1360 水产学报 40 卷充 DL- 蛋氨酸可显著提高异育银鲫 (Carassius auratus gibelio) 鱼体的粗蛋白质含量, 有效促进必需氨基酸在鱼体内的沉积 ; 在高棉粕比例饲料中补充蛋氨酸可提高中华绒螯蟹 (Eriocheir sinensis) 幼苗的抗氧化能力 [6]

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钒魏
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1 第 40 卷第 9 期水产学报 Vol. 40, No 年 9 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Sep., 2016 文章编号 : (2016) DOI: /jfc 蛋氨酸水平对吉富罗非鱼肌肉氨基酸组成及血清抗氧化能力的影响 1 向枭 *, 周兴华 1, 曾本和 1, 罗莉 2 3, 文华 (1. 西南大学荣昌校区水产系, 淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室, 水产科学重庆市市级重点实验室重庆 ; 2. 西南大学动物科技学院, 重庆 ; 3. 中国水产科学院长江水产研究所, 中国水产科学院淡水生态与健康养殖重点开放实验室, 湖北荆州 ) 摘要 : 为探讨蛋氨酸水平对吉富罗非鱼生长过程中肌肉氨基酸组成及血清抗氧化能力的影响, 通过在半精制基础饲料中添加 DL- 蛋氨酸, 配制成蛋氨酸水平分别为 0.26% 0.55% 0.85% 1.14% 1.44% 和 1.73% 的 6 种等氮等能 (32.09% 粗蛋白质,17.82 kj/g 总能 ) 的实验饲料以初始体质量 (66.76±2.29) g 的吉富罗非鱼为实验对象, 每种实验饲料设 3 个重复, 每个重复放养实验鱼 25 尾, 养殖系统为室内养殖系统, 每天表观饱食投喂 3 次, 养殖时间为 60 d 结果显示, 随着饲料蛋氨酸水平的升高, 罗非鱼肌肉中各种氨基酸的含量必需氨基酸总量 (ΣEAA) 氨基酸总量(ΣTAA) 鲜味氨基酸总量(ΣDAA) 均呈先升后降的变化趋势, 且均在 1.14% 水平组达到最大但各实验组中必需氨基酸与氨基酸总量的比值 (ΣEAA/ΣTAA) 鲜味氨基酸与氨基酸总量的比值(ΣDAA/ΣTAA) 及支链氨基酸与芳香氨基酸的比值 (ΣBCAA/ΣAAA) 均无明显差异 (P>0.05); 随着饲料蛋氨酸水平的升高, 罗非鱼血清中超氧化物歧化酶 (SOD) 过氧化氢酶(CAT) 谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px) 的活性随饲料蛋氨酸水平的升高均呈先升后降的变化趋势, 而丙二醛 (MDA) 则呈先降低后趋于稳定的变化趋势研究表明, 适宜的蛋氨酸水平能有效地改善罗非鱼肌肉的氨基酸组成, 改善肌肉的品质, 增强其抗氧化能力关键词 : 吉富罗非鱼 ; 蛋氨酸 ; 氨基酸组成 ; 抗氧化能力中图分类号 : S 文献标志码 : A 蛋氨酸是一种重要的必需氨基酸, 对维持人体和水产动物蛋白质合成的动态平衡发挥着重要作用, 在其生长过程中, 蛋氨酸还直接参与肾上腺素胆碱等物质的合成蛋氨酸在动物体内以 S- 腺苷甲硫氨酸的形式将活性甲基基团转移给核酸和磷脂等生物活性物质 [1], 使膜流动性和 Na + -K + -ATP 酶作用增强 [2], 减少胆汁酸在肝 [3] 内聚积, 加强其解毒作用 Hoffman 等认为当肝脏中蛋氨酸缺乏时将导致 DNA 甲基化不足, 从而引起肝胰脏和肠道的代谢异常, 导致自由基的大量生成因此, 蛋氨酸具有抗击动物体内氧自由基氧化脂质过氧化物损害的作用蛋氨酸的不足或缺乏不仅导致氨基酸的不平衡, 使人和动物体内蛋白质的合成受阻, 而且影响动物肌肉品质和其抗氧化的能力在鲤 (Cyprinus carpio) 饲料中添加 0.2% 蛋氨酸可促进饲料营养的平衡, 提高其肌肉品质和营养物质的含量, 增强其无机盐的转化率 [4] [5] ; 贾鹏等研究表明, 补收稿日期 : 修回日期 : 资助项目 : 重庆市基础与前沿研究计划 (cstc2013jcyja80033); 国家罗非鱼现代产业技术体系建设项目 (CARS-49); 公益性行业 ( 农业 ) 科研专项 ( ) 通信作者 : 向枭, howlet@126.com

2 1360 水产学报 40 卷充 DL- 蛋氨酸可显著提高异育银鲫 (Carassius auratus gibelio) 鱼体的粗蛋白质含量, 有效促进必需氨基酸在鱼体内的沉积 ; 在高棉粕比例饲料中补充蛋氨酸可提高中华绒螯蟹 (Eriocheir sinensis) 幼苗的抗氧化能力 [6] 因此, 在饲料中补充适量的蛋氨酸能提高鱼类肌肉品质, 改善其抗氧化能力本实验以吉富罗非鱼 (GIFT Oreochromis niloticus) 为研究对象, 探讨饲料中不同蛋氨酸水平对吉富罗非鱼肌肉氨基酸组成及血清抗氧化能力的影响, 丰富和完善其营养生理和消化生理, 为通过营养调控途径改善水产品品质提供参考资料 1 材料与方法 1.1 实验动物及饲料实验用罗非鱼购自重庆白市驿渔场, 选用健康无伤病的 500 尾鱼作为实验鱼, 体质量 (66.76±2.29) g 购回后先用 3%~5% 的食盐水消毒后放入暂养池暂养备用实验饲料以明胶鱼粉花生粕包膜氨基酸混合物为主要蛋白质源, 豆油为脂肪源氨基酸混合物的包膜参照 [7] 王冠的方法除蛋氨酸和甘氨酸 ( 平衡氮 ) 水平不同外, 其余的必需和非必需氨基酸参照罗非鱼全鱼氨基酸组成模式配制成低蛋氨酸的基础饲料 ( 表 1), 并设定为对照组在基础饲料中分别添加 0 0.3% 0.6% 0.9% 1.2% 和 1.5% 的 DL- 