幻灯片 1
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- 一疾 濮
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1 蛋白穿越重现之旅 Western Blot 技术 北京全式金生物技术有限公司
2 Western Blot 的起源和应用及原理 Western Blot 实验流程详解 Western Blot 实验中的常见问题分析
3 Western Blot 蛋白质印迹法 又称免疫印迹试验, 它是分子生物学 生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法 基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色 通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息
4 Western Blot 起源 Renart, J., J. Reiser, G. R. Stark, (1979). "Transfer of proteins from gels to diazobenzyloxymethyl-paper and detection with antisera: a method for studying antibody specificity and antigen structure." Proc Natl Acad Sci U S A 76(7): DNA 杂交技术,Southern Blot RNA 杂交技术,Northern Blot 蛋白质印迹技术,Western Blot
5 Western Blot 的应用 定性或半定量分析目的蛋白的特异性表达 蛋白 - 蛋白 蛋白 -DNA 和蛋白 -RNA 相互作用的后续分析 蛋白修饰的鉴定 ( 磷酸化 糖基化的鉴定 )
6 Western Blot 实验原理 直接法 间接法
7 Western Blot 的起源和应用及原理 Western Blot 实验流程详解 Western Blot 实验中的常见问题分析
8 Western Blot 实验流程 样品制备及定量 SDS-PAGE 转膜 显色发光 抗体杂交 封闭
9 样品制备及定量 SDS-PAGE 电泳 转膜 显色 抗体杂交 封闭
10 样品制备 总体原则 整个提取过程在低温下进行, 保持蛋白处于溶解状态, 防止蛋白变性 降解与修饰 根据实验目的选取不同抽提液和抽提方法 有时需要去除体系中的核酸 无关蛋白等干扰成分 方法简便, 耗时短, 易于操作 制备好的样品若不立即使用, 需分装冻存于 -80 冰箱, 及防止储存过程中降解
11 样品制备方法简介 培养细胞的裂解 组织细胞的裂解 弃细胞培养基 1 PBS 洗涤加入细胞裂解液冰上裂解细胞离心收集上清 冰上分离目的组织液氮研磨加入细胞裂解液冰上裂解组织细胞离心收集上清
12 细胞裂解液 组分作用举例 缓冲液盐离子螯合剂还原剂去垢剂蛋白酶抑制剂磷酸酶抑制剂 提供一定 ph 范围的缓冲体系, 使蛋白保持稳定, 增加溶解度 保持蛋白在适当的盐离子浓度下, 避免聚集沉淀 螯合金属离子, 防止蛋白提取物过于黏稠, 溶解度下降 保护二硫键, 防止蛋白发生氧化 溶解膜与脂膜, 溶解与稳定蛋白质 ( 特别是膜蛋白 ) 抑制蛋白酶活性, 防止蛋白降解 抑制磷酸酶活性, 保持蛋白样品的磷酸化状态 Tris-HCl(pH 7.5) Hepes-KOH(pH 7.5) NaCl EDTA EGTA DTT β-me 阴离子型 :SDS 阳离子型 : 脱氧胆酸钠非离子型 : NP-40, Tween-20, TritonX-100 PMSF Aprotinin Leupeptin Pepstetine A Sodium Fluoride Sodium Orthovanadate
13 哺乳动物组织 哺乳动物细胞 核蛋白和浆蛋白提取 DE201 总蛋白提取 DE101 膜蛋白提取 DE301 线粒体分离 DE501 线粒体分离 DE401 简单 快速的试剂盒方式有利于最大限度保证提取蛋白样品的质量
14 相关产品 ProteinExt TM Mammalian Total Protein Extraction Kit ProteinExt TM Mammalian Nuclear and Cytoplasmic Extranction Kit ProteinExt TM Mammalian Membrane Protein Extraction Kit ProteinExt TM Mammalian Mitochondria Isolation Kit for Cell ProteinExt TM Mammalian Mitochondria Isolation Kit for Tissue
15 蛋白定量 目的 : 保持不同处理样品间上样量一致, 便于分析结果 蛋白电泳上样量 细胞样品一般 μg 组织样品一般 μg
16 常用蛋白定量方法 定量方法原理灵敏度干扰因素标准曲线 Lowry 法 (Folin- 酚法 ) 在碱性条件下, 蛋白质与铜作用生成复合物, 后者将磷钼酸 - 磷钨酸还原成蓝色复合物 较高约 5 μg/ml 适用于脂类含量较高的样品, 也能耐受相当浓度的去垢剂 ( 如 SDS); 专一性差, 干扰物质多, 可受硫酸铵 Tris 缓冲液 甘氨酸 各种硫醇的干扰 不是严格的直线 Bradford 法 ( 考马斯亮蓝法 ) 在酸性条件下, 考马斯亮蓝 G-250 和蛋白质结合产生特殊的蓝色 高约 1~5 μg/ml 易受强碱性缓冲液 TritonX- 100 SDS 等去污剂的影响 线性较差 BCA 法 在碱性条件下, 蛋白质中的肽键将 Cu 2+ 还原成 Cu +, 后者能够与 BCA 形成紫色化合物 很高 0.5~20 μg/ml 抗干扰能力强, 不受较高浓度去污剂的干扰 ; 易受某些还原剂 ( 如 DTT 和 β- ME) 铜离子螯合剂和高浓度缓冲液的影响 线性关系较好
17 样品制备及定量 SDS-PAGE 电泳 转膜 显色 抗体杂交 封闭
18 SDS-PAGE 电泳 SDS-polyacrylamide gel electrophoresis SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳
19 SDS-PAGE 原理 SDS 的作用 蛋白质 变形蛋白质成一线形分子并且均匀带上一层负电荷
20 SDS-PAGE 电泳使得蛋白混合物能按照各自的分子量大小分离开来
21 聚丙烯酰胺凝胶 组分 作用 丙烯酰胺 丙烯酰胺单体在自由基的引发下聚合为长链 N,N - 亚甲双丙烯酰胺 过硫酸铵 (AP) TEMED 使长链交联起来形成三维网状结构的凝胶 提供可以引发丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合的自由基 通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺和双丙烯酰胺的聚合 Buffer (Tris-Glycine) 提供稳定的 ph 条件 凝胶的多孔性取决于链的长度以及聚合反应过程交联的程度 聚丙烯酰胺凝胶具有一定的机械强度和透明度, 是良好的电泳介质, 用这种凝胶作为支持物的电泳, 就称为聚丙烯酰胺凝胶电泳
