29期

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1 中 国 农 学 通 报 01,8(9): Chinese Agricultural Science Bulletin 复 方 中 草 药 对 凡 纳 滨 对 虾 生 长 及 非 特 异 性 免 疫 功 能 的 影 响 1, 王 芸, 李 健, 陈 萍 1,, 张 喆, 何 玉 英, 李 吉 涛, 刘 德 月 ( 1 农 业 部 水 产 品 加 工 重 点 实 验 室 / 中 国 水 产 科 学 研 究 院 南 海 水 产 研 究 所, 广 州 ; 农 业 部 海 洋 渔 业 可 持 续 发 展 重 点 实 验 室 / 中 国 水 产 科 学 研 究 院 黄 海 水 产 研 究 所, 山 东 青 岛 66071) 摘 要 : 为 了 提 高 凡 纳 滨 对 虾 (Litopenaeus vannamei) 的 生 长 性 能 和 抵 抗 细 菌 性 疾 病 的 能 力, 将 黄 芪 大 黄 甘 草 和 黄 芩 等 比 例 组 成 复 方, 采 用 连 续 和 间 断 种 投 喂 方 式 评 价 1% 中 草 药 饵 料 对 凡 纳 滨 对 虾 的 生 长 和 非 特 异 性 免 疫 功 能 的 影 响 试 验 共 分 3 个 组, 分 别 为 组 ( 基 础 饲 料 对 照 组 ), 组 (1% 中 草 药 饲 料 组 ), 组 (6 天 投 喂 1% 中 草 药 饲 料 6 天 投 喂 基 础 饲 料 ) 试 验 期 间 在 不 同 时 间 取 样 测 定 血 淋 巴 酚 氧 化 酶 溶 菌 酶 超 氧 化 物 歧 化 酶 的 活 性, 并 在 14 8 天 分 别 进 行 副 溶 血 弧 菌 感 染 凡 纳 滨 对 虾 结 果 表 明 : 组 对 虾 的 增 长 率 和 相 对 增 重 率 均 显 著 高 于 组 和 组 (P<0.05); 组 对 虾 的 增 长 率 和 相 对 增 重 率 略 低 于 对 照 组, 但 无 显 著 差 异 (P>0.05) 饲 料 中 添 加 复 方 中 草 药 可 显 著 提 高 对 虾 免 疫 相 关 酶 (PO LSZ SOD) 活 性 养 殖 第 14 8 天 的 弧 菌 感 染 试 验 结 果 显 示 : 组 的 免 疫 保 护 率 分 别 为 68.3% 91.6%, 组 的 免 疫 保 护 率 分 别 为 7.% 45.8% 说 明 中 草 药 可 改 善 对 虾 对 弧 菌 性 疾 病 的 抵 抗 能 力, 并 随 投 喂 时 间 的 增 加 而 增 强 关 键 词 : 中 草 药 ; 凡 纳 滨 对 虾 ; 非 特 异 性 免 疫 ; 抗 病 力 中 图 分 类 号 :S968. 文 献 标 志 码 :A 论 文 编 号 :01-64 Effects of Compound Chinese Herbs on Growth Performance and Nonspecific Immunity of Litopenaeus vannamei Wang Yun 1,, Li Jian, Chen Ping, Zhang Zhe 1, He Yuying, Li Jitao, Liu Deyue ( 1 Key Laboratory of Aquatic Product Processing, Ministry of Agriculture/ South China Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Guangzhou ; Key Laboratory of Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture/ Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao Shandong 66071) Abstract: In order to improve the growth performance and disease resistance ability of Litopenaeus vannamei, compound Chinese herb composed of equal Radix astragalus, Rheum officinale, Glycyrrhiza uralensis and