蛋氨酸, 同时通过调节饲料中 L- 甘氨酸的含量, 以 0.3% 的水平递减, 来调节饲料中氮的水平设计 6 种等氮 ( 粗蛋白质含量为 32.09%) 等能 ( 总能为 kj/g) 的实验饲料各原料均粉碎过 80 目筛, 称重后混匀, 量少的组分采用逐级扩大法混合, 用实验室小型绞肉机制成直径为 2 mm 的颗粒, 自然晾干后于 20 C 保存经测定 6 种实验饲料中蛋氨酸的质量分数分别为 0.26% 0.55% 0.85% 1.14% 1.44% 和 1.73%, 占饲料蛋白质的质量分数分别为 0.81% 1.71% 2.65% 3.55% 4.49% 和 5.39% 饲料的氨基酸组成见表实验设计及饲养管理实验罗非鱼用商品饲料暂养 7 d 后, 进行 24 h 饥饿处理, 选择健康无伤病的罗非鱼 450 尾, 分成 6 组, 每组 3 个重复, 每个重复 25 尾鱼, 随机投入 18 个实验水泥池 (150 cm 100 cm 50 cm) 中, 分别投喂 6 种不同蛋氨酸水平的实验饲料每天表 1 基础饲料配方及主要营养成分 ( 风干基础 ) Tab. 1 Composition and nutrient level of basal diets 原料 ingredients 项目 items (air-dry basis) 含量 content 鱼粉 /% fish meal 8.00 明胶 /% gelatin 5.00 花生粕 /% peanut meal 氨基酸混合物 1 /% amino acid mixture 小麦精粉 /% wheat starch α- 淀粉 /% α-starch 大豆油 /% soybean oil 5.00 氯化胆碱 /% choline chloride 0.50 复合预混料 2 /% compound premix 1.00 磷酸二氢钙 /% Ca(H 2 PO 4 ) 微晶纤维素 /% microcrystalline cellulose DL- 蛋氨酸 /% DL-methionine 0.00 L- 甘氨酸 /% L-glycine 1.50 合计 /% 成分分析 ( 干物质 ) proximate analysis(dry matter) 蛋氨酸 /% methionine 0.26 水分 /% moisture 粗蛋白质 /% crude protein 粗脂肪 /% crude lipid 6.15 灰分 /% ash 3.52 总能 /(KJ/g) total energy 注 :1. 氨基酸混合物组成见表 2;2. 复合预混料为每千克饲料提供 : 维生素 A 2000 IU, 维生素 C 300 mg, 维生素 D IU, 维生素 E 100 mg, 维生素 K 3 10 mg, 维生素 B 1 5 mg, 维生素 B 2 10 mg, 尼克酸 100 mg, 泛酸钙 40 mg, 维生素 B 6 10 mg, 维生素 B l mg, 生物素 1 mg, 叶酸 5 mg, 肌醇 100 mg,feso 4 7H 2 O 600 mg, CuSO 4 5H 2 O 15 mg,mnso 4 H 2 O 80 mg,znso 4 7H 2 O 300 mg,ki (1%) 60 mg,na 2 SeO 3 5H 2 O (1%) 60 mg,cocl 2 6H 2 O (1%) 7 mg Notes: 1. The amino acid mixture composition are shown in tab The compound premix provides vitamin and mineral for a kilogram of diets: vitamin A 2000 IU, vitamin C 300 mg, vitamin D IU, vitamin E 100 mg, vitamin K 3 10 mg, vitamin B 1 5 mg, vitamin B 2 10 mg,nicotinic acid 100 mg, calcium pantothenate 40 mg, vitamin B 6 10 mg, vitamin B l mg, Biotin 1 mg, folic acid 5 mg, inositol 100 mg, FeSO 4 7H 2 O 600 mg, CuSO 4 5H 2 O 15 mg, MnSO 4 H 2 O 80 mg, ZnSO 4 7H 2 O 300 mg, KI (1%) 60 mg, NaSeO 3 5H 2 O (1%) 60 mg, CoCl 2 6H 2 O (1%) 7 mg 按实验鱼体质量的 3%~5% 表观饱食投喂 ( 每天 8:00 13:00 和 16:00 各投饲喂 1 次 ) 养殖期间每天换水 1 次, 每次换水量为养殖水体的 1/3 实验用

3 9 期向枭, 等 : 蛋氨酸水平对吉富罗非鱼肌肉氨基酸组成及血清抗氧化能力的影响 1361 氨基酸 amino acid 表 2 基础饲料中氨基酸组成分析 ( 干物质 ) Tab. 2 Analyzed amino acid composition of the basal diets (dry matter) % 鱼粉 - 明胶 - 花生粕 - 小麦精粉提供 provided by fish meal- gelatingelatin-wheat starch 氨基酸混合物 provided by AA mixture 32% 肌肉氨基酸模式 amount in 32% muscle protein 基础饲料 AA in basal diet (measured value) 缬氨酸 valine 色氨酸 tryptophane 苏氨酸 threonine 苯丙氨酸 phenylalanine 蛋氨酸 methionine 精氨酸 argnine 赖氨酸 lysine 组氨酸 histidine 亮氨酸 leucine 异亮氨酸 isoleucine 甘氨酸 glycine 丙氨酸 alanine 丝氨酸 serine 胱氨酸 cystine 谷氨酸 glutamic acid 酪氨酸 tyrosine 脯氨酸 proline 天冬氨酸 aspartic acid 注 :. 