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1 碧云天 Western Blot 检测服务介绍 Western Blot Services by Beyotime 碧云天网站 微信公众号 碧云天生物技术 /Beyotime Biotechnology 订购热线 : 或 技术咨询 技术服务 网址 :

2 碧云天 Western Blot 检测技术服务概述 Western Blot 即蛋白质免疫印迹法, 也称 Western Western blotting Western 印迹, 常简写为 WB, 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶转移到固相支持物 PVDF 或 NC 膜膜上, 然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术 Western Blot 应用 研究检测样品中特异性蛋白质的存在 细胞中特异蛋白质的半定量分析 蛋白质分子的相互作用研究 2 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

3 碧云天 Western Blot 检测技术服务 Western Blot 基本原理 Western Blot: 经过聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) 分离的蛋白质样品, 通过 转膜方式转移到固相载体 ( 如 PVDF NC 膜 ) 上, 固相载体以非共价键形式 吸附蛋白质, 且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变 以固相 载体上的蛋白质或多肽作为抗原, 与对应的抗体起免疫反应, 再与酶标记 ( 通常是 HRP) 的第二抗体起反应, 经过底物化学发光试剂 ( 如 ECL) 发光或显 示试剂 ( 如 DAB) 显色以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分 二抗 HRP 目的蛋白 GAPDH 一抗 protein 杂蛋白 protein 目的蛋白 protein 杂蛋白 PVDF 膜 3 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

4 碧云天 Western Blot 检测技术服务碧云天的优势 金品质 碧云天专业的技术团队可以根据客户样本摸索最佳条件, 提 供最优质的服务 服务全 碧云天提供蛋白提取 WB 检测 结果分析等一站式服务, 用 户可根据需求自由定制服务 质量高 碧云天凭借多年的 WB 试剂盒研发经验, 为您提供准确可信的 实验数据及专业的结果分析 4 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

5 碧云天 Western Blot 检测技术服务蛋白提取 WB 过程中最重要的一点就是确定目的蛋白在组织 细胞中的 定位, 然后选择合适的方法提取目的蛋白 Western 及 IP 细胞裂解液 (P0013) 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 (P0027) 细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 (P0033) 细胞线粒体分离试剂盒 (C3601) 防止蛋白裂解 冰上操作 加入蛋白酶抑制剂 蛋白酶抑制剂混合物 ( 通用型, 100X)(P1005) 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物 ( 通用型, 50X) (P1045) 去乙酰化酶抑制剂混合物 (100X)(P1112) 5 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

6 碧云天 Western Blot 检测技术服务蛋白定量 Bradford 法考马斯亮蓝 G-250 在酸性条件下与蛋白结合后形成蓝色化合物, 该化合物在 595nm 处有最大吸收值, 化合物颜色深浅与蛋白的浓度高低成正比 操作简便, 时间短 受去污剂影响较大 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒 (P0006) Bradford 蛋白浓度测定试剂盒 ( 去垢剂兼容型 ) (P0006C) BCA 法碱性条件下, 蛋白将 Cu++ 还原为 Cu+,Cu+ 与 BCA 试剂形成紫色的络合物 并在 562nm 处有最大吸收值 操作相对简单,45min 左右 受还原剂和金属离子影响较大 BCA 蛋白浓度测定试剂盒 ( 增强型 )(P0010) BCA 蛋白浓度测定试剂盒 (P0012) 蛋白标准 (5mg/ml BSA)(P0007) 6 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

7 碧云天 Western Blot 检测技术服务 SDS-PAGE 凝胶电泳 SDS 离子性的活性剂, 变性剂 氨基酸侧链与 SDS 充分结合形成带负电荷的蛋白质 -SDS 胶束 蛋白质 -SDS 胶束所带的负电荷大大超过了蛋白质分子原有的电荷量, 消除了不 同分子之间的电荷差异 决定不同蛋白的泳动速率只剩下分子大小这一因素 与强还原剂一起使蛋白分子氢键 疏水键打开, 使蛋白质分子线性化 SDS-PAGE 凝胶快速配制试剂盒 (P0012AC) SDS-PAGE 电泳液 (P0014A/B) 7 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

8 碧云天 Western Blot 检测技术服务 SDS-PAGE 凝胶电泳 SDS-PAGE 凝胶 BeyoGel SDS-PAGE 预制胶 BeyoGel Plus PAGE 预制胶 8 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

