2330 临床与病理杂志, 2018, 38(11) Keywords lines and human normal ovarian epithelial cells. Pearson correlation analysis evaluated

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1 临床与病理杂志 J Clin Pathol Res 2018, 38(11) doi: /j.issn View this article at: mir-129 通过靶向调控 HMGA2 抑制卵巢癌细胞侵袭迁移的作用机制 邓艳蕾 1, 赵琴 1 2, 李明明 ( 十堰市妇幼保健院 1. 妇科 ;2. 超声科, 湖北十堰 ) [ 摘要 ] 目的 : 研究 mir-129 在高级别浆液性卵巢癌 (high-grade serous ovarian cancer,hgsoc) 组织及细胞系中的表达, 并探讨其对卵巢癌细胞侵袭迁移的影响及作用机制 方法 : 实时荧光定量 PCR(realtime quantitative PCR,qRT-PCR) 检测 mir-129,hmga2 在 70 例 HGSOC 组织和 30 例正常输卵管组织中的表达, 以及 mir-129 在人卵巢癌细胞系和人正常卵巢上皮细胞系中的表达 ;Pearson 相关分析评估 HGSOC 组织中 mir-129 与 HMGA2 表达的相关性 ; 将 mir-129 mimic 和对照转染卵巢癌细胞 CAOV 后, 用 Transwell 小室法检测细胞侵袭情况, 细胞划痕试验检测细胞迁移情况 HMGA2 mrna 和蛋白表达变化 ; 采用生物信息软件及荧光素酶报告基因试验 分析 mir-129 对 HMGA2 基因的靶向性作用 ; 转染 HMGA2 过表达质粒, 观察 HMGA2 对 mir-129 mimic CAOV 细胞侵袭和迁移的影响 结果 :mir-129 在 HGSOC 组织和细胞系中的表达均显著低于正常输卵管组织和正常卵巢上皮细胞 ( 均 P<5);HMGA2 在 HGSOC 组织中的表达显著高于正常输卵管组织 ( 均 P<5), 与 mir-129 的表达呈负相关 (r= 0.712,P<5); 与相比,miR-129 mimic 组 CAOV 细胞侵袭迁移能力下降,HMGA2 mrna 和蛋白表达减少 ( 均 P<5); 生物信息软件预测和荧光素酶报告基因实验显示 HMGA2 为 mir-129 的靶基因 ; 与 mir-129+ 相比,miR-129 mimic+hmga2 组细胞侵袭迁移能力明显升高 ( 均 P<5) 结论:miR-129 在 HGSOC 组织中低表达, 可能通过靶向下调 HMGA2 抑制卵巢癌细胞的侵袭迁移 [ 关键词 ] 高级别浆液性卵巢癌 ;mirna-129;hmga2; 侵袭 ; 迁移 Mechanism of mir-129 inhibiting invasion and migration of ovarian cancer cells by targeting HMGA2 DENG Yanlei 1, ZHAO Qin 1, LI Mingming 2 (1. Department of Gynaecology; 2. Department of Ultrasound, Maternal and Child Health Hospital of Shiyan, Shiyan Hubei , China) Abstract Objective: To investigate the expression of mir-129 in high-grade serous ovarian cancer (HGSOC) tissues and cell lines, and to explore its effect on the invasion and migration of ovarian cancer cells and its mechanism. Methods: Real-time quantitative PCR (qrt-pcr) was used to detect the expression of mir-129 and HMGA2 in 70 HGSOC tissues and 30 normal fallopian tubes, and the expression of mir-129 in human ovarian cancer cell 收稿日期 (Date of reception): 通信作者 (Corresponding author): 邓艳蕾, @qq.com