Radix scutellaria were supplemented into shrimp diets to investigate its effects on growth performance and non-specific immunity of Litopenaeus vannamei. Shrimp Litopenaeus vannamei was randomly divided into three treatments: control treatment was fed with basic diet; group was fed with basic diet supplemented with 1% compound Chinese herb continuously; group fed with herb-containing diet for 6 d and then with basic diet for 6 d. The growth performance and the activities of hydrolymph phenoloxidase (PO), lysozyme (LSZ) and superoxide dismutase (SOD) at different sample time were measured. The shrimps were challenged with Vibrio parahaemolyticus at the 14 th day and 8 th day respectively. The results indicated that the growth 基 金 项 目 : 中 央 级 公 益 性 科 研 院 所 基 本 科 研 业 务 费 专 项 资 金 中 草 药 对 养 殖 对 虾 的 生 长 代 谢 及 作 用 机 理 的 研 究 (011TS05); 科 技 部 科 研 院 所 社 会 公 益 研 究 专 项 海 水 鱼 类 养 殖 质 量 安 全 控 制 技 术 研 究 (004DIB4J165) 第 一 作 者 简 介 : 王 芸, 女,1978 年 出 生, 河 南 南 阳 人, 博 士, 主 要 从 事 水 产 健 康 养 殖 通 信 地 址 : 广 东 省 广 州 市 新 港 西 路 31 号 南 海 水 产 研 究 所,Tel: , [email protected] 通 讯 作 者 : 李 健, 男,1961 年 出 生, 研 究 员, 博 士 生 导 师 研 究 方 向 : 海 水 健 康 养 殖 通 信 地 址 :66071 山 东 省 青 岛 市 南 京 路 106 号 黄 海 水 产 研 究 所, Tel: , [email protected] 收 稿 日 期 : , 修 回 日 期 :

2 110 中 国 农 学 通 报 rate and weight gain rate of shrimp in group increased significantly than that in control group (P<0.05); there was no significant difference of growth rate and weight gain rate between and control group (P> 0.05). The activities of immune enzymes were improved significantly when shrimp was fed diets supplemented with 1% compound Chinese herb. The challenge test demonstrated the immune protective rate of treatment and was 68.3%, 7.