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514 临床与病理杂志 J Clin Pathol Res 2014, 34(5) http://www.lcbl.

1 514 临床与病理杂志 J Clin Pathol Res 2014, 34(5) doi: /j.issn c-myc SIRT1 acetyl-p53 在乳腺癌中的表达及其对预后的影响宋新峰, 张彦聪, 张志芹 ( 德州学院医药与护理学院, 山东德州 ) [ 摘要 ] 目的 : 探讨 c-myc SIRT1 及 acetyl-p53 蛋白在乳腺癌中的表达及其对预后的影响方法 : 应用免疫组织化学方法检测 90 例乳腺癌和 30 例乳腺增生症中的 c-myc SIRT1 (Sirtuin type 1) acetyl-p53 蛋白表达, 结合临床病理资料和随访资料, 进行预后分析结果 :c-myc 阳性组乳腺癌患者的 5 年无瘤生存率和 5 年总生存率 ( 分别为 59.0%/67.2%) 低于 c-myc 阴性组 ( 分别为 86.2%/86.2%), SIRT1 阳性组乳腺癌患者的 5 年无瘤生存率和 5 年总生存率 ( 分别为 56.1%/64.9%) 低于 SIRT1 阴性组 (87.9%/87.9%); acetyl-p53 阳性组乳腺癌患者的 5 年无瘤生存率和 5 年总生存率 ( 分别为 86.7%/86.7%) 高于 acetyl-p53 阴性组 ( 分别为 58.3%/66.7%), 差异均有统计学意义 (P<0.05) 结论: c-myc 及 SIRT1 蛋白高表达的乳腺癌患者预后差, 而 acetyl-p53 蛋白高表达的乳腺癌患者预后好 [ 关键词 ] c-myc;sirt1;acetyl-p53; 乳腺癌 ; 预后 Expression of c-myc, SIRT1 and acetyl-p53 in breast carcinoma and prognostic significance SONG Xinfeng, ZHANG Yancong, ZHANG Zhiqing (College of Medicine and Nursing, Dezhou University, Dezhou Shandong , China) Abstract Objective: To study the correlation between c-myc, Sirtuin type 1 (SIRT1), acetyl-p53 protein and the prognosis of breast carcinoma. Methods: c-myc, SIRT1 and acetyl-p53 protein of breast carcinoma and breast adenosis were detected by immunohistochemical staining. And combined with follow-up data, statistical analysis was performed to study the prognosis. Results: C-Myc positive breast carcinoma patients, 5-year disease-free survival rate and 5-year overall survival rate (59.0%/59.0%, respectively) is lower than c-myc negative ones, (86.2%/86.2%, respectively). And SIRT1 positive breast cancer patients, 5-year disease-free suvival rate and 5-year overall survival rate (56.1%/56.1%, respectively) is lower than SIRT1 negative ones, (87.9%/87.9%, respectively). However, Acetyl-p53 positive breast carcinoma patients, 5-year disease-free survival rate and 5-year overall survival rate (86.7%/86.7%, respectively) is higher than the acetyl-p53 negative ones, (58.3%/66.7% respectively). All the 收稿日期 (Date of reception): 通信作者 (Corresponding author): 宋新峰, songxinfeng588@163.com 基金项目 (Foundation item): 德州市科技计划项目 (2012B12; 2010A62-12) This work was supported by Dezhou city science and technology development projects (2012B12; 2010A62-12), P. R. China.

