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浓茂柯
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1 QuECHERS-HPLC-MS 测定人血浆中 3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物含量王旭 1, 刘国婷 2, 宋金芝院药学部, 天津 ) 3 (1. 天津医科大学第二医院药学部, 天津 ;2. 天津市北辰医院药学部, 天津 ;3. 天津西青医摘要 : 目的建立测定人血浆中 3 种大环内酯类抗菌药物 ( 红霉素地红霉素螺旋霉素 Ⅰ) 及其代谢物 ( 脱水红霉素红霉素 A 烯醇醚红霉胺新螺旋霉素 Ⅰ) 的分析方法方法用乙腈溶液提取,QuECHERS 方法净化, 采用无水硫酸镁和无水乙酸钠沉淀蛋白和盐析分层, 无水硫酸镁和石墨碳烯净化, 上清液氮气吹干后甲醇复溶待测, 用 Eclipse Plus C 18 色谱柱分离, 电喷雾正离子模式, 多反应离子监测扫描, 内标法定量结果 3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物浓度在 4~ 900 ng ml 1 内的线性关系良好 (r>0.999), 定量限 <10 ng ml 1 ; 在 3 个添加水平下,3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物的提取回收率可达 81.45%~96.82%, 日内精密度 <5.00%, 日间精密度 <10.00% 结论 QuECHERS- 液相色谱串联三重四级杆质谱测定血浆中 3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物的分析方法简单, 快速, 灵敏, 特异性强, 适用于血浆中大环内酯类抗菌药物及其代谢物的测定关键词 : 大环内酯类抗菌药物 ; 代谢物 ; 红霉素 ; 地红霉素 ; 螺旋霉素 Ⅰ; 高效液相色谱串联质谱 ; 血浆中图分类号 :R 文献标志码 :B 文章编号 : (2017) DOI: /j.cnki.issn 引用本文 : 王旭, 刘国婷, 宋金芝. QuECHERS-HPLC-MS 测定人血浆中 3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物含量 [J]. 中国现代应用药学, 2017, 34(9): Determination of 3 Macrolide Antibiotics and Their Metabolites in Plasma Using QuECHERS-HPLC-MS WANG Xu 1, LIU Guoting 2, SONG Jinzhi 3 (1.Pharmaceutical Department, The Second Hospital of Tianjin Medical University, Tianjin , China; 2.Pharmaceutical Department, Tianjin Beichen Hospital, Tianjin , China; 3. Pharmaceutical Department, Tianjin Xiqing Hospital, Tianjin , China) ABSTRACT: OBJECTIVE To establish a determination method of 3 macrolide antibiotics (erythromycin A, dirithromycin, spiramycin Ⅰ ), and it s metabolite (anhydroerythromycin A, erythromycin A ene alcohol ether, erythromycylamine, neospiramycin Ⅰ) in plasma using QuECHERS followed by HPLC-MS. METHODS The macrolide antibiotics in samples were extracted with acetonitrile. The plasma was directly purified by QuECHERS pretreatment method. MgSO 4 and sodium acetate anhydrous were added into plasma sample for precipitating protein and salting out stratification. Then, MgSO 4 and