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1 中 国 组 织 工 程 研 究 第 18 卷 第 6 期 出 版 Chinese Journal of Tissue Engineering Research February 5, 2014 Vol.18, No.6 脐 带 间 充 质 干 细 胞 治 疗 帕 金 森 病 的 应 用 王 艳 1, 赵 新 利 2, 张 军 艳 1, 谭 军 1 ( 1 新 乡 医 学 院 第 三 附 属 医 院 神 经 内 二 科, 河 南 省 新 乡 市 ; 2 新 乡 医 学 院 第 一 附 属 医 院 神 经 外 科, 河 南 省 卫 辉 市 ) 文 章 亮 点 : 1 文 章 的 创 新 性 在 于 应 用 人 脐 带 间 充 质 干 细 胞 颈 动 脉 穿 刺 移 植 治 疗 帕 金 森 病, 结 果 显 示 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 可 以 在 一 定 程 度 上 改 善 帕 金 森 病 患 者 的 神 经 功 能, 提 高 生 活 质 量 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 为 这 种 神 经 变 性 疾 病 提 供 了 新 的 治 疗 手 段, 但 针 对 这 一 类 难 治 性 神 经 变 性 疾 病 的 治 疗 模 式 是 否 相 同, 是 否 都 有 疗 效 还 需 深 入 分 析 2 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植, 在 帕 金 森 病 以 及 神 经 损 伤 后 的 修 复 治 疗 方 面 显 示 出 很 强 的 潜 力 同 时 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 又 具 有 免 疫 调 节, 移 植 后 发 生 排 斥 反 应 的 危 险 性 较 小 等 特 点 关 键 词 : 干 细 胞 ; 脐 带 干 细 胞 ; 脐 带 间 充 质 干 细 胞 ; 细 胞 移 植 ; 帕 金 森 病 ; 神 经 变 性 ; 强 直 ; 震 颤 主 题 词 : 干 细 胞 ; 脐 血 干 细 胞 移 植 ; 间 质 干 细 胞 ; 帕 金 森 病 ; 神 经 变 性 基 金 资 助 : 河 南 省 教 育 厅 资 助 项 目 (2010B320013) 摘 要 背 景 : 动 物 实 验 中 已 多 次 验 证, 脐 带 干 细 胞 移 植 可 有 效 改 善 帕 金 森 大 鼠 的 旋 转 行 为, 且 免 疫 排 斥 反 应 低 目 的 : 以 帕 金 森 病 统 一 评 分 量 表 作 为 观 察 指 标, 评 估 人 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 对 帕 金 森 病 的 治 疗 效 果 方 法 : 纳 入 帕 金 森 病 患 者 15 例, 男 8 例, 女 7 例, 年 龄 岁, 帕 金 森 病 H&Y 分 级 3-5 级 在 产 妇 知 情 同 意 情 况 下, 通 过 医 院 伦 理 委 员 会 批 准, 获 取 足 月 妊 娠 产 妇 的 脐 带, 无 菌 收 集 脐 带, 培 养 脐 带 间 充 质 干 细 胞 所 有 患 者 均 住 院 治 疗, 自 第 2 周 起 应 用 人 脐 带 间 充 质 干 细 胞 进 行 颈 动 脉 穿 刺 移 植 治 疗 移 植 前 及 移 植 后 1 个 月 采 用 帕 金 森 病 综 合 评 分 量 表 对 患 者 移 植 前 后 神 经 功 能 进 行 评 定, 分 值 越 高 表 示 神 经 功 能 缺 损 越 严 重 结 果 与 结 论 :15 例 患 者 均 进 入 结 果 分 析 与 移 植 前 相 比, 移 植 后 1 个 月 患 者 帕 金 森 病 综 合 评 分 量 表 分 值 均 明 显 降 低 (P < 0.05), 主 要 集 中 在 对 震 颤 强 直 的 改 善, 而 运 动 迟 缓 姿 势 不 稳 等 临 床 症 状 无 明 显 改 善 患 者 均 未 出 现 移 植 物 抗 宿 主 病 提 示 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 治 疗 帕 金 森 病 效 果 显 著, 可 明 显 改 善 患 者 的 神 经 功 能 王 艳, 女,1974 年 生, 河 南 省 原 阳 县 人, 汉 族,2010 年 新 乡 医 学 院 毕 业, 硕 士, 医 师, 主 要 从 事 脐 血 干 细 胞 的 基 础 研 究 与 临 床 研 究 通 讯 作 者 : 谭 军, 博 士, 硕 士 生 导 师, 主 任 医 师, 新 乡 医 学 院 第 三 附 属 医 院 神 经 内 二 科, 河 南 省 新 乡 市 doi: /j.issn [ 中 图 分 类 号 :R394.2 文 献 标 识 码 :B 文 章 编 号 : (2014) 稿 件 接 受 : 王 艳, 赵 新 利, 张 军 艳, 谭 军. 脐 带 间 充 质 干 细 胞 治 疗 帕 金 森 病 的 应 用 [J]. 