相 对 校 正 因 子 的 相 关 方 法 1.1 内 标 多 控 法 研 究 发 现, 在 中 药 各 成 分 间 存 在 着 一 定 的 比 例 关 系, 只 要 各 成 分 的 量 符 合 该 比 例 关 系, 中 药 的 多 [6] 指 标 质 量 控 制 可 以 依 此 法
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- 砂 祝
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1 1448 相 对 校 正 因 子 在 中 药 多 指 标 测 定 中 的 应 用 研 究 进 展 1, 罗 祖 良 2, 仇 峰 1 1,, 韦 日 伟 2 1,, 覃 禹 2, 张 坤 1, 覃 洁 萍 2, 杨 美 华 1. 北 京 协 和 医 学 院 药 用 植 物 研 究 所, 中 草 药 物 质 基 础 与 资 源 利 用 教 育 部 重 点 实 验 室, 北 京 广 西 中 医 学 院, 广 西 南 宁 * 摘 要 : 中 药 标 准 物 质 品 种 和 质 量 的 相 对 滞 后, 已 成 为 中 药 标 准 制 定 与 提 高 的 制 约 因 素, 为 解 决 这 一 问 题, 不 断 涌 现 出 新 的 测 定 方 法 重 点 介 绍 与 相 对 校 正 因 子 相 关 的 一 测 多 评 法 替 代 对 照 品 法 内 标 多 控 法 及 系 统 内 标 法 等 多 指 标 定 量 方 法 ; 阐 述 了 相 对 校 正 因 子 计 算 方 法 相 关 内 容 和 技 术 要 求, 并 对 其 在 中 药 多 指 标 质 量 控 制 中 的 应 用 情 况 进 行 论 述 关 键 词 : 相 对 校 正 因 子 ; 一 测 多 评 法 ; 替 代 对 照 品 法 ; 多 指 标 测 定 ; 中 药 标 准 物 质 中 图 分 类 号 :R 文 献 标 志 码 :A 文 章 编 号 : (2012) Application of relative correction factor in multi-index determination of Chinese materia medica LUO Zu-liang 1, 2, QIU Feng 1, WEI Ri-wei 1, 2, QIN Yu 1, 2, ZHANG Kun 1, QIN Jie-ping 2, YANG Mei-hua 1 1. Key Laboratory of Bioactive Substances and Resources Utilization of Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education, Institute of Medicinal Plant Development, Peking Union Medical College, Beijing , China 2. Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning , China Key words: relative correction factor (RCF); quantitative analysis of multi-components by single marker (QAMS); substitute reference substance method; multi-index determination; standard substance of Chinese materia medica 在 药 品 质 量 检 验 过 程 中, 对 照 品 是 进 行 定 量 测 定 的 关 键 之 一 而 在 实 际 工 作 中, 有 些 对 照 品 