744 中 国 循 环 杂 志 2014 年 9 月 第 29 卷 第 9 期 ( 总 第 195 期 )Chinese Circulation Journal,September,2014,Vol. 29 No.9(Serial No.195) BNP, ctn I, ADMA, -LVdP/dt
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- 琛 邵
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1 743 基 础 与 实 验 研 究 瑞 舒 伐 他 汀 对 慢 性 心 力 衰 竭 大 鼠 的 心 脏 保 护 作 用 及 其 对 非 对 称 二 甲 基 精 氨 酸 代 谢 通 路 的 影 响 * 熊 爱 琴, 马 萍, 刘 俊 梅, 徐 烨 华, 王 洋, 徐 清 斌 摘 要 目 的 : 探 讨 瑞 舒 伐 他 汀 对 慢 性 心 力 衰 竭 大 鼠 的 心 脏 保 护 作 用 及 其 对 非 对 称 二 甲 基 精 氨 酸 (ADMA) 代 谢 通 路 的 影 响 方 法 :36 只 SD 大 鼠, 随 机 分 为 异 丙 肾 上 腺 素 模 型 组 瑞 舒 伐 他 汀 治 疗 组 正 常 对 照 组, 每 组 12 只, 建 立 各 组 模 型 检 测 血 清 学 相 关 指 标 和 血 流 动 力 学 参 数, 并 观 察 心 肌 组 织 病 理 变 化, 采 用 免 疫 印 迹 方 法 检 测 相 关 蛋 白 表 达 的 情 况 结 果 : 与 正 常 对 照 组 比 较, 异 丙 肾 上 腺 素 模 型 组 脑 钠 肽 肌 钙 蛋 白 I 含 量 血 清 ADMA 和 左 心 室 最 大 下 降 速 率 (-LVdP/dt min ) 明 显 升 高 (P 均 <0.01); 左 心 室 收 缩 压 心 率 动 脉 收 缩 压 平 均 动 脉 压 和 左 心 室 最 大 上 升 速 率 (+LVdP/ dt max ) 均 显 著 降 低 (P 均 <0.01), 差 异 均 有 统 计 学 意 义 与 异 丙 肾 上 腺 素 模 型 组 比 较, 瑞 舒 伐 他 汀 治 疗 组 血 清 脑 钠 肽 肌 钙 蛋 白 I 含 量 ADMA 水 平 和 -LVdP/dt min 明 显 降 低 (P 均 <0.01); 左 心 室 收 缩 压 心 率 动 脉 收 缩 压 平 均 动 脉 压 和 +LVdP/dt max 均 显 著 升 高 (P 均 <0.01), 差 异 均 有 统 计 学 意 义 与 正 常 对 照 组 相 比, 异 丙 肾 上 腺 素 模 型 组 蛋 白 精 氨 酸 甲 基 转 移 酶 1 (PRMT1) 的 表 达 增 多 (P<0.01), 二 甲 基 精 氨 酸 二 甲 胺 水 解 酶 2 (DDAH2) 的 表 达 降 低 (P<0.01), 差 异 均 有 统 计 学 意 义 与 异 丙 肾 上 腺 素 模 型 组 比 较, 瑞 舒 伐 他 汀 治 疗 组 PRMT1 的 表 达 明 显 下 降 (P<0.01),DDAH2 表 达 差 异 无 统 计 学 意 义 (P>0.05) 结 论 : 瑞 舒 伐 他 汀 对 异 丙 肾 上 腺 素 诱 导 的 大 鼠 慢 性 心 力 衰 竭 心 脏 具 有 保 护 作 用, 该 作 用 机 制 与 其 降 低 血 清 肌 钙 蛋 白 I 脑 钠 肽 及 调 控 ADMA 代 谢 通 路 有 关 关 键 词 瑞 舒 伐 他 汀 ; 异 丙 肾 上 腺 素 ; 慢 性 心 力 衰 竭 ; 非 对 称 二 甲 基 精 氨 酸 ; 蛋 白 精 氨 酸 甲 基 转 移 酶 1; 二 甲 基 精 氨 酸 二 甲 胺 水 解 酶 2 The Protective Roll of Rosuvastatin on Chronic Heart Failure in Rats With its Effect on Asymmetric Dimethylarginine Metabolic Pathway XIONG Ai-qin, MA Ping, LIU Jun-mei, XU Ye-hua, WANG Yang, XU Qing-bin. Graduate School of Ningxia Medical University, Yinchuan (750004), Ningxia, China Corresponding Author: XU Qing-bin, Xu-qb@163.com Abstract Objective: To investigate the protection roll of rosuvastatin on chronic heart failure (CHF) in rats with its effect on asymmetric dimethylarginine (ADMA) metabolic pathway. Methods: A total of 36 male SD rats