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1 J South Med Univ, 26, 36(3): doi.3969/j.issn 基础研究 mir-8b N-myc 2 邵建立, 李志忠, 王亮 2, 焦根龙, 周志刚, 孙国栋 暨南大学附属第一医院骨科, 2 肿瘤科, 广东广州 563 摘要 : 目的探讨 mir-8b 对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响 方法培养骨肉瘤细胞, 实时荧光定量 PCR 检测 mir-8b 在骨肉瘤细胞中的表达 抑制 mir-8b 的表达,Transwell 检测对骨肉瘤迁移和侵袭的影响 ; 生物信息学分析 mir-8b 靶基因并采用荧光素酶报告基因分析 mir-8b 和靶基因在骨肉瘤中是否直接作用, 同时采用 Western lotting 检测靶基因在骨肉瘤细胞中的表达以及 Transwell 检测靶基因对骨肉瘤迁移和侵袭的影响 结果实时荧光定量 PCR 结果表明 mir-8b 在骨肉瘤细胞中高表达 抑制 mir-8b 的表达能够抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭 ; 生物信息学分析表明 N-myc 下游调节基因 2(NDRG2) 是 mir-8b 直接作用的靶基因, 荧光素酶报告基因分析验证了该结果 ;Western blotting 检测表明 NDRG2 在骨肉瘤中低表达, 而抑制 mir-8b 能够显著提高 NDRG2 的表达 抑制 mir-8b 的表达的同时抑制靶基因 NDRG2 的表达, 能够逆转抑制 mir-8b 的表达对骨肉瘤细胞的迁移和侵袭的影响, 从而显著提高骨肉瘤细胞的迁移和侵袭 结论 mir-8b 在骨肉瘤中过表达,NDRG2 为 mir-8b 直接调控靶基因, 抑制 mir-8b 能够提高 NDRG2 的表达从而抑制骨肉瘤细胞的迁移侵袭 关键词 :mir-8b; 骨肉瘤 ;N-myc 下游调节基因 2; 迁移 ; 侵袭 microrn-8b promotes migration and invasion of osteosarcoma cells by targeting N-myc downstream regulated gene 2 SHO Jianli, LI Zhizhong, WNG Liang 2, JIO Genlong, ZHOU Zhigang, SUN Guodong Department of Orthopedics and Traumatology, 2 Department of Oncology, First ffiliated Hospital of Jinan University, Guangzhou 563, China bstract: Objective To investigate the effects of mir-8b on the migration and invasion of osteosarcoma cells. Methods Three cultured osteosarcoma cell lines and MG-63 cells transfected with mir-8b inhibitor were examined for mir-8b expression using qrt-pcr analysis. The cell migration and invasion of the transfected cells were assessed with Transwell assay. The targets of mir-8b were predicted using a mirn target prediction software and the results were verified with luciferase reporter assay. The target protein expression in osteosarcoma cells lines was determined by Western blotting, and the cell migration and invasion changes following inhibition of mir-8b or its target protein were assessed using Transwell assay. Results ll the 3 osteosarcoma cells lines showed significantly up-regulated mir-8b expression. Inhibition of mir-8b expression obviously suppressed the migration and invasion of MG-63 cells. ased on luciferase reporter assay, N-myc downstream regulated gene 2 (NDRG2) was identified as the direct