3 案件受理 3.1 刑事案件的送检人员需提供公检法司, 以及保卫部门的盖有公章的鉴定委托书或公函, 并出示本人的工作证民事案件的送检人员需提供委托单位或个人的委托

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聚肯胡
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1 法庭科学 DNA 实验室检验规范 GA-T 范围本标准规定了法庭科学 DNA 实验室检验应遵守的基本要求本标准适用于所有从事法庭科学检验的 DNA 实验室 2 定义本标准采用下列定义 2.1 前期检验 prior examination DNA 检验前进行的预试验和确证试验 2.2 有机溶剂法 organic extraction of DNA 通过酚 - 氯仿混合物萃取 DNA 溶液中的蛋白质类有机物质, 而保留 DNA 于水相溶液中的提取方法 2.3 Chelex 法 Chelex extraction of DNA 利用 Chelex 能有效地去除非核酸有机物的性能而提取 DNA 的方法 2.4 硅珠法 silicon bead test 在硫氰酸胍条件下, 利用二氧化硅微粒特异捕获有机质溶液中的 DNA 分子的性能提取 DNA 的方法 2.5 CTAB 法 cetyltrimethylammonium bromide method 利用非离子型去污剂十六烷基三甲基溴化胺 (CTAB) 具有破坏植物细胞壁和细胞膜及硬组织, 并能与 DNA 形成复合物的能力, 通过抽提使 DNA 与蛋白质及多糖类物质有效分离而达到提取高纯度 DNA 的目的 2.6 聚合酶链反应 polymerase chain reaction-pcr 一个酶促的特定 DNA 片段扩增过程

3 Chelex 法 Chelex extraction of DNA 利用 Chelex 能有效地去除非核酸有机物的性能而提取 DNA 的方法 2.

2 3 案件受理 3.1 刑事案件的送检人员需提供公检法司, 以及保卫部门的盖有公章的鉴定委托书或公函, 并出示本人的工作证民事案件的送检人员需提供委托单位或个人的委托书, 并出示本人的身份证明 3.2 送检人员需填写送检登记表, 详细填写送检单位送检人姓名送检日期简要案情送检检材名称及特征有无作过鉴定原鉴定单位及原鉴定结论鉴定要求等 3.3 接案人员在了解案情和鉴定要求后, 逐一确认检材, 并对检材进行编号, 有条件的照相固定, 最后在送检登记表上签名 3.4 检验人员从接案人员手中受理检材时, 应详细了解案情和鉴定要求, 逐一核对检材后, 在送检登记表上签名 4 检材的提取和保存 4.1 适合 DNA 鉴定的检材包括血液 ( 痕 ) 精液 ( 斑 ) 唾液 ( 斑 ) 毛发组织骨骼等生物检材 4.2 提取检材前注意记录检材的大小形态等特征, 必要时照相录像固定提取检材时必须戴手套提取的检材必须分别包装, 在包装袋上注明检材名称来源数量采集日期等, 并有采集人及采集见证人的签名 4.3 对于活体检材, 一般用医用消毒纱布或中速滤纸采集指血或耳垂血 (2cm2 以上 ), 自然晾干可以用口腔拭子提取口腔粘膜细胞, 提取前须清水漱口, 检材自然晾干 ; 或取毛发 3 根 ~5 根以上检材均用纸袋包装后常温保存 4.4 对于血痕, 类似衣裤地毯床单上的血痕, 可以剪下一部分纸袋包装后常温保存 ; 类似衣柜墙壁地面刀斧上的血迹可以刮取, 或用生理盐水浸湿的纱线提取, 自然晾干后纸袋包装常温保存 4.5 涉嫌性侵害的, 应用棉签分别提取阴道外端中部和后穹窿部, 必要时还应注意会阴下腹口腔肛门等部位有无精液 ( 斑 ), 以及现场怀疑有精斑的其他检材, 如床单被褥卫生纸避孕套内裤衣物等所有检材应该分别提取标明记号自然晾干纸袋包装后常温保存 4.6 现场的可疑毛发用镊子提取, 用纸折叠后置纸袋内常温保存 4.7 含有唾液斑的检材如烟头果核香口胶等用镊子提取, 纸袋包装后常温保存 4.8 人流刮宫组织, 取 5g 以上确认为绒毛的组织 ; 引产胎儿, 取 5g 以上的组织 ; 羊水,

3 接案人员在了解案情和鉴定要求后, 逐一确认检材, 并对检材进行编号, 有条件的照相固定, 最后在送检登记表上签名 3.

