 2 3 4 5 6 1 2 3 1993 8 14 () () () () () () () () () () () () () () () () () ()
兽药基础知识（三）
...1...2...5...8...10... 11...16...18...20...24...26...27...30...31...35...39...43...45...46 I ...49...50...52...53...54...54...57...61...62 ()...64...65...67...68...71...73...75...77...77...78.....80...81
奥运档案（四）.doc
...1 2012...1...2 (2004.3.22 28)...2 (2004 3 15 21)...8 (2004.3.8 14)...14 (2004.3.1 3.7)...21 (2004.2.23 29)...28 (2004.3.8 14)...34...41 2012...45...48...50 1964...51 1968...59 1972...69 1976...79 1980...90
最新监察执法全书（五十）.doc
............................ ( )... I ................................. II ..................... III @ 3 12 2 2 1 ( ) ( [1999]9 ) ( [2001]21 ) 1. 2. 3.
最新执法工作手册（三百八十四）
[1999 2 5 1999 7 ]............... I ... 1998... 1998................... II ....................... III [1999 2 5 1999 7 ] 30 30 2 1 15 30 30 B 15 1 1 2 2 l 2 1 5 12 5 10 18 10 24 1 1 2 1 l 24 1 12 13 24
中华美食大全4
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动物杂谈_二_.doc
I...1...2...4...5...6...7...12...13...14 :...16...18 10...19...21...23...24...24 50...25...26...27 :...28...29...30 :...31...32 II...33...34...35...35...36...37 -...43...44...45...49...50 8000...54...54...57...58...60...61...63...65...68...77...78...79...90...93
抗非典英雄赞歌（三）
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新时期共青团工作实务全书（三十五）
....................................... I ................................. II ...... 90 90... III ' ' 1 2 3 4 1 2 3 30 90 02 0.15 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 2 11 12
经济法法律法规第十九卷
...1...6...12...18...29 ( )...34...39...53...62...67...76...83...87 (2001 )...92...99 I ...111... 118... 120... 122... 128... 134... 137... 140... 141... 144... 151... 152 II ... 153... 158... 163 ()...
游戏攻略大全（五十九）.doc
...1 ----...15...41 2...41...41...42...43...43...44...45...46...47...48...49...50...51...52...53...54...55...57...58...59 I II...60...61...63...64...65...66...66...67...69...70...70...71...72...73 ---...78...79...79...79...80...80...80...80...81...81...82...82
火灾安全实例
...1...2...3...4... 19... 21... 26... 30... 40... 41... 43... 45... 51... 58... 61... 63... 66... 73... 79... 95... 97 I ... 98... 103... 105...113 ( )... 126... 135... 137... 144... 149... 157... 161...
兽药基础知识（七）
...1...4...5...7...9... 11...14...15...17...19...21...24...27.....28...29...31...32...38...39 I ...42...43...46...47...48...50...52...54...56...57...62...64...65...66...69...71...78...79...82...83...87
实用玉米技术（二）
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中国政法大学（一）.doc
...1...6...7...31...32...35...36...40...45...53...60...67...79...82 () I ...88...96... 108... 120 ()... 124... 126... 128 ( )... 132... 134... 143 ( )... 143 ( )... 146... 160... 163... 166 II ... 169
水产知识（一）
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國立中山大學學位論文典藏.PDF