色氨酸没有检测 Notes:. tryptophane was not detected 水为曝气后的自来水, 水温维持在 25~28 C, 溶氧高于 6.0 mg/l,ph 为 7.0~7.5 养殖时间 60 d 1.3 样品采集结束前 1 天停食 24 h, 每池随机取 10 尾实验鱼, 用 50 mg/l 的 MS-222 溶液麻醉, 测定体质量和体长后, 其中 5 尾实验鱼取其侧线上方背部肌肉 ( 第一根背鳍至最后一根背鳍之间, 侧线以上白肌 ), 用液氮速冻后置于 80 C 中保存用于肌肉氨基酸的检测 ; 另外 5 尾实验鱼用一次性注射器尾静脉采血, 放入 2 ml 离心管中, 于 4 C 的冰箱中静置 3 h 后, 在 3500 r/min 转速下 4 C 离心 15 min, 提取血清, 用液氮速冻后转入 80 C 冰箱中保存备用, 用于测定血清抗氧化指标 1.4 指标测定肌肉及基础饲料中氨基酸含量用日立型氨基酸分析仪测定实验鱼血清抗氧化指标的测定超氧化物歧化酶 (SOD) 过氧化氢酶(CAT) 谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px) 活性以及丙二醛 (MDA) 含量采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定 SOD 活性定义为在 37 C 条件下, 每 1 ml 反应液中 SOD 抑制率达 50% 时所对应的 SOD 量为一个 SOD 活性单位 (U/mL);CAT 活性定义为 37 C 条件下每 1 ml 血清每秒钟分解 1 μmol 的 H 2 O 2 的量为一个 CAT 活性单位 (U/mL);GSH-Px 活性定义为 37 C 条件下每 1 L 血清排除非酶促反应后,1 min 内可以催化 1 μmol/l GSH 氧化所需的酶量为一个 GSH-Px 活性单位 (U/mL) 1.5 数据处理方法实验鱼肌肉及饲料氨基酸的测定实验鱼实验数据以平均值 ± 标准误 (means±se) 表示,

4 1362 水产学报 40 卷采用 SPSS Statistics 19.0 统计软件中进行单因素方差分析 (Qne-Way ANOVA), 若组间差异显著, 再用 Duncan 氏进行多重比较, 差异显著水平为 P< 结果与分析 2.1 蛋氨酸水平对罗非鱼肌肉氨基酸含量的影响随着饲料蛋氨酸水平的升高, 罗非鱼肌肉中各种氨基酸的含量均呈先升后降的变化趋势, 且各种氨基酸的含量均在 1.14% 水平组达到最大 ( 表 3) 但各实验组中组氨酸丝氨酸和胱氨酸含量无明显差异 (P>0.05); 缬氨酸蛋氨酸赖氨酸亮氨酸酪氨酸天冬氨酸等的含量除与 0.26% 水平组的差异显著外 (P<0.05), 与其余各实验组差异不显著 (P>0.05); 精氨酸异亮氨酸谷氨酸含量在蛋氨酸水平为 0.55%~1.44% 时差异不显著 (P>0.05), 但与其余各组有显著差表 3 蛋氨酸水平对罗非鱼肌肉氨基酸含量 ( 干物质基础 ) 的影响 Tab. 3 Effect of dietary methionine levels on amino acid composition of GIFT tilapia(dry matter) n=3 1 氨基酸 amino acid 饲料蛋氨酸水平 /% dietary methionine levels 缬氨酸 valine 3.91±0.03 a 4.02±0.04 ab 4.06±0.04 ab 4.08±0.08 b 4.04±0.04 ab 4.01±0.04 ab 苏氨酸 threonine 3.66±0.03 a 3.71±0.02 ab 3.75±0.03 bc 3.80±0.01 c 3.74±0.01 bc 3.72±0.02 ab 苯丙氨酸 phenylalanine 3.32±0.02 a 3.36±0.02 ab 3.37±0.01 bc 3.42±0.03 c 3.35±0.01 ab 3.34±0.01 ab 蛋氨酸 methionine 2.39±0.04 a 2.46±0.05 ab 2.51±0.04 ab 2.55±0.02 b 2.49±0.04 ab 2.42±0.02 ab 精氨酸 argnine 5.16±0.04 a 5.22±0.01 ab 5.28±0.04 ab 5.35±0.05 b 5.30±0.07 ab 5.18±0.04 a 赖氨酸 lysine 7.36±0.04 a 7.52±0.01 ab 7.53±0.02 ab 7.59±0.09 b 7.49±0.07 ab 7.42±0.03 ab 组氨酸 histidine 1.96± ± ± ± ± ±0.01 亮氨酸 leucine 6.71±0.09 a 6.87±0.02 ab 6.95±0.02 b 7.01±0.07 b 6.88±0.08 ab 6.81±0.05 ab 异亮氨酸 isoleucine 3.86±0.02 a 3.96±0.01 bc 3.97±0.05 bc 4.03±0.03 c 3.99±0.02 c 3.90±0.01 ab 甘氨酸 glycine 5.84±0.03 a 5.87±0.03 a 6.13±0.03 b 6.16±0.05 b 6.11±0.04 b 6.09±0.03 b 丙氨酸 alanine 