3 取 2ml 以上的液体提取的检材洁净容器包装冰冻保存冷藏送检 4.9 新鲜尸体, 可用医用消毒纱布或中速滤纸提取血液 (3cm2 以上 ), 自然晾干, 纸袋包装后常温保存新鲜尸体也可取肌肉组织 (50g 以上 ); 腐败尸体, 尽量提取相对新鲜的组织, 包括指甲 (2 枚以上 ) 肋软骨 (5cm 以上 ) 或者其它软骨 (5g 以上 ) 深部肌肉组织 (50g 以上 ) 毛发 (10 根以上 ); 白骨化的尸体尽可能提取指甲长骨牙齿毛发以上检材洁净容器包装冰冻保存冷藏送检 4.10 根据案件情况, 注意提取对照样本 5 前期检验 5.1 血痕检验预试验联苯胺试验试剂 a) 联苯胺无水乙醇饱和液 ; b) 3% 过氧化氢溶液 ; c) 冰醋酸方法取滤纸轻轻擦拭斑迹, 分别加冰醋酸联苯胺无水乙醇饱和液 3% 过氧化氢溶液, 立即出现翠蓝色为阳性反应种属试验环状沉淀试验试剂 a) 抗人血红蛋白血清或抗人血清 ; b) 生理盐水方法

(5cm 以上 ) 或者其它软骨 (5g 以上 ) 深部肌肉组织 (50g 以上 ) 毛发 (10 根以上 ); 白骨化的尸体尽可能提取指甲长骨牙齿毛发以上检材洁净容器包装冰冻保存冷藏送检 4.

4 取少量血痕检材, 滴入适量生理盐水制成浸出液取试管加入抗人血红蛋白血清或抗人血清, 然后小心加入上述浸出液,60min 内两液界面间出现白色沉淀环者为阳性种属试验对流免疫电泳法试剂 a) 巴比妥缓冲液 ; b) 高电渗琼脂糖 ; c) 抗人血红蛋白血清或抗人血清 ; d) 双蒸馏水方法取高电渗琼脂糖和巴比妥缓冲液制成琼脂溶液, 取琼脂溶液平铺于载玻片上, 凝固后打两排成对的孔取少量血痕检材, 滴入适量双蒸馏水或巴比妥缓冲液制成浸出液, 加入上述琼脂板负极侧孔内, 在琼脂板正极侧孔内加入抗人血红蛋白血清或抗人血清, 电泳 30min~ 40min 电泳完毕后在黑色背景上方, 通过斜光照射, 观察两孔间形成的抗原 - 抗体复合物的白色沉淀线, 有白色沉淀线者为阳性种属试验金标试纸检验法试剂和方法以说明书为准 5.2 精斑检验预试验酸性磷酸酶试验试剂 a) 碳酸钙 b- 萘酯 ; b) 1- 氯化重氮蒽醌 ; c) 缓冲液 : 氯化钠冰醋酸醋酸钠方法取适量碳酸钙 b- 萘酯和 1- 氯化重氮蒽醌溶于缓冲液制成检测试剂, 取少量可疑斑迹置白瓷板凹内, 滴加上述试剂, 如检材确为精斑, 在 30s 内即可见橘红色反应

1 试剂 a) 巴比妥缓冲液 ; b) 高电渗琼脂糖 ; c) 抗人血红蛋白血清或抗人血清 ; d) 双蒸馏水 5.1.3.