2 c-myc SIRT1 acetyl-p53 在乳腺癌中的表达及其对预后的影响宋新峰, 等 515 Key words difference had statistical significance (P<0.05). Conclusion: Those breast carcinoma patients with c-myc and SIRT1 protein high expression had a poor prognosis. However, those breast patients with high acetyl-p53 protein expression had a good prognosis. c-myc; SIRT1; acetyl-p53; breast carcinoma; prognosis 近年研究发现,c-Myc SIRT1 (Sirtuin type 1) 与 p53 以组成信号通路的方式共同参与了乳腺癌的发生发展 c-myc 基因在乳腺癌中的扩增率约 30%, 对复发及生存期有一定预测作用, 但它还需要其他信号因子协同作用, 有研究发现,c-Myc 可通过 SIRT1 参与乳腺癌的发生 [1-2] 但是,SIRTl 在乳腺癌中的作用争议颇多 : 有些研究认为 SIRT1 在乳腺癌的发生中起着肿瘤抑制因子的作用 [3-4], 然而, 另有研究结果却表明 SIRT1 是乳腺癌的一种肿瘤促进因子 [5-8] 研究发现 [9-10], 半数以上的人类肿瘤由 p53 基因突变引起, 但是尚有众多人类肿瘤中没有 p53 基因突变, 却有 p53 功能性灭活, SIRT1 能与 P53 结合并使羧基末端的 382 位的赖氨酸残基去乙酰化为乙酰化 P53 (acetyl-p53), 降低与特异性 DNA 的结合能力, 细胞异常增值而引起肿瘤发生尽管 c-myc SIRT1 及 acetyl-p53 蛋白与乳腺癌关系研究较多, 但是三者共同在乳腺癌中的表达如何及其与预后的关系的研究鲜有报道 ; 而且, 现有研究多是进行的体外细胞学实验, 并不能真实反映三者在人体乳腺癌中的实际表达水平及其对乳腺癌患者预后的影响本研究通过检测 c-myc SIRT1 acetyl-p53 在人体乳腺增生症和乳腺癌组织中的表达, 结合临床病理资料和随访资料, 探讨 c-myc SIRT1 acetyl-p53 与乳腺癌预后的关系 1.2 免疫组织化学染色 c-myc SIRT1 鼠单克隆抗体购自 Santa cruz 公司,acetyl-p53 鼠抗体购自北京博奥森生物技术有限公司, 快捷型酶标羊抗鼠 / 兔 IgG 聚合物购自北京中杉金桥生物技术有限公司采用 Envision 二步法染色 1.3 结果判断 PBS 代替一抗做阴性对照, 以阳性片做阳性对照由两位病理科医师诊断参考 Naidu R [11] 方法,c-Myc 细胞核均未着色为 ( ), 比例占 1%~20% 为 (+), 21%~ 50% 为 (++), >70% 为 (+++) 参考文献 [12], SIRT1 细胞核阳性数量 <5% 为 ( ), 5%~35% 为 (+),36%~70% 为 (++),>70% 为 (+++) 参考文献 [1], acetyl-p53 细胞核阳性数量 <10% 为 ( ),11%~25% 为 (+),25%~50% 为 (++),>50% 为 (+++) 1.4 统计学处理应用 SPSS l6.0 统计软件 : 临床资料的描述采用百分比, 组间比较采用 χ 2 检验 ; 等级相关分析采用 Spearman 检验 ; 乳腺癌预后的单因素分析采用 Kaplan-Meier 法, 组间曲线比较用 Log-Rank 检验 ; 多因素分析采用 Cox 比例风险模型以 P<0.05 为差异有统计学意义 1 资料与方法 2 实验结果 1.1 临床资料及随访情况选择德州市人民医院 2006 年 1 月至 2007 年 12 月年间乳腺癌 90 例和乳腺增生症 30 例 90 例乳腺癌患者, 年龄 30~78 岁, 中位年龄 51.0 岁, 其中浸润性导管癌 65 例, 占 72.2%, 浸润性小叶癌 25 例, 占 27.8% 将首次手术日期作为随访起始时间, 采用门诊定期复查和电话相结合的方式, 随访至患者死亡或截止日期为 2012 年 3 月 31 日预后评价指标为患者的无病生存时间 (disease free survival,dfs) 和总生存时间 (overall survival,os) 2.1 c-myc SIRT1 acetyl-p53 在乳腺增生症和乳腺癌中的表达从图 1 看出,SIRT1 和 acetyl-p53 阳性表达定位于细胞核,c-Myc 阳性表达定位于细胞核和胞浆从表 1 看出,c-Myc SIRT1 在乳腺癌中的表达率高于乳腺增生症 (c-myc 为 67.8%/26.7%;SIRT1 为 63.3%/36.7%); 而 acetyl-p53 在乳腺癌中的表达率 33.3% 低于乳腺增生症的 53.3%, 差异均有统计学意义 (P<0.05)