中 国 组 织 工 程 研 究,2014, 18(6): Therapeutic applications of umbilical cord mesenchymal stem cells in Parkinson s disease Wang Yan 1, Zhao Xin-li 2, Zhang Jun-yan 1, Tan Jun 1 ( 1 Second Department of Neurology, Third Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University, Xinxiang , Henan Province, China; 2 Department of Neurosurgery, First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University, Weihui , Henan Province, China) Abstract BACKGROUND: Animal experiments have repeatedly verified that umbilical cord stem cell transplantation can improve the rotational behavior of rats with Parkinson s disease, with lower immune rejection response. OBJECTIVE: To evaluate the therapeutic effects of human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation in the treatment of Parkinson s disease using the Unified Parkinson s Disease Rating Scale. METHODS: Fifteen patients with Parkinson s disease were enrolled, including 8 males and 7 females, aged years. Hoehn & Yahr staging was 3-5. After informed consent was obtained from puerperae and the procedure was approved by the hospital ethics committee, full-term maternal umbilical cord was aseptically collected, to culture umbilical cord mesenchymal stem cells. All patients were hospitalized, and treated with human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation via carotid artery puncture. Neurological function of patients was assessed using a comprehensive rating scale for Parkinson s disease before and 1 month after cells transplantation. Higher score indicated more severe neurological deficits. RESULTS AND CONCLUSION: Fifteen patients entered the result analysis. Compared with before transplantation, 15 patients showed significantly lowered scores on the Unified Parkinson s Disease Rating Scale Wang Yan, Master, Physician, Second Department of Neurology, Third Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University, Xinxiang , Henan Province, China Corresponding author: Tan Jun, M.D., Master s supervisor, Chief physician, Second Department of Neurology, Third Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University, Xinxiang , Henan Province, China Accepted: P.O. Box 10002, Shenyang
2 at 1 month after transplantation (P < 0.05). The improvement was mainly concentrated in the tremor and rigidity, but bradykinesia and unstable position were not improved. Graft versus host disease did not occur in all 15 cases. These findings indicate that umbilical cord blood mesenchymal stem cell transplantation for treating Parkinson s disease has obvious curative effects and significantly improves neurological functions. Subject headings: stem cells; cord blood stem cell transplantation; mesenchymal stem cells; Parkinson disease; nerve degeneration Funding: the grant from Henan Provincial Educational Bureau, No. 2010B Wang Y, Zhao XL, Zhang JY, Tan J. Therapeutic applications of umbilical cord mesenchymal stem cells in Parkinson s disease. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2014;18(6): 引 言 Introduction 帕 金 森 病 是 发 病 率 比 较 高 的 一 种 中 枢 神 经 系 统 病 变 性 的 慢 性 疾 病, 与 中 毒 感 染 以 及 药 物 遗 传 等 都 有 关 系, 但 主 要 病 因 还 是 与 年 龄 有 关 的 脑 动 脉 硬 化 和 神 经 元 的 退 化 等 [1] 从 而 引 起 老 年 人 震 颤 肌 肉 僵 直 运 动 迟 缓 和 各 种 特 殊 姿 势 目 前 应 用 广 泛 的 是 手 术 以 及 药 物 治 疗, 一 般 来 说, 药 物 治 疗 的 期 限 仅 仅 为 3-5 年, 而 药 物 效 果 降 低 后, 则 会 使 病 情 更 加 难 以 控 制, 出 现 异 动 症 等, 而 手 术 治 疗 更 是 一 把 双 刃 剑 因 此 如 何 能 够 从 根 本 上 改 善 神 经 元 功 能, 从 传 统 方 法 上 入 手 是 很 困 难 的, 此 时 脐 带 间 充 质 干 细 胞 治 疗 应 运 而 生, 多 项 动 物 实 验 如 移 植 猪 脐 带 间 充 质 干 细 胞 治 疗 小 鼠 模 型 等 等 [2], 都 取 得 了 很 好 的 效 果, 为 治 疗 帕 金 森 带 来 了 新 的 希 望 和 巨 大 的 潜 力 [3] 文 章 采 取 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 治 疗 15 例 帕 金 森 病 患 者, 以 治 疗 前 后 帕 金 森 病 统 一 评 分 量 表 评 分 做 为 主 要 指 标 来 评 价 其 治 疗 效 果 1 对 象 和 方 法 Subjects and methods 设 计 : 对 比 观 察 试 验 时 间 及 地 点 : 病 例 来 自 于 2010 年 9 月 至 2012 年 10 月 新 乡 医 学 院 第 三 附 属 医 院 神 经 内 二 科 对 象 : 以 本 院 15 例 帕 金 森 病 患 者 为 研 究 对 象, 男 8 例, 女 7 例 ; 年 龄 岁, 平 均 年 龄 63.4 岁, 均 签 署 了 干 细 胞 治 疗 同 意 书 和 伦 理 同 意 书 帕 金 森 病 H&Y 分 级 为 3-5 级 分 级 标 准 为 :0= 无 体 征 ;1.0= 单 侧 患 病 ;1.5= 单 侧 患 病, 并 影 响 到 中 轴 肌 肉 ;2.0= 双 侧 患 病, 但 未 损 害 平 衡 ;2.5= 轻 度 双 侧 患 病, 姿 势 反 射 稍 差, 但 是 能 自 己 纠 正 ;3.0= 双 侧 患 病, 有 姿 势 平 衡 障 碍, 后 拉 试 验 阳 性 ;4.0= 严 重 的 残 疾, 但 是 能 自 己 站 立 或 行 走 ;5.0= 不 能 起 床, 或 生 活 在 轮 椅 上 纳 入 标 准 :1 原 发 性 帕 金 森 病 患 者 2 帕 金 森 病 H&Y 分 级 2-5 级 者 3 对 治 疗 及 试 验 方 案 知 情 同 意, 且 得 到 医 院 伦 理 委 员 会 批 准 者 排 除 标 准 :1 高 度 过 敏 体 质 或 者 有 严 重 过 敏 史 者 2 合 并 恶 性 肿 瘤 者 3 全 身 感 染 或 局 部 严 重 感 染 者 4 并 发 心 肺 肝 肾 等 重 要 脏 器 的 功 能 障 碍 者 5 凝 血 功 能 障 碍, 如 血 友 病 患 者 6 血 清 学 检 查 阳 性 者, 如 艾 滋 病 乙 肝 梅 毒 等 7 患 其 他 神 经 系 统 变 性 疾 病, 以 及 其 他 系 统 重 大 疾 病 者 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 15 例 帕 金 森 病 患 者 的 基 本 资 料 : 病 例 性 别 年 龄 ( 岁 ) 帕 金 森 病 H&Y 分 级 1 男 男 男 男 男 女 女 女 女 女 女 女 男 男 男 56 5 方 法 : 脐 带 间 充 质 干 细 胞 制 备 及 鉴 定 :1 在 产 妇 知 情 同 意 情 况 下, 通 过 医 院 伦 理 委 员 会 批 准, 获 取 足 月 妊 娠 的 产 妇 的 脐 带, 无 菌 收 集 脐 带, 浸 没 于 含 1% 双 抗 ( 青 链 霉 素 ) 的 PBS 中, 玻 璃 容 器 密 封 送 回 实 验 室 2 超 净 台 上 剪 取 约 2 cm 长 的 脐 带, 剖 开 动 静 脉, 用 PBS 洗 净 血 污 3 将 脐 带 剪 碎 成 肉 糜 状, 转 移 到 离 心 管 中, 加 入 4 ml 的 消 化 液 ( 每 升 PBS 含 0.25% 胰 酶, U 胶 原 酶 Ⅱ), 混 匀,37 中 消 化 4 h, 每 隔 10 min 振 摇 1 次 4 吸 取 消 化 上 清, 转 移 到 25 cm 2 细 胞 培 养 瓶 中, 加 入 DMEM/F12 培 养 基 ( 含 体 积 分 数 为 10%-15% 胎 牛 血 清 ),37 体 积 分 数 5%CO 2 培 养 箱 中 培 养 5 约 3 d 能 在 显 微 镜 下 观 察 到 贴 壁 细 胞, 半 量 换 液 后 继 续 培 养,3 d 后 换 液, 细 胞 已 经 能 稳 定 生 长 每 3 d 换 液 1 次, 至 细 胞 生 长 铺 满 瓶 底 ( 约 10 d), 即 可 进 行 传 代 6 用 流 式 细 胞 仪 检 测 细 胞 表 面 标 志 物 CD29, CD34,CD45,CD44,CD90,CD105 的 表 达 率 其 中 CD29,CD44, CD90,CD105 的 阳 性 率 均 在 95% 以 上, ISSN CN /R CODEN: ZLKHAH 933