5 5.2.2 确证试验精子检出法试剂 a) 1% 酸性复红溶液 ; b) 1% 美蓝溶液 ; c) 1% 盐酸 ; d) 生理盐水方法取少量可疑斑迹用适量生理盐水浸泡后, 涂于载玻片上, 干燥后分别用 1% 酸性复红溶液和 1% 美蓝溶液染色,1% 盐酸和清水洗涤, 干燥后镜检精子头部被染成红色, 而尾部被染成蓝色确证试验金标试纸检验法试剂和方法以说明书为准 5.3 唾液斑检验淀粉酶试验试剂 a) 0.01% 淀粉溶液 ; b) 碘 - 碘化钾溶液 ; 方法取少量可疑斑迹加适量 0.01% 淀粉溶液,37 温箱 30min, 加碘 - 碘化钾溶液, 呈淡黄色和无色时为阳性反应, 呈蓝色则为阴性 6 DNA 提取 6.1 有机溶剂法器材和试剂

3 确证试验金标试纸检验法试剂和方法以说明书为准 5.3 唾液斑检验 5.3.1 淀粉酶试验 5.3.1.1 试剂 a) 0.01% 淀粉溶液 ; b) 碘 - 碘化钾溶液 ; 5.2.

6 a) 高速离心机 ; b) 水浴或干浴 ; c) 移液器 d) 细胞溶解缓冲液 (CLB): 蔗糖,MgCl2,Tris-HCl,TritonX-100; e) 蛋白溶解缓冲液 (PLB):NaCl,EDTA-Na2; f) DNA 提取缓冲液 :Tris-HCl EDTA NaCl SDS DTT; g) TNE 缓冲液 :Tris-HCl EDTA NaCl; h) TE 缓冲液 :Tris-HCl EDTA; i) 5 精子提取液 :Tris-HCl EDTA NaCl SDS DTT; j) 纯化试剂 ; k) CentriconTM-100; l) SDS; m) DTT; n) 饱和酚和氯仿 ; o) 无水乙醇和 70% 乙醇溶液 ; p) NaCl 或 NaAc; q) 蛋白酶 K 方法血液 a) 取适量血液加入等体积细胞溶解缓冲液, 混匀至透明 ; b) 离心后去上清液, 沉淀中加入蛋白溶解缓冲液匀浆 ; c) 加入 SDS 和蛋白酶 K,37 消化 4h 以上 ;

DTT; j) 纯化试剂 ; k) CentriconTM-100; l) SDS; m) DTT; n) 饱和酚和氯仿 ; o) 无水乙醇和 70% 乙醇溶液 ; p) NaCl 或 NaAc; q) 蛋白酶 K 6.1.2

7 d) 加入等体积的酚酚和氯仿 (1:1 混合 ) 氯仿各提取一次后, 加 1/10 体积的 NaCl 或 NaAc 溶液和 2.5 倍体积的冷无水乙醇混匀, 得到团状的 DNA 沉淀 ; e) 离心去上清液, 沉淀中加入 70% 乙醇混匀 ; f) 离心去上清液, 晾干后加入 TE 缓冲液备用混合斑 a) 剪碎带有精子的检材, 加入适量 TNE 缓冲液, 37 保温 0.5h~1h, 加入 SDS 和蛋白酶 K, 37 保温 1h~2h 消化女性上皮细胞 ; b) 底部带孔离心管离心分离去除载体, 并去除上清液, 沉淀物用 TNE 洗涤离心数次 ; c) 沉淀物内加入 5 精子提取液蛋白酶 K, 置 37 消化 3h~4h; d) 以下同 d) e) f) 组织 a) 取少量组织 ( 脑肌肉等 ) 加入适量蛋白溶解缓冲液进行匀浆 ; b) 加入 SDS 和蛋白酶 K, 37 消化 4h~6h c) 以下同 d) e) f) 毛干 a) 将毛干剪成 3mm~5mm 长, 无水乙醇水无水乙醇各冲洗一次, 晾干后加入 DTT SDS 蛋白酶 K 蛋白溶解缓冲液, 37 消化至完全溶解 ; b) 加入等体积的酚酚氯仿 (1 1 混合 ) 氯仿各抽提一次, 加入 1/10 体积的 NaCl 或 NaAc 溶液和 2.5 倍无水乙醇, 混合后 -20 冷冻 1h 以上 ; c) 离心去上清液, 沉淀中加入 70% 乙醇混匀 ; d) 离心去上清液, 晾干后加入 TE 缓冲液备用骨和牙齿