22 丙烯酰胺 N,N - 亚甲双丙烯酰胺
23 SDS-PAGE 凝胶的有效分离范围 丙烯酰胺浓度 / % 线性分离范围 / kda ~ ~ ~ ~ ~ 212 注 : 丙烯酰胺 : 双丙烯酰胺的分子比是 29:1
24 连续电泳和不连续电泳 PAGE 根据是否具有浓缩效应, 分为连续电泳和不连续电泳两类 目前最常用的是不连续电泳
25 关亍 Tricine-SDS-PAGE 小分子蛋白在常规 SDS-PAGE 体系中不能得到良好分辨率 在 Glycine-SDS-PAGE 中, 低分子量的多肽常常堆积在浓缩胶中, 不能进入到分离胶中 SDS- 多肽胶束大致上是一个球形, 而不是通常的椭圆棒状结构, 其长短轴相似 多肽内部的电荷较高, 不能被表面 SDS 所带的电荷完全覆盖, 使得迁移率不与分子量呈线性关系 甚至分子量小于 6 kda 的蛋白, 都具有相同的迁移率 Tricine-SDS-PAGE 适合分离小于 30 kda 的蛋白, 尤其适合疏水蛋白质
26 样品制备及定量 SDS-PAGE 电泳 转膜 显色 抗体杂交 封闭
27 膜选择的依据 膜与目的蛋白分子的结合能力 ( 单位面积的膜能结合蛋白的载量 ) 膜的孔径 ( 可拦截蛋白的大小 ) 分子量大于 20 kda μm 分子量小于 20 kda μm 分子量小于 7 kda μm 是否适合用于所选的显色方法, 信噪比高 根据不同的实验目的来选择
28 两种主要膜的对比 NC 膜 PVDF 膜 灵敏度和分辨率高高 背景低低 结合能力 80 ~ 100 μg/cm ~ 300 μg/cm 2 结合强度低高 材料质地纯的 NC 膜比较脆机械强度高 化学兼容性低高 是否需要活化不需要需要无水甲醇活化 适用范围 化学发光荧光检测常规染色 化学发光常规染色考马斯亮蓝染色蛋白质测序糖蛋白检测二次免疫检测
29 湿法 半干法 转膜的方法
30 转膜注意事项 根据蛋白分子量选择转膜方法 一般的蛋白, 两种方法都可以得到满意的效果 ; 小分子量蛋白, 用半干法转膜效果好 ; 大分子量蛋白 ( 如 100 kda 以上 ), 建议用湿法转膜 转膜效果的判断 观察预染 Marker 是否全部转到膜上 ; 丽春红 S(Ponceau S) 染色 -- 可逆
31 样品制备及定量 SDS-PAGE 电泳 转膜 显色 抗体杂交 封闭
32 封闭 目的 : 将膜上未结合蛋白的区域 ( 也就是潜在的抗体非特异性结合位点 ) 封闭, 以避免产生非特异性背景 封闭剂 :5% 脱脂奶粉或 BSA 特殊情况不能选择脱脂奶粉 : 不能与生物素化或伴刀豆蛋白标记的抗体一起使用 ; 不能用于磷酸化抗体对蛋白磷酸化的检测 ; 不能用于碱性磷酸酶 (AP) 显色方法
33 室温或者 37 缓慢摇荡 1~2 h, 特殊情况也可 4 过夜 根据结果情况调整封闭试剂的浓度和类型 比如有时 BSA 比脱脂奶粉更有利于降低非特异性背景, 而有些抗体则在脱脂奶粉封闭的情况下才能得到清晰的背景 如果采用碱性磷酸酶检测系统, 封闭剂最好用 6% 酪蛋白 +1% 聚乙烯吡咯烷酮 +10 mmol/l EDTA 磷酸缓冲盐加热 65 1 小时确保碱性磷酸酶失活 ( 可以加 0.05% 叠氮化钠, 新鲜最好 ) 经济的脱脂奶配方和 AP 兼容得不太好, 如果选用 AP 作为显色方法, 封闭时就要选择 Tris 缓冲体系, 不要用 PBS, 因为 PBS 干扰 AP
34 样品制备及定量 SDS-PAGE 电泳 转膜 显色 抗体杂交 封闭
35 抗体种类 一抗 : 第一抗体, 能和非抗体性抗原特异性结合的蛋白, 包括单克隆抗体和多克隆抗体 二抗 : 第二抗体, 能和抗体结合, 即抗体的抗体, 其主要作用是检测抗体的存在, 放大一抗的信号 一般二抗都会偶联可以检测的标记 ( 如荧光 放射性 化学发光或显色基团 ), 用来检测一抗 如果一抗本身偶联有这些标记, 则不需要二抗, 即所谓的直接 WB
36 一抗的选择 单克隆抗体 & 多克隆抗体 抗体类别 单克隆抗体 多克隆抗体 抗原类别 多肽 / 蛋白 多肽 / 蛋白 特异性 高 较低 批次间是否一致 完全一致 不能保证 最适应用范围 WB / IP / ELISA / IF / ICC / IHC / FCM WB / IP / ELISA
37 关于一抗的宿主物种 产生一抗的物种尽量不要与待检样品的物种一样, 以免二抗与待检样品中的内源性免疫球蛋白产生交叉反应 例如 : 尽量不要用鼠源一抗检测大鼠或小鼠来源的样本 如果用偶联一抗 ( 直接法 ) 进行检测, 则无需考虑以上因素
38 标签抗体和内参抗体 标签抗体 选择标签抗体, 在于其通用性 内参抗体 protein 选择内参抗体, 便于校正系统误差, 准确判定待测蛋白表达水平的差异, 同时可监测整个 WB 过程的准确性 tag
39 选择合适的内参 根据目的蛋白种属来源选择 哺乳动物 : GAPDH, β-actin,β-tublin 植物 :Plant actin Rubisco 根据目的蛋白分子量大小选择 一般同内参相差 5 kda 当两者相差很大时, 可以剪膜当两者相差很小时, 可以分别检测 -- 应尽量避免 根据目的蛋白的定位选择 核定位蛋白 :Lamin B,TBP, Histone H3,PCNA 膜定位蛋白 : Na,K ATPase 线粒体定位蛋白 : VDAC1, COX IV 胞质定位蛋白 : GAPDH, β-actin,β-tublin ( 同样适用于全细胞样品检测 ) 根据内参的丰度 异构体以及具体实验目的选择 β-actin 在肌肉组织中含量很少所谓的组织特异性有可能是不同公司所用抗原不同造成的 : β-actin 有 N- 和 C- 抗原的区别凋亡检测时, 不适宜选择 Lamin B TBP 等作为内参
40 选择正确的二抗 根据一抗的种属来源选择二抗 比如 : 一抗来自鼠源 ( 如 :anti-v5 mouse monoclonal antibody), 二抗就要用抗鼠二抗 ( 如 :Goat anti-mouse IgG (H+L), HRP conjugated)
41 根据一抗的类型选择二抗 根据单体数量和重链类型, 将抗体分别为 IgA, IgD, IgE, IgG 和 IgM 物种同型或类 其中又可分为几个亚类 :IgA1-2, IgG1a, 2a, 2b, 3,IgM1-2 一抗类型小鼠 IgG 小鼠 IgG1 小鼠 IgM 二抗 抗小鼠 IgG 抗体 抗小鼠 IgG1 抗体抗小鼠 IgG 抗体 抗小鼠 IgM 抗体
42 二抗的偶联标记 酶标二抗 ( 辣根过氧化物酶 HRP, 碱性磷酸酶 AP)-- WB,ELISA, IHC 荧光二抗 生物素标记二抗
43 样品制备及定量 SDS-PAGE 电泳 转膜 显色 抗体杂交 封闭
44 显色 HRP AP 底物 发光底物 Luminol AMPPD 显色底物 DAB, TMB, 4-CN NBT, BCIP, NBT/BCIP 特异性高低 灵敏度 化学发光高高 化学显色较高高 背景 低 较高 动力学特性 快 慢 限制因素 叠氮钠抑制 HRP 活性 内源碱性磷酸酶活性干扰检测 价格 便宜 昂贵
45 Western Blot 的起源和应用及原理 Western Blot 实验流程详解 Western Blot 实验中的常见问题分析
46 Western Blot 实验中的常见问题分析