target gene of mir-8b, and inhibition of NDRG2 expression significantly reversed the effect of mir-8b on cell migration and invasion in MG-63 cells. Conclusion mir-8b is over-expressed in osteosarcoma cells, and inhibition of mir-8b, which directly targets NDRG2, can suppress the migration and invasion of osteosarcoma cells. Key words: mir-8b; osteosarcoma cells; N-myc downstream regulated gene 2; cell migration; cell invasion 骨肉瘤是一种常见的骨原发恶性肿瘤, 起源于间叶 [] 组织恶性程度高 好发于青少年, 约 75% 的患者年龄在 5~25 岁之间, 男性比女性发病率略高 ; 骨肉瘤多发于长骨干,8%~9% 发生与股骨 腔骨等, 发生在手和足等四肢末端的不到 % [2-3] 骨肉瘤最主要的治疗方式 收稿日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金 (37862); 广东省中医药局科研课题 (24237) Supported by National Natural Science Foundation of China(37862). 作者简介 : 邵建立, 硕士, 主治医师, tzjl@jnu.edu.cn 通信作者 : 李志忠, 教授, 博士生导师, lizhizhong@medmail.com [, 4] 包括外科切除结合放化疗 但是骨肉瘤患者预后很差, 转移或者复发的患者长期生存率仍低于 2% [5] 因此, 了解骨肉瘤侵袭和转移的分子机制将有助于开发新的预后分子生物标记物和靶向治疗药物 MicroRN(miRN) 是一类存在于多种生物体中可调控基因表达的内源性非编码小分子 RN, 长约 9~ 25 个核苷酸, 其和骨肉瘤的发生发展以及耐药性有着密 [6-7] 切的关系 mir-8b 是 mirn 的一种, 在骨肉瘤中 [8] 高表达且和骨肉瘤的转移有着密切关系, 但是其具体作用以及机制还不清楚 为了更好的确定 mir-8b 在骨肉瘤发展中的作用, 我们将研究 mir-8b 在骨肉瘤细胞中的表达以及通过抑制 mir-8b 的表达研究 mir-8b

2 322 J South Med Univ, 26, 36(3): 的表达对骨肉瘤细胞迁移以及侵袭的影响, 并对 mir-8b 调控骨肉瘤细胞迁移以及侵袭的机制进行初步的探讨, 为骨肉瘤的靶向治疗提供新的理论依据 材料和方法. 细胞培养以及转染人正常成骨细胞系 hfo.9 和骨肉瘤细胞系 MG-63 Saos2 和 HOS 均购自中科院上海细胞研究所 人正常成骨细胞系 hfo.9 采用 F2 培养基与无酚红的 DEME 按 混合并加入 % 胎牛血清和.3 mg/ml 的 G48 培养, 培养条件为 34,5% CO 2 骨肉瘤细胞 MG-63 Saos2 和 HOS 细胞在含有 % 胎牛血清 U/mL penicillin G 和 μg/ml streptomycin 的 RPMI-64 培养基中进行培养 ; 培养条件为 37,5% CO 2 当细胞融合度大约为 8% 时用胰酶消化传代 将对数生长期骨肉瘤细胞种植于 6 孔培养板中 ( 每孔大约 X5 细胞 ), 第 2 天观察细胞融合度大约为 5% 并开始进行转染 mir-8b 抑制剂 (mir-8b inhibitor) 和 购自上海吉玛制药技术有限公司 NDRG2(NM_625) 干扰小 RN(si-NDRG2) 以及对照组 (si-nc) 购自 Santa Cruz iotechnology NDRG2 野生型 3'-UTR 和突变型 3'-UTR 由苏州金唯智合成并连接到 psi-check-2 载体 采用 Lipofectamine 2 分别转染 3 nm mir-8b inhibitor 到骨肉瘤细胞, 或者共转染 3 nm mir-375 mimics 和 μm si-ndrg2 或者 si-nc 到骨肉瘤细胞, 转染步骤参照 Invitrogen 说明书.2 实时荧光定量 PCR 检测 mrn 表达 (qrt-pcr) 收集细胞样品, 加入 ml Trizol 提取液提取细胞总 RN 颈环法反转录得到 cdn, 取 μl cdn 样品用于 mir-2 检测 ;SYR Green 法进行 PCR 检测 mir-2 及内参 U6 PCR 引物购自广州锐博生物科技有限公司,PCR 扩增条件为 :94 预变性 5 min, 然后 94 3 s 55 3 s 72 min 3 s 进行 4 个循环 每个样重复 3 次 检测引物如表.3 Western blotting 检测蛋白表达培养的细胞吸净培养液后, 直接加入细胞裂解液, 在冰上充分裂解后吸出裂解液 C 法测定总蛋白浓度,SDS-PGE 电泳分离蛋白, 电泳结束后取出分离胶, 