5h~1h, 加入 SDS 和蛋白酶 K, 37 保温 1h~2h 消化女性上皮细胞 ; b) 底部带孔离心管离心分离去除载体, 并去除上清液, 沉淀物用 TNE 洗涤离心数次 ; c) 沉淀物内加入 5 精子提取液蛋白酶 K, 置 37 消化 3h~4h; d) 以下同 6.1.2.1d) e) f) 6.

8 a) 以手术刀刮净骨骼和牙齿表面垢物, 用温热蒸馏水冲洗两次, 紫外光照射 1h 再用锤子将牙齿砸成粉末和用电钻取出骨松质, 并将其用研磨器进一步磨碎 ; b) 取适量骨或牙齿粉末, 加入 DNA 提取缓冲液蛋白酶 K, 于 37 消化过夜 ; c) 酚和氯仿提取, 提取液置 CentriconTM -100 中离心浓缩后, 加 1/10 体积的 NaCl 和 2.5 倍无水乙醇 -20 冰箱过夜 ; d) 离心去上清液, 晾干加入 TE 缓冲液溶解后纯化, 纯化试剂和方法以说明书为准 6.2 Chelex 法器材和试剂 a) 高速离心机 ; b) 水浴或干浴 ; c) 移液器 ; d) Chelex-100 溶液 ; e) TNE 缓冲液 f) 蛋白酶 K 溶液 ; g) SDS; h) DTT 溶液 ; i) 双蒸馏水方法血液和血痕 a) 取少量血液或血痕加入适量双蒸馏水, 室温 30min; b) 离心后去上清液, 沉淀中加入 Chelex-100,56 消化 30min; c) 煮沸 8min, 离心后 4 冰箱内备用混合斑

5 倍无水乙醇 -20 冰箱过夜 ; d) 离心去上清液, 晾干加入 TE 缓冲液溶解后纯化, 纯化试剂和方法以说明书为准 6.2 Chelex 法 6.2.1 器材和试剂 a) 高速离心机 ; b) 水浴或干浴 ; c) 移液器 ; d) Chelex-100 溶液 ; e) TNE 缓冲液 f) 蛋白酶 K 溶液 ; g) SDS; h) DTT 溶液 ; i) 双蒸馏水 6.

9 a) 剪碎带有精子的检材, 加入适量 TNE 缓冲液, 37 保温 0.5h~1h, 加入 SDS 和蛋白酶 K, 37 保温 1h~2h 消化女性上皮细胞 ; b) 底部带孔离心管离心分离去除载体, 并去除上清液, 沉淀物用 TNE 离心洗涤数次 ; c) 沉淀物内加入 Chelex-100 溶液蛋白酶 K 和 DTT 溶液, 置 56 消化 1h~2h; d) 煮沸 8min, 离心后 4 冰箱内备用组织 a) 取少量组织 ( 脑肌肉等 ) 加入适量蛋白溶解缓冲液进行匀浆 ; b) 加入 Chelex-100 蛋白酶 K,56 消化 2h~3h; c) 煮沸 8min, 离心后 4 冰箱内备用唾液斑 a) 信封和邮票用灭菌的双蒸水润湿的棉签涂抹信封封口处和邮票背面, 烟蒂直接剪取外层纸, 剪碎后加入 Chelex-100 蛋白酶 K 溶液,56 消化 1.5h; b) 煮沸 8min, 离心后 4 冰箱内备用毛发 a) 毛根剪取毛发的毛根部分 5mm~10mm, 毛干则剪成 3mm~5mm 长, 无水乙醇水无水乙醇各冲洗一次, 晾干后加入 Chelex-100 蛋白酶 K DTT 溶液, 56 消化至完全溶解 ; b) 煮沸 8min, 离心后 4 冰箱内备用骨和牙齿 a) 研碎的牙髓或骨髓, 加入 Chelex-100 蛋白酶 K 溶液,56 消化过夜 ; b) 煮沸 8min, 离心后 4 冰箱内备用 6.3 硅珠法器材和试剂

