目录产品介绍产品特点试剂盒应用基因组 DNA 的应用产品质量控制试剂盒内容产品信息储存条件

Size: px

Start display at page:

Download "目录产品介绍产品特点试剂盒应用基因组 DNA 的应用产品质量控制试剂盒内容产品信息储存条件"

恶雉任
5 years ago
Views:

Buccal Swab DNA Isolation Kit For purification of genimic DNA from buccal swab Research

2 目录产品介绍产品特点试剂盒应用基因组 DNA 的应用产品质量控制试剂盒内容产品信息储存条件试剂盒组分信息注意事项基因组 DNA 提取得率和纯度基因组 DNA 片段大小操作前准备事项实验材料和设备安全性操作指南材料取用说明口腔拭子基因组 DNA 提取操作步骤 DNA 浓度及纯度测定问题分析指南 Copyright Foregene 2014/04. All rights reserved. 2/15

3 产品介绍本试剂盒提供了高效快速从口腔拭子中纯化得到较高浓度基因组 DNA 的方法采用本公司特有的 DNA-only 硅胶膜离心柱和配方, 搭配 Foregene Protease, 可以在 80 分钟提取到较高浓度高质量的基因组 DNA 专门设计的微小纯化柱结合基因组 DNA, 可用微量 (15μl) 洗脱体系洗脱 DNA, 提高获得的基因组 DNA 的浓度, 便于下游检测或实验试剂盒一次可处理一个或多个样品, 且纯化过程不需要用到酚氯仿等有机物抽提以及耗时的异丙醇或乙醇沉淀, 操作简捷省时本试剂盒离心柱采用的 DNA-only 硅胶膜为本公司特有新型材料, 高效特异吸附 DNA, 可最大限度的去除 RNA 杂质蛋白离子及细胞中其他有机化合物获得的 DNA 片段大, 纯度高质量稳定可靠, 一个离心柱的最大承载量为 80μgDNA 获得的 DNA 可用于酶切 PCR Southern 杂交文库构建等分子生物学实验产品特点无 RNA 酶污染 : 无需额外添加 RNA 酶即可去除基因组 DNA 中的 RNA, 避免实验室遭受外源 RNA 酶污染速度快 :Foregene Protease 具有比同类蛋白酶更高的活性, 消化组织样本速度快 ; 操作简单, 基因组 DNA 提取操作在分钟内即可完成方便 : 离心操作均在常温, 无需 4 低温离心或乙醇沉淀 DNA 安全 : 无需有机试剂抽提质量高 : 提取获得的基因组 DNA 片段大无 RNA 无 RNA 酶离子含量极低, 能满足各种实验的要求微量洗脱体系 : 可以提高基因组 DNA 浓度, 便于下游检测或实验 Copyright Foregene 2014/04. All rights reserved. 3/15

4 试剂盒应用该试剂盒适用于纯化以下样本基因组 DNA: 口腔拭子基因组 DNA 的应用口腔拭子基因组 DNA 提取试剂盒纯化获得的基因组 DNA 纯度高, 可用于常规分子生物学操作, 如 : 酶切 PCR Southern 杂交文库构建等实验产品质量控制按照福际生物试剂盒质量检测体系标准 (FOREGENE s Total Quality Management System), 每一批次的口腔拭子基因组 DNA 提取试剂盒都严格进行多次测试, 确保每一批次试剂盒质量的可靠性和稳定性 Copyright Foregene 2014/04. All rights reserved. 4/15

5 试剂盒内容试剂盒组成 Buccal Swab DNA Isolation Kit 口腔拭子基因组 DNA 提取试剂盒 DE DE DE 次 100 次 250 次 Buffer ST1 30ml 60ml 150ml Buffer ST2 30ml 60ml 150ml Linear Acrylamide 250μl 500μl 1.25ml Buffer PW 25ml 50ml 125ml Buffer WB 25ml 50ml 125ml Buffer EB 10ml 20ml 50ml Foregene Protease 1.25ml 2.5ml 6.5ml 离心柱 50 个 100 个 250 个收集管 50 个 100 个 250 个说明书 1 份 1 份 1 份产品信息型号离心柱型纯化组件 Foregene 离心柱试剂通量 1-24 个样品制备时间 80min(24 个样品 ) 离心机台式离心机样本裂解物分离离心分离离心柱液体盛装量 700μl 纯化柱 DNA 承载量 30μg 最小洗脱体积 15μl 样本处理量 1 个口腔拭子储存条件本试剂盒在常温 (15 25 ) 干燥条件下, 可保存 12 个月 ; 如需保存更长时间可置于 2 8 注意 : 若低温保存, 溶液容易产生沉淀在使用前务必将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间, 必要时可在 37 水浴中预热 10 分钟, 以溶解沉淀, 混匀后再使用 Foregene Protease 溶液具有独特配方, 常温保存长期 (3 个月 ) 具有活性 ; 在 4 保存, 其活性和稳定性会更好, 因此建议将其置于 4 保存, 切记不能置于 -20 保存 Copyright Foregene 2014/04. All rights reserved. 5/15