3 CD34,CD45 表 达 阴 性 [4] 临 床 检 查 : 所 有 患 者 均 住 院 治 疗, 第 1 周 进 行 常 规 检 查,8 例 患 者 血 尿 便 常 规 肝 肾 功 能 多 项 肿 瘤 标 记 物 胸 片 等 均 正 常 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 : 自 第 2 周 起 患 者 应 用 人 脐 带 间 充 质 干 细 胞 进 行 颈 动 脉 穿 刺 移 植 治 疗 在 进 行 穿 刺 时, 首 先 要 帮 患 者 选 择 好 正 确 的 体 位, 一 般 采 用 平 卧 位, 将 枕 头 垫 于 颈 下 ( 高 8-10 cm), 头 向 后 仰, 尽 量 暴 露 颈 部 ( 致 使 颈 部 皮 肤 绷 紧 以 利 于 穿 刺 ), 头 略 偏 向 于 穿 刺 部 位 的 对 侧 ( 以 偏 离 正 中 线 cm 为 宜 ), 术 者 站 于 患 者 的 右 侧 进 行 操 作 根 据 解 剖 位 置 ( 上 平 甲 状 软 骨 上 缘, 下 至 甲 状 软 骨 下 缘 1 cm 处 ) 寻 找 正 确 的 注 射 部 位, 进 行 常 规 的 皮 肤 消 毒 后, 用 左 手 食 指 或 食 指 中 指 固 定 其 搏 动 明 显 处 的 血 管, 右 手 食 指 和 拇 指 固 定 准 针 柄 部 位 进 行 垂 直 进 针, 见 回 血, 表 明 穿 刺 成 功 进 针 时 要 注 意 进 针 方 向, 其 垂 直 角 度 以 与 颈 动 脉 垂 直 方 向 为 准, 而 非 与 水 平 面 垂 直 缓 慢 注 入 ( 在 10 min 内 ) 脐 带 间 充 质 干 细 胞 注 射 液 20 ml( 干 细 胞 数 ),1 次 / 周,1 次 为 1 个 疗 程, 视 疗 效 共 治 疗 1 或 2 个 疗 程 [5] 辅 助 治 疗 : 常 规 给 予 扩 张 血 管 抗 自 由 基 营 养 神 经 稳 定 细 胞 膜 等 治 疗 治 疗 效 果 评 价 : 分 别 于 移 植 前 和 移 植 后 1 个 月, 采 用 帕 金 森 病 综 合 评 分 量 表 对 患 者 进 行 评 定, 主 要 从 4 个 方 面 进 行 评 价, 包 括 了 42 个 项 目 :1 第 1 部 分 : 精 神 行 为 和 情 绪 2 第 2 部 分 : 日 常 活 动 3 第 3 部 分 : 运 动 功 能 4 第 4 部 分 : 治 疗 的 并 发 症 分 值 越 高 表 示 神 经 功 能 缺 损 越 严 重 主 要 观 察 指 标 : 运 用 帕 金 森 综 合 评 分 量 表 评 估 15 例 帕 金 森 病 患 者 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 治 疗 前 后 的 神 经 功 能 统 计 学 分 析 : 统 计 者 为 新 乡 医 学 院 统 计 教 研 室 张 合 喜, 使 用 SPSS 13.0 软 件 进 行 统 计 学 分 析, 数 据 用 x _ ±s 来 表 示, 采 用 配 对 t 检 验 P < 0.05 说 明 治 疗 前 后 的 差 异 有 显 著 性 意 义 2 结 果 Results 2.1 参 与 者 数 量 分 析 按 意 向 性 处 理 分 析, 纳 入 15 例 帕 金 森 病 患 者, 均 成 功 进 行 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植, 中 途 无 脱 落 2.2 随 访 结 果 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 后 1 个 月 对 患 者 进 行 随 访, 结 果 如 下 : 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 15 例 帕 金 森 病 患 者 的 随 访 结 果 : 病 例 随 访 时 间 移 植 后 1 个 月 帕 金 森 不 良 事 件 ( 月 ) 综 合 评 分 量 表 评 分 轻 度 乏 力 中 度 乏 力 轻 度 乏 力 轻 度 乏 力 轻 度 乏 力 中 度 乏 力 轻 度 乏 力, 低 热, 体 温 不 超 过 轻 度 乏 力 轻 度 乏 力 轻 度 乏 力 中 度 乏 力 轻 度 乏 力 中 度 乏 力 轻 度 乏 力 中 度 乏 力 2.3 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 后 1 个 月 患 者 帕 金 森 综 合 评 分 量 表 评 分 的 变 化 15 例 患 者 移 植 前 帕 金 森 综 合 评 分 量 表 评 分 平 均 (89.38±30.92) 分, 移 植 后 平 均 (75.63±27.07) 分, 差 异 有 显 著 性 意 义 (P < 0.05, 表 1) 主 要 集 中 在 对 肌 强 直 震 颤 的 改 善, 而 运 动 迟 缓 姿 势 不 稳 等 临 床 症 状 无 明 显 改 善 2.4 不 良 事 件 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 移 植 过 程 中 及 移 植 后 患 者 的 生 命 体 征 均 平 稳, 移 植 后 患 者 均 有 不 同 程 度 的 乏 力 症 状 1 例 患 者 出 现 移 植 后 低 热, 体 温 不 超 过 38, 对 症 处 理 后 均 完 全 缓 解 免 疫 排 斥 发 生 率 较 低, 均 未 出 现 移 植 物 抗 宿 主 病 表 1 帕 金 森 病 患 者 