% at the 14 th day, and 91.6%, 45.8% at the 8 th day respectively. The results indicated the compound Chinese herb could improve the disease resistance of Litopenaeus vannamei to V. parahaemolyticus. Key words: Chinese herbal medicine; Litopenaeus vannamei; nonspecific immunity; disease resistance 0 引 言 凡 纳 滨 对 虾 (Litopenaeus vannamei) 是 目 前 世 界 养 [1] 殖 产 量 最 高 的 三 大 虾 种 之 一, 该 虾 生 长 速 度 快 含 肉 [] 量 大 抗 逆 能 力 强 营 养 要 求 低 年 在 中 国 引 种 并 饲 养 成 功, 现 在 已 是 中 国 对 虾 养 殖 面 积 最 大 产 量 最 高 的 对 虾 品 种 随 着 对 虾 养 殖 强 度 增 加, 对 虾 的 病 害 日 益 严 重, 如 红 体 病 红 腿 病 白 斑 病 肠 炎 病 [3-4] 烂 鳃 病 等, 使 对 虾 养 殖 业 蒙 受 巨 大 损 失, 所 以 研 究 其 发 病 原 因 寻 找 诊 断 控 制 和 防 治 它 们 的 方 法 是 当 前 对 [5-6] 虾 养 殖 业 亟 待 解 决 的 问 题 之 一 中 草 药 具 有 天 然 毒 副 作 用 小 资 源 丰 富 以 及 性 能 [7-8] 多 样 性 等 优 点, 研 究 结 果 表 明 : 在 饲 料 中 添 加 中 草 药 能 够 提 高 凡 纳 滨 对 虾 的 生 长 性 能, 降 低 饲 料 系 数, 提 高 饲 料 的 利 用 率, 改 善 对 虾 肠 道 微 生 物 菌 群 组 成, 是 其 他 用 抗 菌 素 和 化 学 药 物 的 替 代 品 之 一, 在 水 产 养 殖 应 用 [9-1] 中 备 受 关 注 本 课 题 组 通 过 生 长 和 细 菌 感 染 试 验 筛 选 出 了 对 凡 纳 滨 对 虾 具 有 明 显 促 生 长 及 非 特 异 性 免 [13] 疫 调 节 功 能 的 单 味 中 草 药, 为 进 一 步 发 挥 单 味 中 草 药 之 间 的 协 同 作 用, 按 照 中 医 理 论 中 物 间 的 相 生 ( 滋 生 [14] 和 协 同 作 用 ) 原 理, 配 成 复 方 中 草 药 制 剂, 以 提 高 凡 纳 滨 对 虾 的 生 长 性 能 和 抵 抗 细 菌 性 疾 病 的 能 力 养 殖 效 益, 改 善 养 殖 环 境 促 进 对 虾 养 殖 产 业 的 可 持 续 发 展 1 材 料 方 法 1.1 药 饵 的 配 制 黄 芪 大 黄 甘 草 和 黄 芩 均 购 自 青 岛 市 同 仁 堂 药 店 称 取 干 燥 切 碎 的 黄 芪 大 黄 甘 草 和 黄 芩 各 15 g 放 入 1 L 的 烧 杯 中, 加 水 浸 泡 3 h, 煎 煮 3 次, 将 3 次 药 液 集 中, 并 与 6 kg 全 价 配 合 饲 料 ( 基 础 饲 料, 青 岛 长 生 中 科 水 产 饲 料 有 限 公 司 ) 混 匀, 用 小 型 颗 粒 饲 料 机 分 别 制 成 药 饵, 相 当 于 饲 料 中 含 复 方 中 草 药 1%, 烘 干 备 用 配 合 饲 料 的 营 养 成 分 分 析 见 表 1 1. 试 验 对 虾 及 饲 养 管 理 凡 纳 滨 对 虾 购 于 山 东 省 海 阳 市 大 闫 家 镇 对 虾 养 殖 场 挑 选 健 康 规 格 整 齐 的 凡 纳 滨 对 虾, 体 长 (8.7±0.3) cm, 体 重 (7.7±0.6) g 暂 养 1 周 后 分 成 3 组, 表 1 凡 纳 滨 对 虾 饲 料 营 养 成 分 分 析 成 分 粗 蛋 白 粗 脂 肪 粗 纤 维 粗 灰 分 含 量 /% 成 分 钙 总 磷 水 分 赖 氨 酸 含 量 /% 分 别 是 :1% 复 方 中 草 药 连 续 投 喂 组 ;:1% 复 方 中 草 药 间 断 投 喂 组 (6 天 投 喂 含 1% 复 方 中 草 药 饲 料 -6 天 投 喂 基 础 饲 料 );: 对 照 组 ( 投 喂 基 础 饲 料 ), 每 组 设 3 个 平 行, 每 组 40 尾 饲 养 于 500 L 海 水 的 PVC 中,4 h 连 续 通 气 ; 每 天 投 喂 3 次, 均 为 饱 食 投 喂 量 ; 水 温 维 持 在 8.5~30, 每 天 换 水 1 次, 每 次 换 水 1/3 1.3 对 虾 血 清 获 取 在 试 验 开 始 的 天 取 血, 取 血 时 用 1 ml 注 射 器 从 对 虾 围 心 腔 抽 取 血 淋 巴 液, 每 组 取 5 尾 虾 的 血 液 合 并 置 