沸 8min, 离心后 4 冰箱内备用 6.2.2.3 组织 a) 取少量组织 ( 脑肌肉等 ) 加入适量蛋白溶解缓冲液进行匀浆 ; b) 加入 Chelex-100 蛋白酶 K,56 消化 2h~3h; c) 煮沸 8min, 离心后 4 冰箱内备用 6.2.2.4 唾液斑 a) 信封和邮票用灭菌的双蒸水润湿的棉签涂抹信封封口处和邮票背面, 烟蒂直接剪取外层纸, 剪碎后加入 Chelex-100 蛋白酶 K 溶液,56 消化 1.

10 a) 高速离心机 ; b) 水浴或干浴 ; c) 移液器 ; d) 吸附液 : 硫氰酸胍 Tris-HCl EDTA Triton X-100; e) 漂洗液 : 硫氰酸胍 Tris-HCl; f) 硅珠悬液 : 二氧化硅 ; g) TES 缓冲液 :Tris NaCl EDTA; h) 十二烷基肌氨酸钠 ; i) SDS; j) DTT; k) 蛋白酶 K; l) 无水乙醇和 70% 乙醇 ; m) 双蒸馏水方法血液和血痕 a) 取适量血液和血痕, 加入 TES 缓冲液和十二烷基肌氨酸钠, 煮沸 5min 以上, 血痕离心去载体 ; b) 加入吸附液, 混和后加入硅珠悬液, 混和后室温 15min 左右 ; c) 离心去上清液, 加入漂洗液, 混和 ; d) 离心去上清液, 加入冷 70% 乙醇, 混和 ; e) 离心去上清液, 加入 TES,56 保温 10min 以上 ; f) 离心后 4 冰箱内备用混合斑

11 a) 剪碎带有精子的检材, 加入适量 TES 缓冲液 SDS 和蛋白酶 K 溶液,37 消化 1h~2h; b) 去载体, 离心去上清液,TES 缓冲液洗涤沉淀物数次 ; c) 加入 TES 缓冲液和十二烷基肌氨酸钠, 煮沸 5min 以上 ; d) 离心后上清液按 b) c) d) e) f) 操作进行毛发和指 ( 趾 ) 甲 a) 毛发或指 ( 趾 ) 甲分别用双蒸馏水和无水乙醇洗涤, 剪碎后加入 TES 缓冲液十二烷基肌氨酸钠和 DTT 溶液,56 消化至完全溶解 ; b) 离心后上清液按 b) c) d) e) f) 操作进行骨和牙齿 a) 取适量骨或牙齿粉末 ( 见有机溶剂提取法 ) 分别用 TES 缓冲液和 EDTA 洗涤, 加入 TES 缓冲液十二烷基肌氨酸钠和蛋白酶 K DTT 溶液,56 消化过夜 ; b) 离心后上清液按 b) c) d) e) f) 操作进行 6.4 CTAB 法器材和试剂 a) 高速离心机 ; b) 水浴或干浴 ; c) 移液器 ; d) CTAB 提取缓冲液 :CTAB( 十六烷基三甲基溴化胺 ) Tris-HCl EDTA NaCl 巯基乙醇 ; e) 氯仿 / 异戊醇 (24:1); f) 纯化试剂盒 ; g) 蛋白酶 K;