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 15 例 帕 金 森 病 前 与 移 植 后 1 个 月 帕 金 森 综 合 评 分 量 表 评 分 对 比 Table 1 Comparison of scores on the Unified Parkinson s Disease Rating Scale before and 1 month after cell transplantation (x _ ±s, n=15, point) 项 目 阶 段 中 阶 段 后 移 植 前 移 植 后 1 个 月 移 植 前 移 植 后 1 个 月 帕 金 森 综 合 评 分 量 表 评 分 90.23± ±24.12 a 75.96± ±27.06 a 日 常 生 活 活 动 66.61± ±15.86 a 57.74± ±17.33 a 肌 强 直 10.61± ± ± ±7.12 震 颤 14.74± ±5.72 a 12.12± ±5.07 a 表 注 : 与 移 植 前 比 较, a P < 0.05 提 示 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 可 明 显 改 善 帕 金 森 病 患 者 的 神 经 功 能 934 P.O. Box 10002, Shenyang
4 3 讨 论 Discussion 帕 金 森 病 是 一 种 神 经 元 变 性 的 疾 病, 可 致 使 分 泌 的 多 巴 胺 递 质 下 降, 使 患 者 出 现 四 肢 僵 硬 震 颤 以 及 运 动 迟 缓 等 症 状, 截 至 目 前 为 止, 临 床 在 治 疗 该 病 时, 主 要 采 用 手 术 和 药 物 进 行 治 疗, 但 这 两 种 方 法 都 无 法 对 脑 内 环 境 进 行 改 善, 同 时 也 无 法 使 多 巴 胺 能 神 经 元 的 数 目 得 到 增 加, 甚 至 还 可 能 因 电 极 刺 激 神 经 毒 性 等 作 用 致 使 神 经 细 胞 数 量 减 少, 故 寻 求 一 种 能 够 有 效 提 升 神 经 系 统 细 胞 数 目 的 治 疗 方 法 成 为 临 床 研 究 的 重 点 3.1 干 细 胞 治 疗 的 优 势 在 传 统 观 念 中, 中 枢 神 经 细 胞 属 于 终 末 细 胞, 中 毒 创 伤 以 及 缺 血 缺 氧 等 病 理 过 程 均 是 导 致 患 者 神 经 元 丢 失 的 主 要 原 因, 而 帕 金 森 疾 病 的 治 疗 中, 成 体 干 细 胞 横 向 分 化 的 多 潜 能 性 为 其 提 供 了 新 思 路, 采 用 间 充 质 干 细 胞 进 行 治 疗, 主 要 优 势 如 下 : 多 巴 胺 能 神 经 元 丢 失 是 帕 金 森 病 的 关 键, 故 控 制 其 丢 失, 促 使 其 增 加 是 治 疗 的 核 心, 采 用 干 细 胞 移 植 可 有 效 避 免 引 起 帕 金 森 病 相 同 病 程 ; 同 时, 干 细 胞 能 够 持 续 数 年 释 放 和 产 生 大 量 的 多 巴 胺, 据 了 解, 间 充 质 干 细 胞 在 成 功 移 植 后, 其 存 活 时 间 在 10 年 以 上, 尽 管 有 报 道 表 明, 帕 金 森 病 患 者 的 多 巴 胺 系 统 在 持 续 退 化, 但 仍 然 有 效 控 制 病 情, 增 加 多 巴 胺 的 数 目 ; 除 此 之 外, 纹 状 体 超 过 50% 多 巴 胺 能 神 经 支 配 减 少 和 50% 黑 质 多 巴 胺 能 细 胞 损 失, 是 帕 金 森 患 者 出 现 临 床 症 状 的 主 要 因 素, 故 只 有 通 过 改 善 黑 质 纹 状 体 系 统, 使 其 能 够 恢 复 至 50%, 才 能 够 达 到 治 疗 效 果 近 几 年 来, 在 临 床 中 干 细 胞 移 植 成 为 该 病 治 疗 的 主 要 方 法, 但 成 人 神 经 干 细 胞 的 获 取 非 常 困 难, 胚 胎 的 多 巴 胺 能 神 经 元 移 植 可 有 效 控 制 该 病, 却 存 在 伦 理 学 问 题 3.2 细 胞 来 源 的 选 择 间 充 质 干 细 胞 不 仅 具 备 上 述 优 势, 同 时 还 具 有 以 下 特 点 :1 取 材 非 常 方 便, 且 具 有 非 常 充 足 的 细 胞 来 源, 除 脐 带 可 取 得 间 充 质 干 细 胞, 同 时 脐 血 和 骨 髓 等 组 织 均 可 获 取 间 充 质 干 细 胞 2 培 养 条 件 非 常 简 单, 且 短 时 间 内 即 可 大 量 培 养 3 能 够 穿 透 血 脑 屏 障 4 可 避 免 出 现 伦 理 问 题 ; 从 这 里 可 以 发 现, 脐 带 间 充 质 干 细 胞 具 有 非 常 高 的 优 势, 可 将 其 视 为 帕 金 森 病 治 疗 的 理 想 方 法, 同 时 该 方 法 也 是 当 前 临 床 治 疗 的 最 成 熟 的 方 法 3.3 移 植 途 径 的 选 择 目 前, 临 床 对 干 细 胞 移 植 治 疗 帕 金 森 病 的 研 究 报 道 非 常 多, 同 时 也 提 出 了 不 同 的 治 疗 途 径, 有 经 侧 脑 室 移 植 经 静 脉 通 道 经 壳 核 移 植 等 多 种 途 径, 其 中 侧 脑 室 和 壳 核 两 种 移 植 途 径, 更 多 地 是 用 于 人 胚 胎 组 织 移 植 治 疗 中, 而 本 文 首 次 尝 试 经 颈 动 脉 穿 刺 移 植, 选 择 该 途 径 主 要 是 考 虑 到 :1 动 脉 移 植 可 有 效 避 免 静 脉 移 植 出 现 的 静 脉 窦 处 栓 塞 损 失 2 黑 质 纹 状 体 区 是 由 颈 动 脉 供 血 3 经 过 动 脉 移 植, 可 使 干 细 胞 的 分 布 更 加 均 匀, 不 会 出 现 移 植 