were randomly divided into 3 groups, n=12 in each group. Isoproterenol (ISO) group, the rats received ISO subcutaneous injection (5mg kg d) for 7 days to establish CHF model, and then received normal saline gavage administration for 7 days. Rosuvastatin (ROS) treatment group, the rats received ISO with ROS for 7 days, then continuously receiving ROS until 14 days. Normal control group, the rats received saline gavage administration for 7 days. The related serum index and haemodynamic parameters were examined, myocardial pathological changes were observed and the relevant protein expression was measured by Western blot analysis. Results: Compared with Normal control group, ISO group had obviously increased troponin (ctn I), serum ADMA, -LVdP/dtmin, all P<0.01, and decreased left ventricular systolic pressure (LVSP), heart rate, arterial SP, mean arterial pressure, +LVdP/dtmax, all P<0.01. Compared with ISO group, ROS treatment group showed significantly decreased * 基 金 项 目 : 国 家 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 (NO ) 作 者 单 位 : 宁 夏 回 族 自 治 区 银 川 市, 宁 夏 医 科 大 学 研 究 生 院 临 床 学 院 ( 熊 爱 琴 徐 烨 华 ), 药 学 院 ( 刘 俊 梅 王 洋 ); 宁 夏 医 科 大 学 总 医 院 心 内 科 ( 马 萍 徐 清 斌 ) 作 者 简 介 : 熊 爱 琴 主 治 医 师 硕 士 主 要 从 事 心 血 管 疾 病 的 防 治 研 究 @qq.com 通 讯 作 者 : 徐 清 斌 Xu-qb@163.com 中 图 分 类 号 :R541.7 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 : (2014) doi: /j.issn
2 744 中 国 循 环 杂 志 2014 年 9 月 第 29 卷 第 9 期 ( 总 第 195 期 )Chinese Circulation Journal,September,2014,Vol. 29 No.9(Serial No.195) BNP, ctn I, ADMA, -LVdP/dtmin, all P<0.01, and increased LVSP, heart rate, arterial SP, mean arterial pressure, +LVdP/dtmax, all P<0.01. Compared with Normal control group, ISO group had increased expression of protein arginine methyltransferases 1 (PRMT1), decreased expression of dimethyl- arginine dimethylaminohydrolase 2 (DDHA2), both P<0.01. Compared with ISO group, ROS treatment group showed decreased expression of PRMT1, P<0.01 and similar expression DDHA2, P>0.05. Conclusion: Rosuvastatin has the protective roll on ISO induced CHF in rats, which might be related to decreased serum levels of ctn I, BNP and ADMA metabolic pathway regulation. Key word Rosuvastatin; Isoproterenol; Chronic heart failure; Asymmetric dimethylarginine; Protein arginine methyltransferases 1; Dimethylarginine dimethylamine hydrolase 2 (Chinese Circulation Journal, 2014,29:743.) 