PestiCarb were used for dehydration and removing impurity. The upper layer was evaporated to dryness under a stream of nitrogen and the residue obtained was redissolved in methanol. Three macrolide antibiotics were separated by Eclipse Plus C 18 chromatographic column. Electro spray ionization was used to analyze these macrolide antibiotics by using positive ion mode. Multiple reaction monitoring was used to monitor ions. Internal standard method was used to quantitative calculation. RESULTS Three macrolide antibiotics showed good linear relationship in the range of ng ml 1 (r>0.999). The quantitation limits was <10 ng ml 1. At three levels, the average extract recoveries were 81.45% 96.82%, and the intra-day and inter-day precisions were respectively lower than 5.00% and 10.00%, respectively. CONCLUSION The analytical method of 3 macrolide antibiotics in plasma using QuEChERS and HPLC-MS is simple, rapid, sensitive and specific. The analytical method is suitable to quantitate macrolide antibiotics and their metabolites in plasma. KEY WORDS: macrolide antibiotics; metabolites; erythromycin A; dirithromycin; spiramycin Ⅰ; HPLC-MS; plasma 大环内酯类是一类具有 14~16 元大环内酯结构的抗菌类药物, 主要有红霉素螺旋霉素地红霉素等 [1-2] 其抗菌谱主要是革兰阳性菌厌氧菌和部分革兰阴性菌及非典型病原体等, 临床上主要用于治疗泌尿生殖系统等感染性疾病, 支气管肺炎等呼吸系统疾病和胃肠动力障碍等消化系统疾病 [3-5] 由于该类药物口服吸收好, 体内分布广, 组织浓度高, 半衰期长, 不良反应少 [5-6], 因而获得了广泛的临床应用有研究报道红霉素与螺旋霉素共同治疗眼疾患者的金黄色葡萄球菌感作者简介 : 王旭, 女, 硕士, 药师 Tel: (022) wangxu_sjz@163.com 中国现代应用药学 2017 年 9 月第 34 卷第 9 期 Chin J Mod Appl Pharm, 2017 September, Vol.34 No

2 染, 两者具有协同作用 [7], 而地红霉素作为新一代大环内酯的长效药, 常用于治疗急性化脓性扁桃体炎 [8] 当患者同时服用红霉素螺旋霉素和地红霉素时, 三者药动学特点尚不明确, 不利于临床应用为了进一步指导临床应用, 需要监测其血药浓度目前测定大环内酯类抗菌药物的分析方法主要是应用 HPLC 和 HPLC-MS 法 [9-14], 而大环内酯类抗菌药物的代谢物在血浆中的含量较低, 需要高灵敏度的仪器才能检测, 因此需要应用 HPLC-MS 测定微量或痕量的大环内酯类抗菌药物及其代谢物目前, 红霉素螺旋霉素和地红霉素 3 种药物在临床上应用较广泛, 他们的代谢物保持了原药相似的结构, 具有一定的药理活性, 其代谢物不容忽视 [15-17] 大多数文献报道了测定大环内酯类抗菌药物原药的分析方法, 但尚未有相关文献报道同时测定 3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物含量的分析方法为了更加全面检测血浆中大环内酯类抗菌药物的代谢情况并反映临床疗效, 原药与代谢物含量有必要同时监测 Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, and