47 常见问题分析 现象原因解决方案 转膜失败 ( 转膜后观察 ) 1. 看不到预染 Marker 2. 转膜不充分 ( 预染 Marker 有很多没转过去 ) 电极插反了 a. 转膜时间太短 从头再来 对于大分子量蛋白或厚胶需要延长转膜时间 b. 膜未经充分浸润充分润湿 PVDF 膜 ( 甲醇 ) 或 NC 膜 ( 转移平衡 ( 不均匀转移 ) 缓冲液 )( 蛋白无法与干的 PVDF 膜结合 ) 3. 过转 ( 预染 Marker 透膜 ) a. 膜的孔径不合适选择合适孔径的膜 (0.2 μm 或更小 ) b. 转膜电压太高或时间过长 c. 蛋白与膜的结合不强 降低电压或减少时间 采用 PVDF 膜或尼龙膜 ( 结合能力更强 )
48 背景太高
49 现象原因解决方案 ECL 显影有问题或者失败 1. 背景太高 a. 封闭不彻底 b. 抗体浓度过高增加抗体稀释倍数 c. 洗膜不彻底 d. 蛋白上样量太高 e. 转膜缓冲液中 SDS 量太高 a1. 延长封闭时间 (4 过夜 ) a2. 若室温封闭, 最好摇床孵育 a3. 增加封闭蛋白 ( 如 BSA) 的浓度 a4. 更换封闭液种类 : 脱脂奶粉与一些二抗可能有交叉反应, 可更换成 BSA c1. 少量多次洗涤 c2. 适当增加去垢剂强度, 如 Tween-20 换成 NP-40 ( 抗体稀释液中加入 Tween-20 有助于降低非特异性结合 ) 减少蛋白上样量, 或增加抗体稀释倍数 降低 SDS 用量
50 没有信号 信号很弱
51 现象原因解决方案 ECL 显影有问题或者失败 a. 无条带 1 蛋白上样量过低, 增加上样量 b. 抗体浓度低 1 增加抗体浓度 2 增加孵育时间 c. 转膜失败丽春红染色等, 来监测转膜状态 2. 无信号 d. 抗体失效更换抗体 e. 蛋白制备过程中降解 重新制备 f. 抗体浓度过高底物迅速被消耗 g. ECL 显色液失效 ECL 显色液需要现用现配
52 反影空斑非特异性条带, 斑点
53 现象原因解决方案 ECL 显影有问题或者失败 3. 反影或条带为黄色抗体浓度过高增加抗体稀释倍数 4. 显色条带中有白色未显影空斑 5. 非特异性条带多 a. 膜未充分浸润平衡用缓冲液或甲醇充分浸润膜 b. 转膜时膜与胶之间有气泡 c. 显色后包保鲜膜时有气泡 6. 显影后有很多斑点封闭液有杂质 仔细操作, 赶走气泡 仔细操作, 赶走气泡 a. 封闭不彻底 4 封闭过夜 b. 抗体特异性不强增加抗体稀释倍数, 或更换抗体 配好奶粉之后静置一段时间, 使较大的颗粒沉淀下来
54 微笑 条带 垂直纹理 条带太宽 皱眉 条带
55 现象原因解决方案 ECL 显影有问题或者失败 7. 微笑 条带 a. 条带迁移过快降低电压, 减慢电泳速度 b. 电泳温度过高降低电压, 低温电泳 c. 凝胶中间凝固不均匀, 多见于厚胶待凝胶充分凝固再电泳 8. 皱眉 条带凝胶与玻璃挡板底部有气泡在两板间加入适量缓冲液以排除气泡 9. 垂直纹理 a. 样品中有不溶性颗粒 a1. 加样前离心 a2. 优化蛋白提取方法, 寻找合适的裂解液 b. 凝胶中有小气泡仔细配胶, 赶走气泡 10. 条带太宽样品盐离子浓度过高调整裂解液的盐浓度
56 条带扭曲条带太粗拖尾
57 现象原因解决方案 电泳问题 11. 条带扭曲 a. 分离胶与浓缩胶界面不平做好分离胶后注意立即封胶 b. 蛋白溶解度不好优化蛋白提取方法, 寻找合适的裂解液 c. 体系中盐离子浓度过高优化蛋白提取方法, 寻找合适的裂解液 12. 条带太粗浓缩胶配制出错, 没有浓缩效应 13. 拖尾 a. 蛋白样品溶解度不好 1. 检查 ph 值, 重新配制浓缩胶 2. 适当增加浓缩胶长度 3. 降低电压, 延长电泳时间 a1. 加样前离心 a2. 优化蛋白提取方法, 寻找合适的裂解液 b. 电泳缓冲液重复利用次数过多重新配制电泳缓冲液 c. 分离胶浓度过大降低凝胶浓度
58 其它问题分析 显色后目的蛋白分子量同预期不一致 蛋白翻译后修饰 : 糖基化, 磷酸化, 羟基化 蛋白含有特殊氨基酸组成 含有较多碱性氨基酸会使迁移率降低 : 如溶菌酶 含有较多酸性氨基酸会使迁移率增加 蛋白上样量太多, 有时会导致条带下移, 需要减少上样量判断准确位置
59 电泳染色后加样孔底部或浓缩胶与分离胶界面处有条带 多发生于大分子量蛋白分析中 解决办法 加热煮沸后, 添加适量的 DTT 或 β-me, 以补充不足的还原剂 煮样时添加适量 EDTA 以阻止还原剂的氧化
60 Strip 当需要用不同抗体对同一张膜进行杂交时, 需要做 Strip 处理 配方 : 100 mm 2-mercaptoethanol 2% SDS 62.5 mm Tris (ph 6.7) 55 水浴 30 min
61 如何保证 WB 的成功 蛋白制备是关键 配胶不可小觑 -- 细节决定成败 凝胶时间要足够长, 保证充分交联 上样前, 用电泳缓冲液清洗梳孔 各泳道蛋白样品上样量保持一致 用 1 Loading Buffer 将各泳道上样量调成一致 条件允许时, 可以低电压跑浓缩胶, 再调高电压跑分离胶 封闭和洗膜要充分 一抗和二抗的浓度要优化好 科学的设置阳性对照和阴性对照
62 样品制备及定量 SDS-PAGE 电泳 转膜 显色 抗体杂交 封闭
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材料與方法
10-12 250-350 Sprague-Dawley rat ( SD ) 12 ( AM 8 00-PM 8 00 ) (Control group) (HS) (Heat shock group) 15 0 4 6 16 24 (PAE) ( Pulmonary air embolism group) 20 40 (25 l/min) 40 17 20 (HS&PAE) 15 4 16 20
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2 ( )208 58 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)208,Vol.58No. TGF-β bfgf,, 2 (., 330006; 2., 5040) : -β (TGF-β ) (bfgf) (BMSCs), SD BMSCs Percol PCR TGF-β bfgf, pcdna3.(+), 3 BMSCs RT-PCR Westernblot
Microsoft Word 赵凯-二校 出4154
6 10 Vol. 6 No. 10 2015 10 Journal of Food Safety and Quality Oct., 2015 赵 1, 凯 2, 贾彦博 3*, 王啸 2, 丁枫芸 2, 肖海龙 3, 黄建萍 3 (1., 310058; 2., 310019; 3., 310022) 摘要 : 目的 ELISA 方法, Balb/c 4, ELISA,,, ELISA 结果,
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