12 h) SDS; i) DTT; j) 双蒸馏水方法骨和牙齿 a) 取适量骨或牙齿粉末 ( 见有机溶剂提取法 ), 加入 CTAB 提取缓冲液, 室温过夜 ; b) 65 保温 1h, 离心后保留上清液, 加入等体积的氯仿 / 异戊醇, 离心后保留上清液 ; c) 上清液加入 MicroconTM -100 中, 离心浓缩 ; d) 浓缩液进行纯化, 纯化试剂和方法以说明书为准 6.5 PCR 缓冲液处理法器材和试剂 a) 高速离心机 ; b) 水浴或干浴 ; c) 移液器 ; d) 10 PCR 反应缓冲液 ; e) 蛋白酶 K; f) DTT; g) 无水乙醇 ; 方法毛干 a) 将毛干剪成 3mm~5mm 长, 用无水乙醇水无水乙醇各冲洗一次, 晾干 b) 加 10 PCR 反应缓冲液 DTT 蛋白酶 K 溶液, 混匀后 56 消化至完全溶解 ;

1 骨和牙齿 a) 取适量骨或牙齿粉末 ( 见有机溶剂提取法 ), 加入 CTAB 提取缓冲液, 室温过夜 ; b) 65 保温 1h, 离心后保留上清液, 加入等体积的氯仿 / 异戊醇, 离

13 c) 煮沸变性, 离心后 4 冰箱内备用 7 DNA 质和量的检测 7.1 紫外分光光度计法原理通过测定 DNA 溶液对光的吸收, 确定核酸的含量和核酸的纯度, 不能区别 DNA 和 RNA 的含量方法 a) 预置分光光度计零点 ; b) 充分混匀样品, 读取 260nm 和 280nm 的 OD 值 ; c) 计算 A260/A280 比率, 比率 >1.6 为得到较纯的 DNA; d) 计算 DNA 浓度 : 单链 DNA: 1 OD = 40μg/ml; 双链 DNA: 1 OD = 50μg/ml; DNA 浓度 (μg/ml) = 稀释倍数 A μg/ml 1000μg 7.2 定量胶检测法原理荧光染料溴乙锭可嵌入 DNA 分子的碱基平面之间, 在紫外线照射下发出荧光, 其光强度与 DNA 含量成正比比较同一凝胶中待测 DNA 样品与系列标准 DNA 的荧光强度, 确定 DNA 含量试剂 a) 10 载样缓冲液 : 溴酚篮二甲基晴篮聚蔗糖 ; b) 50 TAE 缓冲液 :Tris 乙酸钠 EDTA; c) 溴乙锭 ;

14 d) DNA 标准液, 根据具体需要选用方法 a) 配制琼脂糖凝胶 ; b) 电泳 ; c) 染色 ; d) 紫外灯下观测 7.3 人类 DNA 定量试剂盒试剂和方法以说明书为准 7.4 定量 PCR 仪试剂和方法以说明书为准 8 PCR 反应 8.1 基因座建议在以下范围内选择 : D1S80 D2S1338 D3S1358 D5S818 D7S820 D8S1179 D13S317 D16S539 D18S51 D19S433 D21S11 CSF1PO TPOX TH01 vwa FGA Penta E Penta D F13A01 FESFPS Amelogenin 8.2 试剂 a) 建议选用国际通用的试剂盒 ; b) 自行开发的试剂体系须经相关专家委员会认可后方可使用于日常检案 8.3 仪器 PCR 扩增仪 8.4 扩增反应体系及循环参数以各说明书为准

1 基因座建议在以下范围内选择 : D1S80 D2S1338 D3S1358 D5S818 D7S820 D8S1179 D13S317 D16S539 D18S51 D19S433 D21S11 CSF1PO TPOX TH01