于 无 菌 离 心 管, 4 冰 箱 保 存, 待 血 液 凝 固 后,5000 r/min 离 心 10 min 即 得 血 清,-80 保 存 1.4 生 长 性 能 测 定 试 验 开 始 及 结 束 时 测 量 对 虾 的 体 长 体 重, 计 算 体 长 增 长 率 相 对 增 重 率, 计 算 公 式 如 下 : 体 长 增 长 率 =[( 试 验 末 体 长 试 验 初 体 长 )/ 试 验 初 体 长 ] 100%; 相 对 增 重 率 =[( 试 验 末 体 重 试 验 初 体 重 )/ 试 验 初 体 重 ] 100% 1.5 非 特 异 性 免 疫 因 子 的 测 定 酚 氧 化 酶 (Phenoloxidase,PO) 活 力 用 改 进 的 Ashida [15] 方 法 进 行 测 定 以 L-DOPA 为 底 物 ( 购 自 于 Sigma 公 司 ), 在 96 孔 酶 标 板 中 分 别 加 入 10 μl 血 清 与 00 μl 0.1 mol/l ph 6.0 磷 酸 钾 缓 冲 液, 振 荡 混 匀 后 向 各 样 品 孔 中 加 入 10 μl 0.01 mol/l 的 L-DOPA 溶 液, 在 波 长 为 490 nm 处 读 取 吸 光 值, 并 每 隔 4 min 读 取 1 次 酶 活 力 以 试 验 条 件 下 OD 490 每 分 钟 增 加 为 1

3 王 芸 等 : 复 方 中 草 药 对 凡 纳 滨 对 虾 生 长 及 非 特 异 性 免 疫 功 能 的 影 响 111 个 酶 活 力 单 位 溶 壁 微 球 菌 (Micrococusly soleeikiticus) 购 自 于 Sigma 公 司 血 清 溶 菌 酶 (Lysozyme,LSZ) 活 力 按 照 改 进 了 的 Hulmark [16] 方 法 测 定 使 用 0.1 mol/l (ph 6.4) 的 磷 酸 钾 缓 冲 液 溶 解 溶 壁 微 球 菌 冻 干 粉 末, 调 整 菌 液 浓 度 的 OD 值 (OD 570=0.3), 取 3 ml 该 菌 液 于 玻 璃 试 管 内 置 冰 浴 中, 再 加 入 50 μl 待 测 血 清, 立 即 于 570 nm 下 测 定 吸 光 值 A 0, 然 后 将 该 试 管 在 37 水 浴 中 作 用 30 min, 取 出 后 立 即 置 于 冰 浴 中 终 止 反 应, 测 定 A 值 溶 菌 酶 活 力 (U/mL)=(A 0-A)/A 超 氧 化 物 歧 化 酶 (Superoxide dismutase,sod) 活 力 的 测 定 采 用 黄 嘌 呤 氧 化 法 改 进 后 的 羟 胺 法, 试 剂 盒 购 自 南 京 建 成 生 物 工 程 研 究 所 SOD 酶 活 力 单 位 定 义 为 : 每 毫 升 反 应 液 中 SOD 抑 制 率 达 50% 时 所 对 应 的 SOD 量 为 1 个 酶 活 力 单 位 (U/mL) 1.6 弧 菌 感 染 试 验 试 验 开 始 后 的 14 8 天 分 别 进 行 感 染 试 验 每 组 取 30 尾 对 虾 用 副 溶 血 弧 菌 (Vibrio parahaemolyticus) 进 行 感 染, 预 试 验 确 定 副 溶 血 弧 菌 的 感 染 浓 度 为 cells/ml, 注 射 剂 量 50 µl/ 尾, 预 试 验 证 明, 感 染 后 7 天 左 右 对 虾 的 死 亡 趋 于 稳 定, 故 本 试 验 记 录 感 染 后 7 天 内 各 组 的 累 计 死 亡 率, 并 计 算 相 对 免 疫 保 护 率 (Relative Percent Survival,RPS): 1.7 统 计 分 析 体 长 增 长 率 相 对 增 重 率 及 非 特 异 性 免 疫 因 子 的 数 据 用 SPSS 16.0 统 计 软 件 进 行 处 理, 用 ANOVA 的 方 法 进 行 分 析 当 差 异 显 著 (P<0.05), 用 Tukey s 检 测 法 进 行 均 值 间 多 重 比 较 结 果 与 分 析.1 复 方 中 草 药 对 凡 纳 滨 对 虾 生 长 的 影 响 由 表 可 以 看 出, 连 续 投 喂 含 1% 的 复 方 中 草 药 饲 料 后, 凡 纳 滨 对 虾 的 增 长 率 和 相 对 增 重 率 均 显 著 高 于 对 照 组 (P<0.05) 组 的 增 长 率 和 相 对 增 重 率 较 组 分 别 提 高 % 4.1%, 即 连 续 投 喂 含 有 1% 复 方 中 草 药 饲 料 对 凡 纳 滨 对 虾 具 有 明 显 的 促 生 长 作 用 间 断 性 摄 食 含 1% 复 方 中 草 药 饲 料, 凡 纳 滨 对 虾 的 增 长 率 与 对 照 组 之 间 无 显 著 差 异 (P>0.05). 