2 2330 临床与病理杂志, 2018, 38(11) Keywords lines and human normal ovarian epithelial cells. Pearson correlation analysis evaluated the correlation between mir-129 and HMGA2 expression in HGSOC tissues. After transfection of ovarian cancer cells CAOV with a mir-129 mimic and control, cell invasion was detected by Transwell microscopy, cell migration was detected by cell scratch test, and HMGA2 mrna and protein expression changes were detected. Bioinformatics software and luciferase reporter gene assay were used to analyze the targeting effect of mir-129 on HMGA2 gene. HMGA2 overexpression plasmid was transfected to observe the effect of HMGA2 on the invasion and migration of mir- 129 mimic CAOV cells. Results: The expression of mir-129 in HGSOC tissues and cell lines were significantly lower than that in normal fallopian tubes and normal ovarian epithelial cells (P<5). HMGA2 was significantly higher in HGSOC tissues than in normal fallopian tubes (P<5), negatively correlated with the expression of mir-129 (r= 0.712, P<5). Compared with the control group, the invasion and migration ability of CAOV cells in mir-129 mimic group decreased, and the expression of HMGA2 mrna and protein decreased (P<5); bioinformatics software prediction and luciferase reporter gene experiments confirmed that HMGA2 is a target gene of mir-129; compared with mir-129+ control group, mir-129 mimic+hmga2 group has significantly increased invasion and migration ability (all P<5). Conclusion: MiR-129 is lowly expressed in HGSOC tissues, and it can inhibit the invasion and migration of ovarian cancer cells by targeting down-regulation of HMGA2. high-grade serous ovarian cancer; mirna-129; HMGA2; invasion; migration 卵巢癌是第三大常见女性生殖系统恶性肿 瘤, 其病死率占恶性妇科肿瘤的第一位 [1] 虽然 目前临床上多采用手术 放化疗和分子靶向等多 个学科的联合治疗, 但是我国卵巢癌的发病率和 病死率仍居高不下 [2-3] 由于卵巢癌具有早期症状 不明显 无可靠的肿瘤生物学标志物 不断复发 和缺乏有效治疗靶标等多个特征, 使得卵巢癌的 治疗进入瓶颈 [4], 而局部和全身转移是卵巢癌患者 病死率较高的主要原因 [5], 但其转移的具体机制 尚未明确 卵巢癌组织学类型 90% 为上皮性恶性卵 巢癌, 其中高级别浆液性卵巢癌 (high-grade serous ovarian cancer,hgsoc) 占 2/3 以上 [6] 因此为改善 卵巢癌患者预后, 阐明潜在的肿瘤转移发展机制 并发掘新的治疗靶点至关重要 微小 RNA(miRNA) 是一组长约 19~25 个核苷 酸的内源表达非编码小 RNA, 可通过与靶基因 mrna 的 3' 非翻译区结合降低 mrna 的稳定性负调 节靶基因 mrna 的表达 [7] MiRNA 在生物学活动 中起至关重要的作用 [8-9], 且 mirna 的失调与肿 瘤的发生 发展密切 [10] MiRNA 是参与卵巢癌起 [11] 始和进展的重要因子 研究表明 :mir-129-5p 可抑制卵巢癌细胞的增殖和存活, 并且在卵巢癌 细胞中 mir-129-5p 的下调与恶性进展和较差的预后 有关, 而其在卵巢癌侵袭迁移中的作用及机制尚 未明确 因此本研究以卵巢癌细胞株 CAOV 为研究 对象, 旨在探究 mir-129 在卵巢癌细胞系侵袭迁移 中发挥的作用及机制, 为发掘卵巢癌治疗的新靶标提供实验依据 