15 9 反应产物的检测 9.1 银染检测器材和试剂 a) 电泳仪器及制备凝胶板套具 ; b) 移液器 ; c) 尿素 ; d) 40% Acr:bis (19:1); e) TEMED; f) 10 TBE 缓冲液 ; g) 10% 过硫酸铵溶液 ; h) 硅化剂 : 二甲基硅烷氯仿 ; i) 粘胶剂 :bind silane 乙酸乙醇 j) 固定液和终止液 :10% 乙酸 ; k) 银染溶液 : 硝酸银甲醛 ; l) 显色液 : 无水碳酸钠甲醛硫代硫酸钠方法制胶 a) 可使用 4% 或 6% 聚丙烯酰胺凝胶 ( 材料和方法以说明书为准 ); b) 灌胶, 聚合 1h 预电泳预电泳 30min 扩增产物电泳分离

1 器材和试剂 a) 电泳仪器及制备凝胶板套具 ; b) 移液器 ; c) 尿素 ; d) 40% Acr:bis (19:1); e) TEMED; f) 10 TBE 缓冲液 ;

16 扩增产物与载样缓冲液混匀,95 变性, 冰浴中迅速降温后加样, 同时根据电泳样品数加样适量的 Ladder, 电泳 1h~1.5h 银染检测 a) 凝胶于固定液中固定 20 min 再用去离子水洗涤 3 次, 每次 2 min; b) 凝胶于银染溶液中染色 30 min, 去离子水冲洗 10s; c) 凝胶于显色液中显色, 条带清晰后, 用 10% 乙酸溶液停显, 干燥分型 a) 根据同时电泳的 Ladder 确定样品的 DNA 等位基因型 ; b) 电泳结果用照相或扫描仪固定 9.2 荧光检测使用全自动荧光分析仪进行检测, 器材试剂和方法以各说明书为准 10 人类线粒体 DNA 测序 10.1 器材和试剂 a) 测序仪及配套试剂 ; b) 扩增仪 ; c) 移液器 ; d) PCR 试剂 : 引物 (D-Loop 高变区 1 或高变区 2)L1 H1 L2 H2(L2 H2 的碱基序列范围比 L1 H1 小, 并包含在 L1 H1 的范围内 ),dntp,taq 酶,PCR 缓冲液 ; e) PCR 产物纯化试剂盒 ; f) 测序试剂盒 ; 10.2 方法毛干和骨质

2 荧光检测使用全自动荧光分析仪进行检测, 器材试剂和方法以各说明书为准 10 人类线粒体 DNA 测序 10.

17 样本 DNA 的扩增 Nested-PCR 法 a) 第一步扩增 :25ml 体系, 取适量模板 DNA, 加入 dntp 引物 L1 和 H1 PCR 缓冲液 Taq 酶, 离心,PCR 反应 ( 反应参数根据具体引物的长度设定 ); b) 第二步扩增 :50ml 体系, 取少量第一步扩增产物, 加入 dntp 引物 L2 和 H2 PCR 缓冲液 Taq 酶, 离心,PCR 反应 ( 反应参数根据具体引物的长度设定 ) 扩增产物的纯化材料和方法以纯化试剂盒的说明书为准测序反应材料和方法以测序试剂盒的说明书为准荧光测序使用全自动荧光分析仪进行测序, 器材试剂和方法以各说明书为准结果分析运用分析软件进行自动分析, 以 Anderson(1981) 报道的线粒体 DNA 序列为标准序列, 测得样本的碱基序列与其比对, 得到该样本线粒体 DNA 高变区段碱基序列的特征, 结合电泳图谱复核结果血组织等其他检材操作同 ~ 遗传学分析线粒体 DNA D-loop 区碱基序列为单倍型基因, 进行遗传学数量分析时应依照单倍型基因频率统计进行计算计算公式 : P=ΣX2, h=(1-σx2)n/(n-1) 注 : X 线粒体 DNA 基因型在群体中的频率 ; P 群体中任意两个体线粒体 DNA 多态区基因型相同的可能性 ; n 检测的样品数量 ;

2.1.4 荧光测序使用全自动荧光分析仪进行测序, 器材试剂和方法以各说明书为准 10.2.1.5 结果分析运用分析软件进行自动分析, 以 Anderson(1981) 报道的线粒体 DNA 序列为标准序列, 测得样本的碱基序列与其比对, 得到该样本线粒体 DNA 高变区段碱基序列的特征, 结合电泳图谱复核结果 10.

