连接A

Size: px

Start display at page:

Download "连接A"

缠裘
5 years ago
Views:

1 16 doi /j.issn 基础研究对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的肠杆菌科细菌产酶机制分析王婷婷李冬冬陶传敏谢轶康梅陈知行四川大学华西医院实验医学科四川成都 641 摘要目的了解临床分离肠杆菌菌种分布及对碳青霉烯类抗菌药物的耐药现状和分子机制方法收集四川大学华西医院 29~21 年分离到的对碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科非重复菌株共 45 株测定其对常用抗菌药物的最低抑菌浓度 MIC 以及产酶表型和 PCR 检测产酶分子机制结果对碳青霉烯类药物敏感性降低的 45 株肠杆菌科细菌中 17 株菌对亚胺培南中介或耐药 21 株对美罗培南中介或耐药 36 株对厄他培南中介或耐药绝大多数菌株对头孢菌素类耐药受试菌株中改良 Hodge 试验阳性检出率最高 77.8% 其次为 EDTA 纸片增效试验 57.8% 和 PBA 纸片增效试验 22.2% blatem 和 blactx-m 基因检出率分别为 6.% 53.3%和 15.6% 同时携带 2 种及以上基因的检出率为 4% blaimp 基因检出率为 48.9% 4株菌 3株产酸克雷伯菌 1株阴沟肠杆菌为blaKPC基因阳性检出率为8.9% 且位于质粒上结论研究发现肠杆菌科细菌产酶是对碳青霉烯类药物敏感性下降的主要机制产碳青霉烯酶或合并多种β-内酰胺酶可引起非敏感或耐药的出现本研究报道了在西南地区发现在质粒携带的KPC-2型酶可能引起不同菌种间水平传播需引起足够重视关键词肠杆菌科碳青霉烯类碳青霉烯酶 KPC 耐药性 Analysis of the carbapenemase-producing mechanism of Enterobacteriaceae with decreased susceptibility to carbapenems WANG Tingting, LI Dongdong, TAO Chuanmin, XIE Yi, KANG Mei, CHEN Zhixing Department of Laboratory Medicine, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu 641, China Abtract: Objectives To analyze the distribution of Enterobacteriaceae isolated from West China Hospital, investigate the antibiotic resistance profile of Enterobacteriaceae with decreased susceptibility to carbapenems and explore the molecular mechanism. Methods Forty-five Enterobacteriaceae strains resistant or with reduced susceptibility to carbapenems were isolated from patients in West China Hospital. The antimicrobial susceptibility and carbapenemase-producing phenotypes of the bacteria were examined and specific PCR were performed to determine the molecular mechanism. Results Of the 45 isolates, 17, 21 and 36 were resistant or intermediate strains to imipenem, meropenem and ertapenem, respectively. The majority of these isolates showed resistance to cephalosporins. The modified Hodge test resulted in the highest positivity rate (77.8% ), followed by EDTA disc test (57.8% ) and PBA disc test (22.2% ). BlaTEM, and blactx-m were detected in 6.%, 53.3% and 15.6% of these strains with reduced susceptibility. The rate of strains carrying 2 or more genes was 4%, and the detection rate of blaimp was 48.9%. BlaKPC was identified in 4 (8.9% ) high-level resistant strains and confirmed to locate on the plasmid. Conclusion Production of carbapenemase contributes to reduced susceptibility of carbapenems in Enterobacteriaceae. The presence of blakpc, MBL and ESBL, and their possible combinations can be the main factor contributing to carbapenem resistance or reduced susceptibility in Enterobacteriaceae. The KPC-2 carbapenemase gene located on the plasmids we found in this study can cause potential horizontal transmission across strains. Key words: Enterobacteriaceae; Carbapenems; carbapenemase; KPC; resistance 近年来随着β-内酰胺类抗生素在临床的广泛应用细菌对β-内酰胺类抗生素的耐药率日趋增高产β-内酰胺酶是其主要原因占 8% 多重耐药菌特别是对收稿日期基金项目国家自然科学基金 /H5 Supported by National Natural Science Foundation of China ( / H5). 作者简介王婷婷硕士检验技师电话 tingting23.1@163.com 通信作者谢轶医学博士副主任技师电话 xie_yi_77@163.com 碳青酶烯类抗菌药物耐药的肠杆菌使临床治疗面临严峻挑战目前临床主要的碳青霉烯类药物包括亚胺培南美罗培南和厄他培南在国内外均有敏感率降低的报道 1-3 并且发现肠杆菌科细菌碳青霉烯的耐药机制主要是产碳青霉烯酶碳青霉烯酶能水解大部分β-内酰胺类对碳青霉烯类药物水解率高包括染色体介导的 A 类酶如 NMC-A IMI 和 SME 8-9 质粒介导的 A 类酶如 KPC 和 GES 金属β-内酰胺酶(MBL B 类) 主要包括 IMP VIM 以及 D 类即 OXA 酶其中 D类酶对碳青霉烯类的水解力弱