慢 性 心 力 衰 竭 是 由 于 各 种 原 因 引 起 的 初 始 心 肌 损 伤 导 致 肾 素 - 血 管 紧 张 素 - 醛 固 酮 系 统 和 交 感 神 经 系 统 兴 奋 性 增 高, 各 种 神 经 内 分 泌 介 质 又 促 进 心 肌 重 构, 加 重 心 肌 损 伤 和 心 功 能 恶 化, 形 成 恶 性 循 环 [1] 他 汀 类 药 物 是 胆 固 醇 合 成 通 路 中 限 速 酶 - 羟 基 -3- 甲 基 - 戊 二 酰 辅 酶 A 还 原 酶 的 抑 制 剂, 能 减 少 胆 固 醇 合 成, 临 床 主 要 用 于 降 脂 治 疗 近 年 来 研 究 发 现 他 汀 类 药 物 还 有 改 善 心 肌 肥 厚 和 纤 维 化, 逆 转 心 室 重 构 的 作 用 [2] 从 分 子 生 物 角 度 研 究 认 为 心 力 衰 竭 本 质 是 心 肌 组 织 细 胞 中 蛋 白 表 达 与 调 控 异 常 而 引 起 的 疾 病 [3] 非 对 称 二 甲 基 精 氨 酸 (ADMA) 是 一 种 内 源 性 一 氧 化 氮 合 酶 抑 制 剂, 是 心 血 管 疾 病 的 的 一 种 危 险 因 子 [4] 临 床 及 动 物 实 验 研 究 表 明, 心 力 衰 竭 患 者 体 内 ADMA 水 平 显 著 增 多, 异 丙 肾 上 腺 素 所 致 大 鼠 急 性 心 肌 缺 血 时 ADMA 含 量 增 多 [5] 本 实 验 旨 在 通 过 建 立 异 丙 肾 上 腺 素 致 大 鼠 慢 性 心 力 衰 竭 动 物 模 型, 研 究 瑞 舒 伐 他 汀 对 异 丙 肾 上 腺 素 诱 导 的 大 鼠 慢 性 心 力 衰 竭 心 脏 的 保 护 作 用 及 其 对 ADMA 代 谢 通 路 的 影 响 1 材 料 与 方 法 动 物 : 清 洁 级 雄 性 SD 大 鼠, 体 重 210~250 g, 由 宁 夏 医 科 大 学 实 验 动 物 中 心 提 供, 动 物 合 格 证 号 SCXK( 宁 ) 药 品 和 试 剂 : 瑞 舒 伐 他 汀 片 剂 购 自 英 国 的 阿 斯 利 康 公 司, 批 号 :122653; 异 丙 肾 上 腺 素 ( 购 自 上 海 梯 西 爱 有 限 公 司, 纯 度 >99.0%, 批 号 :MVSTF- NF); 心 肌 肌 钙 蛋 白 I 脑 钠 肽 ADMA 酶 联 免 疫 反 应 检 测 试 剂 ( 购 自 武 汉 华 美 试 剂 有 限 公 司 ); 乌 拉 坦 氯 化 钠 多 聚 甲 醛 ( 美 国 Sigma 公 司 ); 凯 基 全 蛋 白 提 取 试 剂 盒 凯 基 BCA 蛋 白 含 量 检 测 试 剂 盒 ( 南 京 凯 基 生 物 科 技 发 展 有 限 公 司 ); 兔 抗 山 羊 PRMT1 和 山 羊 抗 兔 DDAH2 抗 体 ( 美 国 Abcam 公 司 ); 小 鼠 抗 β-action 抗 体 ( 北 京 中 杉 金 桥 生 物 技 术 公 司 ) 山 羊 抗 兔 及 兔 抗 山 羊 和 山 羊 抗 小 鼠 二 抗 ( 北 京 中 杉 金 桥 生 物 技 术 公 司 ) 化 学 荧 光 发 光 剂 购 自 ( 美 国 赛 默 菲 舍 尔 公 司 ); 实 验 用 水 为 超 纯 水 仪 器 :BL - 420E 四 道 生 物 机 能 实 验 系 统 ( 成 都 盟 泰 科 技 有 限 公 司 );TY96- Ⅱ N 型 超 生 细 胞 粉 碎 机 ( 宁 波 新 芝 生 物 科 技 股 份 有 限 公 司 );H1850R 型 台 式 高 速 冷 冻 离 心 机 ( 长 沙 湘 仪 离 心 机 仪 器 有 限 公 司 );Mutiskan Go 酶 标 仪 ( 美 国 Thermo Fisher 公 司 ); PowerPac Basic 电 泳 仪 ( 美 国 BIO-RAD 公 司 ); 培 清 JS-860B 凝 胶 成 像 分 析 仪 ( 上 海 培 清 科 技 有 限 公 司 ) 慢 性 心 力 衰 竭 动 物 模 型 的 制 备 及 分 组 :36 只 大 鼠, 随 机 分 为 3 组, 每 组 12 只 异 丙 肾 上 腺 素 模 型 组 皮 下 注 射 异 丙 肾 上 腺 素 5 mg/(kg d)7 天 及 生 理 盐 水 灌 胃 7 天, 建 立 慢 性 心 力 衰 竭 大 鼠 模 型 瑞 舒 伐 他 汀 治 疗 组 皮 下 注 射 异 丙 肾 上 腺 素 5 mg/(kg d) 7 天, 并 同 时 给 予 瑞 舒 伐 他 汀 5 mg/(kg d) 灌 胃 给 药 14 天 正 常 对 照 组 给 予 等 