I II ..1.1.1.1.4. 4.....5...11.13... 13...23.........31........42....42 57.......70...70... 75.......83......83......88....100..115.115.127.130..137.137.138..141 III 1979 860 1 1979 1980 4 1987 1979 34
Microsoft Word - 405-mpc-min-chi.doc
城 市 規 劃 委 員 會 都 會 規 劃 小 組 委 員 會 二 零 零 九 年 十 月 九 日 上 午 九 時 舉 行 的 第 4 0 5 次 會 議 記 錄 出 席 者 規 劃 署 署 長 伍 謝 淑 瑩 女 士 黃 遠 輝 先 生 主 席 副 主 席 陳 華 裕 先 生 陳 弘 志 先 生 梁 乃 江 教 授 林 雲 峰 教 授 杜 本 文 博 士 邱 小 菲 女 士 陳 家 樂 先 生 陳
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1 3 3 4 5 6 6 8 10 12 13 13 14 15 16 ii 17 17 18 19 20 21 21 22 22 23 24 25 25 26 26 27 27 28 28 iii 29 29 29 30 30 31 31 32 33 1 85 000 70% 2 1 1 41 3 1 1 1 2 1 3 (a) 4 (b) (c) (d) 1 4 1 5 1.6% 457 000
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2010 1 22 93 1996 4 1 2009 8 27 2015 4 24 2005 5 1 94 12 95 2013 5 15 2 2005 12 1 2015 5 30 1993 11 12011 1 8 96 1994 10 11 1996 2005 3 28 2005 5 1 2009 10 11 97 98 (i) (ii) (iii) 2002 11 1 2014 8 31 2015
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2016 3 175,688 163,875 510,091 493,725 (85,912) (81,373) (253,533) (262,191) 89,776 82,502 256,558 231,534 3 611 827 3,158 7,011 3 656 326 2,768 1,480 (53,355) (48,544) (148,127) (120,526) (12,592) (14,056)
招行2002年半年度报告全文.PDF
2 2 12 13 13 16 19 19 1 2 7088 518040 14,444 2,744-370 -1,955-864 14,889 3 4 8% 16.38 14.01 10.26 11.39 11.93 11.61 4% 10.73 9.69 4.23 10.89 11.11 11.30 15% 6.43 7.59 8.15 10.64 9.28 11.44 75% 55.67 57.74
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創 世 紀 9:1-29; 神 的 憐 憫 及 與 挪 亞 立 約 韋 江 傳 道 暖 身 問 題 : 當 別 人 無 意 識 地 踩 到 你 的 腳, 確 一 句 話 不 說 就 走 開 的 時 候, 你 會 怎 麼 樣 做? 注 意 : 大 綱 中 問 題 較 多, 但 顯 然 不 是 所 有 的 都 需 要 討 論 到, 比 較 多 的 是 供 你 們 參 考 所 以, 每 一 個 帶 領 者
穨Shuk-final.PDF
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城 市 規 劃 委 員 會 鄉 郊 及 新 市 鎮 規 劃 小 組 委 員 會 二 零 零 九 年 一 月 二 十 三 日 下 午 二 時 三 十 分 舉 第 3 8 8 次 會 議 記 錄 行 的 出 席 者 規 劃 署 署 長 伍 謝 淑 瑩 女 士 主 席 陳 偉 明 先 生 簡 松 年 先 生 梁 廣 灝 先 生 吳 祖 南 博 士 鄭 恩 基 先 生 鄺 心 怡 女 士 陳 漢 雲 教 授
% 25% (i) 95% 96,290,900 (ii) 99.9% 17,196,000 (iii) 99.9% 89,663,100 2
01165 2016 12 30 (i) 95% 96,290,900 (ii) 99.9% 17,196,000 (iii) 99.9% 89,663,100 1 14.22 14.07 5% 25% 14 14 2016 12 30 (i) 95% 96,290,900 (ii) 99.9% 17,196,000 (iii) 99.9% 89,663,100 2 2016 12 30 (i) (ii)
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事 業 篇 年 級 課 題 名 稱 目 標 1. 讀 書 時 讀 書 遊 戲 時 遊 戲 生 活 計 劃 初 2. 一 寸 光 陰 一 寸 金 處 事 態 度 3. 職 業 分 類 職 業 資 訊 1. 個 人 每 天 生 活 時 間 表 生 活 計 劃 中 2. 誰 的 工 作 處 事 態 度 3. 十 條 問 題 猜 一 猜 職 業 資 訊 1. 時 間 投 資 大 拍 賣 生 活 計 劃 高
1050502公務員懲戒法實務及新制
公 務 員 懲 戒 實 務 及 新 制 智 慧 財 產 法 院 法 官 林 欣 蓉 修 法 沿 革 74 年 5 月 3 日 修 正 89 年 10 月 19 日 函 送 立 法 院 審 議 91 年 3 月 15 日 函 送 立 法 院 審 議 91 年 8 月 29 日 函 送 立 法 院 審 議 94 年 11 月 23 日 函 送 立 法 院 審 議 99 年 2 月 9 日 函 送 立 法
大小通吃-糖尿病
壹 前 言 貳 正 文 ㆒ 認 識 糖 尿 病 1. 病 因 2. 症 狀 3. 高 危 險 群 4. 類 型 5. 併 發 症 ㆓ 糖 尿 病 的 治 療 1. 飲 食 方 面 2. 運 動 方 面 3. 藥 物 方 面 4. 糖 尿 病 的 良 好 控 制 ㆔ 糖 尿 病 的 併 發 症 1. 急 性 併 發 症 2. 慢 性 併 發 症 ㆕ 糖 尿 病 的 問 題 Q1 是 否 禁 菸 禁 酒?
