复旦学报 医学版 液相色谱 6 质谱联用法测定罗库溴铵血药浓度 蒋果廷 王婷婷 孙 申 郁韵秋 复旦大学药学院药物分析教研室 上海 复旦大学附属妇产科医院麻醉科 上海 摘要 目的 建立液相色谱 & 质谱联用 7 $ '#"!$ &# ' '! # ' & 方法测定血浆中罗库溴铵浓度 并对静脉注射 '

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1 复旦学报 医学版 液相色谱 6 质谱联用法测定罗库溴铵血药浓度 蒋果廷 王婷婷 孙 申 郁韵秋 复旦大学药学院药物分析教研室 上海 复旦大学附属妇产科医院麻醉科 上海 摘要 目的 建立液相色谱 & 质谱联用 7$'#"!$&#' '!#'& 方法测定血浆中罗库溴铵浓度 并对静脉注射 '"-" 该药物的患者 $ 内的血药浓度进行测定 方法 血浆中加入内标盐酸维拉帕米后用乙腈沉淀蛋白法进行处理 离心后取上清进样 选用 /## + ''''' 色谱柱分离 流动相为乙腈 & 甲酸铵 ''! 流速 '' 柱后三通分流 '' 流量进入质谱 质谱采用电喷雾 #!3#%1 接口 选用正离子模式 检测方式为选择性离子监测 #'#1 模式 结果 罗库溴铵在 "' 范围内呈良好的线性关系 精密度及稳定性均符合生物样本测定要求 结论 & 是一种简单 快速 准确测定罗库溴铵血药浓度的方法 并成功应用于静注 $ 内临床样本的测定 关键词 罗库溴铵 液相色谱 & 质谱联用 静脉注射 选择性离子监测 中图分类号 * 文献标识码 / & A####! #!6!# 1/.( (&#" /.( +"&#".$ 9 9&7!" #)%!"'&&%#)%!'""(&'%"%%"!" #"&%&'1&&"'"',&""(&'%"%%" %&'+#$7$'#"!$&#' '!#' &'#$ ##'#$##*' '! '+$ '#$ 2!!##$! '!## 2$#$"# # 2#$ $ /# #8!'$ # # 1! ' '! 2!!## ##/##""#$!#2 #-#+$!#2 # /## + '' ''''#$'!$2 ##&''' '#''!##''2#$#$&2##$' #!##$2##$22$$ #$'!#'##''/ #!3#%12!# #$#+$ '! 2##!#' 2#$ #'#1# /"#2 ##$" "'#$###$!'# #$'#$'##$##"7 " '! # & '#$ '!!#'#$#$#!!# '"#$##*' '! '# '"#$ '! 2#$$!"#$%&'7 $'

