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蜃扉彼车
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1 ; 22(23): ISSN (print) ISSN (online) CLINICAL PRACTICE 质子泵抑制剂与抗生素对幽门螺杆菌的联合抗菌作用 (FICI) was calculated and compared between groups. RESULTS: The FICIs of all combined antibacterial tests were less than 0.75 both in sensi- tive strains and resistant strains. The FICI of antibacterial test of rabeprazole combined with levofloxacin against sensitive strains was smaller than that of levofloxacin combined with omeprazole. For resistant strains, the FICI of amoxicillin combined with rabeprazole was smaller than that of amoxicillin combined with omeprazole. Antibacterial effect of antibiotics combined with proton pump inhibitors against Helicobacter pylori Hong-Yan Bi, Zheng-Hong Chen, Ting-Na Qi, Fei Wang, Ya-Kun Bi, Qiong Wang Hong-Yan Bi, Zheng-Hong Chen, Ting-Na Qi, Fei Wang, Ya-Kun Bi, Qiong Wang, Department of Microbiology, Guiyang Medical College, Guiyang , Guizhou Province, China Supported by: the United Foundation of Guiyang Medical University-Science and Technology Department of Guizhou Province, No. [2012]010 Correspondence to: Zheng-Hong Chen, Professor, Department of Microbiology, Guiyang Medical College, 9 Beijing Road, Guiyang , Guizhou Province, China. joeanchenhan@hotmail.com Received: Revised: Accepted: Published online: Abstract AIM: To observe the antibacterial effect of antibiotics combined with proton pump inhibitors (PPIs) against Helicobacter pylori (H. pylori). CONCLUSION: Omeprazole or rabeprazole combined with clarithromycin, levofloxacin and amoxicillincan have a synergistic antibacterial effect. The antibacterial effect of rabeprazole and levofloxacin against sensitive strains was higher than that of levofloxacin combined with omeprazole. For resistant strains, the antibacterial effect of rabeprazole combined with amoxicillin was higher than that of amoxicillin combined with omeprazole Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved. Key Words: Helicobacter pylori ; Omeprazole; Rabeprazole; Antibiotics Bi HY, Chen ZH, Qi TN, Wang F, Bi YK, Wang Q. Antibacterial effect of antibiotics combined with proton pump inhibitors against Helicobacter pylori. Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 2014; 22(23): URL: DOI: dx.doi.org/ /wcjd.v22.i 背景资料 (Helicobacter pylori, H. pylori),,, 3,,. METHODS: The sensitivity of H. pylori clinical isolates to clarithromycin, amoxicillin and levofloxacin was detected. The sensitive (n = 5) and resistant strains to clarithromycin (n = 5 for each), amoxicillin (n = 5 for each), or levofloxacin (n = 5 for each) were selected, and the minimum inhibitory concentrations (MICs) of these three antibiotics and the two PPIs omeprazole and rabeprazole were measured. Fractional inhibitory concentration index 目的 : (Helicobacter pylori, H. pylori ). 方法 : H. pylori 同行评议者,,, H. pylori (n = 5) (n = 5) (n =

2 3548 ISSN (print) ISSN (online) 研发前沿 H. pylori,,.,. 5)(n = 5) (n = 5)(n = 5), 3 ( )H. pylori (minimal inhibitory concentration, MIC), FIC (fractional inhibitory concentration index, FICI), ; 3 FICI, t. 结果 : FICI <0.75; FICI FICI ; FICI FICI. 结论 : (1) ; (2) ; (3). 生也有关系 [5]. 国内外公认的根除 H. pylori 治疗方案中常用抗生素有硝基咪唑类 ( 甲硝唑 ) 大环内酯类 ( 克拉霉素 ) β- 内酰胺类 ( 阿莫西林 ) 和四环素类等 [6]. 随着抗生素的广泛应用, H. pylori 对常用抗生素的耐药性日趋严重, 导致 H. pylori 的根除率降低. 现在临床上常用根除 H. pylori 的方法是三联疗法或四联疗法即 : 质子泵抑制剂 (proton pump inhibitor, PPI) 和两种抗生素联合或 PPI 铋剂和两种抗生素联合 ( 阿莫西林加克拉霉素甲硝唑加阿莫西林甲硝唑加克拉霉素等 ). 应用 PPI 后体内 H. pylori 的代谢活跃程度及对药物的敏感程度均有很大变化 [7]. 本实验采用棋盘格法检测克拉霉素阿莫西林和左氧氟沙星分别与两种 PPI 类药物 ( 奥美拉唑雷贝拉唑 ) 联合应用前后最低抑菌浓度 (minimal inhibitory concentration, MIC) 值的变化 ; 通过计算 FIC 指数 (fractional inhibitory concentration Index, FICI), 判断两药联合的抗菌效应, 探讨 PPI 对抗生素抗 H. pylori 作用的影响. 1 材料和方法 1.1 质控菌株 H. pylori 菌株 NCTC11637 和 SS1, 获赠于中国疾病预防控制中心传染病预防控制所. H. pylori 临床菌株来源 : 临床标本来自贵阳市第一人民医院贵阳医学院附属白云医 2014 院和贵阳市儿童医院消化科内镜室胃镜检查患者 ( 慢性胃炎胃溃疡十二指肠球部溃疡 ). 哥伦比亚琼脂培养基 ( 上海博微生物科技有限公司 ); MH 琼脂培养基 ( 杭州天和微生物试剂有限公司 ), 新鲜脱纤维羊血 ( 贵阳医学院实验动物, 中心 ), 左氧氟沙星 ( 中国食品药品检定研究院 ), 阿莫西林 ( 中国食品药品检定. 研究院 ), 克拉霉素 ( 中国食品药品检定研究所 ), 奥美拉唑 [ 生工生物 ( 上海 ) 有限公司 ], 雷贝拉唑 ( 国 URL: 家标准物质网 ), 微需氧产气袋 wjgnet.com/ /22/3547.asp DOI: ( 日本三菱化学株式会社 ), H. pylori 添加剂 ( 英国 org/ /wcjd.v22.i OXOID 公司 SRE0147) 引言 H. pylori : 无菌操作, 将活幽门螺杆菌 (Helicobacter pylori, H. pylori ) 感染是检组织剪碎迅速接种于哥伦比亚血琼脂培养基慢性活动性胃炎消化性溃疡胃黏膜相关组 (10% 新鲜脱纤维羊血 ), 微需氧培养 h, 将织淋巴瘤的主要病因, 与胃癌的发生亦有密切疑似菌落进行革兰染色尿素酶试验和 H. pylori 16S rdna 特异性 PCR 扩增 ( 参照文献 [8] 由生联系, 为 Ⅰ 类致癌因子 [1,2]. 近年来有研究证实 H. pylori 感染也是糖尿病心血管疾病发展的危险工生物 ( 上海 ) 有限公司合成 H. pylori 特异性 16S 因素之一 [3,4], 与特发性血小板减少性紫癜的发 rdna 基因的 PCR 引物 ) 进行鉴定. 将阳性菌株进