后 热 点 问 题, 进 而 避 免 移 植 后 并 发 症 的 出 现 3.4 颈 动 脉 注 射 过 程 中 的 注 意 事 项 在 颈 动 脉 注 射 时, 应 注 意 以 下 事 项 :1 在 穿 刺 前, 应 尽 可 能 地 缓 解 患 者 的 焦 虑 和 紧 张 情 绪, 并 叮 嘱 患 者 在 完 成 穿 刺 后, 控 制 吞 咽 和 咳 嗽 动 作 2 在 穿 刺 时, 以 快 准 为 原 则, 尽 量 实 现 一 次 穿 刺, 防 治 出 现 多 次 穿 刺 给 颈 部 造 成 不 必 要 的 损 伤 3 穿 刺 后 应 对 穿 刺 点 进 行 5-10 min 的 按 压, 按 压 位 置 一 定 要 保 持 正 确, 以 免 出 现 因 颈 动 脉 小 球 和 颈 动 脉 窦 受 压 出 现 不 良 反 应 3.5 干 细 胞 替 代 疗 法 的 可 能 作 用 机 制 截 至 目 前 为 止, 间 充 质 干 细 胞 在 帕 金 森 病 治 疗 的 机 制 主 要 为 :1 间 充 质 干 细 胞 移 植 后, 能 够 形 成 星 形 胶 质 细 胞 或 神 经 元 样 细 胞, 这 些 细 胞 能 够 作 用 于 受 损 部 位, 并 游 移 至 全 脑 2 间 充 质 干 细 胞 能 够 分 泌 各 种 营 养 因 子, 或 对 受 损 部 位 进 行 刺 激, 使 其 产 生 大 量 的 内 源 性 生 长 因 子, 对 帮 助 组 织 修 复 有 着 积 极 作 用 3 间 充 质 干 细 胞 是 新 生 血 管 的 重 要 部 分, 可 逐 渐 形 成 细 胞 外 基 质 和 血 管 内 皮 细 胞, 帮 助 血 管 新 生, 提 高 神 经 保 护 作 用 4 在 脑 内 创 造 适 宜 的 局 部 微 环 境, 通 过 体 外 扩 增 或 不 同 因 子 诱 导 分 化 的 方 法 使 间 充 质 干 细 胞 分 化 为 神 经 细 胞 后 进 行 移 植, 替 代 受 损 细 胞 重 建 神 经 功 能 区 和 传 导 通 路 根 据 本 文 结 果 来 看, 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 治 疗 可 在 短 时 间 内 对 帕 金 森 患 者 的 临 床 症 状 进 行 改 善, 但 对 体 位 不 稳 和 运 动 迟 缓 等 症 状 的 改 善 效 果 不 明 显, 这 可 能 与 本 文 观 察 时 间 较 短 有 直 接 联 系, 为 此, 移 植 后 仍 需 对 患 者 进 行 长 时 间 地 跟 踪, 除 帕 金 森 综 合 评 分 量 表 评 分 外, 可 结 合 PET 显 像 示 氟 多 巴 的 摄 取 有 无 增 加, 对 疗 效 进 行 客 观 评 定 3.6 帕 金 森 病 主 要 表 现 帕 金 森 病 好 发 于 老 年 人, 起 病 隐 匿 [4-5], 初 始 表 现 :1 静 止 性 震 颤, 表 现 为 不 自 主 颤 抖, 经 常 从 一 侧 的 手 指 继 而 发 生 于 上 肢 下 肢 下 颌 口 唇 和 头 部 与 下 肢 相 比, 上 肢 更 加 明 显 一 些 2 肌 强 直 : 即 肌 张 力 增 高, 从 而 使 肌 肉 强 直 有 铅 管 样 及 强 直 和 齿 轮 样 机 强 直, 路 标 现 象 为 诊 断 帕 金 森 病 的 早 期 症 状 3 运 动 迟 缓 : 患 者 出 现 面 具 脸 即 表 情 呆 滞 眨 眼 次 数 以 及 眼 睛 转 动 次 数 明 显 减 少, 起 床 系 鞋 带 等 变 慢, 写 字 出 现 写 字 过 小 征 4 特 殊 姿 势 如 屈 曲 体 姿 慌 张 步 态 等 等 3.7 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 治 疗 帕 金 森 病 在 动 物 实 验 中 建 立 动 物 模 型 得 到 多 次 验 证 [6], 将 脐 血 干 细 胞 移 植 对 帕 金 森 大 鼠 旋 转 行 为 具 有 良 好 的 影 响, 且 免 疫 排 斥 反 应 低 并 且 胎 儿 出 生 后 的 脐 血 可 以 有 效 的 利 用, 并 且 对 孕 妇 和 胎 儿 没 有 不 良 的 影 响 脐 血 干 细 胞 移 植 治 疗 帕 金 森 病 的 可 能 机 制 : 主 要 体 现 在 以 下 方 面, 第 一, 脐 血 间 充 质 干 细 胞 移 植 后 能 够 定 向 迁 移 到 病 变 部 位, 表 达 替 代 缺 损 的 神 经 元 或 神 经 胶 质 细 胞, 使 其 发 挥 正 常 的 细 胞 功 能, 从 而 缓 解 帕 金 森 病 的 病 症 第 二, 不 仅 可 以 表 达 成 为 中 枢 神 经 系 统 所 需 要 的 细 胞, 同 时 干 细 胞 可 以 细 胞 卫 士 的 作 用, 分 泌 出 营 养 脑 部 细 胞 和 组 织 的 因 子 或 者 刺 激 损 伤 部 位 自 身 产 生 修 复 因 子, 从 而 保 护 细 胞, 促 进 血 管 神 经 等 的 再 生 第 三, ISSN CN /R CODEN: ZLKHAH 935