9 碧云天 Western Blot 检测技术服务转膜 半干法将凝胶和固相基质像三明治一样夹在用缓冲液湿润滤纸间, 电转 10-30min 适合转移小分子量的蛋白 Western 半干法转膜液 (P0021C/D) 湿法 将凝胶和固相基质夹滤纸间, 浸泡在转移装置的缓冲液中, 电转 45min 或过夜 适合转移大分子量 (100kD 以上 ) 蛋白 Western 转膜液 (P0021A/B) 9 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

10 碧云天 Western Blot 检测技术服务封闭 QuickBlock Western 封闭液 (P0252) Western Blot 封闭液 (P0023B) 10 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

11 碧云天 Western Blot 检测技术服务一抗的选择 一抗的选择 确定所研究的目的蛋白, 根据目的目的名称查询相关抗体 单克隆抗体或多克隆抗体 直接标记的抗体或者未标记的抗体 抗体的实验目的 : 对不同实验选择不同抗体 WB( 免疫印迹 ) IHC( 免疫组化 ) ELISA( 酶联免疫反应 ) FC( 流式细胞检测 ) IP( 免疫沉淀 ) 抗体所检测的种属 : 人 小鼠 大鼠等 11 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

12 碧云天 Western Blot 检测技术服务二抗的选择 二抗的选择 根据一抗物种 根据标记物 荧光标记抗体 抗鼠抗兔抗人抗羊抗马抗鸡 HRP AP Blotin 荧光标记 无标记 红色 Cy3 TRITC RRX Texas Red X Dylight549 Dylight594 Dylight649 绿色 蓝色 近红外线 FITC Cy2 Dylight488 AMCA Cy5 12 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

13 碧云天 Western Blot 检测技术服务曝光显影 化学发光法 常用 HRP 酶标系统的显色底物为 ECL 鲁米诺 (Luminol) 无毒害 灵敏度高 速度快 特异性好 节省抗体 线性宽 ; 可重新剥离检 测 化学显色法 常用酶标系统 HRP 的显色底物为 TMB 和 DAB 酶标系统 AP 的显色底物为 BCIP 何 NBT 方便 便宜 ; 具有一定毒性 灵敏度低 反应速度慢 ; 检测后的膜不可重新 剥离检测 13 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

14 碧云天 Western Blot 检测技术服务曝光显影试剂盒 BCIP/NBT 碱性磷酸酯酶显色试剂盒 (C3206) BeyoECL Plus( 超敏 ECL 化学发光试剂盒 )(P0018) BeyoECL Star( 特超敏 ECL 化学发光试剂盒 )(P0018A) BeyoECL Moon ( 极超敏 ECL 化学发光试剂盒 )(P0018F) 显影定影试剂盒 (P0019) (P0020) 14 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

15 碧云天 Western Blot 检测技术服务服务流程 细胞或组织蛋白提取 蛋白质检 定量 变性 SDS-PAGE 凝胶电泳 转膜 交付结果, 数据分析 ECL 化学发光检测 一抗 二抗孵育 封闭 15 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

16 碧云天 Western Blot 检测技术服务询价与订购 请您下载并填写碧云天 Western Blot 技术服务询价单, 发送至 我们的专业技术人员将在第一时间为您提 供准确报价 若有订购意向, 碧云天的技术服务人员会与您联系, 并签订 碧云天 Western Blot 检测服务协议书 16 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

17 碧云天 Western Blot 检测技术服务客户须知 客户需提供样品 : 新鲜或正确保存的组织 细胞或蛋白样品, 组织样品 : 每份样品约 250~500mg, 细胞样品 : 每份样品约 ~ 细胞数, 蛋白样品 : 每份样品约 μg, 浓度 2μg/μl; 碧云天建议客户提供目的蛋白阳性对照 ; 若客户提供一抗, 须为符合技术要求的浓缩或即用型一抗, 也可由碧云天代购进口原装抗体 ; 客户提供待检测目的蛋白的详细信息, 包括蛋白种属 大小 参考文献等 ; 运输要求 : 干冰或液氮包装寄送, 样本应避免各类污染和反复冻融 ; 客户应对所提供的材料及信息负责, 如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担 17 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

18 碧云天 Western Blot 检测技术服务服务承诺 碧云天承诺提供高分辨率的清晰图片, 准确 客观 可信的检测数据和分析结果 : 胶片及胶片显影图, 或化学发光成像图片, 实验所剩余的试剂 ; 蛋白定量结果 (Excel); 蛋白灰度值分析结果 (Excel); 实验报告 ( 包括详细实验步骤及 WB 结果相关的图表 ) 18 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

19 Thank You 碧云天网站 微信公众号 碧云天生物技术 /Beyotime Biotechnology 订购热线 : 或 技术咨询 技术服务 网址 : 19 Presentation Title Presenter Name Date Subject Business Use Only

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