2 161 碳青霉烯酶能水解大部分的 β- 内酰胺类抗生素, 多 [2-21] 数产酶菌株对亚胺培南都仅表现出敏感性降低, 及早筛查对碳青霉烯类抗菌药物非敏感菌株十分重要 CLSI 推荐的改良 Hodge 试验 (MHT) 是检测肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的表型方法, 能检测到活性较低的碳青霉烯酶但表型试验不可避免的存在假阳性,PCR 检测基因型则可更加准确的确证其产酶类型及时了解临床分离菌株的耐药表型与基因型, 对指导临床合理使用抗生素延缓细菌耐药产生及时有效的控制耐药菌株播散具有十分重要的临床意义本研究收集华西医院对碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科细菌, 对其碳青霉烯类的耐药情况展开研究, 了解肠杆菌科细菌对碳青霉烯类的耐药水平, 解释其产酶类型和分子机制, 为临床用药和院内感染控制提供依据 1 材料和方法 1.1 菌株来源收集四川大学华西医院实验医学科临床微生物实验室 29 年 6 月 ~21 年 9 月期间住院病人中分离的对碳青霉烯类药物非敏感肠杆菌科非重复菌株共 45 株大肠埃希菌 ATCC25922 作为药敏质控菌株, 为本实验室保存菌株大肠埃希菌 J53 由四川大学华西医院感染性疾病中心实验室提供, 作为接合实验受体菌肺炎克雷伯菌 ZJK1 为 blakpc 阳性菌株, 由浙江大学附属第二医院惠赠 blaimp blavim 基因阳性菌株, 为本实验室保存菌株 1.2 主要抗菌药物来源及效价亚胺培南 / 西司他丁 1 1(Impenem, IMP): 杭州默沙东制药有限公司, 效价 5%; 厄他培南 (Ertapenem, ETP): 杭州默沙东制药有限公司, 效价 %; 美罗培南 (Meropenem, MEM): 住友制药 ( 苏州 ) 有限公司, 效价 82.4% 1.3 细菌菌种鉴定 45 株肠杆菌经 MicroScan WalkAway 96SI 或 VITEK2 Compact 全自动微生物鉴定系统鉴定至种, 必要时加入手工生化鉴定 1.4 细菌最低抑菌浓度测定微生物药敏系统的微量肉汤稀释法用 MicroScan WalkAway 96SI NC31 复合测试板和 VITEK2 Compact AST GN13 药敏卡对菌株进行药物敏试试验, 结果按美国临床实验室标准化研究所 (clinical laboratory standard institution, CLSI)M-S2(21) 文件规定 [22] 标准判定质控菌株 : 大肠埃希菌 ATCC 25922, 铜绿假单胞菌 ATCC 琼脂稀释法操作过程参照 CLSI M-S2 (21) 文件进行 [22], 结果解释以其中肠杆菌科 