本 身 价 格 昂 贵, 或 者 性 质 不 稳 定, 甚 至 有 时 很 难 获 得, 使 得 药 品 检 验 包 括 其 重 要 指 标 定 量 无 法 进 行, 影 响 到 药 品 的 质 量 控 制 [1] 目 前 中 药 化 学 对 照 品 的 品 种 和 数 量 远 远 不 能 满 足 药 品 的 检 验 质 量 标 准 的 研 究 与 提 高, 以 及 新 药 研 制 等 方 面 的 要 求 在 很 大 程 度 上, 中 药 标 准 物 质 品 种 和 质 量 的 相 对 滞 后, 已 成 为 中 药 标 准 制 定 与 提 高 的 制 约 因 素 [2] 而 现 行 国 家 标 准 采 用 的 是 各 个 成 分 逐 一 检 测 来 控 制 中 药 及 其 复 方 质 量, 给 生 产 检 验 带 来 诸 多 不 便 为 解 决 这 一 问 题, 研 究 者 不 断 开 发 出 新 的 测 定 方 法, 如 内 标 多 控 法 替 代 对 照 品 法 加 校 正 因 子 的 主 成 分 自 身 对 照 法 系 统 内 标 法 一 测 多 评 法 等 以 上 方 法 不 仅 在 一 定 程 度 上 解 决 了 对 照 品 难 以 制 得 价 格 昂 贵 和 不 稳 定 等 问 题, 而 且 在 中 药 的 多 指 标 质 量 控 制 方 面 起 到 重 要 的 作 用 虽 然 以 上 各 方 法 的 名 称 都 不 尽 相 同, 但 其 方 法 的 原 理 却 基 本 相 同, 即 根 据 中 药 中 各 成 分 间 存 在 着 的 一 定 比 例 关 系, 在 多 个 指 标 成 分 中, 选 定 一 个 性 质 稳 定 且 对 照 品 较 容 易 获 得 的 指 标 成 分 作 为 内 标 成 分 ( 此 成 分 不 是 外 加 内 标, 而 是 待 测 指 标 之 一, 故 以 上 方 法 与 内 标 法 相 似, 却 又 有 差 别 ) 取 各 指 标 成 分 的 对 照 品 与 内 标 成 分 的 对 照 品, 建 立 各 成 分 对 内 标 成 分 的 相 对 校 正 因 子, 相 对 校 正 因 子 建 立 后, 实 现 仅 用 一 个 对 照 品 对 多 个 成 分 进 行 同 时 测 定 目 前, 相 对 校 正 因 子 计 算 法 不 仅 应 用 于 药 品 的 相 关 物 质 的 测 定, 而 且 还 广 泛 应 用 于 中 药 及 其 复 方 制 剂 中 多 指 标 成 分 的 测 定 [3-5] 应 用 此 法 不 需 要 每 种 对 照 品 即 可 完 成 多 指 标 同 步 测 定, 方 法 简 单 快 速 本 文 将 对 与 相 对 校 正 因 子 相 关 的 多 指 标 定 量 方 法 及 相 对 校 正 因 子 计 算 法 的 主 要 内 容 和 技 术 要 求 进 行 综 述 收 稿 日 期 : 基 金 项 目 : 科 技 部 重 大 新 药 创 制 专 项 (2009ZX ); 国 家 中 医 药 管 理 局 2008 年 度 中 医 药 行 业 科 研 专 项 ( ) 作 者 简 介 : 罗 祖 良 (1986 ), 男, 布 依 族, 云 南 马 关 人, 硕 士 研 究 生, 研 究 方 向 为 中 药 质 量 控 制 luozuliang123@yahoo.com * 通 讯 作 者 杨 美 华 Tel: (010) yangmeihua15@hotmail.com