PCR PCR PCR RT-PCR PCR (Polymerase Chain Reaction,PCR) 80 DNA, DNA PCR PCR PCR DNA PCR -- -- DNA DNA 93 DNA PCR DNA DNA ( ) DNA 55 DNA DNA -- TaqDNA dntp DNA -- -- PCR PCR DNA DNA Y (1 X) n Y DNA X (Y)
蛋白上样量的归一化 在同一张膜上比较不同泳道上的蛋白条带信号时, 需要知道每条泳道中总的蛋白上样量 最好的方式是 : 将感兴趣的蛋白与表达量稳定的看家蛋白如 actin 的蛋白量关联, 通过这样的方式, 可以比较不同泳道中的蛋白表达量的差异 归一化也可以消除不同泳道间上样量不同所带来的信号差异 (
厌倦了 Yes Or No 的结果? 定量 Western Blotting 带来全新体验! 对于一些常规的 Western blotting 应用, 有或无 的结果往往就可以满足实验要求了 然而随着科研水平的发展和进步, 以及对实验结果要求的不断提高,Western blotting 不再局限于定性的结果, 而是向着定量, 并且是高精确定量进步 高质量的 Western blotting 试剂,
第八部分2.indd
蛋白质相关产品选择指南 在生物体内, 蛋白质扮演着构筑生命大厦的 砖块 角色, 随着破译生命密码的人类基因组计划进入尾声, 一个以蛋白质为研究重点的 后基因组时代 已经拉开序幕, 蛋白质将是今后的重点研究方向之一 从 2005 年开始,TIANGEN 公司陆续推出蛋白系列相关产品, 包括抗体, 蛋白质分子量标准, 蛋白质显色试剂, 蛋白胶快速染色液 蛋白质定量试剂盒等, 力争为蛋白质学研究技术的不断进步和完善发挥力量
12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL
![12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL](/thumbs/91/106935627.jpg "12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL")
( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot
Western blotting 实验详细步骤 : 一 蛋白样品的制备 ( 蛋白抽提 ) 1. 培养细胞蛋白样品的制备 (1) 细胞培养至 80% 左右密度时, 以含 0.05% 胰蛋白酶 (AR1007) 消化经细胞刮处理, 细胞经预冷的 PBS(AR0030) 漂洗两次,3000 g/min 离
WB 实验流程 培养细胞总蛋白提取试剂 \ 哺乳动物组织总蛋白提取试剂 蛋白抽提 细菌总蛋白提取试剂 细胞胞浆和胞核蛋白提取试剂 细胞真核膜蛋白提取试剂盒细胞线粒体提取试剂盒红细胞裂解液快速沉淀和浓缩蛋白试剂盒 蛋白定量 BCA 蛋白定量试剂盒微量 BCA 蛋白定量试剂盒考马斯亮蓝增强型蛋白定量试剂盒 蛋白酶抑制剂 SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液 上样 电泳 SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒 SDS-PAGE
P3 膠體電泳法
Polyacrylamide Gel Electrophoresis 聚 丙 烯 醯 胺 膠 体 電 泳 莊 榮 輝 3.1 電 泳 原 理 帶 電 分 子 在 電 場 中 能 夠 移 動, 稱 作 泳 動, 泳 動 的 程 度 稱 為 泳 動 率 (mobility).. 泳 動 率 ~ ( 所 外 加 電 壓 mv) ( 分 子 之 淨 電 荷 ) 分 子 與 介 質 間 之 摩 擦 力 上 述
鉴定抗体流程.doc
Western blot 标准操作流程 试剂的配制 ( 一 ) 母液 1.0mol/L Tris HCl 1000 ml 体积 Tris (MW121.14) 121.1g 蒸馏水 800ml 溶解后, 用浓盐酸调 ph 至所需点 ( 见下所示 ), 最后用蒸馏水定容至 1000ml, 高温灭菌后 室温下保存 PH HCl 7.4 约 70ml 7.6 约 60ml 8.0 约 42ml 250ml
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一 H-E 技 术 操 作 规 范 1. 及 时 固 定 组 织 : 免 疫 组 化 的 病 理 制 片 技 术 的 规 范 应 采 用 10%~20% 甲 醛 液 (10% 甲 醛 液 即 用 浓 甲 醛 液 1 份 加 蒸 馏 水 9 份 稀 释 ) 固 定 组 织, 因 甲 醛 易 氧 化 成 甲 酸, 因 此 多 会 偏 酸 性, 最 理 想 的 是 配 成 中 性 甲 醛 液 巨 大 组
Western Blotting 实验原理及应用 免疫印迹是一个用于蛋白质分析的常规技术, 在电场的作用下将电泳分离的蛋白从凝胶转移至一种固相支持物, 然后利用抗原 - 抗体的特异性反应, 从蛋白混合物中检测出目标蛋白, 从而定量或定性的确定正常或实验条件下细胞或组织中目标蛋白的表达情况 Weste
Western Blotting 实验指南 Western Blotting 实验原理及应用 Western Blotting 检测操作手册 Western Blotting Q&A Troubleshooting for Western Blotting 1 Western Blotting 实验原理及应用 免疫印迹是一个用于蛋白质分析的常规技术, 在电场的作用下将电泳分离的蛋白从凝胶转移至一种固相支持物,
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骨 有 明 訊 肌 動 蛋 白 絲 與 細 胞 形 態 關 係 之 研 究 科 別 : 生 物 科 第 48 屆 科 學 展 覽 北 二 區 佳 作 作 者 : 呂 苹 瑋 范 競 勻 指 導 老 師 : 陳 季 瑄 老 師 壹 摘 要 本 研 究 以 人 類 的 子 宮 頸 癌 細 胞 (HeLa cell) 為 細 胞 骨 架 的 觀 察 對 象, 經 過 培 養 與 繼 代, 利 用 免 疫
甲醇 ml 0.02 ml 蒸馏水 ml 0.64 ml
Phosbind 丙烯酰胺实验步骤 第一部分 Mn2+-Phosbind SDS-PAGE 1 Phosbind SDS-PAGE 试剂的准备 丙烯酰胺溶液 Sol. A 30 w/v 丙烯酰胺溶液 30 T 3.3 C 丙烯酰胺-----------------------------------------------------------------29.0 g N N'-亚甲基双丙烯酰胺----------------------------------------------1.0
2
UCallM 实验技术手册 NO.4 --Western Blot 专题 您的需求, 我们的追求 Your needs, our career. 细胞免疫技术交流群 :212421479 1 2 目录 第一部分试剂配方...4 第二部分操作流程图...7 第三部分实验操作...7 一 实验原理... 7 二 蛋白制备及浓度测定... 8 1 蛋白制备... 8 2 蛋白浓度测定... 12 三 凝胶电泳...