转膜夹内从正极到负极依次是海绵 - 滤纸 -PVDF 膜 - 分离胶 - 滤纸 - 海绵, 排出干扰气泡, 加入转膜缓冲液, 恒定电流.5 转膜 2 h 室温下, 将 PVDF 膜放入 5% 脱脂奶粉中封闭 h 然后将 PVDF 膜放入 ml 稀释过的一抗 ( 2) 中 4 过夜 去除一抗,3 ml TST 洗膜 3 次, 每次 5 min 加入 ml 稀释的辣根过氧化物酶标记的二抗 ( 5), 室温孵育 2 h 3 ml TST 洗膜 3 次, 每次 5 min 暗室曝光 表 qrt-pcr 检测引物序列 Tab. Primer sequence of qrt-pcr Primer mir-8b RT mir-8bf mir-8br U6 RT U6 F U6 R NDRG2 F NDRG2 R GPDH-F GPDH-R.4 迁移和侵袭检测 骨肉瘤细胞迁移检测 : 将 Transwell 侵袭小室置入 24 孔板中, 在 Transwell 小室的下室加入含 % FS 的 DMEM 高糖培养液, 收集转染后的骨肉瘤细胞重悬, 加 入 2 µl 重悬液共 5 4 细胞到 Transwell 小室的上 室 ; 细胞培养 24 h, 取出小室, 用棉签将上室内部擦干 净, 小室的下表面用 PS 浸泡清洗 首先以 4% 多聚甲醛 溶液固定细胞, 然后.% 结晶紫染色液染色, 自来水冲 洗 3 次, 显微镜下拍照, 并随机选取 6 个不同区域, 计算 每个视野内穿过滤膜的细胞数量的细胞数, 取平均数为 侵袭细胞数 骨肉瘤的侵袭检测 : 首先在孔径为 8 μm 的 Transwell 侵袭小室微孔膜表面均勾涂抹 2 μl 浓度 为.5 g/l Matrigel 人工基质胶,37 放置 3 min 使其 聚成凝胶状 其余操作步骤同迁移检测.5 生物信息学分析 mir-8b 使用预测软件 Targetscan( targetscan.org) 和 miranda( microrna/home.do) 进行靶基因预测 为了确定 NDRG2 mrn 的 3'-UTR 是否为 mir-8b 的直接靶 蛋白,NDRG2 mrn 的野生型全长 3'-UTR 以及突变 型 3'-UTR 扩增并连接到 psi-check-2 载体 (Promega, 美国 ), 分别命名为 NDRG2-WT 和 NDRG2-MUT 引物 序列表 2 所示 MG-63 细胞共转染 2 nmol/l 或者 mir-8b 模拟物和 ng 质粒 (NDRG2-WT 或 者 NDRG2-MUT),24 孔板培养 48 h 收集细胞裂解, 海肾 (Renilla) 和萤火虫 (firefly) 荧光素酶荧光强度使用 Dual-Luciferase 报告分析系统 (Promega) 进行分析.6 统计学分析 Sequence (5'-3') GTCGTTCCGTGCGGGTCCGGGTTTC GCCTGGTCGCCCCC GCGGTCTTCTTGCTGTCG GTGCGGGTCCGGGT GTCGTTCCGTGCGGGTCCGGGT TTCGCCTGGTCGCT CTCGCTTCGGCGCCT GTGCGGGTCCGGGT TCTCTGGCCGCTTGCG TTCTGCCGGTGTGGC CCCCCTCCTCCCCTTT TTCTCCTTGGGGCCTGT 采用 SPSS 9. 统计软件进行分析, 计数资料以 % 表示, 采用 χ 2 检验 ; 计量资料采用均数 ± 标准差表示, 组 间对比采用配对 t 检验, 非正态分布资料或方差不齐, 采 用秩和检验 以 P<.5 为差异具有统计学意义

3 J South Med Univ, 26, 36(3): 结果 2. mir-8b 在骨肉瘤细胞中的表达 采用 qrt-pcr 检测细胞中 mir-8b 的 mrn 表 达水平, 结果发现 hfo.9 MG-63 Saos2 和 HOS 细 胞中 mir-8b 的相对表达量为.±.,5.8±.44, 2.98±.47 和 3.33±.3 和人正常成骨细胞系 hfo.9 相比, 骨肉瘤细胞系 MG-63 Saos2 和 HOS 中 mir- 8b 的 mrn 表达差异显著, 具有统计学意义 (P<.5, 图 ) 其中 MG-63 中 mir-8b 的 mrn 表达水平最 高, 后续实验采用 MG-63 细胞进行实验 Relative mrn expression 转染 mir-8b inhibitor 对 mir-8b 表达的影响 和 mir-8b inhibitor 转染 24 h 后采用 qrt-pcr 检测 mir-8b 的相对表达量 ( 图 2) MiR-NC 组和 mir-8b inhibitor 组 mir-8b 的相对 表达量分别为.±. 