MIC 解释标准来判定敏感 (S) 中介 (I) 和耐药 (R) 质控菌株大肠埃希菌 ATCC 实验中进行琼脂稀释法的药物包括 : 亚胺培南厄他培南和美罗培南 1.5 细菌耐药表型检测改良 Hodge 试验 (MHT) CLSI M-S2(21) 标准方法 PBA 纸片增效法取预先配制的 4 mg/ml 的 PBA 溶液 1 μl 于亚胺培南 (IPM) 纸片上制成 PBA-IPM 纸片, 无菌环境下自然干燥将待检菌株的单个菌落配制成.5 MCF 菌悬液, 并涂抹 MH 平板平板分别贴 IPM 纸片和含 PBA 的 IPM 纸片 35 孵育过夜结果判定 :PBA-IPM 纸片与 IPM 纸片相比出现抑菌圈扩大现象 ( 5 mm) 为阳性, 如无此现象则为阴性 EDTA 纸片增效法取预先配制的.1 mol/l, ph8. 的 EDTA Na 2 溶液 1 μl 于头孢他啶 / 克拉维酸 (CAZ/CALV,3 μg/1 μg) 纸片上制成 EDTA Na 2 纸片, 无菌环境下自然干燥待检菌株单个菌落配制成.5 MCF 菌悬液, 均匀涂抹 MH 平板, 分别贴上 CAZ/ CAL 纸片和含 EDTA Na 2 的 CAZ/CAL 纸片 35 孵育过夜结果判定 : 加 EDTA Na 2 纸片与 CAZ/CAL 纸片相比出现抑菌圈扩大现象 ( 5 mm) 为阳性, 如无此现象则为阴性 1.6 细菌 DNA 提取及 PCR 扩增煮沸裂解法提取细菌 DNA, 扩增的碳青霉烯酶基因包括 blakpc blaimp blavim, 扩增的 β- 内酰胺酶基因包括 blatem blactx-m 自行设计引物, 由 Invitrogen 公司合成 ( 表 1) 2% 琼脂糖凝胶进行电泳检测电泳结果显示 blakpc 基因阳性的扩增产物送 Invitrogen 公司做测序分析和序列信息进对比表 1 PCR 引物序列 Tab.1 Sequence of the PCR primers Primer blakpc blatem blactx-m blavim blaimp Sequence (5' 3') F-ATGTCACTGTATCGCCGTCT R-TTTTCAGAGCCTTACTGCCC F-AGACGTCAGGTGGCACTTTTCGG R-CAAGGGGTCTGACGCTCA F-TTGTCGCTTCTTTACTCGC R-TATGGCGTTACCTTTGACC F-GGCCCATGGTTAAAAAATCACTGC R-CCGTTTCCGCTATTACAAACCGTTG F-GATTGCCGATGGTGTTTG R-AGCTCTACTGGACCGAAGC F-GGAATAGAGTGGCTTAATTCTC R-GTGATGCGTCYCCAAYTTCACT length ()