5. Phos-tag TM 方法的原理 注意 :BTL-111 有很大的亲水空间, 所以在免疫印迹实验中灵敏度最高 6. Phos-tag TM 方法需配置的溶液 溶液 A:Tris 盐缓冲液 (10 TBS,1L,pH7.5) # Tris(0.10mol/L) 12.1g # NaCl(1.0
免疫印迹法检测磷酸化蛋白 使用生物素标记的 Phos-tag TM 进行化学发光法检测 Ver.6(2012/1) 1. 背景磷酸化是翻译后修饰的一种重要形式, 与目标蛋白的功能调解 定位和特异性结合有关 检测磷酸化蛋白方法 ( 比如磷酸蛋白质组学 ) 在评估生物多样性和生理状态方面是非常重要的 2002 年,Koike 教授的团队 ( 日本广岛大学 ) 发现了一种双环的金属复合体 (1,3-bis[bis(pyridin-2-ylmethyl)amino]propan-2-olato
11. SDS 12. 过硫酸胺 (AP) 13. Tris base (FW:121.14) 14. 浓盐酸 15. TEMED (N,N,N N 四甲基乙二胺 ) 注 :TEMED 催化过硫酸铵形成自由基而加速两种丙稀酰胺的聚合 ph 太低时, 聚合反应受到抑制 16. Tris-HCl 17.
Western Blot 宗伟, 程赛凤, 马斯琦, 熊立仲 * 作物遗传改良国家重点实验室, 华中农业大学, 武汉 * 通讯作者邮箱 :lizhongx@mail.hzau.edu.cn 引用格式 : 宗伟, 程赛凤, 马斯琦, 熊立仲. (2018). Western Blot. Bio-101 e1010130. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010130. How to
黄寿松等 儿种植物中的过氧化物酶同工酶分析 图版 两种不同凝胶系统同工酶谱的比较 ７ 凝胶系统分离的酶谱 Ｖ ０ 凝胶系统分离的酶谱 材料 一高梁 亨加利 发芽 ３天的全苗 Ｖ一水稻 银坊 发芽 ４天的全苗 ２ 正极向电泳时过硫酸 按 澳 酚蓝 和过氧化物 酶同工酶 带的位置 ａ 同工酶带 ｂ 澳酚蓝 ｃ 过硫酸按 材料 高梁 亨加利 发芽 ６天的全苗 ３ 预电泳和未预电泳凝胶分离的酶谱比较 一未预电泳凝胶分离的同工酶谱
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疾 病 名 马 尔 堡 病 毒 病 英 文 名 Marburg virus disease 别 名 Marburg disease; 马 堡 病 毒 病 ; 马 尔 堡 病 ICD 号 A98.3 病 因 和 发 病 机 制 研 究 的 进 展 1. 病 因 研 究 进 展 马 尔 堡 病 毒 病 (MVD) 是 由 丝 状 病 毒 科 马 尔 堡 病 毒 (MBV) 引 起 的 一 种 出 血 性
张红丽 等 部分功能域基因的原核表达与分析 第６期 发表序列 ＡＹ８１９６５０ 同源性为 １００ 与国外 １０ 株 同源性为 ９８畅 ８ 有 １３ 个碱基发生了突 变 其中 ４ 个是有意义的突变 这 ４ 个有意义的 突变分别为第 ２５７ 位 Ｔ Ｃ 第 ５０５ 位 Ａ Ｃ 第 ９０８ 位 Ａ Ｇ 第 １０１２ 位 Ｇ Ｃ 图 ４ 这些差异可 能是捻转血矛线虫株间存在地域差异所致 ２畅 ５ ＨＰＳ 原核表达与鉴定
材料导报 研究篇 年 月 下 第 卷第 期 种球的制备 单步溶胀法制备分子印迹聚合物微球 洗脱处理 种子溶胀聚合机理 种球用量的影响
水相中 组氨酸单分散分子印迹聚合物微球的合成 表征及其识别性能研究 李思平等 李思平 徐伟箭 较佳工艺条件下 在水性体系中选用无皂乳液聚合法制得的单分散微米级聚苯乙烯微球为种球 分别以组氨酸 甲基丙烯酸 或丙烯酸胺 乙二醇二甲基丙烯酸酯 为模板分子 功能单体和交联剂 合成了 组氨酸分子印迹聚合物微球 研究了形貌 粒径及其分布以及模板分子与功能单体之间的相互作用 分别以 激光粒度分析仪紫外分光光度法和红外光谱表征功能单体与交联剂之间的共聚情况
Slide 1
蛋白印迹技术讲座 WB Michael Wong 王士奇 Scientific Support Specialist 科学支援专家 Abcam (Hong Kong) Ltd 讲座内容概览 1. 什么是 western blotting? 2. 实验程序 3. 常见问题和解决方法 什么是 western blotting? 用电泳把细胞或组织蛋白作质量分离 Anti-GAP43 antibody -
westernC2
Western Blotting 实验操作指南 2015 年 3 月修订版 提高实验效率! 目录 Western Blotting 检测的操作方法及注意事项 1. 电泳 (SDS-PAGE) 2. 转膜 3. 封闭 4. 一抗反应 5. 二抗反应 6. 检测 ( 化学发光法 ) Troubleshooting Western Blotting 关联试剂 HRP 底物 (Luminol) 发光 HRP
3 案 件 受 理 3.1 刑 事 案 件 的 送 检 人 员 需 提 供 公 检 法 司, 以 及 保 卫 部 门 的 盖 有 公 章 的 鉴 定 委 托 书 或 公 函, 并 出 示 本 人 的 工 作 证 民 事 案 件 的 送 检 人 员 需 提 供 委 托 单 位 或 个 人 的 委 托
法 庭 科 学 DNA 实 验 室 检 验 规 范 GA-T383-2002 1 范 围 本 标 准 规 定 了 法 庭 科 学 DNA 实 验 室 检 验 应 遵 守 的 基 本 要 求 本 标 准 适 用 于 所 有 从 事 法 庭 科 学 检 验 的 DNA 实 验 室 2 定 义 本 标 准 采 用 下 列 定 义 2.1 前 期 检 验 prior examination DNA 检 验
Polyclonal Goat Anti-Rabbit IgG *HRP
亲硫层析介质 (6FF) Thiophilic Adsorbent Beads 6FF 货号 BDTL0025-5 BDTL0025-10 BDTL0025-50 BDTL0025-250 规格 50ml 250ml 1. 产品介绍本品可以快速有效地从血清 腹水或组织培养液中纯化抗体 本品的配体主要通过与抗体形成电子供体 - 受体复合物, 从而达到对抗体的选择性吸附 本品使用耐压的基质, 可以耐受最高
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蛋白质电泳 目的 : 分离蛋白质混合物 蛋白质等电点 张四洋 蛋白质分子量 中国医科大学三部 一维电泳 (One dimensional gel electrophoresis,1de), 垂直板十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 二维电泳 (two-dimensional gel,2de), 又称双向电泳, 包括第一向等电聚焦电泳 (isoelectric focusing,ief)
X MGC X 22 X 23 X MGC X BALB/c 26 X MGC X MGC X MGC X..