5.72±0.02 a 5.73±0.03 a 5.82±0.04 b 5.86±0.06 b 5.84±0.02 b 5.83±0.03 b 丝氨酸 serine 3.18± ± ± ± ± ±0.04 胱氨酸 cystine 0.78± ± ± ± ± ±0.01 谷氨酸 glutamic acid 12.41±0.10 a 12.73±0.05 bc 12.98±0.09 c 13.02±0.12 c 12.76±0.04 bc 12.63±0.12 ab 酪氨酸 tyrosine 2.60±0.05 a 2.67±0.05 ab 2.72±0.01 b 2.74±0.02 b 2.67±0.03 ab 2.63±0.02 ab 脯氨酸 proline 3.20±0.04 a 3.23±0.02 ab 3.33±0.03 bc 3.38±0.04 c 3.34±0.03 c 3.23±0.03 ab 天冬氨酸 aspartic acid 8.40±0.01 a 8.49±0.05 ab 8.61±0.02 ab 8.69±0.10 b 8.62±0.09 ab 8.56±0.04 ab ΣEAA ±0.08 a 39.10±0.03 bc 39.35±0.03 c 39.89±0.24 d 39.23±0.13 c 38.74±0.17 ab ΣDAA ±0.20 a 38.03±0.16 ab 38.81±0.09 cd 39.08±0.28 d 38.68±0.16 cd 38.28±0.05 bc ΣTAA ±0.22 a 81.79±0.03 b 82.98±0.12 cd 83.79±0.67 d 82.66±0.16 bc 81.70±0.05 b ΣEAA/ΣTAA 0.48± ± ± ± ± ±0.01 ΣDAA/ΣTAA 0.47± ± ± ± ± ±0.00 ΣBCAA 5 /ΣAAA ± ± ± ± ± ±0.01 注 :1. 色氨酸没有检测 ;2. 必需氨基酸总量 ;3. 鲜味氨基酸 ;4. 氨基酸总量 ;5. 支链氨基酸 ;6. 芳香氨基酸 ; 表格中同行肩标相同小写字母或无字母表示差异不显著 (P>0.05), 不同小写字母表示差异显著 (P<0.05) 下同 Notes:1.tryptophane was not detected,2.gross of essential amino acid,3.delicious amino acid,4.gross of total amino acid,5.branched chain amino acid,6.aromatic amino acid. In the same row,values with same small letter superscripts or no letter superscripts mean no significant differences (P>0.05), different small letter superscripts mean significant differences (P<0.05). The same below

5 9 期向枭, 等 : 蛋氨酸水平对吉富罗非鱼肌肉氨基酸组成及血清抗氧化能力的影响 1363 异 (P<0.05); 苏氨酸脯氨酸含量在蛋氨酸水平为 0.85~1.44% 时差异不显著 (P>0.05), 与其余各组有显著差异 (P<0.05); 苯丙氨酸含量在蛋氨酸水平为 0.85~1.14% 时差异不显著 (P>0.05), 与其余各组有显著差异 (P<0.05); 甘氨酸丙氨酸在蛋氨酸水平大于 0.85% 时差异不显著 (P>0.05) 罗非鱼肌肉中必需氨基酸总量 (ΣEAA) 鲜味氨基酸总量 (ΣDAA) 肌肉氨基酸总量(ΣTAA) 均随饲料蛋氨酸水平的升高而呈先上升后下降的变化趋势且均在 1.14% 组时达到最大值但各实验组中必需氨基酸与氨基酸总量的比值 (ΣEAA/ΣTAA) 鲜味氨基酸与氨基酸总量的比值 (ΣDAA/ΣTAA) 及支链氨基酸与芳香氨基酸的比值 (ΣBCAA/ΣAAA) 均无明显差异 (P>0.05), 说明蛋氨酸水平可影响实验鱼肌肉中各种氨基酸的含量, 但对其肌肉中的各类氨基酸的比值无明显影响 2.2 蛋氨酸水平对罗非鱼血清抗氧化指标的影响罗非鱼血清中超氧化物歧化酶 (SOD) 过氧化氢酶 (CAT) 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) 的活性随饲料蛋氨酸水平的升高均呈先升后降的变化趋势 ( 表 4) SOD GSH-Px 的活性均在蛋氨酸水平为 1.14% 达到最大, 分别比 0.26% 水平组提高了 % 和 26.50%,SOD 活性除与 1.44% 组差异不显著外 (P>0.05), 与其余各实验组差异显著 (P<0.05),GSH-Px 活性则与其余各实验组均有显著差异 (P<0.05) CAT 活性则在蛋氨酸水平为 1.44% 时达到最大, 比 0.26% 组提高了 93.64%, 除与 1.14% 组差异不显著外 (P>0.05), 与其余各实验组差异显著 (P<0.05) 丙二醛(MDA) 含量则随饲料蛋氨酸水平的升高呈先降低后趋于稳定的变化趋势在蛋氨酸水平为 1.14% 时达到最低, 较 0.26% 组降低了 43.70% 且当饲料蛋氨酸含量大表 4 蛋氨酸水平对罗非鱼血清抗氧化指标的影响 Tab. 4 Effect of dietary methionine levels on serum antioxidant index of GIFT tilapia n=26 抗氧化指标 antioxidant index 饲料蛋氨酸水平 /% dietary methionine levels 超氧化物歧化酶 /(U/mL) SOD 