6 试剂盒组分信息 Buffer ST1: 提供样本酶解环境 Foregene Protease: 在 Buffer ST1 的环境下酶解组织样本 Buffer ST2: 失活 Foregene Protease, 并提供 DNA 上柱环境 Linear Acrylamide: 减少核酸本底吸附, 提高 DNA 洗脱效率 Buffer PW: 去除 DNA 中的蛋白质 RNA 等杂质 Buffer WB: 去除 DNA 中的残留的盐离子 Buffer EB: 洗脱纯化柱膜上的 DNA DNA-Only Column: 特异吸附裂解产物中的基因组 DNA 注意事项 :( 请务必在使用试剂盒前仔细阅读注意事项 ) 每个纯化体系使用一个口腔拭子即可, 多个口腔拭子请使用多个纯化柱进行纯化试剂盒使用前, 请务必检查 Buffer WB 是否按说明添加了无水乙醇 Buffer WB 在使用前分别添加 60ml 无水乙醇 (DE-05811) 120ml 无水乙醇 (DE-05812) 300ml 无水乙醇 (DE-05813) 使用前, 仔细检查 Buffer ST1 Buffer ST2 和 Buffer PW 中是否有沉淀析出, 若有沉淀析出, 请将其置于 37 溶解, 混匀后再使用在样品裂解过程中, 应始终保持样品浸于裂解缓冲液中, 若样品黏附在管盖及内壁, 可通过短暂离心进行处理洗脱体积 : 采用微量洗脱体系会提高 DNA 浓度, 但 Buffer EB 不应少于 15μl, 否则会影响 DNA 产量切记不要在任何 Buffer 中添加 RNA 酶所有离心步骤均为使用台式离心机常温 (15-25 ) 离心所有实验步骤均在常温 (15-25 ) 进行 Copyright Foregene 2014/04. All rights reserved. 6/15

基因组 DNA 提取得率和纯度微量样本基因组 DNA 的产量与样本来源保存条件酶解程度以及操作有关, 口腔拭子基因组 DNA 提取试剂盒提供了一种有效的获得微量样本基因组 DNA 的方法, 一般一个口腔拭子可获得 0.5-3μg 的基因组 DNA( 根据口腔拭子上含有的细胞数量有关 ) 获得的基因组 DNA 纯度高, 其 OD260/280 1.7-1.

7 基因组 DNA 提取得率和纯度微量样本基因组 DNA 的产量与样本来源保存条件酶解程度以及操作有关, 口腔拭子基因组 DNA 提取试剂盒提供了一种有效的获得微量样本基因组 DNA 的方法, 一般一个口腔拭子可获得 0.5-3μg 的基因组 DNA( 根据口腔拭子上含有的细胞数量有关 ) 获得的基因组 DNA 纯度高, 其 OD260/ 基因组 DNA 片段大小口腔拭子基因组 DNA 提取试剂盒是采用硅胶膜柱分离纯化多种样本来源的基因组 DNA, 纯化获得的基因组 DNA 片段大小均在 23kb 附近见下图 : 分别提取 2 只口腔拭子的基因组 DNA,30μl Buffer EB 洗脱 ; 取 5μl 的基因组 DNA 1% 琼脂糖凝胶电泳图谱 Copyright Foregene 2014/04. All rights reserved. 7/15

8 操作前准备事项使用本试剂盒前, 请务必仔细阅读说明书口腔拭子基因组 DNA 提取试剂盒操作简单方便快速, 说明书提供了整个试剂盒的完整信息和正确使用方法请在使用前准备好必要的实验材料和设备实验材料和设备单次纯化体系 : 一根口腔拭子 1.5ml 或 2ml 无菌离心管无水乙醇台式离心机 ( 13,400 g) 65 水浴或金属浴移液器涡旋仪等安全性本产品仅供科研使用, 请勿用于医药临床医疗食品及化妆品等用途使用化学品时, 穿戴合适的实验服, 手套, 防护眼镜等 Buffer ST2 含有胍盐 : 变性剂, 刺激性 Buffer PW 含有胍盐 : 变性剂, 刺激性 Buffer WB 含有无水乙醇 : 易燃 Foregene Protease: 增敏剂, 刺激性 Copyright Foregene 2014/04. All rights reserved. 8/15