18 h 群体在此位点的遗传多态性 11 防污染措施 11.1 检验人员进入实验室必须穿着实验室专用工作服和工作鞋 ; 检验操作中应戴一次性手套, 一旦手套被污染应马上更换 ; 根据检验需要戴实验室专用帽子和防护眼镜 11.2 检验区域检验开始前应用 75% 乙醇将工作台擦洗干净, 检验结束后用 10%bleach 再擦洗所有的工作台面, 每天定时对实验室进行一次紫外灯照射消毒 ; 实验室地板应定期清洗,PCR 区域必须用专用工具清洗 11.3 检验器材各区域应配置专用的移液器试剂架等, 不能拿到其他区域使用 ; 移液器使用前应用紫外灯照射, 每四个月用 10%bleach 和纯水清洗后, 再用紫外灯照射 11.4 检验过程开启试管前快速离心一下避免样品喷溅 ; 移液吸头必须一次性使用 ; 设置阳性对照和阴性对照 12 文档资料 12.1 案件登记类包括接案记录检材的包装和检材情况的记录检材保管或返回记录检验中交接记录鉴定文书发放记录等 ; 12.2 检验记录类

3 检验器材 11.3.1 各区域应配置专用的移液器试剂架等, 不能拿到其他区域使用 ; 11.3.2 移液器使用前应用紫外灯照射, 每四个月用 10%bleach 和纯水清洗后, 再用紫外灯照射 11.4 检验过程 11.4.1 开启试管前快速离心一下避免样品喷溅 ; 11.

19 包括 DNA 提取记录 PCR 反应记录电泳检测记录观察到的结果记录等 ; 12.3 鉴定文书第一部分应包括送检时间送检单位及委托单位经办人案发时间案发地点案件性质送检要求送检材料 ; 第二部分应包括检验过程与方法检验结果分析讨论偶合率等指数结论鉴定人签名复核人签名鉴定发出日期 12.4 相关图谱类包括仪器分析图表照片自显影图干燥胶等 13 检验周期检验周期依不同检材而定, 新鲜检材检验时间一般为 2 至 7 个工作日 ; 陈旧检材的检验时间一般为 5 至 14 个工作日 ; 疑难检材的检验时间相应延长, 但最长不超过 30 个工作日本标准由全国刑事技术标准化技术委员会 (CSBTS/TC179) 提出并归口本标准主要起草单位 : 公安部物证鉴定中心本标准参加起草单位 : 上海市公安局辽宁省公安厅北京市公安局广州市公安局黑龙江省公安厅本标准起草人 : 叶健陈松周怀谷刘冰

验时间相应延长, 但最长不超过 30 个工作日本标准由全国刑事技术标准化技术委员会 (CSBTS/TC179) 提出并归口本标准主要起草单位 : 公安部物证鉴定中心本标准参加起草单位 : 上海市公安局辽宁

1-1达安基因招股书_定稿_.doc

1-1达安基因招股书_定稿_.doc 2,200 A [2004]119 2004 7 23 A 2,200 7.30 / 2004 7 22 1400-1800 2004 7 20 1 http://www.smers.com.cn http://www.stock2000.com.cn 2 2004 7 20 DAANGENECO. LTD.OFSUNYAT-SENUNIVERSITY 12 13 15 15 16 16 19

3 案 件 受 理 3.1 刑 事 案 件 的 送 检 人 员 需 提 供 公 检 法 司, 以 及 保 卫 部 门 的 盖 有 公 章 的 鉴 定 委 托 书 或 公 函, 并 出 示 本 人 的 工 作 证 民 事 案 件 的 送 检 人 员 需 提 供 委 托 单 位 或 个 人 的 委 托

3 案件受理 3.1 刑事案件的送检人员需提供公检法司, 以及保卫部门的盖有公章的鉴定委托书或公函, 并出示本人的工作证民事案件的送检人员需提供委托单位或个人的委托