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cancer and mammary gland hyperplasia (Envision two footwork) ( 200) A: Breast carcinoma (HE); B: Expression of SIRT1 is positive in the nucleus of

the nucleus of breast carcinoma (IHC); E: Breast adenosis (HE); F: Expression of SIRT1 is negative in the nucleus of breast adenosis (IHC); G:

carcinoma patients [n (%)] Pathological pattern c-myc (+)( ) χ 2 /P SIRT1 (+)( ) χ 2 /P Acetyl-p53 (+)( ) χ 2 /P Breast adenosis 8 (26.7%) 22 (73.

3%) 33 (36.7%) 30 (33.3%) 60 (66.7%) * P<0.05. 2.

05) 其中, c-myc 与 SIRT1 随着乳腺癌肿物体积的的增大, 其表达率都提高 (c-myc 为 52.5%/80.0%,SIRT1 为 42.5%/80.0%), 组间差异有统计学差异 (P<0.

05) 并且, 伴随着乳腺癌的组织分级和临床分期的增加,c-Myc SIRT1 的表达率提高, 而 acetyl-p53 的表达率却降低, 组间差异均有统计学意义 ( P<0.

3 516 临床与病理杂志, 2014, 34(5) A B C D E F G H 图 1 SIRT1 acetyl-p53 c-myc 在乳腺癌和乳腺增生症中的表达 (Envision 二步法 ) ( 200) Figure 1 SIRT1, acetyl - p53, c - Myc expression in breast cancer and mammary gland hyperplasia (Envision two footwork) ( 200) A: Breast carcinoma (HE); B: Expression of SIRT1 is positive in the nucleus of breast carcinoma (IHC); C: Expression of acetyl-p53 is negative in the nucleus of breast carcinoma (IHC); D: Expression of c-myc is positive in the nucleus of breast carcinoma (IHC); E: Breast adenosis (HE); F: Expression of SIRT1 is negative in the nucleus of breast adenosis (IHC); G: Expression of acetyl-p53 is positive in the nucleus of breast adenosis (IHC); H: Expression of c-myc is negative in the nucleus of breast adenosis (IHC). 