3 3549 表 1 抗生素与奥美拉唑联合前后的最低抑菌浓度 (n = 5, mean±sd, μg/ml) 创新盘点 H. pylori 克拉霉素 + 奥美拉唑左氧氟沙星 + 奥美拉唑阿莫西林 + 奥美拉唑. 行传代培养, 于绵羊血中 -80 保存 H. pylori : 参照美国临床实验标准化委员会制定的琼脂稀释法检测克拉霉素阿莫西林左氧氟沙星敏感性, 克拉霉素 1.0 µg/ml 判为耐药, 阿莫西林 1.0 µg/ml 判为耐药, 左氧氟沙星 1.0 µg/ml 判为耐药 MIC : 挑取克拉霉素耐药菌株和敏感菌株各 5 株阿莫西林耐药菌株和敏感菌株各 5 株左氧氟沙星耐药菌株和敏感菌株各 5 株, 通过棋盘格法测定联合用药时的 MIC 值. (1) 抗生素和 PPI 药物单独应用对敏感菌株和耐药菌株 MIC 的测定 : 挑取 H. pylori 菌落, 以生理盐水配制成相当于 2.0 麦氏标准浓度 ( CFU/mL), 各取 5 µl 菌液点种于含不同浓度 ( 和 16.0 µg/ml) 克拉霉素左氧氟沙星和阿莫西林及含不同浓度 ( 和 80.0 µg/ml) 奥美拉唑雷贝拉唑的药物平板上和不含药物的 MH 血琼脂 (10% 新鲜脱纤维羊血 ) 平板上, 37 微需氧培养 96 h, 观察细菌的生长情况, 以无细菌生长的最低药物浓度为 MIC 值 ; (2) 联合用药时 MIC 值的测定 - 药物配伍 ( 克拉霉素 + 奥美拉唑 ; 克拉霉素 + 雷贝拉唑 ; 阿莫西林 + 奥美拉唑 ; 阿莫西林 + 雷贝拉唑 ; 左氧氟沙星 + 奥美拉唑 ; 左氧氟沙星 + 雷贝拉唑 ), 药物浓度稀释为其单独应用时 MIC 值的倍克拉霉素左氧氟沙星或阿莫西林及奥美拉唑和雷贝拉唑及上述各个药物浓度的克拉霉素左氧氟沙星或阿莫西林配伍上述各个浓度的奥美拉唑或雷贝拉唑. 挑取 H. pylori 菌落, 以生理盐水配制成相当于 2.0 麦氏标准浓度 ( CFU/mL) 的菌液, 取 5 µl 菌液点种于含不同的平板上及不含药物的 MH 血琼脂 (10% 新鲜脱纤维羊血 ) 平板上, 37 微需氧培养 96 h, 观察细菌的生长情况, 以无细菌生长的最低药物浓度为联合用药时的 MIC 值 ; (3)FIC 指数的计算和数据分析 : 棋盘格法结果用部分抑菌浓度 (FIC) 及 FIC 指数来评价, FIC 指数即联合抑菌分数, 为药物在联合前后所测得的 MIC 比值. FIC(A) = 联合试验时抗生素的 MIC/ 抗生素单独试验时 MIC; FIC(B) = 联合试验时 PPI 的 MIC/ 质子泵抑制剂单独试验时的 MIC; FIC 指数 = FIC(A)+FIC(B); FIC 指数 <0.75, 表明两药有协同作用, FIC 指数越小, 联合抗菌作用越强 ; FIC 指数 = 0.75, 表明两药联合时抗菌作用表现为累加作用 ; FIC 指数 = 1-2, 表明两药联合抗菌作用为无关 ; FIC 指数 >2, 表明两药联合抗菌作用表现为拮抗. 数据采用 SPSS18.0 统计软件包进行统计分析. 奥美拉唑和雷贝拉唑分别与各抗生素联合抗菌试验 FICI 之间的差异采用两小样本 t 检验进行比较, P <0.05 为差异有统计学意义. 2 结果株临床标本中分离的 69 株 H. pylori 培养物经药物敏感性检测 : 克拉霉素耐药率为 31.8%, 左氧氟沙星耐药率为 30.4%, 阿莫西林耐药率为 11.5%. 2.2 MIC 3 种抗生素与奥美拉唑或雷贝拉唑联合前后 MIC 值 ( 表 1, 2): 克拉霉素左氧氟沙星和阿莫西林分别与奥美拉唑或雷贝拉唑联合后的 MIC 值均比联合前降低 ; 根据与奥美拉唑或雷贝拉唑联合后抗生素的 MIC 值判定药物的敏感性, 其中 5 株阿莫西林耐药株在联合后表现为敏感 ; 和奥美拉唑或雷贝拉唑联合后, 3 株左氧氟沙星耐药株对该药表现为敏感, 2 株克拉霉素耐药株对该药表现为敏感. 2.3 FICI 阿莫西林克拉霉素左氧氟沙星分别与奥美拉唑或雷贝拉唑联合抗菌试验的 FICI( 表 3, 4), FICI 均 <0.75, 为协同抗菌作用 ; 雷贝拉唑和左氧氟沙星对敏感菌株的联合抗菌试验的 FICI 比奥美拉唑和左氧氟沙星的联合抗菌试验的 FICI 小 (P = 0.035<0.05, 两小样本 t 检验 ), 奥美拉唑和雷贝拉唑分别与克拉霉素或阿莫西,,.