2 相 对 校 正 因 子 的 相 关 方 法 1.1 内 标 多 控 法 研 究 发 现, 在 中 药 各 成 分 间 存 在 着 一 定 的 比 例 关 系, 只 要 各 成 分 的 量 符 合 该 比 例 关 系, 中 药 的 多 [6] 指 标 质 量 控 制 可 以 依 此 法 解 决 王 跃 生 等 提 出 了 基 于 内 标 多 控 法 的 中 药 复 方 质 量 评 价 模 式, 即 在 中 药 复 方 中 选 则 1~2 个 分 离 度 好 性 质 稳 定 而 且 对 照 品 较 易 获 得 的 成 分 作 为 内 标 成 分 ( 此 成 分 不 是 外 加 的 内 标 物 质, 而 是 复 方 中 本 身 含 有 的 成 分, 因 其 作 用 与 内 标 物 质 相 类 似, 故 此 命 名 ) 方 法 原 理 : 在 一 定 的 范 围 ( 线 性 范 围 ) 内 成 分 的 量 ( 质 量 或 浓 度 ) 与 检 测 器 响 应 值 成 正 比, 即 f=w / A(W 表 示 浓 度,A 表 示 响 应 值 ), 以 易 得 对 照 品 成 分 为 内 标 成 分, 建 立 该 内 标 成 分 与 被 测 成 分 间 的 相 对 校 正 因 子 (f km ), 然 后 通 过 内 标 成 分 对 照 品 的 浓 度 和 相 对 校 正 因 子 计 算 被 测 组 分 的 量, 即 f km =f k / f m =(W k A m )/ (W m A k );W m =(W k A m )/(f km A k ); 式 中 A k 为 内 标 成 分 对 照 品 的 峰 面 积,W k 为 内 标 成 分 对 照 品 的 浓 度,A m 为 被 测 组 分 的 峰 面 积,W m 为 被 测 组 分 的 浓 度 该 课 题 组 应 用 HPLC 内 标 多 控 法 测 定 了 四 逆 散 中 芍 药 苷 柚 皮 苷 橙 皮 苷 甘 草 酸 和 新 橙 皮 苷, 并 对 该 评 价 模 式 进 行 方 法 学 考 察, 比 较 了 外 标 法 与 内 标 多 控 法 的 测 定 结 果, 表 明 内 标 多 控 法 对 中 药 复 方 多 成 分 质 量 控 制 是 可 行 的 实 用 的 随 后, 该 课 题 组 又 用 此 法 分 别 测 定 了 杏 香 兔 耳 风 中 绿 原 酸 和 3, 5- 二 咖 啡 酰 基 奎 宁 酸 的 量 及 芸 香 科 植 物 枳 实 枳 壳 青 皮 和 陈 皮 中 黄 酮 类 成 分 的 量 结 果 表 明 内 标 多 控 法 可 实 现 只 用 绿 原 酸 一 种 对 照 品 同 时 测 绿 原 酸 和 3, 5- 二 咖 啡 酰 基 奎 宁 酸 的 量 ; 该 法 可 用 于 枳 实 枳 壳 青 皮 以 及 陈 皮 中 黄 酮 类 成 分 的 定 量 分 析 和 质 量 控 制 [7-8] 1.2 替 代 对 照 品 法 [9] 谢 元 超 等 采 用 测 定 替 代 对 照 品 相 对 于 对 照 品 的 相 对 校 正 因 子 的 方 法, 将 测 得 的 相 对 校 正 因 子 载 入 到 各 品 种 项 下, 用 替 代 对 照 品 结 合 相 对 校 正 因 子 的 方 法 进 行 中 药 或 中 药 复 方 的 质 量 控 制 相 对 校 正 因 子 (f)=(a i / C i )/(A r / C r ), 式 中 A i 为 替 代 对 照 品 的 峰 面 积 ;A r 为 对 照 品 的 峰 面 积 ; C i 为 替 代 对 照 品 的 浓 度 ;C r 为 对 照 品 的 浓 度 在 一 定 的 色 谱 条 件 下, 配 制 一 系 列 浓 度 对 照 品 和 替 代 对 照 品 溶 液, 以 浓 度 为 横 坐 标, 峰 面 积 为 纵 坐 标, 分 别 绘 制 对 照 品 和 替 代 对 照 品 的 标 准 曲 线, 将 标 准 曲 线 的 截 距 校 正 为 0 后, 用 两 条 标 准 曲 线 斜 率 (k) 的 比 值 求 得 f 测 定 样 品 时, 用 对 照 品 进 行 测 定, 被 测 样 品 浓 度 C 1 =A t /(A r / C r ); 用 替 代 对 照 品 进 行 测 定, 被 测 样 品 