体 积 生 理 盐 水 灌 胃 7 天 灌 胃 给 药 体 积 为 每 100 g 体 重 0.5 ml 血 清 心 肌 肌 钙 蛋 白 I 脑 钠 肽 和 ADMA 水 平 的 测 定 : 全 血 于 6000 g 离 心 15 min, 取 血 清, 严 格 按 照 酶 联 免 疫 吸 附 法 (ELISA) 试 剂 盒 厂 家 说 明 书 所 述 方 法 操 作 [7,8], 检 测 心 肌 肌 钙 蛋 白 I 脑 钠 肽 和 ADMA 的 含 量 心 功 能 血 流 动 力 学 参 数 的 测 定 : 各 组 动 物 末 次 给 药 后 禁 食 不 禁 水 24 h, 称 体 重,20% 乌 拉 坦 (6 ml/kg) 腹 腔 麻 醉 于 颈 部 偏 右 侧 行 纵 向 切 口, 分 离 出 右 颈 总 动 脉, 结 扎 远 心 端, 用 大 鼠 动 脉 夹 封 闭 近 心 端, 于 两 端 内 剪 开 血 管 并 插 入 含 有 肝 素 生 理 盐 水 (500 U/ml) 的 心 导 管 (PE50) 至 右 颈 总 动 脉, 放 开 动 脉 夹, 通 过 压 力 换 能 器 连 接 BL-420E 四 道 生 物 机 能 实 验 系 统 记 录 仪, 记 录 动 脉 血 压 变 化 : 动 脉 收 缩 压 动 脉 舒 张 压 平 均 动 脉 压, 稳 定 后 记 录 15 min, 然
3 745 后 沿 颈 动 脉 向 心 方 向 将 导 管 轻 轻 插 入 3~4.5 cm, 当 动 脉 压 力 波 形 突 然 有 大 幅 度 的 变 化 舒 张 压 明 显 下 降 时, 说 明 导 管 已 进 入 左 心 室, 稳 定 后 记 录 左 心 室 收 缩 压 左 心 室 最 大 上 升 (+LVdp/dt max )/ 下 降 速 率 (-LVdp/dt min ) 心 率 等 免 疫 印 迹 方 法 检 测 相 关 蛋 白 表 达 : 在 约 50 mg 经 液 氮 研 磨 的 心 肌 组 织 中 加 入 0.3 ml 冷 裂 解 缓 冲 液, 冰 浴 下 超 声 破 碎 细 胞 4,1 万 r/min 离 心 10 min, 取 上 清 蛋 白 定 量, 剩 余 上 清 液 加 入 上 样 缓 冲 液 100 水 浴 10 min,-20 保 存 取 蛋 白 样 本 60μg 上 样,10%SDS-PAGE 凝 胶 电 泳 (80 V/120 V 电 压 ), 200 ma 恒 定 电 流 转 膜 至 硝 酸 纤 维 素 膜,5% 脱 脂 奶 粉 封 闭 1h 后, 分 别 用 抗 PRMT1 抗 体 (1 300) 抗 DDHA2 抗 体 (1 300) 及 抗 β-actin 抗 体 ( 内 参, 1:1000)4 孵 育 过 夜 分 别 加 入 山 羊 抗 兔 兔 抗 山 羊 二 抗 ( 偶 联 有 HRP,1:3000) 和 山 羊 抗 小 鼠 二 抗 ( 偶 联 有 HRP,1:5000) 常 温 孵 育 2 h, 加 入 超 级 化 学 发 光 底 物 反 应 液, 曝 光 胶 片 胶 片 扫 描 结 果 采 用 Quantity-one 软 件 分 析, 将 目 的 条 带 的 光 密 度 值 与 其 相 对 应 的 内 参 β-actin 的 光 密 度 值 相 比 以 校 正 误 差, 所 得 比 值 代 表 该 目 的 蛋 白 的 相 对 含 量 病 理 组 织 学 观 察 : 切 取 心 尖 组 织, 置 于 10% 中 性 甲 醛 固 定 24h, 石 蜡 包 埋, 切 片 4μm, 行 常 规 苏 木 素 伊 红 染 色, 200 镜 检 观 察 参 照 文 献 [9], 将 心 肌 病 理 损 伤 分 为 4 级 :0 级 (-): 心 肌 细 胞 结 构 清 晰, 心 肌 纤 维 排 列 整 齐, 横 纹 清 楚, 无 炎 细 胞 浸 润, 无 细 胞 水 肿 坏 死 或 纤 维 化, 间 质 毛 细 血 管 无 扩 张 或 轻 度 扩 张 ;I 级 (+): 心 肌 细 胞 排 列 稀 疏, 少 量 炎 细 胞 浸 润 心 肌 细 胞 水 肿, 间 质 血 管 扩 张 心 肌 组 织 可 见 局 灶 性 纤 维 化, 限 于 心 内 膜 下 ;Ⅱ 级 (++): 较 多 炎 细 胞 浸 润, 心 肌 细 胞 水 肿, 心 肌 细 胞 纤 维 化 呈 片 状 分 布, 累 及 心 壁 全 层, 间 质 可 见 明 显 血 管 扩 张 ;Ⅲ 级 (+++): 有 明 显 的 间 质 血 管 扩 张 水 肿 及 炎 细 胞 浸 润, 心 肌 广 泛 性 大 面 积 纤 维 化, 灶 间 相 互 连 接 累 及 心 壁 全 层 统 计 学 处 理 : 实 验 结 果 以 SPSS 11.5 统 计 分 析 软 件 包 进 行 分 析, 数 据 以 x±s 表 示, 多 组 间 均 数 的 比 较 采 用 One-way ANOVA 分 析,P<0.05 为 存 在 统 计 学 差 异 的 界 限 2 结 果 2.1 三 组 脑 钠 肽 肌 钙 蛋 白 I ADMA 