9 操作指南请严格按照说明书进行基因组 DNA 提取相关操作材料取用说明口腔拭子取样方式 : 使用无菌口腔拭子在面颊内反复擦拭次注意 : 为了保证样本不被食物或饮品污染, 取样前 30 分钟内请勿进食和饮水口腔拭子取样后处理 : 用剪刀将口腔拭子上棉签部分从杆上剪下, 置于 2ml 离心管中待用 Copyright Foregene 2014/04. All rights reserved. 9/15

10 口腔拭子基因组 DNA 提取操作步骤 ( 请严格按照本操作说明进行相关实验操作 ) 使用前请先在 Buffer WB 中加入无水乙醇, 加入体积请参照瓶上的标签 1. 将一根取得样本的口腔拭子, 将棉签部分剪下, 放置干净的 2ml 离心管中 2. 向该离心管中加入 600μl Buffer ST1, 涡旋混匀 3. 向上述体系中加入 20μl Foregene Protease, 涡旋混匀简短离心以收集附着在离心管盖及内壁的液滴 4. 将离心管放置于 65 金属浴或水浴中 1h, 其间每间隔 15min 涡旋混匀一次 5. 加入 620μl Buffer ST2, 混匀后加入 4μl Linear Acrylamide, 涡旋混匀, 简短离心以收集附着在离心管盖及内壁的液滴 6. 将离心管放置于 65 金属浴或水浴中 10min, 其间每间隔 3min 轻摇混匀一次, 简短离心以收集附着在离心管盖及内壁的液滴 7. 弃掉溶液中的口腔拭子, 将所得混合液全部转移至离心柱中,12,000rpm(~13,400 g) 离心 1min, 弃掉收集管中的废液 8. 将离心柱放回收集管中, 向离心柱中加入 500μl Buffer PW,12,000rpm(~13,400 g) 离心 1min, 弃掉收集管中的废液 9. 将离心柱放回收集管中, 向离心柱中加入 700μl Buffer WB,12,000rpm(~13,400 g) 离心 1min, 弃掉收集管中的废液 10. 重复步骤 9 一次 11. 将离心柱放回收集管中,12,000rpm(~13,400 g) 空管离心 1min 12. 将离心柱转移至新的 1.5ml 离心管中, 向膜中央悬空滴加 μl 已于 65 预热的 Buffer EB, 室温放置 5min,12,000rpm(~13,400 g) 离心 1min 注意 :Buffer EB 的体积不应少于 15μl, 在推荐洗脱体积范围内, 适当增加 Buffer EB 体积, 可提高 DNA 得率如果希望提高 DNA 的浓度, 可将第 1 次离心得到的溶液重新加回离心柱中,12,000rpm (~13,400 g) 离心 1min Copyright Foregene 2014/04. All rights reserved. 10/15

11 DNA 浓度及纯度检测得到的基因组 DNA 的质量与操作过程中的多种因素有关 DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度 DNA 的 OD260 值为 1 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA DNA 的 OD260/ 如果洗脱时不使用洗脱缓冲液 Buffer EB, 而使用去离子水, 比值会偏低, 因为 ph 值和离子存在会影响光吸收值, 但并不表示纯度低 Copyright Foregene 2014/04. All rights reserved. 11/15

12 问题分析指南以下针对口腔拭子基因组 DNA 提取中可能遇到的问题进行分析, 希望能对您的实验有所帮助另外, 对于在操作说明和问题分析以外的其他实验或技术上的问题, 我们设有专门的技术支持帮助您如有任何需要可联系我们 : 或 E-mali: 纯化柱堵塞本试剂盒在基因组 DNA 提取操作步骤中, 样本酶解后没有离心步骤直接将样本酶解混合物上纯化柱吸附 DNA, 有可能由于酶解不完全样本粘稠高等因素导致纯化柱堵塞可能存在的原因如下 : 1. 组织样本酶解不完全建议 : 可适当延长 Foregene Protease 处理样本时间或者以 12,000rpm (~13,400 g) 离心 5min 后取上清液过柱 2. 组织样本用量过多或者组织较大建议 : 样本最好不要超过 1 根口腔拭子 ; 如果样本过多请相应增加 Buffer ST1 Foregene Protease Buffer ST2 的用量 3. 样本粘稠度过高建议 : 可将样本用 10mM 的 Tris-HCl 适当稀释后再进行基因组 DNA 的提取操作低产量或无 DNA 通常有多种因素会影响基因组 DNA 产量, 包括样本来源样本保存条件样本的预处理操作等提取过程中无法获得基因组 DNA 可能存在的原因如下 : 1. 样本保存不当或保存时间太长, 导致基因组 DNA 降解建议 : 口腔拭子最好是新鲜取样, 不宜使用保存的拭子进行基因组 DNA 提取操作 2. 组织用量过少可能导致提取不到相应的基因组 DNA 建议 : 按照操作指南里面的口腔拭子取样说明进行操作, 尽量多擦拭几次以便口腔拭子上能附着足够的细胞进行基因组 DNA 提取 3. Foregene Protease 保存不当, 导致其活性降低或失活 Copyright Foregene 2014/04. All rights reserved. 12/15