浓 度 C 2 =(A t / f)/(a r / C r ), 式 中 A t 为 被 测 样 品 峰 面 积 [1,9] 谢 元 超 等 先 后 用 替 代 对 照 品 法 对 丹 参 复 方 丹 参 片 及 石 杉 碱 甲 片 进 行 质 量 控 制, 具 有 实 用 价 值, 方 法 中 使 用 的 替 代 对 照 品 并 非 药 物 的 有 效 成 [2,10] 分, 而 是 引 入 的 新 成 分 随 后, 马 双 成 等 用 替 代 对 照 品 法 同 时 测 定 了 莪 术 油 及 其 注 射 液 中 6 种 成 分 以 及 同 时 测 定 了 中 药 和 保 健 食 品 中 6 种 大 豆 异 黄 酮 类 成 分 的 量 方 法 中 使 用 的 替 代 对 照 品 均 为 药 物 所 含 有 效 成 分, 是 多 种 待 测 成 分 中 易 得 到 而 稳 定 的 一 种 成 分, 利 用 其 他 待 测 成 分 与 其 相 对 校 正 因 子 来 实 现 对 待 测 成 分 的 测 定 1.3 主 成 分 自 身 对 照 法 目 前 我 国 药 品 质 量 标 准 检 查 有 关 物 质 最 常 用 的 方 法 是 加 校 正 因 子 的 主 成 分 自 身 对 照 法, 该 法 用 主 成 分 作 对 照, 杂 质 峰 面 积 不 经 校 正, 由 于 不 同 物 质 检 测 的 响 应 值 不 一 样, 杂 质 峰 面 积 不 经 校 正 则 难 以 定 量 测 定, 因 此 只 能 对 杂 质 作 限 量 检 查 [11] 吴 益 群 等 采 用 加 校 正 因 子 的 主 成 分 自 身 对 照 法 测 定 5- 羟 甲 基 糠 醛 对 替 硝 唑 的 校 正 因 子, 并 以 该 校 正 因 子 计 算 替 硝 唑 葡 萄 糖 注 射 液 中 5- 羟 甲 基 糠 醛 [12] 的 量, 结 果 较 为 满 意 魏 嘉 陵 等 参 考 中 国 药 典 加 校 正 因 子 的 主 成 分 自 身 对 照 法, 探 讨 测 定 杂 质 氯 苯 酪 胺 相 对 于 主 成 分 苯 扎 贝 特 的 相 对 保 留 时 间 以 确 定 氯 苯 酪 胺 在 色 谱 图 中 的 位 置, 测 定 杂 质 氯 苯 酪 胺 相 对 于 主 成 分 苯 扎 贝 特 的 校 正 因 子 以 计 算 氯 苯 酪 胺 的 量 结 果 表 明 用 加 校 正 因 子 的 主 成 分 自 身 对 照 法 测 定 苯 扎 贝 特 中 杂 质 氯 苯 酪 胺 的 量, 方 法 可 行, 该 [13] 法 测 定 结 果 与 外 标 法 基 本 相 同 于 莲 欣 等 用 加 校 正 因 子 的 主 成 分 自 身 对 照 法 测 定 盐 酸 土 霉 素 中 相 关 物 质, 结 果 表 明, 加 校 正 因 子 的 主 成 分 自 身 对 照 法 是 一 种 比 较 准 确 实 用 快 捷 的 分 析 方 法 1.4 系 统 内 标 法 系 统 内 标 法 的 原 理 [14] : 首 先 获 得 成 分 A 对 照 品 溶 液 质 量 浓 度 (C A ) 与 检 测 器 的 响 应 信 号 ( 峰 面 积 或 峰 高,Y) 之 间 的 回 归 方 程 Y=K A C A 及 其 线 性 范 围, K A 即 成 分 A 的 校 正 因 子, 同 法 获 得 成 分 B 的 校 正 因 子 K B 计 算 成 分 A 与 B 之 间 相 对 校 正 因 子 (f)= K B / K A 利 用 外 标 法 测 定 样 品 中 成 分 A 的 质 量 浓 度 C a ( 成 分 A 为 内 标 ); 通 过 测 定 样 品 中 成 分 A 与 成 分 B 的 峰 面 积 (A a A b ), 利 用 f 计 算 样 品 中 成 分 B