及 血 流 动 力 学 参 数 变 化 与 正 常 对 照 组 比 较, 异 丙 肾 上 腺 素 模 型 组 脑 钠 肽 肌 钙 蛋 白 I 含 量 血 清 ADMA 和 -LVdP/ dt min 明 显 升 高 (P 均 <0.01); 左 心 室 收 缩 压 心 率 动 脉 收 缩 压 平 均 动 脉 压 和 +LVdP/dt max 均 显 著 降 低 (P 均 <0.01), 差 异 均 有 统 计 学 意 义 与 异 丙 肾 上 腺 素 模 型 组 比 较, 瑞 舒 伐 他 汀 治 疗 组 血 清 脑 钠 肽 肌 钙 蛋 白 I 含 量 ADMA 水 平 和 -LVdP/dt min 明 显 降 低 (P 均 <0.01); 左 心 室 收 缩 压 心 率 动 脉 收 缩 压 平 均 动 脉 压 和 +LVdP/dt max 均 显 著 升 高 (P 均 <0.01), 差 异 均 有 统 计 学 意 义 表 1 表 1 三 组 脑 钠 肽 肌 钙 蛋 白 I 非 对 称 二 甲 基 精 氨 酸 血 流 动 力 学 指 标 及 PRMT1 DDAH2 表 达 的 比 较 (n=12, ±s) 正 常 对 照 组 异 丙 肾 上 腺 素 模 型 组 瑞 舒 伐 他 汀 治 疗 组 脑 钠 肽 (pg/ml) ± ±29.67 * ±27.51 肌 钙 蛋 白 I (pg/ml) 34.89± ±5.93 * 30.79±4.37 非 对 称 二 甲 基 精 氨 酸 (ng/ml) 34.6± ±10.01 * 37.77±4.18 血 流 动 力 学 指 标 左 心 室 收 缩 压 (mmhg) ± ±6.70 * 137.0±19.23 心 率 ( 次 / 分 ) 401±25 332±23 * 390±25 动 脉 收 缩 压 (mmhg) ± ±7.23 * ±5.00 平 均 动 脉 压 (mmhg) 91.89± ±4.98 * 91.15±4.87 左 心 室 内 压 最 大 上 升 速 率 (mmhg/s) ± ± * ± 左 心 室 内 压 最 大 下 降 速 率 (mmhg/s) ± ± * ± PRMT1 表 达 0.478± ±0.089 * 0.447±0.071 DDAH2 表 达 0.807± ±0.084 * 0.609±0.133 注 : 与 对 照 组 比 较 * P<0.01; 与 异 丙 肾 上 腺 素 模 型 组 比 较 P<0.01 PRMT1: 精 氨 酸 甲 基 转 移 酶 1 DDAH2: 二 甲 基 精 氨 酸 二 甲 胺 水 解 酶 2 1 mmhg=0.133 kpa 2.2 免 疫 印 迹 检 测 结 果 与 正 常 对 照 组 相 比, 异 丙 肾 上 腺 素 模 型 组 PRMT1 的 表 达 增 多 (P<0.01),DDAH2 的 表 达 降 低 (P<0.01), 差 异 均 有 统 计 学 意 义 与 异 丙 肾 上 腺 素 模 型 组 比 较, 瑞 舒 伐 他 汀 治 疗 组 PRMT1 的 表 达 明 显 下 降 (P<0.01),DDAH2 表 达 差 异 无 统 计 学 意 义 (P>0.05) 表 1 图 1A 1B 2.3 三 组 心 肌 组 织 病 理 切 片 苏 木 素 伊 红 染 色 结 果 正 常 对 照 组 大 鼠 心 肌 组 织 无 异 常 改 变, 心 肌 纤 维 排 列 整 齐, 横 纹 清 晰, 细 胞 核 居 中, 间 质 未 见 血 管 扩 张 及 炎 性 细 胞 的 浸 润 ; 异 丙 肾 上 腺 素 模 型 组 大 鼠 心 肌 细 胞 肥 大 排 列 紊 乱, 间 质 可 见 不 同 程 度 的 细 胞 凋 亡 纤 维 化 及 炎 性 细 胞 浸 润, 以 纤 维 化 最 为 突 出 ; 瑞 舒 伐 他 汀 治 疗 组 心 肌 纤 维 化 程 度 显 著 减 轻, 伴 少 量 炎 性 细 胞 浸 润 图 2
4 746 中 国 循 环 杂 志 2014 年 9 月 第 29 卷 第 9 期 ( 总 第 195 期 )Chinese Circulation Journal,September,2014,Vol. 29 No.9(Serial No.195) PRMT1 42kDa DDAH2 30kDa β-actin 43kDa β-actin 43kDa 正 常 对 照 组 异 丙 肾 上 腺 素 模 型 组 瑞 舒 伐 他 汀 治 疗 组 1A 正 常 对 照 组 异 丙 肾 上 腺 素 模 型 组 瑞 舒 伐 他 汀 治 疗 组 1B 注 :1A:PRMT1 的 表 达 结 果 1B:DDAH2 的 表 达 结 果 PRMT1: 精 氨 酸 甲 基 转 移 酶 1 DDAH2: 二 甲 基 精 氨 酸 二 甲 胺 水 解 酶 2 β-actin:β- 肌 动 蛋 白 图 1 三 组 免 疫 印 迹 检 测 结 果 注 :2A: 正 常 对 照 2B: 异 丙 肾 上 腺 素 模 型 组 2C: 瑞 舒 伐 他 汀 治 疗 组 图 2 三 组 心 肌 组 织 病 理 切 片 苏 木 素 伊 