和.2±.7 和 组 相比,miR-8b inhibitor 组 mir-8b 的相对表达明显 减少, 差异显著具有统计学意义 (P<.5, 图 2) mir-8b inhibitor 能够显著抑制 mir-8b 的表达, 转 染成功, 可以用于后续实验 hfo.9 MG-63 Saos2 HOS 图 MiR-8b mrn 相对表达量 Fig. mir-8b mrn expression in 3 osteosarcoma cell lines relative to that in a normal ostoblast cell line. P<.5 vs hfo.9 cells. Relative mrn expression 抑制 mir-8b 表达对骨肉瘤细胞迁移影响 MiR-NC 和 mir-8b inhibitor 转染 48 h 后采用 Transwell 检测 MG-63 细胞的迁移能力, 代表图如图 3 所示 组和 mir-8b inhibitor 组 mir-8b 的 迁移细胞数分别 55±6 和 7±5 和 组相比, mir-8b inhibitor 组迁移细胞数明显减少, 差异显著 具有统计学意义 (P<.5, 图 3) 抑制 mir-8b 的表达 能够抑制骨肉瘤细胞的迁移 2.4 抑制 mir-8b 表达对骨肉瘤细胞侵袭影响 MiR-NC 和 mir-8b inhibitor 转染 48 h 后采用 Transwell 检测 MG-63 细胞的侵袭能力, 代表图如图 4 所示 MiR-NC 组和 mir-8b inhibitor 组的侵袭细胞 数分别 96±4 和 49± 和 组相比,miR-8b inhibitor 组的侵袭细胞数明显减少, 差异显著具有统计 学意义 (P<.5, 图 4) 抑制 mir-8b 的表达能够抑制 骨肉瘤细胞的侵袭 2.5 mir-8b 靶基因预测以及 W 检测 mir-8b inhibitor 图 2 mir-8b inhibitor 对 mir-8b 表达的影响 Fig.2 Effect of mir-8b inhibitor on mir-8b expression in MG-63 cells. P<.5 vs. 通过软件预测发现 NDRG2 可能是 mir-8b 的一 个靶基因 ( 图 5) 通过 Western lotting 检测发现 NDRG2 在 hfo.9 MG-63 Saos2 和 HOS 的相对表 达量分别为.±..4±.2.33±.5 和.22±.4, mir-8b inhibitor 8 6 Migrated cells per field mir-8b inhibitor 图 3 抑制 mir-8b 表达能够抑制 MG-63 细胞的迁移 Fig.3 Inhibition of mir-8b expression suppresses migration of MG-63 cells. : Microscopic observation of MG-63 cell migration; : Statistics of migrating cell number per field. P<.5 vs.

4 324 J South Med Univ, 26, 36(3): mir-8b inhibitor 2 Invasion cells of field mir-8b inhibitor 图 4 mir-8b inhibitor 对 MG-63 细胞侵袭的影响 Fig.4 Inhibition of mir-8b expression suppresses invasion of MG-63 cells. : Microscopic observation of MG-63 cell invasion; : Statistics of invading cells per field. P<.5 vs. ( 图 5 C) mir-8b 和 NDRG2 的表达趋势相反, 在 MG-63 细胞中表达量最小 所以假设在骨肉瘤细胞中 NDRG2 为 mir-8b 靶基因 C NDRG2 GPDH Relative protein expression 2.6 荧光素酶报告验证 NDRG2 为 mir-8b 直接作用 的靶基因 hfo.9 MG-63 Saos2 HOS hfo.9 MG-63 Saos2 HOS 图 5 NDRG2 在骨肉瘤细胞中的表达 Fig.5 Expression of NDRG2 in the osteosarcoma cells. : predicted duplex formation between wild-type or mutant NDRG2 3'-UTR and mir-8b;, C: Western blot results showing NDRG2 protein expression levels in osteosarcoma cell lines. P<.5 vs hfo.9 cells. 为了证明 NDRG2 是否为 mir-8b 的靶基因, 采 用双荧光素酶报告基因检测 ( 图 6) NDRG2-WT+ 组和 NDRG2-WT+ mir 8b 组的荧光活性变 化倍数分别为.54±.23 和.44±.2, 两者相比差异显 著具有统计学意义 (P<.5) NDRG2-MUT+ 以及 NDRG2-MUT+miR 8b 组的荧光活性变化倍数 分别为.33±.23 和.3±.26, 两者相比无统计学差异 (P>.5) 同时采用 qrt- PCR 检测 NDRG2-WT + 组和 NDRG2-WT + mir 8b 组的 NDRG2 mrn 分别为.±. 