Safe extraction [18] (QuECHERS) 样品前处理由 Anatassiades 等于 2003 年提出, 采用 MgSO 4 盐析分层和分散固相萃取净化样品, 最初主要用于农产品里农药残留分析中, 随后应用于食品领域净化奶制品中药物残留分析, 该法具有简单快速经济等优势而逐渐被应用于样品净化目前应用 QuECHERS 方法处理血浆样品的大环内酯类抗菌药物的研究尚未有报道, 因此本研究建立 HPLC-MS 测定人血浆中 3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物含量分析方法, 为药动学研究和临床用药进一步提供依据 1 仪器与试剂 Agilent 1260 型高效液相色谱系统, 包括二元泵, 在线脱气, 自动进样器 ( 美国 Agilent 公司 ); Applied Biosystems Qtrap 5500 三重四级杆质谱仪 ( 加拿大 AB 公司 );BS224S 型电子天平 ( 北京赛多利斯仪器系统有限公司 );KQ-500DE 型超声仪 ( 昆山市超声仪有限公司 );TG16-WS 离心机 ( 长沙市平凡仪器有限公司 );N-EVAP116 型氮气浓缩仪 ( 美国 Organomation Associates 公司 );Agilent Eclipse Plus-C 18 色谱柱 (2.1 mm 150 mm,3.5 μm, 美国 Agilent 公司 );0.22 µm 尼龙滤膜 ( 天津津腾有限公司 ) 红霉素对照品 ( 德国 Dr. Ehrenstorfer GmbH, 批号 :40527, 纯度 :99.5%); 螺旋霉素对照品 ( 德国 Dr. Ehrenstorfer GmbH, 批号 :31022, 纯度 : 99.0%); 地红霉素对照品 ( 中国食品药品检定所, 批号 :PX64-MONM, 纯度 :99.6%); 新螺旋霉素对照品 ( 批号 :8-QFY-26-1, 纯度 >99%) 红霉胺对照品 ( 批号 :2-OMK-3-1, 纯度 >99%) 脱水红霉素 A 对照品 ( 批号 :1-ALB-97-1, 纯度 >99%) 红霉素 A 烯醇醚对照品 ( 批号 :3-YEN-17-2, 纯度 >99%) 均购自加拿大 TRC 公司 ; 罗红霉素 ( 德国 Dr. Ehrenstorfer 公司, 批号 :30824); 甲醇和乙腈 ( 色谱纯, 美国 Thermo Fisher 公司 ); 甲酸甲酸铵 ( 色谱纯, 德国 Sigma-Aldrich 公司 ); 乙二胺 -N- 丙基硅烷 (Primary-secondary amine,psa, 德国 Sigma-Aldrich 公司 );C 18 固体粉末 ( 德国 CNW Technologies GmbH 公司 ); 石墨碳烯 (PestiCarb, PC); 固体粉末 ( 美国 Agilent 公司 ) 取天津医科大学第二医院健康体检者血液, 加入抗凝剂肝素, 抗凝剂血液 =1 9, 混匀, 离心 ( 离心半径为 6 cm, 离心 5 min, 转速为 r min 1 ) 后所得的上清液即为血浆 2 方法与结果 2.1 液相色谱串联质谱条件色谱条件色谱柱 :Agilent Eclipse Plus-C 18 (2.1 mm 150 mm,3.5 μm); 柱温 : 室温 ; 进样量 :5 μl; 流速 :0.5 μl min 1 ; 流动相 :0.1% 甲酸水溶液 (A)- 乙腈 (B) 梯度洗脱, 洗脱程序 : 0~1 min,90% 85% A;1~15 min,85% 55% A; 15~16 min,55% 90% A;16~20 min,90% A 质谱条件离子源类型 : 点喷雾电离源 ESI(+); 电喷雾电压 :5 000 V; 离子源温度 :500 ; 雾化气压力 :50 kpa; 辅助气压力 :55 kpa; 气帘气压力 :32 kpa; 碰撞室入口电压 :10 V; 碰撞室出口电压 :7 V; 碰撞电压去簇电压定性离子对定量离子对化合物分子量见表贮备液对照品溶液的制备分别准确称取大环内酯类抗菌药物 ( 红霉素地红霉素螺旋霉素 Ⅰ) 及其代谢物 ( 脱水红霉素红霉素 A 烯醇醚红霉胺和新螺旋霉素 Ⅰ)(2.5± 0.2) mg, 分别置于 25 ml 量瓶中, 用甲醇稀释并定容, 得 0.1 mg ml 1 的大环内酯类抗菌药物及其代谢物的贮备液, 另外配置内标罗红霉素标准贮 1290 Chin J Mod Appl Pharm, 2017 September, Vol.34 No.9 中国现代应用药学 2017 年 9 月第 34 卷第 9 期