复 方 中 草 药 对 凡 纳 滨 对 虾 血 清 酚 氧 化 酶 (PO) 活 力 的 影 响 结 果 见 表 3, 投 喂 含 1% 复 方 中 草 药 饲 料 7 天, 表 复 方 中 草 药 对 凡 纳 滨 对 虾 生 长 的 影 响 组 别 初 始 体 长 /cm 终 末 体 长 /cm 体 长 增 长 率 /% 初 始 体 重 /g 终 末 体 重 /g 相 对 增 重 率 /% 8.7± ± ±0.6b 7.7± ± ±.0b 8.7± ± ±0.7a 7.8± ± ±1.5a 8.7± ± ±1.3b 7.7± ± ±1.3b 注 : 同 列 肩 标 没 有 相 同 字 母 者 表 示 差 异 显 著 (P<0.05) 表 3 复 方 中 草 药 对 凡 纳 滨 对 虾 血 清 酚 氧 化 酶 活 力 的 影 响 分 组 ( 不 同 投 喂 方 式 ) 天 数 /d ±0.018a.099±0.056a 3.959±0.071a 3.095±0.177b.758±0.041a 3.138±0.087a.598±0.070a 1.991±0.080a.511±0.113a 1.441±0.075ab 1.517±0.106a 1.595±0.010a.053±0.060a 4.055±0.046a.331±0.130a.104±0.056b.185±0.139b.387±0.061b.01±0.105a.50±0.057a 1.83±0.11b 1.708±0.171a 1.594±0.016a 1.978±0.180a 3.083±0.14b 3.04±0.158b.069±0.089b.73±0.10b.316±0.160b 1.545±0.099b 1.490±0.034b 1.606±0.159a 1.594±0.054a 注 : 同 行 肩 标 没 有 相 同 字 母 者 表 示 差 异 显 著 (P<0.05) 组 和 组 凡 纳 滨 对 虾 血 清 PO 活 力 显 著 的 高 于 组 (P<0.05), 分 别 较 组 提 高 了 8.4% 31.5% 这 说 明 添 加 1% 复 方 中 草 药 的 饲 料 饲 喂 凡 纳 滨 对 虾 7 天 可 激 活 血 清 PO 活 力 从 11~19 天 组 PO 活 力 显 著 高 于 组 (P<0.05), 从 1~4 天 组 PO 活 力 与 组 无 显 著 差 异 (P>0.05) 组 PO 活 力 7 天 后 开 始 明 显 降 低,9 天 显 著 低 于 对 照 组 (P<0.05), 直 到 再 次 投 喂 1% 复 方 中 草 药 饲 料, 如 17~19 天 显 著 高 于 对 照 组 (P<0.05) 这 说 明 该 复 方 中 草 药 可 以 明 显 提 高 凡 纳 滨 对 虾 PO 活 力, 停 止 投 喂 含 中 草 药 的 饲 料 后 凡 纳 滨 对 虾 血 清 中 的 PO 活 力 显 著 降 低.3 复 方 中 草 药 对 凡 纳 滨 对 虾 血 清 溶 菌 酶 (LSZ) 活 力 的 影 响 由 表 4 可 见, 投 喂 含 1% 复 方 中 草 药 饲 料 7 天, 组 和 组 凡 纳 滨 对 虾 血 清 LSZ 活 力 显 著 的 高

4 11 中 国 农 学 通 报 表 4 复 方 中 草 药 对 凡 纳 滨 对 虾 血 清 溶 菌 酶 活 力 的 影 响 表 5 复 方 中 草 药 对 凡 纳 滨 对 虾 血 清 超 氧 化 物 歧 化 酶 活 力 的 影 响 天 数 /d 分 组 ( 不 同 投 喂 方 式 ) 天 数 /d 分 组 ( 不 同 投 喂 方 式 ) 1 0.9±0.00a 0.93±0.00a 0.93±0.00a ±4.41a 358.4±3.3a ±0.61a ±0.064a 0.56±0.041a 0.690±0.04b ±5.31a ±4.76a 313.3±4.19a ±0.116a 1.633±0.048a 1.353±0.139b ±4.99a ±4.84b ±6.4c ±0.07a 