162 1.7 质粒接合试验分别以 blakpc 基因阳性临床菌株 H42 产酸克雷伯菌 H44 产酸克雷伯菌 H67 产酸克雷伯菌 H73 阴沟肠杆菌为供体菌以 E.coli J53 为受体菌将供体菌和受体菌混合培养取.

3 质粒接合试验分别以 blakpc 基因阳性临床菌株 H42 产酸克雷伯菌 H44 产酸克雷伯菌 H67 产酸克雷伯菌 H73 阴沟肠杆菌为供体菌以 E.coli J53 为受体菌将供体菌和受体菌混合培养取.1 ml 混合液涂抹于含 15 mg/l叠氮钠和2 mg/l厄他培南平板 35 孵育过夜后记录各平板上的菌落数将接合子转到含15 mg/l 叠氮钠和 2 mg/l 厄他培南平板 PCR 检测目的基因并鉴定接合子菌种 2 结果 2.1 细菌鉴定和药敏结果菌株来源及菌种分布本实验于 29 年 6 月~ 21 年 9 月期间收集了临床微生物实验室共 45 株对亚胺培南或厄他培南MIC值 2 μg/ml的肠杆菌科非重复临床分离菌株经 MicroScan WalkAway 96SI 或 VITEK2 Compact 全自动微生物鉴定仪鉴定至种包括阴沟肠杆菌 16 株肺炎克雷伯菌 11 株产酸克雷伯菌 4 株大肠埃希菌 4 株弗劳地枸橼酸 5 株解鸟氨酸克雷伯菌 1 株产气肠杆菌 1 株聚团肠杆菌 1 株居泉沙雷菌 1 株普城沙雷菌 1 株图 1 菌株主要分离自痰尿血及分泌物等标本 C.freundii 11% E.cloacae 36% K.pneumoniae 24% 图1 碳青霉烯类敏感性下降肠杆菌科细菌分离构成比 Fig.1 Constituent ratio of the Enterobacteriaceae decreased susceptibility to carbapenems 细菌耐药性分析在45株所研究的菌株中 17株菌对亚胺培南中介或耐药(MIC>4 μg/ml) 21 株对美罗培南中介或耐药(MIC>4 μg/ml) 36 株对厄他培南中介或耐药(MIC>2 μg/ml) 其他常见药物耐药分布如表 2 所示 2.2 细菌耐药表型结果在 45 株菌中共有 35 株细菌在 MHT 中显示为阳性结果检出率为 77.8% 35/45 PBA 纸片增效法结果 1 株菌为阳性检出率为 22.2% 1/45 EDTA 纸片增效法结果 26株菌为阳性检出率为57.8% 26/ PCR检测结果对45株菌做PCR检测其中4株菌的blaKPC基因为阳性检出率为8.9% PCR 检测结果显示45 株菌中 β-内酰胺酶blatem基因27株 27/45 6% 24 株 24/ % blactx-m 7 株 7/ % 同时携带两种基因的比率为 blatem % +blactx-m 6.7% blatem+blactx-m % 同时携带3种基因比率为6.7% 图2 2.4 测序结果 blakpc 基因阳性菌株的扩增产物测序结果显示产酸克雷伯菌 H44 菌株 KPC 型扩增产物测序结果与 Genbank 上源自肺炎克雷伯菌株 HZ1 的 KPC-2 (GU86225)相似性最高为99%同源可确定为KPC-2型 2.5 接合试验结果接合子经PCR检测blaKPC基因电泳结果显示扩增产物片段大小与预期相符接合子经生化鉴定结果为大肠埃希菌鉴定率97.9% 即可确定受体菌J53经接合获得blaKPC基因显示KPC基因位于可接合质粒上 Othcrs 11% E.coli 9% ca 9% K.oxyto with 3 讨论本研究收集的45株对碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌中对亚胺培南美罗培南和厄他培南的耐药率表2 45株肠杆菌科细菌对常见抗生素的耐药情况 Tab.2 Resistance of the 45 Enterobacteriaceae isolates to the antibiotics frequently used IPM MEM ETP AMK CRO CAZ FEP CIP GEN R % I % S % IPM: Imipenem; MEM: Meropenem; ETP: Ertapenem; AMK: Amikacin; CRO: Ceftriaxone; CAZ: Ceftazidime; FEP: Cefepime; CIP: Ciprofloxacin; GEN: Gentamicin; S: Susceptible; I: Intermediate; R: Resistant. 分别为 2.% 15.6%和 75.6% 对β-内酰胺类耐药率亦很高对于三代头孢菌素耐药率高达 95.6% 对喹诺酮类药物耐药也较高 82.2% 环丙沙星对庆大霉素耐药率为6% 仅对阿米卡星耐药率相对较低 % 本研究进行KPC酶的筛查检测 3株MHT阳性的菌株经 PCR 证实有 4 株携带 KPC 酶基因其他的多为产金属酶其他β-内酰胺酶或合并多种酶引起耐药或敏感性下降 4株MHT阳性菌株在本研究中检测的耐药基因均

http://www.j-smu.com 163 blakpc M 1 2 + - 1 2 +_ - M blaimp 1 2 +_ - M blatem M 1 2 + - blactx-m M 1 2 + - 图 2 酶基因扩增产物电泳图 Fig.2 Amplification of β-lactamases genes by PCR.

为阴性, 需要进一步增加检测的基因范围以确定其机制在 4 株 KPC 酶阳性的菌株中有 1 株 MHT 结果为弱阳性, 其他均为阳性, 本研究中 MHT 对检测 KPC 酶的灵敏度为 %, 特异度为 11.