3 表 1 3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物的质谱条件 Tab. 1 The mass spetrum conditions of three macrolide antibiotics and their metabolites 序号分析物分子量离子化形式母离子 m/z 子离子 m/z 去簇电压 DP/V 碰撞电压 CE/eV 1 红霉素 A [M+H] 地红霉素 [M+H] 螺旋霉素 Ⅰ [M+H] 脱水红霉素 A [M+H] 红霉素 A 烯醇醚 [M+H] 红霉胺 [M+H] 新螺旋霉素 Ⅰ [M+H] * * * * * * * 注 :* 定量离子 Note: * quantitative ion. 备液 (2.5±0.2)mg 置于 25 ml 量瓶中, 得 0.1 mg ml 1 内标贮备液, 均置于 20 冰箱中避光冷冻保存待用 2.3 混合对照品工作液的制备分别精密移取 500 µl 红霉素 A 700 µl 地红霉素 600 µl 螺旋霉素 Ⅰ 500 µl 脱水红霉素 A 400 µl 红霉素 A 烯醇醚 700 µl 红霉胺 900 µl 新螺旋霉素 Ⅰ 的 2.2 项下贮备液和内标 µl, 分别至 10 ml 量瓶中, 用甲醇溶解并定容, 混匀后即得红霉素 A 5 µg ml 1 地红霉素 7 µg ml 1 螺旋霉素 Ⅰ6 µg ml 1 脱水红霉素 A 5 µg ml 1 红霉素 A 烯醇醚 4 µg ml 1 红霉胺 7 µg ml 1 新螺旋霉素 Ⅰ9 µg ml 1 大环内酯类抗菌药物混合对照品溶液, 以及 10 µg ml 1 的罗红霉素内标溶液, 于 4 冰箱中保存待用分别精密移取 10,20,50,100,200,500,1 000 µl 混合对照品溶液至 10 ml 量瓶中, 并将 100 µl 的 10 µg ml 1 的罗红霉素内标溶液加入每个浓度混合对照品溶液中, 用甲醇定容至 10 ml, 可得红霉素 A 5,10,25,50,100,250,500 ng ml 1, 地红霉素 7,14,35,70,140,350,700 ng ml 1, 螺旋霉素 Ⅰ6,12,30,60,120,300,600 ng ml 1, 脱水红霉素 A5,10,25,50,100,250,500 ng ml 1, 红霉素 A 烯醇醚 4,8,20,40,80,200,400 ng ml 1, 红霉胺 7,14,35,70,140,350,700 ng ml 1, 新螺旋霉素 Ⅰ9,18,45,90,180,450,900 ng ml 1, 并含内标 ng ml 1 的对照品线性工作液, 用于当天实验使用 2.4 供试品溶液采用改良的 QuEChERS 方法进行前处理准确移取人血浆 200 µl 置于 50 ml 离心瓶中, 加入乙腈 10 ml, 涡旋 1 min, 分别加入硫酸镁 500 mg 和无水硫酸钠 400 mg 用于沉淀蛋白和盐析作用, 涡旋 1 min, 混匀, 离心半径为 6 cm, 离心 (r=5 000 r min 1 ) 5 min, 提取上清液 10 ml 至第 2 根 50 ml 离心管中, 然后将无水硫酸镁 500 mg 和石墨碳烯 40 mg 分别加入第 2 个离心管中, 涡旋 1 min 然后吸取 5 ml 上清液至 10 ml 试管, 在 40 水浴锅中氮吹至干, 用 500 µl 甲醇溶解残留物, 用 0.22 µm 尼龙滤膜过滤后上机检测 2.5 方法学考察方法专属性考察分别取 5 份空白血浆 200 μl, 按 2.4 项下供试品溶液的操作步骤处理, 根据项和项下色谱和质谱条件, 进样 5 μl 测量结果表明, 血浆内源性成分不干扰 3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物和内标测定, 同时各待测成分分离良好, 该前处理方法和 HPLC-MS 适宜血浆中大环内酯类抗菌药物及其代谢物的定性和定量色谱图见图线性关系和定量限在项和项下色谱和质谱条件下, 用空白血浆加入对照品溶液配制各大环内酯类抗菌药物及其代谢物的血浆样品线性范围溶液, 按 2.4 项下方法处理样品, 建立 3 种大环内酯类及其代谢物标准曲线中国现代应用药学 2017 年 9 月第 34 卷第 9 期 Chin J Mod Appl Pharm, 2017 September, Vol.34 No