红 染 色 结 果 ( 200 ) 2A 2B 2C 3 讨 论 异 丙 肾 上 腺 素 可 造 成 心 肌 弥 漫 性 坏 死, 心 肌 纤 维 化, 这 种 心 衰 模 型 因 为 没 有 持 续 存 在 的 损 伤 因 素 ( 如 瓣 膜 疾 病 冠 状 动 脉 结 扎 病 毒 等 ), 所 以 能 够 更 好 地 反 映 心 衰 的 自 然 病 理 过 程 [10] 本 实 验 采 用 异 丙 肾 上 腺 素 皮 下 注 射 的 方 法 建 立 大 鼠 慢 性 心 力 衰 模 型 脑 钠 肽 是 心 脏 分 泌 的 激 素 之 一, 与 左 心 室 功 能 关 系 密 切, 血 清 脑 钠 肽 水 平 越 高, 左 心 室 功 能 障 碍 越 严 重, 它 是 诊 断 心 力 衰 竭 的 敏 感 指 标 [11] 肌 钙 蛋 白 I 是 心 肌 内 的 一 种 调 节 蛋 白, 只 存 在 于 心 肌 组 织 中, 有 研 究 表 明, 慢 性 心 力 衰 竭 患 者 血 清 肌 钙 蛋 白 I 水 平 明 显 升 高 [12], 说 明 慢 性 心 力 衰 竭 时 存 在 心 肌 损 伤 此 外, 左 心 室 收 缩 压 左 心 室 等 容 期 压 力 最 大 变 化 速 率 反 映 了 心 室 的 收 缩 功 能 和 舒 张 功 能, 它 们 是 评 价 心 肌 舒 缩 性 能 的 指 标 [13] 慢 性 心 力 衰 竭 可 使 左 心 室 收 缩 压 +LVdP/dt max 明 显 降 低, 同 时 心 肌 肥 厚 及 纤 维 化 使 心 肌 局 部 舒 缩 性 能 发 生 障 碍, 心 肌 僵 硬 度 增 加, 心 脏 顺 应 性 下 降, 心 输 出 量 随 之 减 少 研 究 显 示 5 mg/(kg d) 异 丙 肾 上 腺 素 持 续 给 药 7 天 可 出 现 心 肌 组 织 纤 维 化, 心 功 能 障 碍, 且 其 与 梗 死 后 心 功 能 障 碍 及 心 肌 肥 厚 相 一 致 [14] 本 实 验 结 果 显 示 异 丙 肾 上 腺 素 模 型 组 大 鼠 血 清 脑 钠 肽 及 肌 钙 蛋 白 I 含 量 明 显 升 高 (P<0.01); 心 率 动 脉 收 缩 压 左 心 室 收 缩 压 和 LV +dp/dt max 均 显 著 降 低 (P<0.01), 而 -LV dp/dt min 升 高 (P<0.01); 大 鼠 心 肌 组 织 可 见 心 肌 细 胞 肥 大 细 胞 凋 亡 纤 维 化 及 炎 性 细 胞 浸 润, 尤 以 组 织 纤 维 化 最 为 严 重 与 文 献 报 道 一 致 [6-8] 因 此, 本 实 验 以 异 丙 肾 上 腺 素 诱 导 大 鼠 慢 性 心 力 衰 竭 模 型 造 模 是 成 功 的 研 究 表 明, 脑 钠 肽 肌 钙 蛋 白 I 是 慢 性 心 力 衰 竭 的 生 物 标 识 物, 是 心 肌 损 伤 高 度 敏 感 和 特 异 的 指 标, 心 衰 患 者 肌 钙 蛋 白 I 的 释 放 与 左 心 收 缩 功 能 障 碍 有 关 [15] 本 实 验 结 果 显 示 瑞 舒 伐 他 汀 可 降 低 异 丙 肾 上 腺 素 诱 导 的 慢 性 心 力 衰 竭 大 鼠 血 清 脑 钠 肽 肌 钙 蛋 白 I 水 平, 表 明 瑞 舒 伐 他 汀 对 心 肌 损 伤 具 有 保 护 作 用 瑞 舒 伐 他 汀 可 显 著 改 善 大 鼠 左 心 室 收 缩 舒 张 功 能, 提 示 瑞 舒 伐 他 汀 可 改 善 异 丙 肾 上 腺 素 致 慢 性 心 力 衰 竭 大 鼠 心 功 能 此 外, 从 心 肌 病 理 组 织 切 片 显 示 瑞 舒 伐 他 汀 可 明 显 改 善 大 鼠 心 肌 纤 维 化 程 度, 减 轻 心 肌 损 伤 上 述 结 果 表 明, 瑞 舒 伐 他 汀 对 异 丙 肾 上 腺 素 诱 导 的 慢 性 心 力 衰 竭 大 鼠 的 心 脏 具 有 保 护 作 用 ADMA 是 一 种 内 源 性 一 氧 化 氮 合 酶 竞 争 性 抑 制 剂, 在 慢 性 心 力 衰 竭 的 发 展 中 起 至 关 重 要 的 作 用 临 床 研 究 表 明, 在 慢 性 心 力 衰 竭 患 者 血 清 中 检 测 到 ADMA 水 平 增 高 [16], 动 物 实 验 表 明, 异 丙 肾 上 腺 素 诱 导 的 急 性 心 肌 缺 血 大 鼠 血 清 ADMA 水 平 明 显