5 脐 血 干 细 胞 进 入 脑 部 后, 可 以 诱 导 分 化 并 且 替 代 受 损 细 胞 恢 复 神 经 系 统 的 功 能 和 传 导 通 路, 为 脑 内 营 造 一 个 良 好 的 局 部 微 环 境 [7-8] 3.8 可 以 作 为 治 疗 帕 金 森 的 脐 带 间 充 质 干 细 胞 的 要 求 简 而 言 之 就 是 要 孕 妇 和 胎 儿 正 常 且 足 月 妊 娠, 即 胎 儿 发 育 和 营 养 正 常, 并 且 母 婴 没 有 传 染 病 肿 瘤 遗 传 病 等 等 这 样 获 取 的 脐 带 间 充 质 干 细 胞 具 有 许 多 优 点 : 比 如 增 殖 分 化 能 力 强 免 疫 排 斥 性 低 分 化 能 力 强 来 源 广 泛 收 集 方 便 对 孕 妇 和 胎 儿 没 有 危 害 且 不 受 伦 理 的 限 制, 在 临 床 上 的 应 用 前 景 非 常 宽 广 [9] 3.9 脐 带 间 充 质 干 细 胞 治 疗 帕 金 森 病 时 移 植 途 径 的 分 析 移 植 途 径 有 多 种, 常 见 的 为 经 局 部 经 侧 脑 室 或 者 壳 核 移 植 腰 穿 经 静 脉 移 植 等 各 种 方 法 均 有 其 优 点 和 长 处, 本 次 应 用 的 方 法 为 经 静 脉 移 植 考 虑 到 帕 金 森 病 的 本 质 为 黑 质 纹 状 区 病 变, 而 此 区 则 是 由 颈 静 脉 提 供 血 液 因 此 选 择 了 此 种 移 植 方 式 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 时 的 注 意 事 项 : 术 前 要 对 患 者 的 身 体 条 件 等 作 出 诊 断 : 即 体 检, 包 括 手 术 禁 忌 症 的 各 项 检 查 ( 血 尿 常 规, 肝 肾 代 谢 状 况, 凝 血 是 否 障 碍, 体 液 是 否 平 衡 等 等 ) 和 防 止 手 术 中 的 胃 肠 道 反 应 ( 移 植 前 12 h 内 注 意 使 胃 排 空, 以 及 尿 便 排 空 ); 采 用 的 方 法 为 颈 动 脉 注 射 法 首 先 要 做 好 患 者 的 心 理 工 作, 减 少 其 紧 张 和 忧 虑 的 负 面 情 绪, 并 且 配 合 医 生 减 少 颈 部 的 运 动, 如 吞 咽 咳 嗽 等 等 其 次, 仔 细 了 解 颈 部 解 剖 学, 找 准 颈 动 脉 位 置, 避 免 伤 及 颈 动 脉 窦 以 及 神 经 等 引 起 的 一 系 列 负 面 反 应 ; 最 后, 术 后 应 嘱 患 者 平 卧 去 枕 休 息 6 h, 注 意 监 控 心 电 图 等 以 及 是 否 存 在 并 发 症 [10-45] 本 次 关 于 脐 带 间 充 质 干 细 胞 移 植 治 疗 帕 金 森 病 的 研 究 中,15 例 患 者 均 有 明 显 的 改 善, 主 要 表 现 在 肌 肉 震 颤 姿 势 障 碍 等 等 方 面 通 过 统 计 学 t 检 验 分 析 得 出,P < 0.05, 说 明 了 治 疗 前 后 的 差 异 有 显 著 性 意 义, 再 次 证 明 了 与 传 统 的 治 疗 方 法 相 比, 脐 带 间 充 质 干 细 胞 治 疗 帕 金 森 病 是 一 种 新 型 且 有 效 的 治 疗 方 法, 具 有 广 阔 的 前 景, 为 帕 金 森 的 治 疗 提 供 了 新 的 希 望 为 了 得 到 长 期 的 临 床 疗 效 和 安 全 性 的 研 究 结 果, 还 应 进 行 大 样 本 和 长 期 的 观 察 与 目 前 手 术 治 疗 帕 金 森 病 相 比, 干 细 胞 移 植 疗 法 代 表 一 种 进 步 的 治 疗 方 案, 已 成 为 临 床 上 具 有 竞 争 力 的 新 疗 法, 现 有 研 究 表 明 其 能 促 使 长 期 持 久 地 大 幅 改 善 运 动 障 碍, 阻 断 疾 病 进 程 致 谢 : 感 谢 新 乡 医 学 院 第 三 附 属 医 院 妇 产 科 新 乡 医 学 院 统 计 教 研 室 对 于 文 章 的 帮 助 作 者 贡 献 : 项 目 主 持 人 王 艳 谭 军 ; 参 与 者 赵 新 利 张 军 艳, 实 验 采 用 盲 法 评 估 利 益 冲 突 : 文 章 及 内 容 不 涉 及 相 关 利 益 冲 突 伦 理 要 求 : 知 情 同 意 : 参 与 试 验 的 患 病 个 体 及 其 家 属 自 愿 参 加, 对 试 验 过 程 完 全 知 情 同 意, 在 充 分 了 解 治 疗 方 案 的 前 提 下 签 署 知 情 同 意 书 ; 干 预 及 治 疗 方 案 获 新 乡 医 学 院 附 属 第 三 医 院 伦 理 委 员 会 批 准 医 院 资 质 : 新 乡 医 学 院 附 属 第 三 医 院 具 有 干 细 胞 移 植 的 资 质 医 生 资 质 : 谭 军 为 主 任 医 师, 赵 新 利 为 副 主 任 医 师, 张 军 艳 为 主 治 医 师, 王 艳 为 医 师, 均 具 有 从 事 干 细 胞 领 域 工 作 的 经 验 学 术 术 语 : 帕 金 森 病 综 合 评 分 量 表 - 主 要 从 4 个 方 面 对 帕 金 森 病 患 者 神 经 功 能 进 行 评 价 : 第 1 部 分 : 精 神 行 为 和 情 绪 ; 第 2 部 分 : 日 常 活 动 ; 第 3 部 分 : 运 动 功 能 ; 第 4 部 分 : 治 疗 的 并 发 症 分 值 越 高 表 示 神 经 功 能 缺 损 越 严 重 作 者 声 明 : 文 章 为 原 创 作 品, 无 抄 袭 剽 窃, 无 泄 密 及 署 名 和 专 利 争 议, 内 容 及 数 据 真 实, 文 责 自 负 4 参 考 文 献 References [1] Smith GA, Isacson O, Dunnett SB. The search for genetic mouse models of prodromal Parkinson's disease. Exp Neurol. 2012;237(2): [2] Eun-Ju K, Young-Hyurk L, Min-Jeong K, et al. Transplantation of porcine umbilical cord matrix mesenchymal stem cells in a mouse model of Parkinson's disease. J Tissue Eng Regen Med. 2013;7(3): [3] Kordower JH. Stem cells and gene therapy in PD: future directions. Parkinsonism Relat Disord. 