4 以提取离子色谱峰的峰面积 (Y) 作为纵坐标, 质量浓度 (X) 为横坐标建立标准线性方程, 并以内标法定量将各大环内酯类抗菌药物及其代谢物标准溶液逐步稀释至所测的信号为 10 倍的噪音时, 可得测其浓度为定量限结果表明,3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物在线性范围内线性良好, r>0.999, 定量限 <10 ng ml 1, 说明该方法适合 3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物的定量分析结果见表日内日间精密度取空白血浆配制 3 种大环内内酯类抗菌药物及其代谢物线性范围的第 2,4,6 个浓度的 3 个添加水平的血浆样品溶液, 每个浓度的样品溶液平行制备 6 份, 测定结果计算作为日内精密度根据当天的标准曲线, 连续测 3 d, 测定结果作为日间精密度结果表明日内精密度 <5.00%, 日间精密度均 <10.00% 结果见表提取回收率和基质效应对照品溶液直接上机测定, 测得的峰面积为 A 取 6 份空白血浆 200 µl, 根据 2.4 项下供试品前处理操作到溶解残渣前, 其残渣加入适量标准溶液配制成各大环内酯类抗菌药物及其代谢物线性范围第 2,4,6 个浓度的 3 个添加水平的样品溶液 ( 内含 100 ng ml 1 内标溶液 ), 用甲醇定容后上机测定, 测得的峰面积为 B 取 6 份空白血浆 200 µl, 加入适量标准溶液配制成各大环内酯类抗菌药物及其代谢物线性范围第 2,4,6 个浓度的 3 个添加水平的样品溶液, 根据 2.4 供试品前处理后的样品溶液上机测定, 测得的峰面积为 C 基质效应 =B/A 100%; 提取回收率为 C/B 100% 3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物的基质效应在 81.02%~115.66% ; 内标的提取回收率为 81.45%~96.82% 这表明该色谱和质谱条件下, 基质效应的影响可以忽略提取回收率均符合生物样品分析的要求结果见表 4 图 1 3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物的提取离子流图 A 空白血浆 +3 大环内酯类抗菌药物及其代谢物对照品 ;B 空白血浆 ;C 3 大环内酯类抗菌药物及其代谢物对照品 ;1 新螺旋霉素 ;2 螺旋霉素 ; 3 红霉胺 ;4 地红霉素 ;5 红霉素 A;6 脱水红霉素和红霉素 A 烯醇醚 ;7 罗红霉素 Fig. 1 The chromatograms of extracted ion current for three macrolide antibiotics and their metabolites A blank plasma+reference substances of three marolide antibiotics and their metabolites; B blank plasma; C reference substances of three marolide antibiotics and their metabolites; 1 neospiramycin; 2 spiramycin; 3 erythromycylamine; 4 dirithromycin; 5 erythromycin A; 6 anhydroerythromycin A and erythromycin A ene alcohol ether; 7 roxithromycin. 表 2 3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物的线性方程 Tab. 2 The regression equation, the limit of detection and the limit of quantification for three macrolide antibiotics and their metabolites 化合物浓度范围 /ng ml 1 线性方程相关系数 r 定量限 /ng ml 1 红霉素 A 5~500 Y= X 地红霉素 7~700 Y= X 螺旋霉素 Ⅰ 6~600 Y= X 脱水红霉素 A 5~500 Y= X 红霉素 A 烯醇醚 4~400 Y= X 红霉胺 7~700 Y= X 新螺旋霉素 Ⅰ 9~900 Y=981X Chin J Mod Appl Pharm, 2017 September, Vol.34 No.9 中国现代应用药学 2017 年 9 月第 34 卷第 9 期