1 0 3 8 4 9726023 UDC X MGC80-3 2000 7 2000 7 2000 7 2000 6 22.3.4...11..11 12 13 15 15 20 20 X MGC80-3. 22 X 22 X 23 X MGC80-3.23 X BALB/c 26 X MGC80-3.27 X MGC80-3 28 29 29 30 31 32 33 X MGC80-3 34 X..34.35.36
Western Blotting 实验原理及应用 免疫印迹是一个用于蛋白质分析的常规技术, 在电场的作用下将电泳分离的蛋白从凝胶转移至一种固相支持物, 然后利用抗原 - 抗体的特异性反应, 从蛋白混合物中检测出目标蛋白, 从而定量或定性的确定正常或实验条件下细胞或组织中目标蛋白的表达情况 Weste
艾比玛特生物医药 ( 上海 ) 有限公司 Western Blotting 实验指南 Western Blotting 实验原理及应用 Western Blotting 检测操作手册 Western Blotting Q&A Troubleshooting for Western Blotting 1 Western Blotting 实验原理及应用 免疫印迹是一个用于蛋白质分析的常规技术, 在电场的作用下将电泳分离的蛋白从凝胶转移至一种固相支持物,
迈 迪 安 生 命 科 学 公 司 专 长 传 染 病 原 材 料 在 过 去 的 35 年 里, 迈 迪 安 生 命 科 学 公 司 始 终 致 力 于 为 科 研 和 商 业 诊 断 试 剂 的 开 发 提 供 抗 原 和 抗 体 以 传 染 病 为 特 长, 我 公 司 提 供 超 过 125
迈 迪 安 生 命 科 学 公 司 ISO9001 及 GMP 标 准 认 证 为 研 发 优 生 优 育 及 儿 科 传 染 病 检 测 试 剂 而 设 计 的 原 材 料 www.meridianlifescience.com 迈 迪 安 生 命 科 学 公 司 专 长 传 染 病 原 材 料 在 过 去 的 35 年 里, 迈 迪 安 生 命 科 学 公 司 始 终 致 力 于 为 科 研 和
D 慢 性 肾 炎 E 子 宫 蓄 脓 7. 支 气 管 肺 炎 的 X 线 影 征 是 A 黑 色 阴 影 B 密 度 均 匀 的 阴 影 C 大 小 不 一 的 云 絮 状 阴 影 D 边 缘 整 齐 的 大 块 状 阴 影 E 整 个 肺 野 出 现 高 密 度 阴 影 8. 以 波 幅 变
2010 年 国 家 执 业 兽 医 资 格 考 试 试 卷 ( 下 午 卷 ) 临 床 科 目 A 1 型 题 答 题 说 明 每 一 道 考 试 题 下 面 有 A B C D E 五 个 备 选 答 案, 请 从 中 选 择 一 个 最 佳 答 案, 并 在 答 题 卡 上 将 相 应 题 号 的 相 应 字 母 所 属 的 方 框 涂 黑 1. 检 查 浅 表 淋 巴 结 活 动 性 的 基
材料 方法
生物技术通报 张发洲 杨慧兰 为了构建单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽 真核表达质粒 应用 技术从 株 的基因组中扩增 基因 并连接至真核表达载体 对阳性克隆进行菌落 酶切和测序鉴定后 成功构建了重 组质粒 用 转染试剂盒将重组质粒 转染至 细胞中 并用 及 检测其表达情况 结果显示 基因在 细胞中得到正确表达 真核表达质粒 的构建成功 为进 一步研究 对宿主细胞的影响奠定了基础 单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽
材料與方法
µ µ µ κ 17 18 19 20 µ µ µ 21 H 2 DCF-DA H 2 O 2 H 2 DCF-DA 酶 esterase H 2 DCF-DA deacetylation H 2 DCF H 2 DCF H 2 DCF DCF H 2 DCF DCF Bae et al., 1997; Vanden et al., 1997; Atlante et al., 1997; Wang
M2 (M2e)23, M2e CRM197 CRM197-N389 CRM197-N190 N C SDS-PAGE A,M2e, (AUC),, M2e-(CRM197-N190)(CRM197- [8],M2e,, N190)-M2e, M2e,, (HBc) M2e (O19
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33 4 2017 6 CHINESEJOURNALOF VIROLOGY Vol.33 No.4 June 2017 M2e CRM197 1 1 2 1, 2 1,2 1,2 1,2 * 1,2, (1., 361102; 2., 361102) :, M2 (M2e),, (CRM197) CRM197,M2eCRM197(aa1~535) CRM197-N190 (aa1~190) CRM197-N389(aa1~389)C
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( CIP) /,. :, 2003. 10 ISBN 7-5624- 2977-4............ :. G479 CIP ( 2003) 087438 : : : : * : : 174 ( A ) : 400030 : ( 023) 65102378 65105781 : ( 023) 65103686 65105565 : http: / /www. cqup. com. cn :
基 础 研 究 食 品 科 学 2011, Vol. 32, No. 07 17 白 球 蛋 白 醇 溶 蛋 白 和 碱 溶 蛋 白 等, 发 现 白 果 中 的 蛋 白 质 主 要 以 清 蛋 白 和 球 蛋 白 为 主, 其 中 白 果 清 蛋 白 具 有 抗 氧 化 和 延 缓 衰 老 等 作
16 李 莹 莹 1, 吴 彩 娥 1, *, 杨 剑 婷 2, 范 龚 健 1 (1. 南 京 林 业 大 学 森 林 资 源 与 环 境 学 院, 江 苏 南 京 210037;2. 安 徽 科 技 学 院 食 品 药 品 学 院, 安 徽 凤 阳 233100) 对 白 果 的 主 要 过 敏 蛋 白 进 行 鉴 定, 并 对 其 过 敏 原 性 进 行 分 析 以 SDS-PAGE 和 Western-Blotting
鸭鹅兔养殖与疾病防治（一）
...1...2...6...8...10...14...20...22...26...32...36...40...48....50...50...52...54...57...62 I ...64...65...66...67...71...73...74...76...77...79...90...95...98... 101... 102... 103... 104... 105... 106...