2 复旦学报 医学版 年 月 " *' '7$'#"!$&#' ' # # #'#!#' '#$ 罗库溴铵 *' ' 是一种甾类非去极化肌肉松弛剂 为季铵盐结构 于 年首 次被报道 验证其安全性和有效性后 于 年在美国及英国上市 并于 年以 爱可松为商品名进入中国市场 相对于其他肌松药 罗库溴铵具有起效快 代谢产物少的优点 其主要经过肝脏代 谢 胆道排除 经肾排泄只占次要地位 临床用于开腹手术及腹腔镜手术麻醉 文献中测定罗库溴铵血药浓度主要采用液质联 用的方法 前处理采用二氯甲烷提取法或固相 微萃取等 过程较为复杂费时 给快速高通量检测带来困难 因此需要一种更为简便可靠的测定方法来实现临床监测 考虑到相关手术在 $ 之内即可完成 手术过程实时监测 无需非常低的定量限 本课题预处理采用一步蛋白沉淀方法 简化了实验流程 并按照 版 " 中国药典 # 中 " 生物样品定量分析方法验证指导原则 # 验证了该分析方法 最终成功应用于临床样本 复旦大学附属妇产科医院麻醉科提供 的测定 本文建立了一种准确 可靠 方便的 & 法测定罗库溴铵的血药浓度 为治疗药物临床检测提供了依据 材料和方法 仪器 型高效液相色谱仪 美国安捷伦公司 包括 (5 型 :#,'! 四元泵 (5 型 / 自动进样器 /+ 型色谱柱恒温箱和!/50$'##%# 工作站 型四级杆质谱检测器 +(&( 型离心机 上海安亭科学仪器 +(5 型电子天平 瑞士 # + 公司 %*&/ 型电子天平 日本 /0 公司 试剂 罗库溴铵 浙江仙琚制药股份有限公司 盐酸维拉帕米 上海阿拉丁生化科技股份有限公司 甲醇, 级 国药集团化学试剂有限公司 乙腈, 级 美国 5"& *"# 公司 甲酸, 级 美国 0-' +$" 公司 甲酸铵 美国 /7 $'!! 公司 储备液的配制 (5 天平 万分之一天平 精密称取罗库溴铵 " 乙腈溶解并于 ' 容量瓶中定容 配成 "' 储备液 %*& / 天平 十万分之一天平 精密称取内标盐酸维拉帕米 " 甲醇溶解并于 ' 容量瓶中定容 配成 "' 储备液 均于 6 条件下储存 临用时稀释至所需浓度 工作液的配制 取内标储备液室温放置 用乙腈稀释到 "' 取罗库溴铵储备液室温放置 用乙腈逐级稀释得一系列标准溶液 浓度分别为 及 "' 再与浓度为 "' 的内标溶液等体积混合 得到浓度为 及 "' 的工作液 含内标 "' 供标准血样配制用 标准血样的配制 取人空白血浆 与上述方法配制的工作液 混合 涡旋 ' 制得标准曲线样品 浓度为 及 "' 含内标 "' 质控样品浓度为 及 "' 含内标 "' 临床样本加内标 向 临床样本中加入 浓度为 "' 的内标溶液 涡旋 ' 制得含内标 "' 的临床血样 血浆样品前处理 向 含内标血样中加入 乙腈 涡旋 ' 静置 ' 之后采用 " 转速离心 ' 取上清进样 液相色谱条件 色谱柱 /## + '' ''' 预柱,$')'' '' 流动相 乙腈 甲酸铵 ''! 流速 '' 三通柱后分流 '' 进质谱 柱温 6 进样体积 洗针溶液 乙腈水溶液 质谱条件 离子源 电喷雾接口 #! 3#%1 正离子模式 干燥气流速 ' ' 干燥气温度 6 雾化器电压! 质谱检测器 选择性离子监测 # '# 1 模式 通道 检测药物!7+ 通道 检测内标!7+

3 蒋果廷 等 液相色谱 & 质谱联用法测定罗库溴铵血药浓度 结 果 专属性 图 / 为空白血样的 1 图 图 5 为空白血样加罗库溴铵及内标的 1 图 图 为患者 静注 '"-" 的罗库溴铵 ' 后采集血样的 1 图 结果显示罗库溴铵及内标在实验条件下均有较好的保留与分离 罗库溴铵和内标的测定处均未见明显干扰 线性范围和灵敏度 取罗库溴铵浓度为 及 "' 的标准血样并按照 血浆样品前处理进行操作并进样分析 得到罗库溴铵以及内标的峰面积 以罗库溴铵的理论浓度为自变量 罗库溴铵与内标物的峰面积比值为因变量 ' 并且以 为权重 用加权最小二乘法作线性回归 同时计算校正标样回算浓度 表 处于标示值的 符合指导原则的要求 显示本方法在 "' 的浓度范围内线性关系良好 在. 的条件下 可对浓度为 "' 的罗库溴铵血样进行含量测定 /5-! '5, '!- 2#$*' ' "'1 "', '## '# # #!##!-2#$1 "'.' ## "' ## "' 图,6) 法测定人血中罗库溴铵的典型色谱图 *, ##6) 表, 人血浆中罗库溴铵测定的线性关系,###! / ## "' / ## "' / '++ '++ '++ 精密度与准确度 选取高 "' 中 "' 低 "' 以及定量限 "' 共 个浓度 另行配制 在同一天内对每一考察浓度平行配制 个样品进行分析 连续测定 天 每日绘制