5 表 3 3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物的日内日间精密度 Tab. 3 The results of precision for three macrolides and their metabolites 化合物红霉素 A 地红霉素螺旋霉素 Ⅰ 脱水红霉素 A 红霉素 A 烯醇醚红霉胺新螺旋霉素 Ⅰ 添加水平 /ng ml 1 日内精密度 /% 日间精密度 /% 表 4 3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物的基质效应和提取回收率 Tab. 4 The reaults of matrix effects and extraction recoveries for three macrolide antibiotics and their metabolites 化合物添加水平 /ng ml 1 基质效应 /% 提取回收率 /% 红霉素 A 地红霉素螺旋霉素 Ⅰ 脱水红霉素 A 红霉素 A 烯醇醚红霉胺新螺旋霉素 Ⅰ 稳定性试验本实验考察了各大环内酯类抗菌药物及其代谢物线性范围第 2,4,6 个浓度的 3 个添加水平的样品溶液在不同保存条件下的稳定性 (n=3) 结果表明, 血浆样品经过处理后 4 放置 4 h 的 RSD 均 <7.00%, 稳定 ; 血浆样品经过处理后 4 放置 8 h 的 RSD 均 <7.00%, 稳定 ; 血浆样品经过处理后在 20 放置 30 d 的 RSD 均 <7.00%, 稳定样品经历 3 次冷冻 - 解冻循环的 RSD 均 <7.00%, 稳定结果见表 5 表 5 3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物的稳定性 Tab. 5 The results of stability for three macrolides and their metabolites 4 放置 4 放置 20 放经历 3 次冷添加水平 / 化合物 ng ml 1 红霉素 A 地红霉素螺旋霉素 Ⅰ 脱水红霉素 A 红霉素 A 烯醇醚红霉胺新螺旋霉素 Ⅰ 4 h 的 8 h 的置 30 d 的冻 - 解冻的讨论 3.1 质谱条件的优化该实验分别优化了负离子模式和正离子模式, 结果表明, 正离子模式的响应更高, 更有利于质子化这可能是因为大环内酯类抗菌药物大多数是个大环内酯环通过羟基与去甲氨基糖缩合生成的碱性苷, 其中大环内酯环一般含有羟基酮基或醛基等, 这些基团在 ESI 离子源的正离子模式下具有较大的响应 [19-20] 螺旋霉素新螺旋中国现代应用药学 2017 年 9 月第 34 卷第 9 期 Chin J Mod Appl Pharm, 2017 September, Vol.34 No

6 霉素的化学结构中含有 2 个氮原子在 Q1 扫描过程中能够生成 [M+H] + 和 [M+2H] 2+, 而 [M+H] + 形式响应比较大在子离子扫描中, 通过离子响应强度大小, 选择 3~4 个较大响应的子离子, 供 MRM 扫描时选择, 最后选择响应较大的 2 个子离子作定性离子, 并从中选择一个响应较大的离子作为定量离子此外脱水红霉素 A 和红霉素 A 烯醇醚是同分异构体, 不仅具有相同的分子式, 在质谱中也能产生 3 个相同的子离子, 分别是 m/z 158.1, m/z 116.0,m/z 通过液相色谱条件的优化, 红霉素的代谢物脱水红霉素 A 和红霉素 A 烯醇醚能够实现良好分离而分别定性和定量, 他们的保留时间分别为 min 和 min 3.2 液相色谱条件的优化实验分别考察了乙腈和甲醇流动相, 乙腈在 Eclipse Plus-C 18 色谱柱下洗脱大环内酯类抗菌药物的能力比甲醇强为了减少有机溶剂的使用和节省分析时间, 最终选择乙腈 -0.1% 甲酸水溶液作为流动相, 在 20 min 内 3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物能够实现良好的分离, 特别是脱水红霉素和红霉素 A 烯醇醚能够实现良好的分离, 不受杂质的影响, 大多数分离度均能 >1.5, 如图 1 所示, 符合检测的需要 3.3 样品前处理条件的优化根据大环内酯类抗菌药物易溶于极性溶剂的性质, 本实验考察乙腈甲醇 0.1% 甲酸乙腈溶液和 0.1% 甲酸 -5 mmol L 1 甲酸铵乙腈溶液提取大环内酯类抗菌药物及其代谢物结果表明, 用甲醇提取血浆中的多数大环内酯类抗菌药物回收率 <40% 而 0.1% 甲酸乙腈溶液 5 mmol L 1 甲酸铵乙腈或 0.1% 甲酸 -5 mmol L 1 甲酸铵乙腈溶液提取血浆中的大环内酯类抗菌药物时, 红霉素及其代谢物等一些大环内酯类抗菌药物容易受酸碱的影响, 造成回收率不稳定或者回收率不理想用乙腈为提取溶剂时,3 大环内酯类抗菌药物的回收率可 >80%, 同时乙腈也可以达到沉淀蛋白的作用因此最终选择乙腈提取血浆中的大环内酯类抗菌药物实验还分别考察了 5,10,15,20,25,30 和 35 ml 乙腈溶液的提取效率结果显示,10~15 ml 乙腈整体提取效率较合理, 为了节省溶剂, 最终选择 