0.6±0.040b 0.761±0.07c ±.78a 419.5±7.36b ±6.41b ±0.048a 0.748±0.04a 0.780±0.150a ±3.63a 48.36±1.31b 43.39±.98b ±0.003a 1.581±0.003b 1.458±0.00c ±3.33ab ±3.16a 45.44±3.31b ±0.013a 0.778±0.05b 1.308±0.007c ±1.14a ±1.73b 43.78±1.47c ±0.010a 0.785±0.014b 1.97±0.006c ±8.3a ±4.00b ±1.74c ±0.004a 0.617±0.013b 0.65±0.005c ±5.56a ±0.64a ±6.50b ±0.010a 0.909±0.00b 0.771±0.013c ±.37a ±6.7b 45.3±9.88b ±0.080a 0.516±0.013b 0.30±0.01c ±0.7a 41.47±9.43b 438.4±0.78a 注 : 同 行 肩 标 没 有 相 同 字 母 者 表 示 差 异 显 著 (P<0.05) 于 组 (P<0.05), 分 别 较 组 提 高 了 8.1% 和 0.7% 这 说 明 用 1% 复 方 中 草 药 饲 料 饲 喂 凡 纳 滨 对 虾 7 天 可 激 活 血 清 LSZ 活 力 从 7~4 天 组 LSZ 活 力 基 本 均 显 著 高 于 组 (P<0.05), 但 是 11 天 组 LSZ 活 力 与 组 无 显 著 差 异 (P>0.05), 且 17 天 组 LSZ 活 力 显 著 低 于 组 (P<0.05) 组 LSZ 活 力 7 天 后 开 始 明 显 降 低,9 天 显 著 低 于 组 (P<0.05), 从 15~19 天 显 著 低 于 组 (P<0.05), 直 到 1~4 天 显 著 高 于 组 (P<0.05) 这 说 明 添 加 1% 复 方 中 草 药 的 饲 料 可 以 明 显 提 高 凡 纳 滨 对 虾 血 清 溶 菌 酶 活 力.4 复 方 中 草 药 对 凡 纳 滨 对 虾 血 清 超 氧 化 物 歧 化 酶 (SOD) 活 力 的 影 响 投 喂 含 有 1% 复 方 中 草 药 饲 料 7 天, 组 和 组 凡 纳 滨 对 虾 血 清 SOD 酶 活 力 显 著 的 高 于 组 (P<0.05), 分 别 较 提 高 了 10.8% 4.9% 这 说 明 1% 复 方 中 草 药 的 饲 料 饲 喂 凡 纳 滨 对 虾 7 天 可 激 活 血 清 SOD 活 力 从 14~1 天 组 SOD 活 力 均 显 著 高 于 组 (P<0.05), 除 了 13~15 天 低 于 组 组 SOD 活 力 7 天 后 开 始 明 显 降 低,13 天 显 著 低 于 组 (P<0.05), 从 15~19 天 显 著 的 高 于 组 (P<0.05) 这 说 明 添 加 1% 复 方 中 草 药 的 饲 料 可 以 明 显 提 高 凡 纳 滨 对 虾 血 清 SOD 活 力, 结 果 见 表 5.5 副 溶 血 弧 菌 感 染 试 验 结 果 试 验 开 始 后 第 14 天 注 射 副 溶 血 弧 菌 感 染 凡 纳 滨 对 虾, 观 察 了 7 天 内 各 组 累 计 死 亡 率, 结 果 见 图 1, 组 的 累 计 死 亡 率 为 36.7%, 组 和 组 的 累 计 死 亡 率 分 别 为 13.3% 6.7%, 均 低 于 组, 免 疫 保 护 率 达 到 63.8% 7.% 结 果 表 明 : 投 喂 含 有 复 方 中 草 注 : 同 行 肩 标 没 有 相 同 字 母 者 表 示 差 异 显 著 (P<0.05) 累 计 死 亡 率 时 间 图 1 养 殖 14 天 副 溶 血 弧 菌 感 染 后 各 组 对 虾 的 累 积 死 亡 率 药 的 饲 料 能 够 提 高 凡 纳 滨 对 虾 抵 抗 由 副 溶 血 弧 菌 引 起 的 细 菌 性 疾 病 的 能 力 试 验 开 始 后 8 天 注 射 副 溶 血 弧 菌 感 染 凡 纳 滨 对 虾, 观 察 了 7 天 内 各 组 累 计 死 亡 率, 结 果 见 图 组 累 计 死 亡 率 时 间 图 养 殖 8 天 副 溶 血 弧 菌 感 染 后 各 组 对 虾 的 累 积 死 亡 率