4 3550 ISSN (print) ISSN (online) 应用要点,. 表 2 抗生素与雷贝拉唑联合前后的最低抑菌浓度 (n = 5, mean±sd, μg/ml) 克拉霉素 + 雷贝拉唑左氧氟沙星 + 雷贝拉唑阿莫西林 + 雷贝拉唑表 3 3 种抗生素与奥美拉唑联合抗菌作用的 FICI (n = 5, mean±sd) 克拉霉素 + 奥美拉唑左氧氟沙星 + 奥美拉唑阿莫西林 + 奥美拉唑表 4 3 种抗生素与雷贝拉唑联合抗菌作用的 FICI 值 (n = 5, mean±sd) 克拉霉素 + 雷贝拉唑左氧氟沙星 + 雷贝拉唑阿莫西林 + 雷贝拉唑林联合抗菌试验的 FICI 没有显著的差异 ; 雷贝拉唑和阿莫西林对耐药菌株的联合抗菌作用 FICI 比奥美拉唑和阿莫西林的联合抗菌试验小 (P = 0.012<0.05, 两小样本 t 检验 ), 雷贝拉唑和奥美拉唑分别与左氧氟沙星或克拉霉素联合抗菌的试验 FICI 没有显著差异. 3 讨论随着抗生素的使用, H. pylori 对抗菌药物的耐药性日益严重, 不同地区耐药情况不尽相同, 甲硝唑的耐药率较高, 最高达 99.6%, 阿莫西林最高达到 32.4% [9], 克拉霉素耐药率达到 41.9% [10], 左氧氟沙星为 33.1% [11]. 在本次实验中有 31.8% 克拉霉素耐药, 30.4% 左氧氟沙星耐药, 11.5% 阿莫西林耐药, 耐药菌的出现给临床治疗带来了困难. 目前临床上常用 PPI 药物加两种抗生素治疗 H. pylori 感染, PPI 药物主要包括奥美拉唑雷贝拉唑泮托拉唑兰索拉唑和埃索美拉唑. PPI 药物可以抑制质子泵 (H + -K + -ATP 酶 ) 的活性, 从而抑制胃酸的分泌, 减少胃酸对病变黏膜刺激, 使症状缓解. PPI 和抗生素联用提高抗菌治疗效果的原因可能为 : (1) 临床上常用的抗生素在酸性环境中多不稳定, 易被分解, 无法达到治疗的有效浓度, PPI 药物可以通过抑酸作用而利于这些抗生素发挥抗菌作用 [12], PPI 药物能使 24 h 胃酸抑制达到 90%, 并能保持 ph>5.5 长达 14 h, 使不耐酸抗生素能发挥最大的杀菌效力 ; (2)PPI 可以减少胃液分泌量, 间接增加抗生素浓度, 提高抗菌效果 ; (3) 体外研究证明, PPI 具有直接杀菌作用, 可以抑制 H. pylori 的生长, 并且可以抑制 H. pylori 尿素酶的活性, 应用 PPI 以后胃黏膜活检的快速尿素酶试验阳性率较用药前明显下降 ; (4)PPI 对抗菌药物的 MIC 值有一定的影响, 在抗 H. pylori 感染中, 能通过抑制外排泵的外排作用, 提高抗生素的杀菌作用. 临床应用表明 [13,14], 雷贝拉唑三联疗法使消化性溃疡症状明显缓解, 并且有较高的愈合率及 H. pylori 清除率. 也有学者认为 5 种 PPI 药物对 H. pylori 的清除率没有明显的影响 [14,15]. H. pylori 具有较丰富的生物多样性, 其生物学性状和基因特征在不同地区存在一定的差异性, 例如, 本课题组发现, 贵阳地区克拉霉素耐药菌株的突变位点与其他地区的突变位点存在碱基差异 [16]. 本文选取的是贵阳地区 H. pylori 临床分离株, 采用棋格盘法检测了奥美拉唑或雷

5 3551 贝拉唑分别与阿莫西林克拉霉素或左氧氟沙星的联合抗菌效应, 结果表明, 奥美拉唑和雷贝拉唑分别与克拉霉素左氧氟沙星阿莫西林联合后无论对敏感株还是耐药株的 FIC 指数均 <0.75, 表现为协同抗菌作用 ; 雷贝拉唑和左氧氟沙星对敏感株的联合抗菌作用比奥美拉唑和左氧氟沙星的联合抗菌作用强, 雷贝拉唑和阿莫西林对耐药株的联合抗菌作用比奥美拉唑和阿莫西林的联合抗菌作用强. 提示使用阿莫西林或左氧氟沙星与雷贝拉唑配伍进行根除治疗的效果优于与奥美拉唑配伍的效果, 为临床用药提供了理论基础. 根据 3 种抗生素分别和奥美拉唑或雷贝拉唑联合后的 MIC 判定抗生素的敏感性, 则在联合抗菌试验中, 部分耐药株分别表现为对阿莫西林左氧氟沙星和克拉霉素敏感, 提示与 PPI 类药物配伍时, 细菌对抗生素的药物敏感性可发生改变, 该机制有待进一步研究. 4 参考文献 1 Axon AT. Relationship between Helicobacter pylori gastritis, gastric cancer and gastric acid secretion. Adv Med Sci 2007; 52: [PMID: ] 2 Makola D, Peura DA, Crowe SE. Helicobacter pylori infection and related gastrointestinal diseases. J Clin Gastroenterol 2007; 41: [PMID: DOI: /MCG.0b013e318030e3c3] 3 Drlica K. The mutant selection