和.93±.2, 两者相比差异不显著没有统计学意义 (P>.5) 同时采用 Western blotting 检测检测 NDRG2- WT + 组和 NDRG2-WT+ mir 8b 组的 NDRG2 mrn 发现两者相比差异显著具有统计学意义 (P<.5, 图 6,C) 以上数据说明 NDRG2 的 3'-UTR 区上的位点都可以与 mir-8b 结合,miR-8b 与其靶基因 NDRG2 存在直接调控关系 2.7 NDRG2 表达对骨肉瘤迁移的影响 mir-8b inhibitor 和 si-ndrg2( 或者 si-nc) 共转染 48 h 后采用 Transwell 检测 MG-63 细胞的迁移 () 图 7) mir-8b inhibitor+si-nc 组和 mir-8b inhibitor+si-ndrg2 组的迁移细胞数分别 49±9 和 7±2 和 mir-8b inhibitor+si-nc 组相比,miR-8b inhibitor+si-ndrg2 组 mir-8b 的迁移细胞数明显减少, 差异显著具有统计学意义 (P<.5, 图 7) 抑制 NDRG2 的表达能够逆转 mir-8b inhibitor 造成的迁移抑制 2.8 NDRG2 表达对骨肉瘤侵袭的影响 mir-8b inhibitor 和 si-ndrg2( 或者 si-nc) 共转染 48 h 后采用 Transwell 检测 MG-63 细胞的迁移 () 图 8) mir-8b inhibitor+si-nc 组和 mir- 8b inhibitor+si-ndrg2 组侵袭细胞数分别 55±6 和 7±5 和 mir-8b inhibitor+si-nc 组相比,miR-8b inhibitor+ si-ndrg2 组的侵袭细胞数明显减少, 差异显著具有统计学意义 (P<.5, 图 8) 抑制 NDRG2 的表达能够逆转 mir-8b inhibitor 造成的侵袭抑制 3 讨论 mir-8 在小鼠胸腺 脑 肺等器官中高表达, 骨髓 [9] 和脾脏中也可检测到它的表达 mir-8b 属于 mir-8 家族, 其在非小细胞肺癌 (NSCLC) 星形细胞

5 J South Med Univ, 26, 36(3): Relative luciferase activity Relative mrn expression C NDRG2 GPDH NDRG2-WT NDRG2-WT+ NDRG2-WT+ mir 8b NDRG2-MUT NDRG2-WT+miR 8b NDRG2-WT+miR 8b 图 6 验证 NDRG2 是 mir-8b 直接作用的靶基因 Fig.6 NDRG2 is a direct target of mir-8b. : Luciferase activity of wild-type (3'-UTR-Wild) or mutant (3'-UTR-Mutant) NDRG2 3'-UTR containing reporters in MG-63 cells transfected with mir-8b mimics or ; : qrt-pcr of PDGF- mrn in UM cells transfected with mir-375 mimics or ; C: Western blotting results. P<.5 vs. 瘤中表达量了显著降低 [-] ; 但是在甲状腺乳头状腺癌, 乳腺癌中表达量显著升高 [2-3] 本研究结果表明在骨肉 瘤细胞中 mir-8b 的表达显著提高, 和 Jones 等研究结 果相似,Jones K 研究结果表明 mir-8b 在骨肉瘤组 织中高表达 [8] mir-8b 在肿瘤的发生发展以及耐药中有着广泛 [4] 的作用 研究表明,resin 等研究表明在慢性淋巴细 胞白血病 (CLL), 过表达 mir-8b 能够减少降低 TCL,cl2 和 Mcl 抗凋亡蛋白的表达, 降低 kt 和 Erk/2 蛋白的磷酸化, 显著诱导 CLL 细胞凋亡, 从而抑 [2] 制白血病细胞扩张和提高治疗小鼠的生存 Li 等研 究发现 mir-8b 在甲状腺乳头状腺癌中表达显著升 高, 下调 mir-8b 的表达能够显著上调靶基因 CYLD 的表达, 从而抑制甲状腺乳头状腺癌的增殖, 促进其凋 [] 亡 Wang 等研究发现 mir-8 b 在 NSCLC 中 549/ DDP 细胞表达水平低与在 549 细胞中的表达水平, mir-8b 能够通过靶向调控 TGFβR/Smad 信号通路 [5] 抑制 NSCLC 的化学耐药性 Sochor 等研究表明 mir-8b 在乳腺癌组织以及血清中高表达, 和预后不 [3] 良密切相关, 具有促癌作用 Zheng 等发现 mir-8b 在乳腺癌患者的血清以及乳腺癌细胞系中过表达, 在乳 腺癌阿霉素耐药株中表达量更高, 研究发现 mir-8b 通过靶向直接调节 im 的表达促进乳腺癌的发展以及 化疗耐药性 以上结果表明在不同的肿瘤中 mir-8b 发挥不同的作用, 但是 mir-8b 的差异表达和肿瘤的 发生发展以及耐药中有着广泛的联系 本研究表明抑 制 mir-8b 的表达能够显著降低骨肉瘤细胞的迁移和 侵袭, 说明 mir-8b 在这里发挥促癌基因的作用, 和在 乳腺癌以及甲状腺乳头状腺癌的作用类似 [2-3] 本研究通过生物信息学分析发现 NDRG2 为 