5 747 增 高 [17] 本 实 验 研 究 结 果 表 明, 异 丙 肾 上 腺 素 诱 导 的 慢 性 心 力 衰 竭 大 鼠 血 清 ADMA 含 量 明 显 增 高, 瑞 舒 伐 他 汀 可 明 显 降 低 血 清 中 升 高 的 ADMA 水 平 提 示 瑞 舒 伐 他 汀 对 大 鼠 慢 性 心 力 衰 竭 保 护 作 用 与 降 低 血 清 ADMA 水 平 有 关 研 究 表 明,ADMA 的 产 生 与 分 解 代 谢 受 PRMT1/DDAH2 系 统 的 调 控 PRMT1 以 S- 腺 苷 甲 硫 氨 酸 为 甲 基 供 体, 催 化 蛋 白 或 多 肽 中 精 氨 酸 残 基 进 行 甲 基 化, 甲 基 化 蛋 白 在 蛋 白 水 解 酶 的 作 用 下 生 成 ADMA 二 甲 基 精 氨 酸 二 甲 胺 水 解 酶 (DDAH) 是 内 源 性 ADMA 代 谢 的 关 键 酶 在 体 内,80% 以 上 的 ADMA 经 DDAH 水 解 成 胍 氨 酸 和 二 甲 胺 而 被 代 谢, 仅 有 少 量 由 尿 排 出 DDAH 又 存 在 两 个 亚 型 : 即 DDAH1 和 DDAH2 DDAH2 则 多 存 在 于 以 内 皮 型 一 氧 化 氮 合 酶 (enos) 表 达 为 主 的 组 织 如 心 脏 血 管 等 ADMA 的 生 产 和 消 除 与 PRMT1 和 DDAH2 密 切 相 关,PRMT1 表 达 的 降 低 或 DDAH2 表 达 增 多 均 可 以 使 体 内 ADMA 的 生 成 减 少 [18] 因 此,PRMT1/ADMA/DDAH2 代 谢 通 路 失 调 可 引 起 内 皮 功 能 不 全 心 室 重 构 等 一 系 列 病 理 改 变, 最 终 导 致 慢 性 心 力 衰 竭 本 课 题 组 研 究 结 果 表 明, 异 丙 肾 上 腺 素 组 PRMT1 表 达 明 显 增 多, 且 DDAH2 表 达 显 著 降 低, 与 文 献 报 道 一 致 [19] 瑞 舒 伐 他 汀 可 降 低 升 高 的 PRMT1 的 表 达, 但 对 降 低 的 DDAH2 表 达 无 影 响 提 示 瑞 舒 伐 他 汀 对 大 鼠 慢 性 心 力 衰 竭 的 保 护 作 用 是 通 过 降 低 PRMT1 的 表 达 而 减 少 血 清 ADMA 含 量 来 实 现 的 综 上 所 述, 瑞 舒 伐 他 汀 具 有 保 护 异 丙 肾 上 腺 素 诱 导 大 鼠 慢 性 心 力 衰 竭 的 作 用, 该 作 用 机 制 与 其 降 低 血 清 肌 钙 蛋 白 I 脑 钠 肽 和 ADMA 及 调 控 ADMA 代 谢 通 路 有 关 慢 性 心 力 衰 竭 是 各 种 心 血 管 疾 病 的 最 严 重 阶 段, 尽 管 他 汀 类 药 物 具 有 治 疗 心 衰 的 理 论 基 础, 动 物 实 验 和 临 床 实 验 也 提 示 他 汀 类 药 物 可 改 善 心 衰, 但 也 有 一 定 的 不 利 影 响 目 前 还 缺 乏 大 规 模 人 群 前 瞻 性 临 床 资 料 进 一 步 支 持 随 着 临 床 对 其 研 究 的 不 断 加 大 和 加 深, 相 信 他 汀 类 药 物 将 会 在 心 血 管 疾 病 以 及 其 他 治 疗 领 域 中 将 会 发 挥 更 为 广 泛 的 作 用 参 考 文 献 [1] 孙 青 雯, 陈 焕 芹, 王 全 珍, 等. 心 力 衰 竭 患 者 血 清 和 肽 素 水 平 的 变 化 及 其 与 N 末 端 B 型 利 钠 肽 原 的 关 系. 中 国 循 环 杂 志, 2013, 7: [2] 王 蕾, 张 世 杰, 王 海 鹏, 等. 阿 托 伐 他 汀 对 兔 舒 张 性 心 力 衰 竭 模 型 心 室 重 构 的 影 响. 中 国 循 环 杂 志, 2010, 3: [3] 黄 璐, 王 立 波, 赵 晓 辉, 等. Neuregulin-1β 在 慢 性 左 心 衰 患 者 中 的 表 达 及 其 临 床 意 义, 黑 龙 江 医 药 科 学,2011,34: 56. [4] Ueda S, Yamagishi S, Matsumoto Y, et al. Asymmetric dimethylarginine (ADMA) is a novel emerging risk factor for cardiovascular disease and the development of renal injury in chronic kidney disease. Clin Exp Nephrol, 2007, 11: [5] Li X, Wang X, Guo Y, et al. Regulation ofendothelial nitric oxide synthase and asymmetric dimethylarginine by matrine attenuates isoproterenol-induced acute myocardial injury in rats. J Pharm Pharmacol, 2012, 64: [6] Krenek P, Kmecova J, Kucerova D, et al. Isoproterenol-induced heart failure in the rat is associated with nitric oxide-dependent functional alterations of cardiacfunction. Eur J Heart Fail. 2009, 11: [7] Bertinchant JP, Robert