window and antimicrobial resistance. J Antimicrob Chemother 2003; 52: [PMID: ] 4 Zhao X, Drlica K. Restricting the selection of antibiotic-resistant mutant bacteria: measurement and potential use of the mutant selection window. J Infect Dis 2002; 185: [PMID: DOI: /338571] 5 Hansen GT, Zhao X, Drlica K, Blondeau JM. Mutant prevention concentration for ciprofloxacin and levofloxacin with Pseudomonas aeruginosa. Int J Antimicrob Agents 2006; 27: [PMID: 同行评价 DOI: /j.ijantimicag ]. 6 (2003 ) 2004; 84: Wang CD, Zhuang ZH, Lu D, Li WQ, Wu T, Chen YL. [Efficacy of moxifloxacin-based triple therapy to eradicate Helicobacter pylori infection]. Zhonghua Yixue Zazhi 2010; 90: [PMID: ] 8 PCR 16S rdna 2010; 25: ; 10: ; 85: ; 9: ; 42: Wong BC, Wong WM, Yee YK, Hung WK, Yip AW, Szeto ML, Li KF, Lau P, Fung FM, Tong TS, Lai KC, Hu WH, Yuen MF, Hui CK, Lam SK. Rabeprazolebased 3-day and 7-day triple therapy vs. omeprazole-based 7-day triple therapy for the treatment of Helicobacter pylori infection. Aliment Pharmacol Ther 2001; 15: [PMID: ] 14 Hong EJ, Park DI, Oh SJ, Song MJ, Choi WH, Hong CH, Park JH, Kim HJ, Cho YK, Shon CI, Jeon WK, Kim BI. [Comparison of Helicobacter pylori eradication rate in patients with non-ulcer dyspepsia and peptic ulcer diseases according to proton pump inhibitors]. Korean J Gastroenterol 2008; 52: [PMID: ] 15 Uygun A, Kadayifçi A, Yeşilova Z, Savaş MC, Ateş Y, Karslioğlu Y, Ciğerim M, Bağci S, Dağalp K. Recent success of pantoprazole -or lansoprazolebased clarithromycin plus amoxicillin treatment in the eradication of Helicobacter pylori. Turk J Gastroenterol 2004; 15: [PMID: ] ; 28:

刘华一, 等. 蒲地蓝消炎口服液联合三联药物根除幽门螺杆菌63例评估两组疗效. 止痛的作用, 可能具有提高根治H. pylori 的作用. 结果: 按意向性分析(intention-to-treat)和符合治疗方案分析(per-protocol)三联疗法联合蒲地蓝消炎口服液组和H. pylor

刘华一, 等. 蒲地蓝消炎口服液联合三联药物根除幽门螺杆菌63例评估两组疗效. 止痛的作用, 可能具有提高根治H. pylori 的作用. 结果: 按意向性分析(intention-to-treat)和符合治疗方案分析(per-protocol)三联疗法联合蒲地蓝消炎口服液组和H. pylor wcjd@wjgnet.com 世界华人消化杂志 013年6月8日; 1(): 1780-178 ISSN 1009-3079 (print) ISSN 19-859 (online) 临床经验 CLINICAL PRACTICE 蒲地蓝消炎口服液联合三联药物根除幽门螺杆菌63例刘华一, 张滨, 姜立根背景资料幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori )可导致慢