1 对象与方法 1.1 对象选取 2016 年 1 至 12 月首次于十堰市妇幼保健院治疗且并未进行治疗的卵巢癌患者, 收集手术切除病理确诊的 70 例 HGSOC 组织标本以及 30 例因其他良性疾病切除子宫输卵管术标本, 并立即保存于 80 液氮中用于提取组织 RNA 患者的临床病理学数据均保存可查, 并签署知情同意书 本研究经十堰市妇幼保健院医学伦理委员会审核批准 1.2 材料人卵巢癌细胞系 3AO,CAOV,HO8910 和人正常卵巢上皮细胞 IOSE80 均购自美国 ATCC 细胞库 ; Transwel l 小室 蛋白裂解试剂购自上海碧云天生物技术有限公司 ; 反转录试剂盒 实时荧光定量 PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR) 试剂盒等均购自日本 TaKaRa 公司 HMGA2 内参 GAPDH 引物由上海捷瑞生物工程有限公司设计合成, 兔抗人 HMGA2 抗体 (ab52039) 鼠抗人 GAPDH 抗体 (ab9485) 突变型和野生型 HMGA2 的 3'- 非翻译区 (3'-UTR) 荧光素酶报告载体 (HMGA2-wt,HMGA2-

3 mir-129 通过靶向调控 HMGA2 抑制卵巢癌细胞侵袭迁移的作用机制邓艳蕾, 等 2331 mut) mir-129 mimics HMGA2 过表达质粒由上海吉凯基因公司包装合成 1.3 方法 细胞培养及转染将细胞培养在 37, 5%CO 2 全湿度培养箱中,3AO, CAOV 细胞培养基为 10% FBS + RPMI1640, HO8910 细胞培养基为 10% FBS + DMEM-F12 CAOV 细胞在呈对数生长期时铺至 6 孔板, 贴壁 24 h 后, 按说明书将脂质体 2000 与各组转染试剂转染至细胞中, 分为 mir-129 mimics 与, 以及 mir-129 mimic+hmga2 组, 放至培养箱中培养 qrt-pcr 检测基因 mrna 的表达收集研磨的组织粉末和转染 48 h 后的各组细胞, 采用 TRIzol 法裂解细胞提取总 RNA 采用在线软件 mirbase( 分析 mir-129 mimics 序列 采用 Premier 5 在线软件设计引物序列,HMGA2 基因引物序列 : 正向引物为 5'-ACCCAGGGGAAGACCCAAA-3', 反向引物为 5'-CCTCTTGGCCGTTTTTCTCCA-3';GAPDH 基因引物序列 : 正向引物为 5'-GGAGCGAGAT CCCTCCAAAAT-3', 反向引物为 5'-AGCGAGCAT CCCCCAAAGTT-3', 由上海捷瑞生物工程有限公司设计合成 将 RNA 反转录成 cdna 并进行荧光定量 PCR 以 GAPDH 为内参基因 每个样品设置 3 个反应复孔, 按两步法进行反应, 分析各样品的循环阈值 (cycle threshold,ct), 用 2 Ct 法分析各组实验数据 实验重复 3 次 Transwell 小室法检测细胞侵袭能力接种细胞前用 50 μl 无血清培养基湿润 Transwell 小室聚碳酸酯微孔膜, 取转染 48 h 后的各组细胞无血清培养基洗 3 次, 以每孔 个细胞 100 μl 培养基接种于 Transwel l 小室的上室, 下室加 500 μl 的完全培养基作为趋化因子, 放至培养箱中培养,12 h 后于显微镜下观察下室穿过 5 个细胞的时候终止培养, 取出聚碳酸酯微孔膜, PBS 洗 3 次后中性甲醛固定 10 min, 苏木精染色 显微镜下随机计数 5 个视野计数, 取其均值代表细胞侵袭能力 细胞划痕试验检测细胞迁移能力取转染 48 h 后的各组细胞, 以每孔 个细 胞 12 ml 接种于 6 孔板中, 将其置于培养箱中, 待细胞贴壁后约 12 h, 用 10 μl 的无菌枪头在 6 孔板 正中沿直线画 1 条划痕,PBS 冲洗 3 次后, 加入无血 清培养基培养 于倒置显微镜下每 24 h 记录 1 次细 胞迁移情况 荧光素酶报告基因实验 实验分 4 组 :HMGA2-wt 与 mir-129 mimics 共 转染组 (HMGA2-wt+miR-129);A20-wt 与 scramble 共转染组 (HMGA2-wt+scramble);HMGA2-mut 与 mir-129 mimics 共转染组 (HMGA2-mut+miR-129); HMGA2-mut 与 scramble 共转染组 (HMGA2- mut+scramble), 分别转染上述 4 组到 CAOV 细胞 中,48 h 后收集细胞, 按照双荧光素酶活性检测试 剂盒的说明书进行操作, 检测荧光素酶活性, 实 验重复 3 次 蛋白提取及 Western 印迹 收集细胞, 每孔加入 500 μl 的蛋白裂解液 ( 含有 5 μl 蛋白酶抑制剂和 5 μl 磷酸酶抑制剂 ), 震 荡裂解 20 min,4, r/min 离心 30 min 后, BCA 试剂盒检测蛋白浓度, 变性后, 每孔 30 μg 蛋白进行 SDS-PAGE 电泳, 蛋白经湿转至 PVDF 膜,5% 脱脂牛奶封闭 1 h, 加入一抗 4 