mir-8b 的靶基因 NDRG2 为抑癌基因, 在肿瘤中的 表达显著下调, 与肿瘤的发生 发展和转归密切相关 研究表明 NDRG2 能够作为星形细胞瘤 胃癌等预后的 [6-7] [8] 标志 Golestan 等研究发现过表达 NDRG2 能够 抑制 MMP-9 的表达从而结肠癌细胞的增殖 迁移和侵 [9] 袭 Kim MJ 等研究表明 NDRG2 过表达能够下调 cox-2 表达, 抑制 NF-κ 信号通路乳腺癌细胞的抑制细 胞迁移和入侵 本研究通过 W 分析 NDRG2 在骨肉 mir-8b inhibitor+si-nc mir-8b inhibitor+si-ncdrg mir-8b mir-8b inhibitor+ inhibitor+si-nc si-ncdrg2 图 7 抑制 NDRG2 的表达对 MG-63 细胞迁移的影响 Fig.7 Effects of PDGF- silencing on MG-63 cell migration after transfection with mir-8b. : MG-63 cell migration measured using a transwell assay 48 h after transfection with mir-8b inhibitor plus si-nc or si-ndrg2; : verage number of migrating cells per field. P<.5 vs mir8b inhibitor+si-nc. Migrated cells per field

6 326 J South Med Univ, 26, 36(3): mir-8b inhibitor+si-nc mir-8b inhibitor+si-ncdrg mir-8b mir-8b inhibitor+ inhibitor+si-nc si-ncdrg2 图 8 抑制 NDRG2 的表达对 MG-63 细胞侵袭的影响 Fig.8 Effect of PDGF- silencing on MG-63 cell invasion after the transfection with mir-8b. : MG-63 invasion measured by Matrigel invasion assay 48 h after transfection with mir-8b inhibitor plus si-nc or si-ndrg2; : verage number of invading cells per field. P<.5 vs mir8b inhibitor+si-nc. Invasion cells of field 瘤中的表达显著下调, 说明 NDRG2 在骨肉瘤中表达异常, 同时通过 qrt-pcr 和 W 分析发现抑制 mir-8b 能够提高 NDRG2 的表达 进一步研究发现, 抑制 mir-8b 的同时抑制 NDRG2 的表达能够显著提高骨肉瘤细胞的迁移和侵袭, 该结果表明抑制 mir-8b 表达对骨肉瘤迁移和侵袭造成显著的抑制, 而抑制 mir-8b 的同时抑制 NDRG2 的表达能够逆转该影响 该结果说明 NDRG2 发挥抑癌作用, 和前人的研究 [2] 结果类似 而 mir-8b 能够抑制 NDRG2 的表达, 发挥促癌作用 总之, 本研究表明 mir-8b 在骨肉瘤细胞中高表达,NDRG2 为 mir-8b 直接作用的靶基因, 抑制 mir-8b 能够促进 NDRG2 的表达从而抑制骨肉瘤的迁移和侵袭, 该研究为骨肉瘤的治疗提供新的靶点和思路 参考文献 : [] Picci P. Osteosarcoma (osteogenic sarcoma)[j]. Orphanet J Rare Dis, 27(4): [2] Mirabello L, Troisi RJ, Savage S. Osteosarcoma incidence and survival rates from 973 to 24: data from the Surveillance, Epidemiology, and End Results Program[J]. Cancer, 29, 5(7): [3] Ottaviani G, Jaffe N. The epidemiology of osteosarcoma[j]. Cancer Treat Res, 29(52): 3-3. [4] Heare T, Hensley M. Dell'orfanoS.bonetumors:osteosarcoma and ewing's sarcoma[j]. CurrOpinPediatr, 29, 2(3): [5] Weeden S, Grimer RJ, Cannon SR, et al. The effect of local recurrence on survival in resected osteosarcoma[j]. Eur J Cancer, 2, 37(): [6] Li X, Chen L, Wang W, et al. MicroRN-5 Inhibits Cell Invasion and Migration and Is