10 ml 但是单纯用乙腈提取, 基质效应较大, 不利于定量, 特别是地红霉素红霉胺螺旋霉素和新螺旋霉素, 四者的基质效应分别为 34.89%,58.38%,139.37% 和 % 因此需要进行进一步的净化由于 QuEChERS 前处理方法具有操作简便快速经济等优势, 因此本实验采用该法本实验分别考察传统的 QuEChERS 方法和改良后 QuEChERS 方法在第 2 个净化步骤中, 改良后 QuEChERS 方法是考察石墨碳烯 (PestiCarb,PC) 材料, 而传统的 QuEChERS 方法是采用乙二胺 -N- 丙基硅烷 (Primary secondary amine,psa) 和 C 18 材料, 分别考察 3 者对基质效应和提取回收率的影响结果表明,PC 与 C 18 的除杂效果与相当, 二者均比 PSA 除杂效果好同时从实验结果得知, 对于大多数大环内酯类抗菌药物,PC 比单一 C 18 材料单一 PSA 材料和 C 18 +PSA 组合材料的基质效应和提取回收率更合理, 因此选择 PC 净化样品, 基质效应和提取回收率均符合检测分析需要 3.4 临床应用该方法的建立为测定人血浆中 3 种大环内酯类抗菌药物及其代谢物含量提供检测方法, 为应用于临床实验的药动学研究提供基础, 但是还未实际应用临床试验中, 有待更深入的研究 REFERENCES [1] SONG X, ZHOU T, LIU Q. Molecularly imprinted solid-phase extraction for the determination of ten macrolide drugs residues in animal muscles by liquid chromatography-tandem mass spectrometry [J]. Food Chem, 2016(208): [2] SUN S J. The progress of clinical application of macrolides [J]. Chin Lic Pharm( 中国执业药师 ), 2011, 8(6): 19-21, 38. [3] ZHOU Y, ZHOU T, JIN H. Rapid and selective extraction of multiple macrolide antibiotics in foodstuff samples based on magnetic molecularly imprinted polymers [J]. Talanta, 2015(137): [4] HU Y. Clinical value of macrolide antibiotics in the treatment of children with bronchopneumonia [J]. J Clin Pulm Med( 临床肺科杂志 ), 2013, 18(3): [5] LI Z Y, CUI Y B, ZHANG J X. Progress in studies of macrolide antibotics [J]. World Notes Antibiotics( 国外医药抗生素分册 ), 2013, 34(1): [6] 葛涵, 沈舜义. 大环内酯类抗生素研究进展 [J]. 世界临床药物, 2007, 28(6): [7] DENG X H, GUO Y W, SONG H Y. Effect of erythromycin and spiramycin on ocular staphylococcus aureus biofilm [J]. Rec Adv Ophthalmol( 眼科新进展 ), 2012, 32(9): [8] 金晶, 袁玉林, 叶林峰, 等. 地红霉素联合尼美舒利治疗急性化脓性扁桃体炎 42 例 [J]. 医药导报, 2010, 29(12): [9] G VINCENT U, VON HOLST C. Sample preparation strategy for the simultaneous determination of macrolide antibiotics in 1294 Chin J Mod Appl Pharm, 2017 September, Vol.34 No.9 中国现代应用药学 2017 年 9 月第 34 卷第 9 期

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g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min 25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.