13 建议 : 确认 Foregene Protease 保存条件或者更换新的 Foregene Protease 进行酶解反应 4. 试剂盒保存不当或存放时间太长, 导致试剂盒里面某些组分失效建议 : 购置新的口腔拭子基因组 DNA 提取试剂盒进行相关操作 5. Buffer WB 没有添加无水乙醇建议 : 确认 Buffer WB 中添加正确体积的无水乙醇 6. 洗脱液没有正确滴加到硅胶膜上建议 : 将 65 预热的洗脱液滴加到硅胶膜的正中间, 并在室温放置 5 分钟增加洗脱效率提取获得低产量基因组 DNA 可能存在的原因如下 : 1. 样本保存不当或保存时间太长, 导致基因组 DNA 降解建议 : 口腔拭子最好是新鲜取样, 不宜使用保存的拭子进行基因组 DNA 提取操作 2. 组织样本用量过少, 提取到的基因组 DNA 含量会较少建议 : 按照操作指南里面的口腔拭子取样说明进行操作, 尽量多擦拭几次以便口腔拭子上能附着足够的细胞进行基因组 DNA 提取 3. Foregene Protease 保存不当, 导致其活性降低或失活建议 : 确认 Foregene Protease 保存条件或者更换新的 Foregene Protease 进行酶解反应 4. 洗脱液问题建议 : 请使用 Buffer EB 进行洗脱 ; 如果使用 ddh 2 O 或其他洗脱液, 确认洗脱液的 ph 值在之间 5. 洗脱液没有正确滴加建议 : 请将洗脱液滴加到硅胶膜的正中间, 并在室温放置 5 分钟增加洗脱效率 6. 洗脱液体积太少建议 : 请按说明书上要求使用洗脱液进行基因组 DNA 洗脱, 最少不要低于 15μl Copyright Foregene 2014/04. All rights reserved. 13/15

14 提取获得基因组 DNA 纯度低基因组 DNA 纯度低会导致下游实验的失败或效果不理想, 如 : 酶切不开,PCR 得不到目的基因片段等可能存在的原因如下 : 1. 杂蛋白污染 RNA 污染分析 : 没有使用 Buffer PW 洗涤纯化柱 ;Buffer PW 洗涤纯化柱没有使用正确的离心转速建议 : 在上清液过柱时尽量保证上清液中无沉淀 ; 务必按说明书进行 Buffer PW 洗涤纯化柱, 并且此步骤不能省略 2. 杂质离子污染分析 : 省略了 Buffer WB 洗涤纯化柱或者只洗涤了一次, 导致残留的离子污染建议 : 务必按说明书使用 Buffer WB 洗涤 2 次, 以尽量去除残留的离子 3. RNA 酶污染分析 :Buffer 中添加了外源的 RNA 酶 ;Buffer PW 洗涤操作不正确, 导致 RNA 酶残留, 影响下游 RNA 实验操作, 如 : 体外转录等建议 :Foregene 系列核酸提取试剂盒无需额外添加 RNA 酶即可去除 RNA,Buccal Swab DNA Isolation Kit 里面所有试剂均无需添加 RNA 酶 ; 务必按说明书进行 Buffer PW 洗涤纯化柱, 并且此步骤不能省略 4. 乙醇残留分析 :Buffer WB 洗涤纯化柱后, 没有进行空管离心操作建议 : 按说明书进行正确的空管离心操作 5. 其他杂质污染分析 : 保存样本或特殊样本没有进行预处理建议 : 按操作说明对样本进行彻底的预处理 Copyright Foregene 2014/04. All rights reserved. 14/15

目录产品介绍产品特点试剂盒应用基因组 DNA 的应用产品质量控制试剂盒内容产品信息储存条件

目录产品介绍产品特点试剂盒应用基因组 DNA 的应用产品质量控制试剂盒内容产品信息储存条件 Genomic DNA Micro Kit For genomic DNA purification from small volumes of blood,dried blood spots, laser-microdissected tissues,tissues,and so on Research use only. Store at room temperature. Copyright

目 录 产品介绍 产品特点 试剂盒应用 基因组 DNA 的应用 产品质量控制 试剂盒内容 产品信息 储存条件

目录产品介绍产品特点试剂盒应用基因组 DNA 的应用产品质量控制试剂盒内容产品信息储存条件