3 1450 的 质 量 浓 度 (C b )=(A b C a )/(A a f) [15] 柏 冬 等 以 桂 枝 汤 中 芍 药 苷 为 内 标, 测 定 芍 药 苷 与 甘 草 苷 肉 桂 酸 桂 皮 醛 和 甘 草 酸 之 间 的 相 对 校 正 因 子, 利 用 该 相 对 校 正 因 子 计 算 甘 草 苷 肉 桂 酸 桂 皮 醛 和 甘 草 酸 的 量, 并 与 外 标 一 点 法 测 定 结 果 进 行 比 较, 以 验 证 方 法 的 准 确 性 和 可 行 性 结 果 表 明, 系 统 内 标 法 既 能 同 时 测 定 中 药 中 多 个 成 分 的 量, 又 能 简 化 实 验 操 作, 有 望 成 为 适 合 中 药 特 点 的 多 指 标 质 量 评 价 新 模 式 此 外, 该 课 题 组 还 以 七 参 颗 粒 中 人 参 皂 苷 Rg 1 与 三 七 皂 苷 R 1 人 参 皂 苷 Re 和 人 参 皂 苷 Rb 1 之 间 的 相 对 校 正 因 子, 利 用 该 相 对 校 正 因 子 计 算 三 七 皂 苷 R 1 人 参 皂 苷 Re 和 人 参 皂 苷 Rb 1 的 量, 建 立 了 同 时 测 定 七 参 颗 粒 中 多 个 有 效 成 分 的 系 统 内 标 含 量 测 定 方 法 [14] 1.5 一 测 多 评 法 [16] 王 智 民 等 提 出 了 一 测 多 评 法, 利 用 中 药 有 效 成 分 内 在 的 比 例 关 系, 只 测 定 一 个 成 分 ( 对 照 品 可 得 到 者 ), 即 可 实 现 多 个 成 分 的 同 步 测 定 其 原 理 : 在 一 定 的 范 围 内 ( 线 性 范 围 内 ) 成 分 的 量 ( 质 量 或 浓 度 ) 与 检 测 器 响 应 值 成 正 比 在 多 指 标 质 量 评 价 时, 以 药 材 中 某 一 典 型 组 分 ( 有 对 照 品 者 ) 为 内 标, 建 立 该 组 分 与 其 他 组 分 之 间 的 相 对 校 正 因 子 (f km ), 通 过 相 对 校 正 因 子 计 算 其 他 组 分 的 量 这 种 测 定 一 个 成 分 以 实 现 对 多 个 成 分 定 量 的 方 法 为 一 测 多 评 法 计 算 f km 值 的 公 式 :f km =f k / f m =(W k A m )/ (W m A k ); 由 此 可 导 出 定 量 计 算 公 式 :W m =(W k A m )/(f km A k ), 式 中 A k 为 内 标 物 峰 面 积 ;W k 为 内 标 物 浓 度 ;A m 为 待 测 组 分 峰 面 积 ;W m 为 待 测 组 分 浓 度 近 年 来, 有 关 这 方 面 的 研 究 报 道 逐 渐 增 多, 且 在 中 国 药 典 2010 年 版 一 部 中, 已 经 收 录 该 法 测 定 黄 连 中 小 檗 碱 巴 马 汀 黄 连 碱 表 小 檗 碱 4 个 [17] 成 分 的 量 ; 吴 呈 祥 等 以 槲 皮 素 为 对 照, 应 用 一 测 多 评 法 测 定 中 药 萹 蓄 中 主 要 黄 酮 类 成 分 杨 梅 苷 萹 蓄 苷 和 槲 皮 素 的 量, 建 立 了 中 药 萹 蓄 的 质 量 标 准 到 目 前 为 止, 一 测 多 评 法 已 在 木 通 黄 连 黄 芩 黄 芪 人 参 三 七 柴 胡 连 翘 大 黄 等 药 材 多 指 标 定 量 测 定 中 得 到 应 用 [18-23] 也 有 研 究 将 一 测 多 评 法 应 用 于 复 方 中 药 的 质 量 控 制 [24] 2 相 对 校 正 因 子 计 算 方 法 主 要 内 容 2.1 检 测 指 标 的 选 择 原 则 上 指 标 性 成 分 应 选 择 药 材 中 药 理 作 用 比 较 明 确 的 有 效 成 分 或 与 药 材 临 床 功 效 具 