46.49±4.57 a 53.10±4.24 a 65.55±6.07 b ±6.08 d 95.79±4.70 d 80.64±8.97 c 过氧化氢酶 /(U/mL) CAT 2.36±0.43 a 3.05±0.54 ab 3.66±0.26 bc 4.26±0.25 cd 4.57±0.38 d 3.73±0.45 bc 谷胱甘肽过氧化物酶 /(U/mL) GSH-Px ±3.79 a ±2.85 c ±1.65 c ±2.43 d ±2.64 b ±2.32 c 丙二醛 /(nmol/ml) MDA 22.47±1.30 d 18.87±0.63 c 15.56±0.45 b 12.65±1.06 a 13.04±0.71 a 13.57±0.81 a 于 1.14% 时差异不显著 (P>0.05) 说明适量的蛋氨酸能有效地提高罗非鱼的抗氧化能力 3 讨论 3.1 蛋氨酸水平对罗非鱼肌肉中氨基酸含量的影响蛋氨酸是人和动物必需氨基酸中唯一含有硫的氨基酸, 是合成蛋白质的原料 Keembiyehetty [8] 等认为, 饲料中蛋氨酸的不足, 不仅导致饲料氨基酸的不平衡, 饲料蛋白转化率降低, 机体蛋白质合成降低 ; 且蛋氨酸不足还会引起鱼类生长受阻 [9-10] 饲料中添加一定量的蛋氨酸可显著提高异育银鲫 [5] 黑鲷(Sparus macrocephalus) [11] [12] 等的蛋白质沉积率 ; 向枭等发现, 罗非鱼的增重率特定生长率及蛋白质沉积率随饲料蛋氨酸水平的升高呈先升后降的变化趋势人和动物对蛋白质的积累是通过饲料中氨基酸的合成 [13] 来实现的 Alam 等认为, 牙鲆 (Paralichthys olivaceus) 的体蛋白结合态氨基酸的组成和数量受饲料中的氨基酸模式的影响 ; 饲料蛋氨酸平衡组的大黄鱼 (Larimichthys crocea) 稚鱼体的必需氨基酸的含量要高于蛋氨酸缺乏组和过量组 [14] ; [15] Mai 等研究表明, 随饲料蛋氨酸水平的升高, 大黄鱼肌肉中蛋氨酸和异亮氨酸的含量呈现先升高后稳定的趋势, 但其他必需氨基酸的含量无明显变化 ; 本实验中, 罗非鱼肌肉中各种氨基酸的含量必需氨基酸总量及氨基酸总量均随饲料中蛋氨酸水平的升高呈先升后降的变化趋势与上述研究结果基本一致其可能的原因为, 动物体组织中必需氨基酸水平和饲料的

6 1364 水产学报 40 卷需要量之间有一定的相关性 [16], 饲料中各种氨基酸平衡时, 鱼类体内合成代谢大于分解代谢, 氨基酸或蛋白质被储存 [11] ; 而当饲料中蛋氨酸缺乏或不足时, 机体内分解代谢大于合成代谢, 体内其他正常水平的氨基酸被当作能量而被氧化分解, 降低其合成蛋白质的能力, 减少其在肌肉中的沉积 ; 另一方面, 过量添加蛋氨酸会导致蛋氨酸的氧化及有毒代谢物质的积聚 [17], 会造成氨基酸中毒症而产生负面的影响 [18] 但 [19] Luo 等在使用大豆浓缩蛋白和晶体氨基酸混合物替代鱼粉的实验中发现, 点带石斑鱼 (Epinephelus coioides) 肌肉中必需氨基酸含量随饲料蛋氨酸含量的提高而增大 ; 虹鳟 (Oncorhynchus mykiss) 肝脏和肌肉中蛋氨酸和胱氨酸含量随着饲料中 L- 蛋氨酸含量的升高而逐渐增加, 但谷氨酸和牛磺酸含量无影响 [20] [21] ; 林仕梅等在实用饲料中补充结晶 D- 蛋氨酸后发现, 随着蛋氨酸添加水平的提高, 奥尼罗非鱼 (Oreochromis niloticus O. aureus ) 的蛋白质沉积量增加, 且其血清中蛋氨酸的含量显著提高, 但对鱼体氨基酸含量无显 [22] 著影响朱选等也认为补充外源蛋氨酸对罗非鱼肌肉氨基酸组成无明显影响说明蛋氨酸对不同鱼类肌肉中氨基酸的影响有一定的差异, 可能与实验动物所处阶段实验饲料的组成及饲养管理等的差异有关, 其具体原因还有待于进一步研究 ; 本实验中罗非鱼肌肉中的鲜味氨基酸 ( 谷氨酸甘氨酸丙氨酸精氨酸和天冬氨酸 ) 总量呈先上升后下降的趋势说明适宜的蛋氨酸水平能改善肌肉的品质当饲料中蛋氨酸的供应不足或过量时, 在氨基酸的合成和转化的过程中受原料供应数量和转化速率影响, 将导致氨基酸间积累的不平衡, 风味氨基酸的积累下降 3.2 蛋氨酸水平对罗非鱼血清抗氧化能力的影响在动物的代谢过程中, 一些正常的生理生化反应需要氧自由基的参与, 并通过动物体内有关酶性和非酶性抗氧化系统清除过量的氧自由基, 以维持动物体内氧化与抗氧化的动态平衡 MDA 是脂质过氧化的产物, 其含量的多少间接反映活性氧自由基的含量及组织细胞脂质过氧化的强度 [23] [24] Li 等研究表明, 蛋氨酸羟基类似物 (MHA) 可以降低杂交条纹鲈 (Morone chrysops M. saxatilis) 肝脏 MDA 含量饲料中 MHA 在一定范围内升高时, 可显著降低建鲤 (Cypnnus carpio var. jian) 血清肠道肝胰脏和肌肉组织中 MDA 的含量 [25] 本实验中, 饲料中蛋氨酸水平小于 1.14% 时, 罗非鱼血清中 MDA 含量随蛋氨酸水平的升高而显著降低, 而当饲料蛋氨酸水平大于等于 1.14% 时, 罗非鱼血清中 [6] MDA 含量则变化不明显孙立梅等发现, 补充蛋氨酸可降低中华绒螯蟹幼蟹血清 MDA 含量, [26] Feng 等认为饲料中添加过量的 MHA 将显著升高建鲤幼鱼肝胰脏和肠道的 MDA 含量蛋氨酸缺乏时, 中期草鱼 (Ctenopharyngodon idella) 肌肉和肝胰脏中的 MDA 含量升高且随着饲料蛋氨酸水平的提高, 其肌肉肝胰脏血清和肠道中的 MDA 含量则显著降低 [27] 说明适宜蛋氨酸水平能够降低鱼类体内脂质过氧化毒性产物 MDA 的含量, 降低其机体的氧化损伤程度 SOD CAT GSH-Px 等抗氧化酶则是动物机体内清除氧自由基的重要酶, 