4 复旦学报 医学版 年 月 随行标准曲线 进行日内和日间精密度 准确度的考察 精密度以相对标准偏差 # #& #*0 进行衡量 准确度以方法回收率来衡量 结果显示 表 本方法的日间和日内相对标准偏差 *0 方法回收率在 仅有一个位于定量下限 "' 的样品方法回收率 也在标准范围 定量下线为标示值 之内 符合指导原则的要求 基质效应和提取回收率 选择 "' 个浓度进行基质效应的考察 由空白基质提取后加入分析物和内标测得基质存在下峰面积 ( 组 由分析物和内标的纯溶液测得不含基质的相应峰面积 ( 组 由峰面积之比得到待测物及内标的基质因子 并由此计算经内标归一化的基质因子 结果如表 所示 个浓度经内标归一化的基质因子的变异系数均小于 符合指导原则的要求 表 - 分析方法的精密度与准确度 -# +'!# #&, ## "' *0 * *0 * *0 * *0 * ## "' /* 表 + 各浓度样品的基质效应 +$! /1 ("! ("! # ("! ("! #.'3# # 空白血样加入分析物和内标 预处理后进样得相应峰面积 ( 组 由 ( 组与 ( 组峰面积之比可求得提取回收率 个浓度及内标的提取回收率分别为 和 符合要求 稳定性 样品冻融循环稳定性 配制 "' 以及 "' 两个浓度的模拟血样 置于 6 冰箱中 冻融 次后进行测定 结果为标示浓度的 短期放置稳定性 配制 "' 以及 "' 两个浓度的模拟血样 样品分别于 6 及 6 放置 $ 后处理进样 结果为标示浓度的 / 放置稳定性实验 样品处理后进样并于 $ 后重复进样测定 结果为标示浓度的 以上测定结果与标示浓度相比较偏差均在 之内 符合指导原则的要求 样品测定 按照所建立的方法 对两组临床样本进行测定 图 考察静注 '"-" 的罗库溴铵后 $ 内的血药浓度变化 取血时间分别为注射后 和 ' 图 - 临床样本药时曲线 *-6!

5 蒋果廷 等 液相色谱 & 质谱联用法测定罗库溴铵血药浓度 讨 论 色谱柱选择 罗库溴铵是一类季铵盐 在一般的反相色谱条件下不易保留 实验中分别采用 '' '' ' 845,,$'''''. ''''' 11 ''''' 和!/## + ''''' 等柱子进行了尝试 结果显示! 号柱对罗库溴铵和内标均有较好保留 故本 实验选择! 号柱进行分离 色谱条件优化 以乙腈 & 水为流动相 分别对有机相的比例和水相! 进行了考察 综合考虑保留时间和峰形后 选择乙腈 水相为 水相! 为 '' 甲酸铵 用甲酸调节! 此外 将柱温由 6 升至 6 时 峰形明显改善 质谱条件选择 确定色谱条件后 进样质谱扫描 扫描范围 得总离子流图 根据罗库溴铵以及内标相对应的保留时间质荷比情况最终选择!7+ 检测罗库溴铵以及!7 检测内标盐酸维拉帕米 图 图 + 罗库溴铵和盐酸维拉帕米 内标 的结构以及质荷比 *+)## 66 ##9!) 本实验根据相关指导原则 建立了 & 联用的方法来测定静注 $ 内罗库溴铵血药浓度的方法 并成功应用于临床样品的测定 为药物临床监测及相关研究提供了依据 参 考 文 献 1* /+.(*%%. %# 2 ' -" "# " #$#3#!" #&'!!# $0"&% %.&5*/09,/**!$'& -# ' ' " )%!-" /+%*+. 0,.+%*!$'& -# #$2'-"" ")%!-" /*%.%./5/ /.%, :### #'# ' $'! '7$'#"!$&#!3# '!#'#0%! 0% */%.8/*%++1 (*1(%1*/ ( / ' $'!' 7 $'#"!$&#''!#'#2#$!!#!$'-# 0)%! $! ", (*9.15 5(%* 0!'#,% '#$ '## '!!!# ' '#)'!'0 )%!$!" 收稿日期 编辑 王蔚

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