标题
实 践 技 能 考 试 大 纲 11 ( 一 ) 医 德 医 风 ( 二 ) 沟 通 能 力 ( 三 ) 人 文 关 怀 一 职 业 素 质 二 病 史 采 集 ( 一 ) 发 热 ( 二 ) 皮 肤 黏 膜 出 血 ( 三 ) 疼 痛 头 痛 胸 痛 腹 痛 关 节 痛 腰 背 痛 ( 四 ) 咳 嗽 与 咳 痰 ( 五 ) 咯 血 ( 六 ) 呼 吸 困 难 ( 七 ) 心 悸 ( 八 ) 水
赵世嘏 高乃云 楚文海 微曝气工艺是在常规 基础上发展起来的 试验表明在紫外光强 投加量为 三氯乙酸 初始浓度约为 的情况下 后该工艺对 的去除达到 以上 工艺效果受 光强 投加量 初 始浓度和 的影响 其他条件一定时 随着 光强和 投加量的增大 去除率增加 然而 投加量超过 后 去除效果增加缓慢 对不同初始浓度 时去除率最 高 而后浓度增加 去除率下降 中性或弱酸性 条件下更有利于降解 消毒副产物
八周年庆特别推荐 细胞培养及检测 TransSerum TM HQ Fetal Bovine Serum TransLipid HL Transfection Reagent TransDetect TM Double-Luciferase Reporter Assay Kit TransDetec
周年 全力以赴为科研, 事 ( 式 ) 在人为莫待天 金榜题名终须有, 八载春秋风云间 周而复始不辞苦, 年增岁长志定坚 欢度一季春光美, 庆得威名扬万千 八载风雨易春秋, 欢庆不忘与君同! 值此全式金生物八周年庆典之际, 衷心感谢长期以来支持和关爱我们的新老朋友, 您的鼓励让我们勇往直前, 您的信任让我们坚定不移 一路走来, 您见证了我们的努力和成长, 也见证了我们从平凡走向卓越的辉煌 我们将一如既往秉承
程汉良 夏德全 吴婷婷 孟学平 吉红九 董志国 陈淑吟 对文蛤 青蛤 硬壳蛤 江户布目蛤 薄片镜蛤 和菲律宾蛤仔 种帘蛤科贝类和 个地理种 群文蛤 大连 连云港 湛江 防城港 的细胞色素 氧化酶亚基 基因片段的核苷酸序列进行了分析 以探讨这一序列在种质鉴定 种群遗传结构和分子系统发生研究中的应用价值 测序结果 表明 所有物种扩增片段长度均为 序列 含量 明显高于 含量 物种间共有变异位点 个 其中简约信息位点
目录 一原理与应用...3 二 Phos-tag Acrylamide 介绍...4 三实验流程...5 四疑难问题...9 五 Phos-tag PAGE 条件优化...10 六应用与参考文献...11 七 FAQ...14 八 SuperSep Phos-tag...18 九 Phos-tag
Phos-tag 实验指导手册 第二版 目录 一原理与应用...3 二 Phos-tag Acrylamide 介绍...4 三实验流程...5 四疑难问题...9 五 Phos-tag PAGE 条件优化...10 六应用与参考文献...11 七 FAQ...14 八 SuperSep Phos-tag...18 九 Phos-tag 系列产品...19 十相关产品...20 Phos-tag SDS-PAGE
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不 懈 努 力! 只 为 您 的 肯 定! western blot 专 区 预 染 蛋 白 Marker 250ul ( 条 带 10-170KD) 预 染 蛋 白 Marker ( 条 带 10-250KD) 发 光 蛋 白 Marker ( 条 带 22-120KD) SM0671 Fermentas 300 强 烈 推 荐 250ul SM1811 Fermentas 380 500ul MM0908
保健食品功能学评价程序和检验方法
保 健 食 品 功 能 学 评 价 程 序 和 检 验 方 法 (1996 年 7 月 18 日 卫 监 发 [1996]38 号 发 布, 自 发 布 之 日 起 实 行 ) 1. 主 题 内 容 和 适 用 范 围 本 程 序 和 检 验 方 法 规 定 了 评 价 食 品 保 健 作 用 的 统 一 程 序 和 检 验 方 法 本 程 序 和 检 验 方 法 适 用 于 评 价 食 品 的 免
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. ( CIP), 2004 /. 2. : (. ) ISBN 7-5077-2116-7......... : :. R473. 71-44 CIP ( 2004 ) 022284 : : : : : : 2 1 : 100078 : : 787mm 1092mm 16 : 7. 5 : 180 : 2005 3 2 : 2005 3 2 : 00001 10000 : 100. 00 ( 10
104 18, 1 1.1, (500±20) g, 1, ; BALB/c 1.2 Varian Cary 50 ; Bio-Rad model 550, BioRad, BioRad IgG(Goat-IgG) Sigma ; CNBr Sepharose 4B Amersham-Pharmac
2011 1, 18(1): 103 109 Journal of Fishery Sciences of China 研究论文 DOI: 10.3724/SP.J.1118.2011.00103 许娜娜 1,2, 钱冬 2 1, 赵海泉 1., 230001; 2., 313001 摘要 : (Lateolabrax japonicus) (Ig), -IgG(Goat-IgG), A Goat-IgG
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一体化蛋白免疫印迹系统 Amersham TM WB System GE 医疗中国 欢迎来到 Western Blot 的新时代! 使用新的 Amersham WB 系统, 电泳转印杂交孵育成像定量分析, 一气呵成 无需担心结果难以重复再现, 无需反复摸索实验条件! 每个样品 每一次实验都能获得一致的定量数据 拥有了稳定可重复的定量数据, 我们可以把更多的精力投入到探索生命现象的艺术世界中 一体化蛋白免疫印迹系统
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标题
Vol. 36 高 等 学 校 化 学 学 报 No. 5 2015 年 5 月 摇 摇 摇 摇 摇 摇 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 摇 摇 摇 摇 摇 摇 886 ~ 892 摇 摇 doi: 10. 7503 / cjcu20140965 一 种 新 的 混 合 斑 精 子 分 离 方 法 伍 贤 军 1,2, 赵 摇 兵 2, 缪 摇 璇
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G+ G+ G- b 作用机制 不可逆地结合到细菌核糖体 ５０Ｓ亚基 的靶位上 抑制细菌蛋白质合成?１４元大环内酯类阻断 肽酰基ｔ ＲＮＡ移位?１６元大环内酯类抑制 肽酰基的转移反应?与５０Ｓ亚基上的Ｌ２７ Ｌ２２蛋白质结合 促使 肽酰基ｔ ＲＮＡ从核糖体 上解离 对哺乳动物核糖体无影响 erythromycin erythromycin erythromycin 5% 5% clarithromycin
目 录
( 第 四 版 ) 中 国 医 科 大 学 生 物 化 学 与 分 子 生 物 学 教 研 室 2008 年 04 月 生 物 化 学 实 验 ( 第 四 版 ) 主 编 : 魏 金 荣 副 主 编 : 关 一 夫, 于 爱 鸣 党 员 编 者 ( 按 姓 氏 笔 画 顺 序 ): 毕 强 李 雪 松 刘 素 媛 邢 伟 武 迪 迪 郑 华 川 宗 志 红 宿 文 辉 阎 敬 韩 晓 曦 魏 金 荣
11. Fab 867 (Infectious bursal disease IBD) IBD ().25 mmol/l IPTG 37 4 h [1] SDS-PAGE 1 Table 1 Primers used in the amplification of the target gene P
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37 11 215 11 中国预防兽医学报 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Vol. 37 No.11 Nov. 215 doi: 1.3969/j.issn.8-589.215.11.12 张瑛杰 1, 尹杰超 1, 李天鹤 2, 周兵 3, 徐鹏飞 1, 荆燕 1,4, 任桂萍 1*, 李德山 1* (1. 153 2. 49
装 置 组 成 用 于 在 脊 椎 外 科 或 脑 外 科 手 术 后 涂 敷 在 脊 椎 或 脑 硬 膜 伤 口 外 表 面, 形 成 水 凝 胶 分 类 编 码 :6866 ( 八 ) 快 速 交 换 治 疗 灌 注 导 管 : 是 一 种 治 疗 灌 注 导 管, 导 管 末 梢 部 分 为