1065 # [1994]21 [1995]1 (2014)19 ... 1... 3... 4... 6... 7... 10... 12... 17... 21... 37... 40... 50... 56... 57... 59... 62... 71... 72 ... 83... 86... 87... 89... 93... 94... 95... 96 [1992]45 009079
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60 19501992 2005 2008 12 15 97.5%0.6%0.6%0.6%0.6% 2008 12 16 2008 2010 6 2011 7 160 2012 1 2013 5 2014 6 3 5 4 1 E 2016 13 1 2016 161 300,000,000 2010 36,000,000 200,000,000 536,000,000 2011 64,320,000
游戏攻略大全（五十二）.doc
...1 III...1...2...7... 11...14...21...29...32 4...38...50...55...56...61...62 2...66 3...88... 101... 124... 134... 134... 138... 141 I ... 145... 148... 150 II 1 III 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
游戏攻略大全（五十一）.doc
I...1...5...5...12 2...12...13...13...14...15...15...16...17...17...18...19...20...21...21...22...23...24...24...25 II...26...27...27...28...29...30...30...48...48...51...54...63 -...67...67...75...81...86...89...94...94...97...
女性减肥健身（四）.doc
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PCR专题改.doc
Primer3 http://frodowimitedu/cgi-bin/primer3/primer3_wwwcgi Primer5 Oligo665 Primer5 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=38536 Oligo667 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=40898 1 PCR 1
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中 国 环 境 现 状 与 政 策 评 论 第 一 章 水 污 染 中 国 当 前 的 总 体 水 污 染 状 况 是 相 当 严 重 的, 尽 管 城 市 工 业 水 污 染 的 发 展 势 头 得 到 了 一 定 的 控 制, 但 以 生 活 污 水 和 农 村 化 学 品 流 失 为 主 要 内 容 的 面 源 污 染 又 呈 现 迅 速 上 升 的 欠 势, 而 且 更 加 难 以 控 制
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附件四：作品送展表（夾於作品說明書第一頁，請勿裝訂）
嘉 義 市 第 31 屆 中 小 學 科 學 展 覽 會 作 品 說 明 書 科 別 : 生 活 與 應 用 科 學 科 組 別 : 國 小 組 作 品 名 稱 : 果 真 有 酵 - 水 果 酵 素 的 應 用 關 鍵 詞 : 水 果 酵 素 環 保 編 號 : 1 摘 要 本 研 究 主 要 的 目 的 是 蒐 集 常 見 的 水 果, 利 用 多 餘 的 果 皮 和 剩 餘 的 果 肉 製 造
新婚夫妇必读（二十二）.doc
...1...3...9...10... 11...14...15...17...21...23...26...34 ED...36...39...40...43...45...48...50 I II...52...52...55...58...59...62...63...66...68...70...72...74...76...76...78...79...81...87...88...89...92...93
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臺 灣 二 OO 四 年 國 際 科 學 展 覽 會 科 別 : 微 生 物 學 科 作 品 名 稱 : 耐 熱 性 酵 素 生 產 菌 Bacillus Subtilis WLA12 之 分 離 與 定 性 得 獎 獎 項 : 微 生 物 學 科 第 一 名 候 補 作 品 學 作 校 : 臺 北 市 立 第 一 女 子 高 級 中 學 者 : 李 昱 蓉 耐 熱 性 酵 素 生 產 菌 Bacillus
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