Downregulated in Human Osteosarcoma[J]. Cytogenet Genome Res. 25, 46(2): [7] Lu T, Zhang C, Chai MX, et al. mir-374a promotes the proliferation of osteosarcoma cell proliferation by targeting xin2[j]. Int J Clin Exp Pathol, 25, 8(9): [8] Jones K, Salah Z, Del Mare S, et al. mirn signatures associate with pathogenesis and progression of osteosarcoma[j]. Cancer Res, 22, 72(7): [9] Chen CZ, Li L, Lodish HF, et al. MicroRNs modulate hematopoietic lineage differentiation[j]. Science, 24, 33(5654): []Wang X, Chen X, Meng Q, et al. MiR-8b regulates cisplatinchemosensitivity and metastasis by targeting TGFβR/Smad signaling pathway in NSCLC[J]. Sci Rep, 25, 5: 768. []Zhi F, Wang Q, Deng D, et al. MiR-8b-5p downregulates NOV to suppress proliferation, migration and invasion and promote apoptosis in astrocytoma[j]. PLoS One, 24, 9(): e924. [2]Li D, Jian W, Wei C, et al. Down-regulation of mir-8b promotes apoptosis by targeting CYLD in thyroid papillary cancer[j]. Int J Clin Exp Pathol, 24, 7(): [3]Zheng Y, Lv X, Wang X, et al. mir-8b promotes chemoresistance in breast cancer by regulating im expression[j]. Oncol Rep, 26, 35(2): [4]resin, Callegari E, D'abundo L, et al. mir-8b as a therapeutic agent for chronic lymphocytic leukemia in the Eµ-TCL mouse model[j].oncotarget, 25, 6(23): [5]Sochor M, asova P, Pesta M, et al. Oncogenic microrns: mir- 55, mir-9a, mir-8b, and mir-24 enable monitoring of early breast cancer in serum[j]. MC Cancer, 24, 4: 448. [6]Li L, Wang J, Shen X, et al. Expression and prognostic value of NDRG2 in human astrocytomas[j]. J Neurol Sci. 2, 38(-2): [7]Ling ZQ, Ge MH, Lu XX, et al. Ndrg2 promoter hypermethylation triggered by helicobacter pylori infection correlates with poor patients survival in human gastric carcinoma[j]. Oncotarget, 25, 6 (): [8]Golestan, Mojtahedi Z, Ghalamfarsa G, et al. The effects of NDRG2 overexpression on cell proliferation and invasiveness of SW48 colorectal cancer cell line[j]. Iran J Med Sci, 25, 4(5): [9]Kim MJ, Kim HS, Lee SH, et al. NDRG2 controls COX-2/ PGE2-mediated breast cancer cell migration and invasion[j]. Mol Cells, 24, 37(): [2]Hu W, Fan C, Jiang P, et al. Emerging role of N-myc downstreamregulated gene 2 (NDRG2) in cancer[j]. Oncotarget, 25, doi:.8632/oncotarget ( 编辑 : 经媛 )