有 相 关 性 的 成 分 ; 选 择 的 内 标 成 分 应 是 对 照 品 相 对 易 得 者 ; 其 他 检 测 指 标 应 是 不 易 得 到 或 制 备 难 度 大 或 成 本 高 或 不 稳 定 者 待 测 指 标 选 取 后, 应 进 行 预 试 验, 确 定 多 成 分 同 时 测 定 的 色 谱 条 件 另 外, 待 测 成 分 应 有 相 对 较 高 的 量 2.2 对 照 品 溶 液 制 备 实 验 中 所 用 对 照 品 应 该 标 明 质 量 分 数, 如 果 为 自 制 的 对 照 品, 则 需 经 严 格 的 质 量 分 数 检 查, 质 量 分 数 应 大 于 98%, 必 要 时 注 明 量, 供 校 正 用 配 制 混 合 对 照 品 溶 液 是 分 别 取 各 待 测 成 分 对 照 品 一 定 量, 精 密 称 定, 采 用 适 宜 的 溶 剂, 制 成 含 适 宜 浓 度 的 混 合 对 照 品 溶 液, 用 于 实 验 方 法 学 的 考 察 及 相 对 校 正 因 子 的 计 算 2.3 方 法 学 考 察 参 照 中 国 药 典 附 录 中 高 效 液 相 色 谱 法 的 要 求, 完 成 色 谱 条 件 的 优 化 ; 参 照 中 国 药 典 附 录 中 药 质 量 标 准 分 析 方 法 验 证 指 导 原 则 的 要 求 完 成 准 确 度 精 密 度 专 属 性 定 量 限 检 测 限 线 性 范 围 耐 用 性 等 各 项 内 容 的 考 察, 应 符 合 要 求 2.4 待 测 成 分 相 对 校 正 因 子 的 计 算 待 测 成 分 的 相 对 校 正 因 子 在 以 上 不 同 方 法 中 计 算 方 法 也 不 相 同, 常 用 的 计 算 方 法 主 要 分 为 两 种 : 一 种 是 分 别 测 定 待 测 成 分 的 标 准 曲 线, 应 用 标 准 曲 线 斜 率 的 比 值 求 得 相 对 校 正 因 子 ; 另 一 种 是 以 不 同 进 样 量 测 得 的 校 正 因 子 的 平 均 值 作 为 相 对 校 正 因 子 标 准 曲 线 法 在 一 定 的 色 谱 条 件 下, 配 制 一 系 列 浓 度 的 混 合 对 照 品 溶 液, 以 浓 度 为 横 坐 标, 峰 面 积 为 纵 坐 标, 分 别 测 定 各 对 照 品 的 标 准 曲 线, 将 标 准 曲 线 的 截 距 校 正 为 0 后, 用 两 条 标 准 曲 线 斜 率 K 的 比 值 求 得 校 正 因 子 利 用 对 照 品 溶 液 获 得 质 量 浓 度 与 检 测 器 的 响 应 信 号 ( 峰 面 积 或 峰 高 ) 之 间 的 回 归 方 程 Y=K C 及 其 线 性 范 围 (r> ),K 即 校 正 因 子 ; 同 法 获 得 其 他 成 分 的 校 正 因 子 计 算 成 分 A 与 B 之 间 相 对 校 正 因 子 f=k B / K A 平 均 值 计 算 法 在 一 定 的 范 围 内 ( 线 性 范 围 内 ) 成 分 的 量 (W) 与 检 测 器 响 应 值 (A) 成 正 比, 即 W=fA, 选 取 待 测 成 分 中 一 组 分 k 为 内 标, 建 立 组 分 k 与 其 他 组 分 m 之 间 的 相 对 校 正 因 子, 即 f km = f k / f m =(W k A m )/(W m A k ) 配 置 一 定 浓 度 的 混 合 对 照 品 溶 液, 精 密 吸 取 不 同 体 积 的 同 一 混 合 对 照 品 进 样 分 析, 分 别 计 算 不 同 进 样 体 积 下 的 f km, 然 后 计 算 平 均 值, 并 以 其 作 为 相 对 校 正 因 子 进 行 样 品