PCR PCR PCR RT-PCR PCR (Polymerase Chain Reaction,PCR) 80 DNA, DNA PCR PCR PCR DNA PCR -- -- DNA DNA 93 DNA PCR DNA DNA ( ) DNA 55 DNA DNA -- TaqDNA dntp DNA -- -- PCR PCR DNA DNA Y (1 X) n Y DNA X (Y)
項 訴 求 在 考 慮 到 整 體 的 財 政 承 擔 以 及 資 源 分 配 的 公 平 性 下, 政 府 採 取 了 較 簡 單 直 接 的 一 次 性 減 稅 和 增 加 免 稅 額 方 式, 以 回 應 中 產 家 庭 的 不 同 訴 求 ( 三 ) 取 消 外 傭 徵 費 6. 行 政 長
2013 年 1 月 23 日 的 立 法 會 會 議 葛 珮 帆 議 員 就 幫 助 中 產 動 議 的 議 案 ( 經 單 仲 偕 議 員 及 莫 乃 光 議 員 修 正 ) 進 度 報 告 在 2013 年 1 月 23 日 的 立 法 會 會 議 上, 由 葛 珮 帆 議 員 就 幫 助 中 產 動 議 的 議 案, 經 單 仲 偕 議 員 及 莫 乃 光 議 員 修 正 後 獲 得 通 過
(f) (g) (h) (ii) (iii) (a) (b) (c) (d) 208
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2015 2002 2 11 2002 2 11 346 2005 1 1 2015 4 10 2015 3 10 2015 4 10 2005 1 1 2015 4 10 2015 4 10 86 2000 7 25 2000 9 1 100,000 87 2012 6 18 50% 1995 3 18 2015 12 27 2016 6 1 2003 9 1 2013 6 29 2004 4 1
Microsoft Word - 08 单元一儿童文学理论
单 元 ( 一 ) 儿 童 文 学 理 论 内 容 提 要 : 本 单 元 共 分 成 三 个 小 课 目, 即 儿 童 文 学 的 基 本 理 论 儿 童 文 学 创 作 和 儿 童 文 学 的 鉴 赏 与 阅 读 指 导 儿 童 文 学 的 基 本 理 论 内 容 包 括 儿 童 文 学 的 基 本 含 义 儿 童 文 学 读 者 儿 童 文 学 与 儿 童 年 龄 特 征 和 儿 童 文 学
2015年全国硕士研究生入学考试
2015 年 全 国 硕 士 研 究 生 入 学 考 试 佛 山 科 学 技 术 学 院 自 命 题 考 试 科 目 考 试 大 纲 ( 科 目 名 称 : 农 业 知 识 综 合 二 科 目 代 码 :340 ) 一 考 查 目 标 农 业 知 识 综 合 二 侧 重 于 动 物 生 产 类 综 合 知 识 的 考 查 考 试 内 容 应 主 要 涵 盖 动 物 遗 传 学 动 物 生 理 学 动
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臺 北 縣 立 樟 樹 國 中 96 學 年 度 第 二 學 期 區 域 性 自 然 科 學 領 域 資 賦 優 異 教 育 方 案 實 施 計 劃 一 依 據 : ( 一 ) 特 殊 教 育 法 第 二 十 九 條 ( 二 ) 特 殊 教 育 法 施 行 細 則 第 四 條 第 二 項 ( 三 ) 身 心 障 礙 及 資 賦 優 異 學 生 鑑 定 標 準 二 目 的 : ( 一 ) 推 廣 資
國立中山大學學位論文典藏.PDF
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商 周 三 代 年 代 學 的 研 究 經 過 近 五 年 的 努 力, 完 成 夏 商 周 年 表 本 大 事 概 覽 中 夏 商 周 三 代 的 大 事 紀 年, 即 採 用 夏 商 周 斷 代 工 程 的 考 論 成 果 對 於 無 法 考 證 年 份 的 史 事 或 發 生 在 史 前 時
中 外 歷 史 大 事 概 覽 編 者 說 明 : 1. 傳 說 時 代 與 夏 商 周 年 表 : 人 類 在 未 有 文 字 記 事 之 前, 口 耳 相 傳 的 神 話 傳 說, 是 先 民 對 自 然 變 化 的 體 驗 與 歷 史 經 歷 的 口 述 這 些 傳 說, 或 者 存 有 誇 張 和 穿 鑿, 隨 著 考 古 文 物 的 出 土 與 歷 史 學 家 的 努 力, 汰 偽 存 真,
第 三 条 实 验 室 技 术 安 全 工 作 贯 彻 以 人 为 本 安 全 第 一 预 防 为 主 综 合 治 理 的 方 针 各 单 位 及 教 职 工 学 生 应 树 立 安 全 意 识, 履 行 安 全 义 务 承 担 安 全 责 任 第 四 条 实 验 室 技 术 安 全 工 作 坚 持
校 发 2015 28 号 北 京 科 技 大 学 实 验 室 技 术 安 全 管 理 规 定 第 一 章 总 则 第 一 条 为 加 强 学 校 实 验 室 安 全 管 理, 防 止 实 验 室 安 全 事 故 发 生, 保 障 教 职 工 及 学 生 的 人 身 财 产 安 全, 促 进 学 校 各 项 事 业 健 康 稳 定 发 展, 根 据 国 家 相 关 法 律 法 规, 结 合 学 校