好的一种方法 [25] 本研究结果显示 1 株菌为阳性, 而其中包括了 4 株 blakpc 基因阳性菌株该方法对于检测 KPC 酶的灵敏度为 %, 特异度为 4% 结合 MHT 与 PBA 两个实验, 其双阳性结果虽对检测 KPC 酶特异度有所提高 (4%), 但仍不够理想, 需要开发特异度和敏感度都高的新方法本研究采用头孢他啶 /

8% 说明该方法是筛查 MBL 酶效果较好的表型试验方法通过 PCR 检测,blaTEM 基因检出率最高, 为 6%, 其次, 为 53.3%, 同时携带 blatem 和检出率 33.3%, 可见在我院对碳青霉烯类敏感性下降的肠杆菌科细菌产 β- 内酰胺酶以 TEM 与 SHV 型为主 blakpc 阳性菌检出率 8.

9% IMP 酶分为染色体和质粒介导两类, 由于质粒介导酶容易通过质粒的传递将耐药基因传播到其他菌种, 因此更受临床关注研究发现一株产酸克雷伯菌合并产 KPC 酶 IMP 酶及 β- 内酰胺酶, 其对厄他培南 MIC 值达到了 256 μg/ml, 说明合并产多种酶可能是引起碳青霉烯类药物高水平耐药的机制之一本研究中分离到 4

4 163 blakpc M _ - M blaimp 1 2 +_ - M blatem M blactx-m M 图 2 酶基因扩增产物电泳图 Fig.2 Amplification of β-lactamases genes by PCR. M: DLDNA Marker; 1 and 2: Amplification results of clinical strains; + and - : positive and negative control, respectively. 为阴性, 需要进一步增加检测的基因范围以确定其机制在 4 株 KPC 酶阳性的菌株中有 1 株 MHT 结果为弱阳性, 其他均为阳性, 本研究中 MHT 对检测 KPC 酶的灵敏度为 %, 特异度为 11.8%, 可出现假阳性, 这与 Carvalhaes [23] [24] 和施德仕等报道一致产 ESBLs 等高活性 β- 内酰胺酶应该是引起碳青霉烯类药物敏感性降低, 导致未携带碳青霉烯酶类基因的菌株在 MHT 试验出现阳性的原因之一由于 MHT 特异性的不足, 本研究增加其他方法进行筛查, 其中 PBA 纸片增效法是近期报道最多效果较好的一种方法 [25] 本研究结果显示 1 株菌为阳性, 而其中包括了 4 株 blakpc 基因阳性菌株该方法对于检测 KPC 酶的灵敏度为 %, 特异度为 4% 结合 MHT 与 PBA 两个实验, 其双阳性结果虽对检测 KPC 酶特异度有所提高 (4%), 但仍不够理想, 需要开发特异度和敏感度都高的新方法本研究采用头孢他啶 / 克拉维酸 (CAZ/CALV) 纸片加 EDTA 试验 [26-27], 显示 26 株菌为阳性, 其中 21 株菌为 IMP 基因阳性, 未发现有 VIM 基因阳性的菌株, 只有 1 株 IMP 阳性菌在 EDTA 试验中结果为阴性, 其灵敏度 95.5%, 而特异性 8.8% 说明该方法是筛查 MBL 酶效果较好的表型试验方法通过 PCR 检测,blaTEM 基因检出率最高, 为 6%, 其次, 为 53.3%, 同时携带 blatem 和检出率 33.3%, 可见在我院对碳青霉烯类敏感性下降的肠杆菌科细菌产 β- 内酰胺酶以 TEM 与 SHV 型为主 blakpc 阳性菌检出率 8.9%, 低于国内浙江等地区 [28] 报道的研究结果其原因包括抗生素的使用摄入剂量和当地医院对多重耐药病原菌感染相关病人的隔离措施等本研究中, 产 IMP 酶菌株的碳青霉烯类药物 MIC 值范围在 2~32 μg/ml, 引起低至中等水平耐药, blaimp 检出率 48.9% IMP 酶分为染色体和质粒介导两类, 由于质粒介导酶容易通过质粒的传递将耐药基因传播到其他菌种, 因此更受临床关注研究发现一株产酸克雷伯菌合并产 KPC 酶 IMP 酶及 β- 内酰胺酶, 其对厄他培南 MIC 值达到了 256 μg/ml, 说明合并产多种酶可能是引起碳青霉烯类药物高水平耐药的机制之一本研究中分离到 4 株对碳青霉烯类敏感性下降甚至耐药的菌株, 其 blakpc blaimp blavim blatem 及 blactx-m 检测结果均为阴性, 这些菌株可能携带本研究中未列入检测的 blaesbls 或产非 ESBLs 型的其他 β- 内酰胺酶的基因, 如 AmpC 酶等, 或有孔蛋白缺失等其他耐药机制, 有待进一步研究本研究分离到 4 株产 KPC 酶菌株, 其中 3 株为产酸克雷伯菌,1 株为阴沟肠杆菌对 4 株 KPC 酶阳性的菌株进行接合实验后发现, 其中 2 株菌为接合成功, 说明该耐药基因位于可接合的质粒上, 可通过接合作用转移到受体菌中, 提示有发生水平播散的可能, 故应做好临床耐药监测和院感控制工作, 以期预防耐药株暴发流行的发生及时了解本院肠杆菌科细菌耐药表型及基因型, 对指导临床合理使用抗生素延缓细菌耐药的产生及时有效的控制耐药菌株的播散和流行具有十分重要