4 1451 的 定 量 测 定 2.5 相 对 校 正 因 子 耐 用 性 考 察 待 测 成 分 相 对 校 正 因 子 耐 用 性 系 指 在 测 定 条 件 有 小 的 变 动 时, 其 对 影 响 的 承 受 程 度 为 使 所 建 立 的 各 待 测 成 分 的 相 对 校 正 因 子 能 用 于 常 规 检 验, 应 对 待 测 成 分 相 对 校 正 因 子 耐 用 性 进 行 全 面 的 考 察, 如 果 测 试 条 件 要 求 苛 刻, 则 应 加 以 限 定 考 察 内 容 包 括 相 对 校 正 因 子 在 各 种 条 件 ( 流 动 相 的 组 成 比 例 ph 值 柱 温 体 积 流 量 及 检 测 波 长 等 的 微 小 改 变 时 和 使 用 不 同 仪 器 不 同 品 牌 或 不 同 批 号 的 同 类 型 色 谱 柱 不 同 实 验 室 不 同 操 作 人 员 等 ) 下 的 耐 用 性 对 于 相 对 校 正 因 子 值 影 响 大 的 因 素 应 具 体 分 析 后 加 以 限 定, 以 确 保 方 法 有 效 2.6 计 算 值 与 实 测 值 的 比 较 按 照 供 试 品 溶 液 制 备 方 法 制 备 不 同 批 次 的 样 品 ( 样 品 应 尽 可 能 多 ), 分 别 进 样 分 析 对 实 测 值 ( 外 标 法 测 定 ) 和 计 算 值 两 组 数 据 采 用 t 检 验 或 夹 角 余 弦 值 或 用 Pearson 相 关 系 数 进 行 分 析 比 较, 以 验 证 相 对 校 正 因 子 计 算 法 用 于 多 指 标 质 量 评 价 的 准 确 性 和 可 行 性 2.7 待 测 成 分 的 色 谱 峰 定 位 色 谱 峰 的 准 确 定 位 是 保 证 相 对 校 正 因 子 计 算 法 应 用 的 前 提, 一 般 可 以 采 用 保 留 时 间 差 或 相 对 保 留 值 等 参 数 结 合 色 谱 图 整 体 特 征, 以 及 每 个 峰 的 紫 外 吸 收 特 征 来 定 位 其 余 待 测 成 分 色 谱 峰 相 对 保 留 值 (r as ) 指 各 待 测 成 分 与 内 参 物 (s) 间 保 留 时 间 的 比 值, 即 r as =t Ra / t Rs ; 保 留 时 间 差 指 各 待 测 成 分 与 s 间 保 留 时 间 的 差 值, 即 t Ras =t Ra -t Rs 在 HPLC-MS 分 析 中, 可 以 根 据 各 种 被 测 成 分 相 应 的 保 留 时 间 分 子 离 子 质 荷 比 紫 外 光 谱 数 据 对 [10] 样 品 中 被 测 成 分 进 行 确 认, 结 果 更 准 确 魏 锋 等 采 用 HPLC-DAD-MS 联 用 技 术, 通 过 定 性 和 定 量 手 段 分 别 求 得 各 被 测 成 分 相 对 于 特 定 对 照 品 的 相 对 校 正 因 子, 从 而 实 现 以 染 料 木 素 为 对 照, 同 时 测 定 样 品 中 大 豆 苷 黄 豆 黄 苷 染 料 木 苷 大 豆 苷 元 黄 豆 黄 素 和 染 料 木 素 6 种 成 分 的 量 3 结 语 相 对 校 正 因 子 的 计 算 多 通 过 不 同 质 量 浓 度 或 不 同 进 样 量 对 照 品 溶 液 所 测 得 的 峰 面 积 与 质 量 浓 度 比 值 的 算 术 平 均 值 作 为 成 分 的 校 正 因 子, 并 以 各 成 分 与 对 照 成 分 校 正 因 子 的 比 值 作 为 相 对 校 正 因 子, 可 以 看 出 不 同 进 样 量 不 同 浓 度 计 算 所 得 的 校 正 因 子 有 一 定 误 差 ; 而 通 过 一 系 列 浓 度 的 混 合 对 照 品 溶 液 测 定, 分 别 测 定 各 对 照 品 的 标 准 曲 线, 将 标 准 曲 线 的 截 距 校 正 为 0 后, 用 两 条 标 准 曲 线 斜 率 的 比 值 