对动物机体的氧化与抗氧化平衡有重要的作用, 可使动物细胞免受损伤 SOD 主要负责清除体内的 O 2 -, 将其转化为 H 2 O 2 [28] ;CAT 和 GSH-Px 则主要在微粒体胞浆及线粒体基质中清除 H 2 O 2 [29], 同时, GSH-Px 可清除生物膜中的脂质过氧化产物, 进而减轻细胞膜中多不饱和脂肪酸的过氧化作用, 保护细胞膜结构和功能的完整性 [30] 本实验中, 罗非鱼血清中 SOD CAT GSH-Px 的活性均随饲料蛋氨酸水平的升高均呈先升后降的变化趋势有研究表明, 适量的蛋氨酸能显著提高生长中期草鱼血清肝胰脏肠道和肌肉中的 SOD CAT 及 GSH-Px 的活性 [27], 补充蛋氨酸可显著提高中华绒螯蟹幼蟹血清中 SOD 和 GSH- Px 活性 [6] ;MHA 可显著提高建鲤幼鱼肝胰脏和肠道的 SOD CAT 和 GSH-Px 的活性 [26] 与本研究结果基本相一致说明适宜的蛋氨酸水平可有效地提高鱼类的抗氧化酶活性, 促进机体内自由基的清除, 增强机体的抗氧化能力, 提高其清除自由基的能力 4 小结本实验条件下, 饲料蛋氨酸水平对罗非鱼肌肉中各种氨基酸的含量肌肉氨基酸总量必需氨基酸总量及鲜味氨基酸总量均有显著影

7 9 期向枭, 等 : 蛋氨酸水平对吉富罗非鱼肌肉氨基酸组成及血清抗氧化能力的影响 1365 响蛋氨酸能有效地改善罗非鱼肌肉的氨基酸组成, 改善其肌肉品质 ; 同时蛋氨酸能有效地降低罗非鱼血清中 MDA 的含量, 提高 SOD CAT GSH-Px 活性, 因此, 适量的蛋氨酸可增强罗非鱼的抗氧化能力参考文献 : [ 1 ] Pérez-Jiménez A, Peres H, Cruz R V, et al. The effect of dietary methionine and white tea on oxidative status of gilthead sea bream (Sparus aurata)[j]. British Journal of Nutrition, 2012, 108(7): [ 2 ] Tang L, Wang G X, Jiang J, et al. Effect of methionine on intestinal enzymes activities, microflora and humoral immune of juvenile Jian carp (Cyprinus carpio var. jian)[j]. Aquaculture Nutrition, 2009, 15(5): [ 3 ] Hoffman R M. Altered methionine metabolism, DNA methylation and oncogene expression in carcinogenesis: a review and synthesis[j]. Biochimica et Biophysica Acta, 1984, 738(1-2): [ 4 ] 张满隆, 冯丽芝. 鲤鱼饲料中添加蛋氨酸的应用试验 [J]. 河北渔业, 2002(2): Zhang M L, Feng L Z. The experiment of adding methionine in carp feed[j]. Hebei Fisheries, 2002(2): (in Chinese). [ 5 ] 贾鹏, 薛敏, 朱选, 等. 饲料蛋氨酸水平对异育银鲫幼鱼生长性能影响的研究 [J]. 水生生物学报, 2013, 37(2): Jia P, Xue M, Zhu X, et al. Effects of dietary methionine levels on the growth performance of juvenile Gibel carp (carassius auratus gibelio)[j]. Acta Hydrobiologica Sinica, 2013, 37(2): (in Chinese). [ 6 ] 孙立梅, 陈立侨, 李二超, 等. 高比例棉粕饲料中补充蛋氨酸对中华绒螯蟹幼蟹摄食生长及抗氧化酶活性的影响 [J]. 水生生物学报, 2013, 37(2): Sun L M, Chen L Q, Li E C, et al. Effects of dietary methionine supplementation on feeding, growth and antioxidant ability of juvenile Chinese mitten crab, Eriocheir sinensis[j]. Acta Hydrobiologica Sinica, 2013, 37(2): (in Chinese). [ 7 ] 王冠. 晶体氨基酸经微胶囊技术处理后对异育银鲫生长影响的研究 [D]. 上海 : 上海水产大学, Wang G. Study on the technology of micro-capsule improving the effect of free amino acid on the growth of [ 8 ] [ 9 ] [10] [11] [12] [13] [14] [15] [16] Carassius auratus glibelio[d]. Shanghai: Shanghai Fisheries University, 2005 (in Chinese). Keembiyehetty C N, Gatlin D M. Performance of sunshine bass fed soybean- meal-based diets supplemented with different methionine compounds[j]. The