表 1 c-myc SIRT1 acetyl-p53 在乳腺增生症和乳腺癌组织中的表达差异 Table 1 Comparison expression of c-myc, SIRT1, acetyl-p53 protein between breast adenosis and breast carcinoma patients [n (%)] Pathological pattern c-myc (+)( ) χ 2 /P SIRT1 (+)( ) χ 2 /P Acetyl-p53 (+)( ) χ 2 /P Breast adenosis 8 (26.7%) 22 (73.3%) /0.000 * 11 (36.7%) 19 (63.3%) 6.516/0.011 * 16 (53.3%) 14 (46.7%) 3.807/0.051 * Breast carcinoma 61 (67.8%) 29 (32.2%) 57 (63.3%) 33 (36.7%) 30 (33.3%) 60 (66.7%) * P< c-myc SIRT1 acetyl-p53 在乳腺癌中的表达与临床病理参数的关系 c-myc SIRT1 及 acetyl-p53 在不同年龄分组不同病理类型的乳腺癌中的表达率虽有差异, 但组间差异无统计学意义 ( P>0.05) 其中, c-myc 与 SIRT1 随着乳腺癌肿物体积的的增大, 其表达率都提高 (c-myc 为 52.5%/80.0%,SIRT1 为 42.5%/80.0%), 组间差异有统计学差异 (P<0.05); 但是,acetyl-p53 随着乳腺癌肿物体积的的增大, 其阳性表达率却降低 (47.5%/22.0%), 组间差异有统计学差异 ( P<0.05) 并且, 伴随着乳腺癌的组织分级和临床分期的增加,c-Myc SIRT1 的表达率提高, 而 acetyl-p53 的表达率却降低, 组间差异均有统计学意义 ( P<0.05) 另外, 与淋巴结无转移组相比, 淋巴结转移组的乳腺癌患者其 c-myc SIRT1 表达率都提高 (c-myc 为 54.7%/86.5%,SIRT1 为 47.2%/86.5%), 而 acetyl-p53 的阳性表达率却降低 (47.2%/13.5%), 组间差异有统计学意义 (P<0.05) 2.3 乳腺癌组织 c-myc 与 SIRT1 SIRT1 与 acetyl-p53 蛋白等级相关分析 c-myc 与 SIRT1 在乳腺癌组织中的表达二者呈正相关 (P<0.05); 而 SIRT1 与 acetyl-p53 在乳腺癌中的表达两者却呈负相关 (P<0.05) 2.4 乳腺癌预后的单因素分析由表 2 看出 : 年龄小于 50 岁组肿物大于 2 cm 组组织分级 III 级组临床分期 III 期组有淋巴结转移组乳腺癌患者的 5 年无瘤生存率 5 年总生存率分别比对照组低, 差异有统计学 (P<0.05) c-myc 阳性组乳腺癌患者的 5 年无瘤生存率和 5 年总生存率 ( 分别为 59.0%/67.2%) 低于 c-myc 阴性组 ( 分别为 86.2%/86.2%), SIRT1 阳性组乳腺癌患者的 5 年无瘤生存率和 5 年总生存率 ( 分别为 56.1%/64.9%) 低于 SIRT1 阴性组 (87.9%/87.9%) ( 图 2); acetyl-p53 阳性组乳腺癌患者的 5 年无瘤生存率和 5 年总生存率 ( 分别为 86.7%/86.7%) 高于 acetyl-p53 阴性组 ( 分别为 58.3%/66.7%), 差异均有统计学意义 (P<0.05)