求 得 成 分 相 对 校 正 因 子, 此 法 计 算 得 到 的 校 正 因 子 更 准 确 方 法 更 合 理, 且 可 以 限 定 相 对 校 正 因 子 的 使 用 范 围 另 外, 在 色 谱 峰 的 定 位 中, 当 应 用 HPLC 色 谱 法 分 析 时, 可 以 根 据 保 留 时 间 差 相 对 保 留 值 和 各 成 分 的 紫 外 光 谱 数 据 来 定 位 ; 如 果 有 条 件 使 用 HPLC-MS 进 行 分 析, 可 以 根 据 各 种 被 测 成 分 相 应 的 保 留 时 间 分 子 离 子 质 荷 比 紫 外 光 谱 数 据 对 样 品 中 被 测 成 分 进 行 确 认, 则 色 谱 峰 的 确 认 将 更 加 简 单 准 确 中 药 现 代 研 究 已 经 逐 渐 认 识 到 中 药 有 效 成 分 的 多 样 性, 单 一 成 分 将 很 难 全 面 反 映 其 质 量, 因 此, 中 药 成 分 定 量 测 定 发 展 的 趋 势 是 多 指 标 定 量 测 定 对 于 多 指 标 定 量 测 定 一 般 需 要 为 每 种 待 测 成 分 建 立 测 定 方 法 或 在 同 一 条 件 下 采 用 多 个 指 标 对 照 进 行 测 定 这 些 多 指 标 测 定 方 法 存 在 着 对 照 品 消 耗 量 大 的 缺 陷, 而 且 操 作 复 杂 繁 琐 易 导 致 误 差 相 对 校 正 因 子 计 算 法 既 能 反 映 中 药 有 效 成 分 多 样 化, 实 现 中 药 多 指 标 同 步 测 定, 可 以 降 低 对 照 品 的 使 用 数 量, 减 少 误 差, 提 高 测 定 结 果 的 准 确 性, 且 操 作 相 对 简 单 快 速 相 对 校 正 因 子 计 算 法 尤 其 适 合 于 生 产 企 业 或 一 些 专 门 的 实 验 室 对 某 类 长 期 生 产 和 重 复 测 定 的 样 品 进 行 例 行 检 测, 可 以 达 到 分 析 检 测 的 准 确 快 速 高 效, 并 可 大 大 地 降 低 分 析 检 测 的 成 本 同 时, 对 中 药 和 天 然 药 物 复 杂 体 系 的 分 析 和 测 定, 该 法 具 有 独 特 的 优 势 目 前, 相 对 校 正 因 子 计 算 法 在 多 指 标 成 分 的 定 量 中, 虽 已 有 多 种 方 法 被 提 出 并 得 到 越 来 越 多 的 应 用, 但 各 方 法 之 间 还 没 有 统 一 的 标 准, 不 够 成 熟, 方 法 还 需 进 一 步 完 善, 使 其 能 应 用 于 中 药 的 质 量 控 制 参 考 文 献 [1] 谢 元 超, 张 启 明, 金 少 鸿. 替 代 对 照 品 法 用 于 石 杉 碱 甲 片 含 量 测 定 的 研 究 [J]. 中 国 药 学 杂 志, 2008, 43(3): [2] 何 欢, 马 双 成, 张 启 明, 等. HPLC 替 代 对 照 品 法 同 时 测 定 莪 术 油 及 其 注 射 液 中 6 种 成 分 的 含 量 [J]. 药 物 分 析 杂 志, 2009, 29(11): [3] 尹 萌, 孟 月 兰, 闻 琍 毓. 关 黄 柏 中 生 物 碱 类 成 分 的 一 测 多 评 [J]. 中 草 药, 2011, 42(6): [4] Sun P, Wang X D, Alquier L, et al. Determination of relative response factors of impurities in paclitaxel with high performance liquid chromatography equipped with
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