2012;18:10. [4] Moore CG, Schenkman M, Kohrt WM, et al. Study in ParkinsonDisease of Exercise (SPARX):Translating high-intensity exercise from animals to humans. Contemp Clin Trials. 2013;36(1): [5] Smith GA, Isacson O, Dunnett SB. The search for genetic mouse models of prodromal Parkinson's disease. Exp Neurol. 2012;237(2): [6] Wang F, Kameda M, Yasuhara T, et al. GDNF-pretreatment enhances the survival of neural stem cells following transplantation in a rat model of Parkinson's disease. Neurosci Res. 2011;71(1): [7] Nishimura K, Takahashi J. Therapeutic application of stem cell technology toward the treatment of Parkinson's disease. Biol Pharm Bull. 2013;36(2): [8] Yan M, Sun M, Zhou Y, et al. Conversion of human umbilical cord mesenchymal stem cells in Wharton's jelly to dopamine neurons mediated by the Lmx1a and neurturin in vitro: potential therapeutic application for Parkinson's disease in a rhesus monkey model. PLoS One. 2013; 8(5): e [9] Arenas E. Towards stem cell replacement therapies for Parkinson s disease. Biochem Biophys Res Commun. 2010; 396(1): [10] Luo Y, Kuang SY, Hoffer B. How useful are stem cells in PD therapy. Parkinsonism Relat Disord. 2009;15 Suppl 3:S [11] Zeng X, Couture LA. Pluripotent stem cells for Parkinson's disease: progress and challenges. Stem Cell Res Ther. 2013; 4(2):25. [12] 袁 源, 杨 树 源, 韩 忠 朝, 等. 人 脐 带 间 充 质 干 细 胞 分 离 纯 化 及 基 本 牛 物 学 特 性 研 究 [J]. 中 华 实 验 外 科 杂 志,2006,5(3): [13] 胡 静 波, 周 燕, 蒋 丹 丹, 等. 体 外 扩 增 过 程 中 人 骨 髓 间 充 质 干 细 胞 的 增 殖 与 分 化 规 律 [J]. 细 胞 与 分 子 免 疫 学 杂 志,2006,22(1):7-10. [14] 高 国 栋, 张 华, 王 学 廉, 等. 帕 金 森 病 的 定 向 手 术 适 应 症 [J]. 中 华 神 经 外 科 杂 志,2002,18(1): P.O. Box 10002, Shenyang
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绎 1 援 401331 2. 400030 3. 400020 4. 400080 5. 400012 88 44 44 猿 孕 约 0.05 ESR 悦 CRP RF 孕 约 0.05 doi: 10.11842/wst.2014.04.018 R593.22 A Rheumatoid Arthritis RA 44 19 25 32 耀 75 47.71 依 8.53 5 耀 28 4.39
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绎 阴 元元 / 100102 MCAT MCAO 84~333 mg kg -1 167 333 mg kg -1 MCAT 84 167 mg kg -1 MCAT 27% 37% 84~333 mg kg -1 MCAT 21%~ 32% MCAO LDH 10%~ 12% MDA 28%~38% SOD 15%~36% GSH 14%~36% doi: 10.3969/j.issn.1674-3849.2013.01.016
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绎 1 2 1. 8300112 援 830000 CNKI 1979-20121989-2013 PubMed/MEDLINE Jadad Cochrane RevMan 5.2.0 Meta 4 360 Meta OS WMD 95%-0.48-0.81-0.160.04-0.150.22 RR 95% 1.671.292.151.220.354.20 doi: 10.11842/wst.2014.08.030
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