5 王 芸 等 : 复 方 中 草 药 对 凡 纳 滨 对 虾 生 长 及 非 特 异 性 免 疫 功 能 的 影 响 113 的 累 计 死 亡 率 为 80%, 组 和 组 的 累 计 死 亡 率 分 别 为 6.7% 43.4%, 均 低 于 组, 免 疫 保 护 率 达 到 91.6% 45.8% 3 结 论 与 讨 论 3.1 中 草 药 对 凡 纳 滨 对 虾 生 长 的 影 响 已 有 研 究 结 果 表 明 复 方 中 草 药 制 剂 对 鱼 类 和 对 虾 具 有 促 生 长 作 用, 这 可 能 与 中 草 药 中 含 有 多 种 营 养 成 分 生 物 活 性 物 质 及 提 高 水 产 动 物 消 化 系 统 酶 活 性 有 [17] [1] 关 王 吉 桥 等 报 道 使 用 含 有 金 银 花 人 参 和 山 楂 等 中 草 药 饲 料 投 喂 3 种 规 格 的 牙 鲆, 其 增 重 率 分 别 高 于 对 照 组, 胃 和 肠 蛋 白 酶 淀 粉 酶 活 性 分 别 较 对 照 组 [18] 显 著 提 高 ; 丁 贤 等 报 道 了 由 板 蓝 根 地 丁 金 银 花 大 青 叶 黄 芪 等 组 成 的 复 方 中 草 药 可 以 显 著 提 高 对 虾 肠 道 消 化 酶 活 性, 从 而 利 于 养 分 的 消 化, 促 进 生 长 研 究 发 现 黄 芪 和 黄 芩 两 味 单 方 中 草 药 添 加 入 饲 料 中 明 显 促 进 鲤 鱼 的 生 长, 增 加 鲤 鱼 肠 道 细 菌 数 量, 改 变 肠 道 菌 群 组 成 [19] 本 研 究 亦 表 明 : 由 黄 芪 黄 芩 甘 草 等 组 成 的 复 方 制 剂, 通 过 连 续 投 喂 的 方 式 可 以 明 显 促 进 对 虾 的 生 长, 这 与 已 有 的 报 道 结 果 类 似, 其 机 理 推 测 可 能 是 通 过 调 节 对 虾 肠 道 消 化 酶 和 肠 道 菌 群 的 组 成 而 促 进 对 饲 料 中 营 养 成 分 的 消 化 和 吸 收 但 是 本 实 验 也 发 现 间 断 性 投 喂 该 复 方 中 草 药 制 剂, 促 生 长 效 果 不 明 显 这 说 明 复 方 中 草 药 的 促 生 长 作 用 应 该 是 一 个 累 积 的 过 程, 间 断 性 投 喂 方 式 不 利 于 中 草 药 作 用 的 发 挥 但 具 体 的 原 因 有 待 于 进 一 步 的 研 究 3. 中 草 药 对 凡 纳 滨 对 虾 非 特 异 性 免 疫 功 能 的 影 响 甲 壳 动 物 的 免 疫 系 统 以 非 特 异 性 免 疫 为 主,PO LSZ SOD 在 异 己 物 质 的 识 别 和 免 疫 防 御 方 面 起 重 要 作 用 对 虾 血 清 中 的 非 特 异 性 免 疫 因 子 活 力 被 作 为 健 康 评 价 的 指 标, 对 于 增 强 疾 病 的 抵 抗 力 发 挥 着 重 要 作 用 [0-] 本 研 究 结 果 表 明, 连 续 投 喂 含 有 该 复 方 中 草 药 的 饲 料 能 显 著 提 高 凡 纳 滨 对 虾 血 清 的 PO LSZ SOD [3] 活 力, 这 与 已 有 的 研 究 结 果 类 似 李 义 等 用 黄 芪 党 参 大 黄 板 蓝 根 等 十 余 味 中 草 药 添 加 到 饲 料 中, 可 以 显 著 提 高 罗 氏 沼 虾 的 免 疫 功 能, 有 效 地 预 防 嗜 水 气 单 [4] 胞 菌 ;Jian 等 研 究 了 由 黄 芪 和 当 归 按 5:1 组 成 的 中 草 药 可 以 显 著 提 高 大 黄 鱼 的 非 特 异 性 免 疫 功 能 及 抵 抗 由 溶 藻 胶 弧 菌 引 起 的 细 菌 性 疾 病 同 时 本 研 究 发 现 间 断 性 投 喂 方 式 下, 凡 纳 滨 对 虾 血 清 的 PO LSZ SOD 活 力 仅 在 投 喂 复 方 中 草 药 饲 料 期 间 显 著 高 于 对 照 组, 改 投 基 础 饲 料 后 上 述 酶 活 力 显 著 下 降 结 果 表 明 : 该 复 方 中 草 药 是 一 种 良 好 的 免 疫 调 节 剂, 其 连 续 添 加 饲 喂 凡 纳 滨 对 虾 效 果 更 好, 同 时 此 复 方 中 草 药 发 挥 药 效 所 需 要 的 时 间 大 概 是 7 天 左 右 3.3 中 草 药 对 凡 纳 滨 对 虾 抵 抗 细 菌 性 疾 病 能 力 的 影 响 凡 纳 滨 对 虾 的 体 内 感 染 试 验 是 评 价 复 方 中 草 药 添 加 剂 效 果 的 最 佳 方 法 个 不 同 时 间 的 感 染 试 验 结 果 均 表 明 此 复 方 中 草 药 制 剂 可 以 提 高 凡 纳 滨 对 虾 抵 抗 副 溶 血 弧 菌 感 染 的 能 力 组 和 组 14 天 感 染 试 验 的 免 疫 保 护 率 分 别 达 到 了 68.3% 7.