4 c-myc SIRT1 acetyl-p53 在乳腺癌中的表达及其对预后的影响宋新峰, 等 517 表 2 影响乳腺癌患者生存的单因素分析 (n=90) Table 2 The single factor analysis for the survival of patients with breast carcinoma (n=90) Clinical characteristic n 5-year DFS (%) χ 2 /P 5-year OS (%) χ 2 /P Age (year) < /0.008 * /0.047 * Tumour (cm) /0.001 * /0.002 * > Pathological pattern Invasive ductal carcinoma / /0.298 Invasive lobular carcinoma Histological grade I+II /0.000 * /0.000 * III Clinical stage I+II /0.000 * /0.000 * III Lymphatic metastasis Negative /0.000 * /0.000 * Positive Surgical method Radical mastectomy / /0.558 Conserving operation Adjuvant therapy No / /0.361 Yes c-myc Negative /0.006 * /0.042 * Positive SIRT1 Negative /0.001 * /0.010 * Positive Acetyl-p53 Negative /0.004 * /0.028 * Positive * P<0.05.

5 518 临床与病理杂志, 2014, 34(5) SIRT1 阴性阳性阴性 -censored 阳性 -censored Cum survival Cum survival 年无瘤生存时间图 2 SIRT1 蛋白表达与乳腺癌患者 5 年无瘤生存率 5 年总生存率关系 (P<0.05) 年生存时间 Figure 2 Correlation between breast carcinoma patients, 5-year disease-free survival rate and 5-year overall survival rate and SIRT1 (P<0.05) 乳腺癌预后的多因素分析 Cox 多因素分析表明, 组织分级临床分期及 SIRT1 均可影响乳腺癌患者 5 年无瘤生存时间 (P<0.05); 而只有组织分级和淋巴结转移可影响乳腺癌患者 5 年 OS(P<0.05) 3 讨论美国的 SL Deming 等通过系统评价得出,c-Myc 癌基因的扩增在乳腺癌中相当普遍, 或许可以作为乳腺癌的独立预后因素 [13] [14] O Toole SA 等研究也发现 c-my 基因扩增的浸润性导管癌患者有较差的预后本实验结果显示,c-Myc 蛋白在乳腺癌中的表达显著高于乳腺增生症 (P<0.05); 并且, 伴随着乳腺癌患者年龄的增加肿块的增大组织分级和临床分期的提高及淋巴结的转移, 其在癌组织中的表达率提高而且,c-Myc 蛋白阳性表达的患者 5 年无瘤生存时间 5 年 OS 缩短这些研究结果提示 c-myc 蛋白在乳腺癌中高表达, 并促进乳腺癌的进展, 此类患者预后差 SIRTl 作为一种必须依赖 NAD + 的组蛋白 / 非组蛋白去乙酰化酶, 参与多种细胞生理病理过程 [15], 但其在乳腺癌中的作用却颇多争议 : 有些研究认为,SIRT1 蛋白是乳腺癌的肿瘤抑制因子 ; 而另外一些研究表明, 确实乳腺癌的肿瘤促进因子本研究发现, 伴随着乳腺癌患者年龄的增加肿块的增大组织分级和临床分期的提高及淋巴结的转移及其 c-myc 蛋白的阳性表达,SIRT1 蛋白在癌组织中的表达率提高并且,SIRT1 蛋白阳性表达的患者 5 年无瘤生存时间 5 年 OS 也会缩短所有研究结果说明 SIRT1 蛋白可能作为一种肿瘤促进因子参与乳腺癌的发生发展, 而且, 还可作为乳腺癌预后差的指标之一 [16-17] 研究表明, 人类肿瘤半数以上存在 p53 基因突变,p53 与组织分级临床分期淋巴结转移相关, 可作为评估乳腺癌预后的又一指标本研究发现,acetyl-P53 蛋白在大年龄组患者高组织分级和临床分期及淋巴结转移的乳腺癌中表达降低, 并且呈现出伴随着 c-myc 蛋白及 SIRT1 蛋白表达增高却表达降低的规律, 而且低表达的乳腺癌患者的 5 年无瘤生存率和 5 年总生存率降低, 提示 acetyl-p53 蛋白低表达可以作为临床判断乳腺癌预后不良的因子使用综上所述,c-Myc SIRT1 与 acetyl-p53 三者共同参与乳腺癌的发生发展, 并且在乳腺癌中的表达存在相关性,c-Myc 与 SIRT1 在乳腺癌中的表达呈一致性, 而 acetyl-p53 与 SIRT1 的表达呈负相关 ; 而且 c-myc 及 SIRT1 蛋白高表达的乳腺癌患者预后差, 而 acetyl-p53 蛋白高表达的乳腺癌患者预后好参考文献 1. 张栋, 高东宸, 张长淮, 等. 浸润性乳腺癌中 c-myc,bcl-2 蛋白表达及 DNA 倍性的检测及意义 [ J]. 中华普通外科杂志, 2003, 18(10): ZHANG Dong, GAO Dong-chen, ZHANG Chang- huai, et al. The detection of c-myc, Bc-l 2 protein and DNA ploidy in invasive breast carcinoma and its significance[j]. Chin J Gen Surg, 2003, 18(10): Yuan J, Minter-Dykhouse K, Lou Z. A c-myc-sirt1 feedback loop regulates cell growth and transformation[ J]. J Cell Biol, 2009, 185(2):