Progressive Fish-Culturist, 1997, 59(1): Rønnestad I, Conceição L E, Aragão C, et al.free amino acids are absorbed faster and assimilated more efficiently than protein in postlarval Senegal sole (Solea senegalensis)[j]. Journal of Nutrition, 2000, 130(11): Takagi S, Shimeno S, Hosokawa H, et al. Effect of lysine and methionine supplementation to a soy protein concentrate diet for red sea bream Pagrus major[j]. Fisheries Science, 2001, 67(6): Ngandzali B O. Dietary L-methionine requirement of juvenile black sea bream (Sparus macrocephalus) at a constant dietary cystine level[j]. Aquaculture Nutrition, 2011, 17(5): 向枭, 周兴华, 罗莉, 等. 饲料蛋氨酸水平对吉富罗非鱼生长饲料利用率和体成分的影响 [J]. 水产学报, 2014, 38(4): Xiang X, Zhou X H, Luo L, et al. Effects of dietary methionine levels on the growth performance, feed utilization and body composition of GIFT Tilapia (Oreochromis niloticus)[j]. Journal of Fisheries of China, 2014, 38(4): (in Chinese). Alam M S, Teshima S, Ishikawa M, et al. Methionine requirement of juvenile Japanese flounder Paralichthys olivaceus estimated by the oxidation of radioactive methionine[j]. Aquaculture Nutrition, 2001, 7(3): 于海瑞, 艾庆辉, 麦康森, 等. 大黄鱼稚鱼 L- 蛋氨酸需要量的研究 [J]. 水生生物学报, 2013, 37(6): Yu H R, Ai Q H, Mai K S, et al. L-methionine requirement of large yellow croaker (Pseudosciaena crocea R.) larvae[j]. Acta Hydrobiologica Sinica, 2013, 37(6): (in Chinese). Mai K S, Wan J L, Ai Q H, et al. Dietary methionine requirement of large yellow croaker, Pseudosciaena crocea R[J]. Aquaculture, 2006, 253(1-4): Coloso R M, Murillo-Gurrea D P, Borlongan I G, et al. Sulphur amino acid requirement of juvenile Asian sea

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9 9 期向枭, 等 : 蛋氨酸水平对吉富罗非鱼肌肉氨基酸组成及血清抗氧化能力的影响 1367 Effects of dietary methionine levels on muscle amino acids composition and serum antioxidant ability of GIFT Oreochromis niloticus XIANG Xiao 1 *, ZHOU Xinghua 1, ZENG Benhe 1, LUO Li 2, WEN Hua 3 (1. Key Laboratory of Freshwater Fish Reproduction and Development, Ministry of Education, Key Laboratory of Aqucatic Science of Chongqing, Department of Fisheries, Rongchang Campus, Southwest University, Chongqing , China; 2. Department of Fishery Science, College of Animal and Technology of Southwest University, Chongqing , China; 3. Key Laboratory of Freshwater Ecology and Aquaculture, Yangtze River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Jingzhou , China) Abstract: A feeding trial was conducted to evaluate the effects of dietary methionine levels on