E, Polge A, et al. Comparison of the diagnostic value of cardiac troponin I and T determinations for detecting early myocardial damage and the relationship with histological findings after isoprenaline-induced cardiac injury in rats. Clin Chim Acta, 2000, 298: [8] Hasic S, Hadzovic-Dzuvo A, Jadric R, et al. B-type natriuretic peptide and adiponectin releases in rat model of myocardial damage induced by isoproterenol administration. Bosn J Basic Med Sci, 2013, 13: [9] Benjamin IJ, Jalil JE, Tan LB, et al. Isoproterend-induced myocardial fibrosisin relation to myocyte necrosis. Cire Res, 1989,65: 657. [10] 李 为 民, 甘 润 韬, 孙 桂 芳, 等. 肿 瘤 坏 死 因 子 拮 抗 剂 对 异 丙 肾 上 腺 素 诱 导 大 鼠 心 力 衰 竭 的 治 疗 作 用. 中 华 心 血 管 杂 志,2002,30: [11] 陆 洁, 巢 娟 芬, 崔 微 艳, 等. 重 症 心 衰 患 者 血 浆 N 末 端 脑 钠 肽 前 体 测 定 的 价 值. 临 床 急 诊 杂 志, 2011, 12: [12] 宋 予 苹, 王 文 君, 徐 泽 昌, 等. D- 二 聚 体 和 高 敏 C- 反 应 蛋 白 及 脑 钠 肽 浓 度 测 定 对 急 性 冠 脉 综 合 征 预 后 的 预 测 价 值. 中 国 全 科 医 学, 2007, 10: 801. [13] Thompson DS, Waldron CB, Juul SM, et al. Analysis of left ventricular pressure during isovolumic relaxation in coronary artery disease. Circulation, 1982, 65: [14] Heather LC, Catchpole AF, Stuckey DJ, et al. Isoproterenol induces in vivo functional and metabolic abnormalities: similar to those found in the infarcted rat heart. J Physiol Pharmacol, 2009, 60: [15] 郑 伯 仁, 林 敏 瑜, 刘 菁, 等. 慢 性 心 衰 患 者 NT-proBNP 血 浆 肌 钙 蛋 白 I hscrp 检 测 的 意 义. 心 血 管 康 复 医 学 杂 志, 2012, 4: [16] 彭 银, 刘 丽 梅, 潘 运 波, 等. 血 清 ADMA 在 心 力 衰 竭 患 者 研 究 中 的 应 用 分 析. 中 国 保 健 营 养, 2012, 14: [17] Zoccali C, Mallamaci F, Maas R, et al. Left ventricular hypertrophy, cardiac remodeling and asymmetric dimethylarginine (ADMA) in hemodialysis patients. Kidney Int. 2002, 62: [18] Palm F, Onozato ML, Luo Z, et al. Dimethylarginine dimethylaminohydrolase (DDAH): expression, regulation, and function in the cardiovascular and renal systems. Am J Physiol Heart CircPhysiol, 2007, 293: H [19] Li X, Wang X, Guo Y, et al. Regulation of endothelial nitric oxide synthase and asymmetric dimethylarginine by matrine attenuates isoproterenol-induced acute myocardial injury in rats. J PharmPharmacol, 2012, 64: ( 收 稿 日 期 : ) ( 编 辑 : 王 宝 茹 )
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