国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 局 关 于 囊 袋 扩 张 环 等 158 个 产 品 分 类 界 定 的 通 知 国 食 药 监 械 [2012]241 号 2012 年 08 月 22 日 发 布 各 省 自 治 区 直 辖 市 食 品 药 品 监 督 管 理 局 ( 药 品 监 督 管 理 局 ): 为 适 应 医 疗 器 械 监 督 管 理 工 作 的 需 要, 国 家 食 品 药
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1 (1) (2) ( ) (3) (4) (5) (1) (2) (3) 2 (1) ( ) (2) (3) (4) 1 2 1 3 4 5 1 1-20 4 2, 260mOsm/kg 320 mosm/kg HEPES ph 7.2-7.4 ph ph (7.4-7.7), ph (7.0-7.4) NaHCO 3 CO 2 CO 2 CO 2 5 2 NaHCO 3 1.97g/L CO 2
第八部分无细胞蛋白表达1.indd
2016-2017 产品目录 08 蛋白表达及检测 无细胞蛋白表达系统简介 299 无细胞蛋白表达系列技术简介 300 Premium PLUS Expression Kit (WM7-EDX-PLUS) 302 WEPO1240/1240H/1240G Expression Kit (WM7-TI-1240) 304 WEPO7240/7240H/7240G Expression Kit (WM7-TI-7240)
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目 录 C O N T E N T S 第 一 部 分 行 业 现 状 分 析 第 一 章 诊 断 试 剂 行 业 发 展 概 况 第 一 节 诊 断 试 剂 概 述 一 诊 断 试 剂 概 述 二 诊 断 制 品 按 学 科 分 类 三 体 外 诊 断 试 剂 的 分 类 第 二 节 生 物 制 药 产 业 特 性 分 析 第 三 节 2006 年 我 国 生 物 医 药 行 业 的 发 展 情
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中 华 人 民 共 和 国 国 家 环 境 保 护 标 准 HJ 585 2010 代 替 GB 11897 89 水 质 游 离 氯 和 总 氯 的 测 定 N,N- 二 乙 基 -1,4- 苯 二 胺 滴 定 法 Water quality Determination of free chlorine and total chlorine Titrimetric method using N,N-diethyl-1,4-phenylenediamine
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ExpressPlus TM 10 8 预制胶 技术手册 No. TM0645 版本 : 05312017 Ⅰ 简介 1 Ⅱ 凝胶选择指导 2 Ⅲ 兼容的电泳槽 3 Ⅳ 预制胶使用简介 4 Ⅴ 凝胶染色 10 Ⅵ 蛋白转印 11 Ⅶ 凝胶实例 11 Ⅷ 问题分析及解决方法 12 Ⅸ 相关产品和订购信息 13 I. 简介金斯瑞 ExpressPlus TM 预制胶是一款高性能的小型聚丙烯酰胺凝胶, 能满足客户上样量大的需求
(CIP) : /. :, 2004 ISBN T S CIP (2004) (1 : ) : * : : :
(CIP) : /. :, 2004 ISBN 7 5045 4510 4.... T S974. 2 CIP (2004) 044759 (1 : 100029 ) : * 787 1092 16 8. 25 176 2004 6 1 2004 6 1 : : 15. 00 : 010 64929211 : 010 64911190 : http: / / www. class. com. cn
经 无 数 次 的 提 取 和 提 纯, 最 终 得 到 一 小 匙 东 西 这 种 东 西 在 显 微 镜 下 呈 现 出 针 状 晶 体 的 形 状, 在 水 中 溶 解 后 得 到 一 种 带 乳 光 的 汁 液 当 他 将 少 许 溶 液 涂 抹 健 康 烟 叶 上 几 天 后, 这 烟 叶
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:,, : : ( 800 : 200433) : 7871092 1/ 16 : 10.75 : 260 520 1998 6 1 1998 6 1 :12 000 ISBN 7-81060-013-3/ R012 : 22.00 ,,,,,,,,,,, 12, 4,, WH O, 270,, ( ),,,,,,,,,,,,,,,,,, 1998 6 8 1 11 15 20 27 31 35 55
Odyssey Western Protocol 目 录 Ⅰ. 需要的试剂 Ⅱ. Western 检测方法 Ⅲ. 双色检测指南 Ⅳ. 膜的 Stripping Ⅴ. Western 检测优化 Ⅵ. 常用提示..
Odyssey 近红外双色激光成像系统 Western Blot Protocol ( 中文版 ) 基因有限公司 2007 年 1 月 Odyssey Western Protocol 目 录 Ⅰ. 需要的试剂... - 1 - Ⅱ. Western 检测方法... - 2 - Ⅲ. 双色检测指南... - 4 - Ⅳ. 膜的 Stripping... - 4 - Ⅴ. Western 检测优化...
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1. 下 列 何 種 物 質 最 容 易 通 過 細 胞 膜? (A) 脂 溶 性 高 的 極 性 小 分 子 (B) 脂 溶 性 低 的 極 性 大 分 子 (C) 脂 溶 性 低 的 非 極 性 小 分 子 (D) 脂 溶 性 高 的 非 極 性 小 分 子 (E) 脂 溶 性 高 的 非 極 性 大 分 子 2. B 細 胞 能 產 生 抗 體, 下 列 何 種 胞 器 與 運 送 抗 體 至
pet28a + CD 1 3 ~ 4 NHL 85% ~ % B 2 CD B B B 3-4 CD 5 CD B Rituximab C2B8 CD IgG1 CHO FDA C2B8 Minibody IgG VL VH CH3 Linker VL-VH-CH3 Fc ADCC
35 3 12 9 JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY Natural Science Edition Vol 35 No 3 Sept 12 pet28a + CD 210046 Rituximab VL VH CH3 CD overlap PCR Rituximab VL VH Linker ScFv ScFv IgG1 CH3 IgG1 cdna pet28a
李俊新 崔 敏 刘艳春 姚艳君 周广芬 孙 宝 河北科技大学理学院 河北石家庄 滦南县职业教育中心基础部 河北滦南 在物理化学实验的基础上 对一级反应的 种不同数据处理模型进行比较和分析 通过对 实验数据处理模型进行系统的比较 来改善传统实验数据处理中存在的一些问题 从而简化数据处 理 减小作图工作量与作图误差 提升实验水平 提高数据处理结果的准确性 一级反应 数据处理模型 过氧化氢 图 过氧化氢分解实验装置图
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
生命科学研究 房 蓓 武泰存 王景安 以玉米沈单 号为材料 用溶液培养的方法研究了缺锌 低锌和正常供锌对玉米生长发育的影响 进一步明确了一定量低锌比缺锌对玉米的伤害更大 并对其 同工酶谱及蛋白质表达进行了分析 结果表明 一定浓度的低锌培养使玉米生长受抑及受害最重 且地上部分比地下部分更敏感 低锌和缺锌处理时 种同工酶的酶谱和蛋白表达与正常供锌时均有明显的差异 尤其在一定量低锌浓度时 有些同工酶的表达增强或被特异性诱导
生物真题+模拟卷（14）.FIT)
教 师 招 聘 考 试 中 学 生 物 全 真 模 拟 试 卷 ( 一 ) 渊 时 间 院 120 分 钟 满 分 院 100 分 冤 一 尧 单 项 选 择 题 渊 圆 园 小 题 袁 每 小 题 员 分 袁 共 圆 园 分 冤 员 援 关 于 人 体 细 胞 功 能 和 结 构 的 叙 述 袁 正 确 的 是 渊 粤 援 在 细 胞 核 内 砸 晕 粤 能 够 传 递 和 表 达 遗 传 信 息
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
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