muscle amino acids composition and serum antioxidant ability of GIFT tilapia (Oreochromis niloticus) [initial body weight of (66.76±2.29) g]. Six isonitrogenous and isoenergetic semi-purified diets were formulated to contain 32.09% crude protein,17.82% kj/g gross energy and six levels of methionine 0.26%, 0.55%, 0.85%, 1.14%, 1.44% and 1.73% respectively (dry matter basis). Each diet was randomly assigned to triplicate groups of 25 fish and fed to apparent satiation by hand thrice daily (8:00, 13:00 and 16:00) for 60 days in indoor farming system. The results showed that the all amino acids content, gross of essential amino acid (ΣEAA), gross of total amino acid (ΣTAA), gross of total delicious amino acid (ΣDAA) in muscle initially increased with increasing dietary methionine levels but then decreased. All the indexes were highest when the dietary methionine level was 1.14% (P<0.05). The ratio of essential amino acids to total amino acids (ΣEAA/ΣTAA), the ratio of delicious amino acid to total amino acids (ΣDAA/ΣTAA), the ratio of branched chain amino acid to aromatic amino acids (ΣBCAA/ΣAAA) had no significant differences (P>0.05). With the increase of dietary methionine level, the activities of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GSH-Px) in serum first decreased, then increased, at the same time, the malondialdehyde (MDA) in serum first increased, then towards stability. Results of above show that the optimum dietary methionine level could effectively improve the muscle amino acid composition and the quality of the muscles, and enhance the serum antioxidant capacity of GIFT tilapia. Key words: GIFT Oreochromis niloticus; methionine; amino acid composition; anti-oxidant ability Corresponding author: XIANG Xiao. xiangx@126.com Funding projects: Basic and Advanced Research Projects in Chongqing (cstc2013jcyja80033); National Project on the Construction of the Modern Industrial Technology System of Tilapia (CARS-49); National Special Research Fund for Non-Profit Sector (Agriculture) ( )

32期

32期中国农学通报 2014,30(32):38-42 Chinese Agricultural Science Bulletin 中草药饲料添加剂对黄鳝性激素含量的影响 1,2 1,2 1,2 2 赵庆凯, 丁炜东, 邴旭文, 王建新 ( 1 南京农业大学无锡渔业学院, 江苏无锡 214081; 2 中国水产

1360 水产学报 40 卷 充 DL- 蛋氨酸可显著提高异育银鲫 (Carassius auratus gibelio) 鱼体的粗蛋白质含量, 有效促进 必需氨基酸在鱼体内的沉积 ; 在高棉粕比例饲 料中补充蛋氨酸可提高中华绒螯蟹 (Eriocheir sinensis) 幼苗的抗氧化能力 [6]

1360 水产学报 40 卷充 DL- 蛋氨酸可显著提高异育银鲫 (Carassius auratus gibelio) 鱼体的粗蛋白质含量, 有效促进必需氨基酸在鱼体内的沉积 ; 在高棉粕比例饲料中补充蛋氨酸可提高中华绒螯蟹 (Eriocheir sinensis) 幼苗的抗氧化能力 [6]