6 c-myc SIRT1 acetyl-p53 在乳腺癌中的表达及其对预后的影响宋新峰, 等 Wang RH, Sengupta K, Li C, et al. Impaired DNA damage response, genome instability, and tumorigenesis in SIRT1 mutant mice[ J]. Cancer Cell, 2008, 14(4): Wang RH, Zheng Y, Kim HS, et al. Interplay among BRCA1, SIRT1, and Survivin during BRCA1-associated tumorigenesis[ J]. Mol Cell, 2008, 32(1): Menssen A, Hydbring P, Kapelle K, et al. The c-myc oncoprotein, the NAMPT enzyme, the SIRT1-inhibitor DBC1, and the SIRT1 deacetylase form a positive feedback loop[ J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 2012, 109(4): E187-E Lee H, Kim KR, Noh SJ, et al. Expression of DBC1 and SIRT1 is associated with poor prognosis for breast carcinoma[ J]. Hum Pathol, 2011, 42(2): Holloway KR, Barbieri A, Malyarchuk S, et al. SIRT1 positively regulates breast cancer associated human aromatase (CYP19A1) expression[ J]. Mol Endocrinol, 2013, 27(3): Clark-Knowles KV, Dewar-Darch D, Jardine KE, et al. SIRT1 catalytic activity has little effect on tumor formation and metastases in a mouse model of breast cancer[ J]. PLoS One, 2013, 8(11): e Tseng RC, Lee CC, Hsu HS, et al. Distinct HIC1-SIRT1-p53 loop deregulation in lung squamous carcinoma and adenocarcinoma patients[ J]. Neoplasia, 2009, 11(8): Noh SJ, Kang MJ, Kim KM, et al. Acetylation status of P53 and the expression of DBC1, SIRT1, and androgen receptor are associated with survival in clear cell renal cell carcinoma patients[ J]. Pathology, 2013, 45(6): Naidu R, Wahab NA, Yadav M, et al. Protein expression and molecular analysis of c-myc gene in primary breast carcinomas using immunohistochemistry and differential polymerase chain reaction[ J]. Int J Mol Med, 2002, 9(2): Cha EJ, Noh SJ, Kwon KS, et al. Expression of DBC1 and SIRT1 is associated with poor prognosis of gastric carcinoma[ J]. Clin Cancer Res, 2009, 15(13): Deming SL, Nass SJ, Dickson RB, et al. C-myc amplification in breast cancer: a meta-analysis of its occurrence and prognostic relevance[ J]. Br J Cancer, 2000, 83(12): O Toole SA, McNeil CM, Morey AL, et al. 29. C-Myc Gene Amplification Is Associated With A Poor Prognosis in Invasive Ductal Carcinoma[ J]. Pathology - Journal of the RCPA, 2010, 42: S89-S Kim EJ, Um SJ. SIRT1: roles in aging and cancer[ J]. BMB Rep, 2008, 41(11): Rohan TE, Li SQ, Hartwick R, et al. p53 Alterations and protein accumulation in benign breast tissue and breast cancer risk: a cohort study[ J]. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 2006, 15(7): Read W, Hannisdal E. The prognostic value of p53 and c-erb b-2 immunostaining is overrated for patients with lymph node negative breast carcinoma. A multivariate analysis of prognostic factors in 613 patients with a follow-up of years [J]. Cancer, 2000, 88(4): 本文引用 : 宋新峰, 张彦聪, 张志芹. c-myc SIRT1 acetyl-p53 在乳腺癌中的表达及其对预后的影响 [ J]. 临床与病理杂志, 2014, 34(5): doi: /j.issn Cite this article as: SONG Xinfeng, ZHANG Yancong, ZHANG Zhiqing. Expression of c-myc, SIRT1 and Acetyl-p53 in Breast carcinoma and Prognostic Significance[ J]. Journal of Clinical and Pathological Research, 2014, 34(5): doi: /j.issn

分级和气管是否受侵是影响预后的独立危险因素关键词状腺肿瘤 ; 癌, 乳头状 ; 预后 Clinical outcomes of 600 papillary thyroid carcinoma patients ZHANG Zong-min,

分级和气管是否受侵是影响预后的独立危险因素关键词状腺肿瘤 ; 癌, 乳头状 ; 预后 Clinical outcomes of 600 papillary thyroid carcinoma patients ZHANG Zong-min, 移性鳞癌患者的临床资料, 比较不同治疗手段的效果 50 例患者男性 44 例, 女性 6 例, 年龄 29~73 岁, 中位年龄 52.5 岁 ; 临床分期 :N2c 占 64% (32/50),N3 占 36% (18/50) 30 例患者行双颈淋巴结清扫术 50 例患者均行放疗, 剂量为 50~66