5 164 的临床意义参考文献 : [1] Vatopoulos A. High rates of metallo-beta-lactamase-producing Klebsiella pneumoniae in Greece--a review of the current evidence [J]. Euro Surveill, 28, 13(4): 1-6. [2] Oteo J, Delgado-Iribarren A, Vega D, et al. Emergence of imipenem resistance in clinical Escherichia coli during therapy[j]. Int J Antimicrob Agents, 28, 32(6): [3] Kaezmarek F, Dib-Hajj F, Shang W, et al. High-level carbapenem resistance in a Klebsiella Pneumoniae clinical isolate is due to the combination of bla(act-l)bcta-laetamase production, porin ompk35/36 insertional inactivation, and down-regulation of the phosphate transport porin phoe[j]. Antimicrob Agents Chemother, 26, 5: [4] Pottumarthy S, Moland ES, Juretschko S, et al. NmcA carbapenemhydrolyzing enzyme in Enterobacter cloacae in North America[J]. Emerg Infect Dis, 23, 9(8): [5] Radice M, Power P, Gutkind G, et al. First class a carbapenemase isolated from enterobacteriaceae in Argentina[J]. Antimicrob Agents Chemother, 24, 48(3): [6] Aubron C, Poirel L, Ash RJ, et al. Carbapenemase-producing enterobacteriaceae, U.S. rivers[j]. Emerg Infect Dis, 25, 11(2): [7] Yu YS, Du XX, Zhou ZH, et al. First isolation of blaimi-2 in an enterobacter cloacae clinical isolate from China[J]. Antimicrob Agents Chemother, 26, 5(4): [8] Naas T, Vandel L, Sougakoff W, et al. Cloning and sequence analysis of the gene for a carbapenem-hydrolyzing class A betalactamase, Sme-1, from serratia marcescens S6[J]. Antimicrob Agents Chemother, 1994, 38(6): [9] Queenan AM, Shang W, Schreckenberger P, et al. SME-3, a novel member of the serratia marcescens SME family of carbapenemhydrolyzing beta-lactamases[j]. Antimicrob Agents Chemother, 26, 5(1): [1]Yigit H, Queenan AM, Anderson GJ, et al. Novel carbapenemhydrolyzing beta-lactamase, KPC-1, from a carbapenem-resistant strain of Klebsiella pneumoniae[j]. Antimicrob Agents Chemother, 21, 45(4): [11]Bratu S, Landman D, Alam M, et al. Detection of KPC carbapenemhydrolyzing enzymes in Enterobacter spp. from Brooklyn, New York[J]. Antimicrob Agents Chemother, 25, 49(2): [12]Hossain A, Ferraro M, Pino R, et al. Plasmid-mediated carbapenemhydrolyzing enzyme KPC-2 in an Enterobacter sp[j]. Antimicrob Agents Chemother, 24, 48: [13] 张幸国, 杜小幸, 张嵘, 等. 发现一株产 KPC-2 型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌 [J]. 中华检验医学杂志, 26, 29(9): [14]Poirel L, Le Thomas I, Naas T, et al. Biochemical sequence analyses of GES-1, a novel class A extended-spectrum beta-lactamase, and the class 1 integron In52 from Klebsiella pneumoniae [J]. Antimicrob Agents Chemother,, 44(3): [15]Bandoh K, Watanabe K, Muto Y, et al. Conjugal transfer of imipenem resistance in Bacteroides fragilis[j]. J Antibiot (Tokyo), 1992, 45(4): [16]Lauretti L, Riccio