% 组 和 组 8d 感 染 试 验 的 免 疫 保 护 率 分 别 达 到 了 91.6% 45.8% 经 1 个 月 的 对 虾 饲 养, 随 着 养 殖 时 间 的 延 长, 凡 纳 滨 对 虾 抵 抗 细 菌 性 疾 病 的 能 力 也 在 逐 渐 的 增 强 所 以 可 以 充 分 说 明 此 复 方 中 草 药 制 剂 能 够 增 强 凡 纳 滨 对 虾 抵 抗 细 菌 性 疾 病 的 能 力 总 之, 复 方 中 草 药 制 剂 可 以 改 善 凡 纳 滨 对 虾 的 生 长 性 能 及 免 疫 功 能, 并 且 不 同 的 投 喂 方 式 对 其 应 用 效 果 有 明 显 的 影 响, 连 续 投 喂 方 式 在 一 定 程 度 上 可 以 明 显 促 进 对 虾 的 生 长 及 提 高 对 虾 的 非 特 异 性 免 疫 功 能, 间 断 性 投 喂 方 式 却 只 能 阶 段 性 提 高 对 虾 的 非 特 异 性 免 疫 能 力 所 以 综 合 评 价 认 为 在 凡 纳 滨 对 虾 饲 料 中 使 用 该 复 方 中 草 药 时 建 议 采 用 连 续 投 喂 的 方 式 参 考 文 献 [1] 王 兴 强, 马 甡, 董 双 林. 凡 纳 滨 对 虾 生 物 学 及 养 殖 生 态 学 研 究 进 展 [J]. 海 洋 湖 沼 通 报,004,4: [] 张 伟 权. 世 界 重 要 养 殖 品 种 南 美 白 对 虾 生 物 学 简 介 [J]. 海 洋 科 学,1990,3:69-7. [3] 孟 庆 显. 我 国 对 虾 疾 病 的 发 生 概 况 和 展 望 [J]. 现 代 渔 业 信 息,199, 7(7):1-17. [4] 史 丽 明. 国 外 的 对 虾 疾 病 及 其 防 治 方 法 [J]. 海 洋 渔 业,1991,4(1-6): [5] 王 焕 明, 陈 浩 如. 对 虾 疾 病 与 防 治 技 术 [J]. 水 产 科 学,1990,9(4): [6] 赵 红 霞, 詹 勇, 许 梓 荣. 对 虾 疾 病 发 生 与 防 治 的 研 究 进 展 [J]. 海 洋 渔 业,00,1: [7] 候 金 全. 十 八 种 动 植 物 及 其 制 剂 SOD 含 量 探 讨 [J]. 中 国 生 化 药 物 杂 志,1991,():5-6. [8] 武 瑞, 康 世 良. 中 草 药 饲 料 添 加 剂 的 免 疫 功 能 与 应 用 前 景 [J]. 畜 牧 业,001,9:10-1. [9] 丁 贤, 林 黑 着, 李 卓 佳, 等. 植 物 提 取 物 对 凡 纳 滨 对 虾 生 长 消 化 酶 及 免 疫 因 子 的 影 响 研 究 [J]. 热 带 海 洋 学 报,008, 7(5):66-7. [10] 于 明 超, 李 卓 佳, 林 黑 着, 等. 饲 料 中 添 加 芽 孢 杆 菌 和 中 草 药 制 剂 对 凡 纳 滨 对 虾 生 长 及 肠 道 菌 群 的 影 响 [J]. 热 带 海 洋 学 报,010,9(4): [11] Harikrishnan R, Balasundaram C, Heo M S. Impact of plant products on innate and adaptive immune system of cultured finfish and shellfish[j].aquaculture,317(1-4):1-15. [1] 王 吉 桥, 孙 永 新, 张 剑 诚. 金 银 花 等 复 方 中 草 药 对 牙 鲆 生 长 消 化 和 免 疫 能 力 的 影 响 [J]. 水 产 学 报,006,30(1): [13] 王 芸, 李 健, 刘 淇, 等.5 种 中 草 药 对 凡 纳 滨 对 虾 生 长 及 非 特 异 性 免 疫 功 能 的 影 响 [J]. 安 徽 农 业 科 学,007,35(6):

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