, 260mOsm/kg 320 mosm/kg HEPES ph ph ph ( ), ph ( ) NaHCO 3 CO 2 CO 2 CO 2 5 2
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- 讨锦 马
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1 1 (1) (2) ( ) (3) (4) (5) (1) (2) (3) 2 (1) ( ) (2) (3) (4) 1 2 1
2 , 260mOsm/kg 320 mosm/kg HEPES ph ph ph ( ), ph ( ) NaHCO 3 CO 2 CO 2 CO 2 5 2
3 NaHCO g/L CO 2 10 NaHCO g/L HEPES ph HEPES 0.34g/L HEPES ph DMEM 2-2-Mercaptoethanol 2-Me 2-Me 2-Me DNA (PHA) 2-Me Me (Do20) M 0.1M 0.5ml L- L
4 , 30 complement,,,, rpm,
5 ml 250ml 100ml 2 1cm 200ml 100ml 50ml 25ml 10ml 3 30mm 60mm 120mm 4 1ml 10ml 5 50ml 30ml 15ml 10ml 5ml ± % 5% 5
6 ph ph ph ph % 10 70% % DMSO TPA 5 CO 2 CO 2 CO 2 CO 2 HEPA 300 / 3000 /HEPA (latent phase),.,.,,.,,
7 ,, , 6-24 (2) (logarithmic growth phase) Mitotic index, MI %-0.5% (contact inhibition) piled up Density Inhibition 3 (Stagnate phase) Plateau phase ph
8 g ml mla B C
9 3-5 2% NaOH % % NaOH 5% , 15, , 15, , % 1 4 9
10 RPMI-1640 DMEM- DMEM- IMDM McCoys 5A M199 F10 PBS Phosphate-Buffered Sallines DPBS Dulbecco s Phosphate-Buffered Sallines g/l CaCl 2 (anhyd.)( ) 0.10 KCl 0.20 KH 2 PO MgCl 2 6H 2 O 0.10 NaCl 8.00 Na 2 HPO 4 7H 2 O 2.16 Hanks Hanks Balanced Salt Solutions HBSS g/l CaCl 2 (anhyd.)( ) 0.14 KCl 0.40 KH 2 PO MgCl 2 6H 2 O
11 MgSO 4 7H 2 O 0.10 NaCl 8.00 NaCO Na 2 HPO D-Glucose 1.00 Phenol Red 0.01 D-Hanks (D-Hanks Balanced Salt Solutions, D-HBSS) g/l KCl 0.40 KH 2 PO NaCl 8.00 NaCO Na 2 HPO D-Glucose 1.00 Phenol Red 0.01 (EDTA) 1 ph Ca 2+ Mg 2+ D-Hanks 0.25% 1 D-Hanks ph7.2 D-Hanks % 0.125% ph EDTA 4Na EDTA 0.02% 0.25% 1 1 EDTA Hanks EDTA EDTA D-HBSS 4 11
12 EDTA 4Na 0.05%, 0.53mM EDTA 4Na 0.5g 0.2gEDTA 4Na 1L D-HBSS -20 ph 1 NaHCO3 7.5% 4 ph 10 CO2 2 HEPES HEPES 10-50mM, 1M 200ml 47.6 HEPES 1N NaOH ph ; 4 ph ph ph D (6) /ml DMSO( ) 5 10 DMSO HL-60 DMSO HL-60 glycele, DMSO DMSO 12
13 3 DMSO DMSO 4 DMSO DMSO 1 10 DMSO g ml 25 30ml 24 DMSO : (1) ml 25ml 3 80g /ml 13
去 中 和 ; [3] 消 化 最 好 在 37 培 养 箱 或 室 温 25 以 上 的 环 境 下 进 行 消 化, 消 化 2--5 min 后, 把 培 养 瓶 放 在 显 微 镜 下 观 察, 发 现 胞 质 回 缩 细 胞 间 隙 增 大, 细 胞 变 圆 后, 立 即 将 培 养 瓶
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