ML, Mazzariol A, et al. Cloning and characterization of blavim, a new integron-borne metallo-beta-lactamase gene from a Pseudomonas aeruginosa clinical isolate [J]. Antimicrob Agents Chemother, 1999, 43(7): [17]Poirel L, Naas T, Nicolas D, et al. Characterization of VIM-2, a carbapenem-hydrolyzing metallo-β-lactamase and its plasmid-and integron-borne gene from a Pseudomonas aeruginosa clinical isolate in France[J]. Antimicrob Agents Chemother,, 44: [18]Bush K, Sykes R. Characterization and epidemiology of β- lactamases[j]. Elsevier Science Publishers BV, Philadelphia, PA, [19]Donald HM, Scaife W, Amyes SG, et al. Sequence analysis of ARI-1, a novel OXA beta-lactamase, responsible for imipenem resistance in acinetobacter baumannii 6B92[J]. Antimicrob Agents Chemother,, 44(1): [2]Bratu S, Landman D, Alam M, et al. Detection of KPC carbapenemhydrolyzing enzymes in Enterobacter spp. from Brooklyn, New York[J]. Antimicrob Agents Chemother, 25, 49(2): [21]Bratu S, Mooty M, Nichani S, et al. Emergence of KPC-possessing Klebsiella pneumoniae in Brooklyn, New York: epidemiology and recommendations for detection[j]. Antimicrob Agents Chemother, 25, 49(7): [22]Jones RN, Stilwell MG, Wilson ML, et al. Contemporary tetracycline susceptibility testing: doxycycline MIC methods and interpretive criteria (CLSI and EUCAST) performance when testing Gram-positive pathogens[j]. Diagn Microbiol Infect Dis, 213, 76 (1): [23]Carvalhaes CG, Picão RC, Nicoletti AG, et al. Cloverleaf test (modified Hodge test) for detecting carbapenemase production in Klebsiella pneumoniae: be aware of false positive results[j]. J Antimicrob Chemother, 21, 65(2): [24] 施德仕, 邵海枫, 王卫萍, 等. 用改良 Hodge 试验筛查低产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌 [J]. 临床检验杂志, 21, 28(6): [25]Tsakris A, Kristo I, Poulou A, et al. Evaluation of boronic acid disk tests for differentiating KPC-possessing Klebsiella pneumoniae isolates in the clinical laboratory[j]. J Clin Microbiol, 29, 47(2): [26]Yong D, Lee K, Yum J, et al. Imipenem-EDTA disk method for differentiation of metallo-β-lactamase-producing clinical isolates of Pseudomonas spp.and Acinetobacter spp[j]. J Clin Microbiol, 22, 4: [27]Yan JJ, Wu JJ, Tsai SH, et al. Comparison of the double-disk, combined disk, and test methods for detecting metallo-betalactamases in gram-negative bacilli[j]. Diagn Microbiol Infect Dis, 24, 49(1): [28] 叶智颖, 吕火祥, 胡庆丰, 等. 耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌 KPC 酶检测分析 [J]. 中国卫生检验杂志, 211, 21(2): 454-5, 457. ( 编辑 : 陈望忠 )

Slide 1

Antimicrobial Resistance in China 中国细菌耐药现状 Minggui Wang, M.D. 王明贵 Huashan Hospital, Fudan University 复旦大学附属华山医院抗生素研究所 Shanghai, China 1 Source of data 耐药数据来源 CARSS China Antimicrobial Resistance Surveillance