孵育过 夜,TBST 洗 3 次后, 二抗室温孵育 1 h,elc 化学 发光法曝光条带, 显影定影 采用 Image J 软件进 行蛋白条带灰度值的分析, 结果重复 3 次 1.4 统计学处理 采用 SPSS 17.0 统计软件进行数据分析, 数据 均以均数 ± 标准差 (x±s) 表示, 两组间比较采用配对 t 检验, 多组间比较采用单因素方差分析,P<5 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 MiR-129 在 HGSOC 组织和细胞系中的表达 MiR-129 在 HGSOC 组织中的表达显著低于 正常输卵管组织, 差异有统计学意义 ( P<5, 图 1A) 与正常卵巢上皮细胞 IOSE80 相比,miR- 129 在卵巢癌细胞系 3AO,CAOV,HO8910 中表达 下调, 且在 CAOV 中表达最低, 差异均有统计学意 义 ( 均 P<5, 图 1B), 即 mir-129 在卵巢癌组织和 细胞系中低表达

4 2332 临床与病理杂志, 2018, 38(11) A B 2.0 mir-129 相对表达量 mir-129 相对表达量 Normal Tumor IO SE 80 3AO CAOV HO8910 图 1 qrt-pcr 法检测 mir-129 的表达 Figure 1 Expression of mir-129 was detected by qrt-pcr (A)HGSOC 组织和正常输卵管组织中 mir-129 的表达水平,miR-129 在 HGSOC 组织中低表达 (P<5);(B)miR-129 在 3 株卵巢癌细胞系 3AO,CAOV,HO8910 中的表达显著低于正常卵巢上皮细胞 IOSE80(P<5) (A) Expression level of mir-129 was in HGSOC tissues and normal oviduct tissues, and mir-129 was lowly expressed in HGSOC tissues (P<5); (B) Expression of mir-129 was significantly lower in three ovarian cancer cell lines 3AO, CAOV, HO8910 than that in normal ovarian epithelial cells IOSE80 (P<5). 2.2 Transwell 小室检测 mir-129 对细胞侵袭能力的影响 Trans wel l 小室结果显示 : 与相比, mir-129 组细胞穿过的细胞显著减少, 差异有统计学意义 (P<5, 图 2) 表明 mir-129 具有抑制 CAOV 细胞的侵袭能力 mir-129 mimics 组 穿膜细胞数目 图 3 划痕试验检测转染 CAOV 细胞 mir-129 mimics 后细胞划痕愈合度下降, 细胞迁移能力下降 Figure 3 Scratch assay detected the scratch healing of CAOV cells transfected with mir-129 mimics was reduced, and cell migration ability was decreased 与相比,P<5 Compared with the control group, P<5. 图 2 Transwell 小室检测转染 CAOV 细胞 mir-129 mimics 后细胞穿膜数量减少, 细胞侵袭能力下降 Figure 2 Transwell chamber detected the number crossedmembrane of CAOV cells transfected with mir-129 mimics was reduced, and cell invasiveness ability was decreased 与相比,P<5 Compared with the control group, P< 划痕试验检测 mir-129 对细胞迁移能力的影响 划痕试验结果显示 : 与相比,miR-129 组细胞划痕愈合度显著降低, 差异有统计学意义 (P<5, 图 3) 表明 mir-129 具有抑制 CAOV 细胞 的迁移能力 0 mir-129 mimics 组 2.4 MiR-129 靶基因的预测和验证与正常输卵管组织相比,HGSOC 组织中 HMGA2 mrna 表达明显升高 ( P<5, 图 4A) Pearson 相关分析表明 HGSOC 组织中 mir-129 表达与 HMGA2 mrna 表达呈负相关 (r= 0.712,P<5; 图 4B) 利用 mirbase,target Scan 和 mi Target 等软件行生物学分析, 结果表明 mir-129 与 HMGA2 的 3'-UTR 结合 ( 图 4C) 荧光素酶报告基因实验结果显示 : 与 HMGA2-wt+scramble 共转染组相比, HMGA2-Wt+miR-129 共转染组的荧光素酶活性显著降低 ; 而 HMGA2-mut+scramble 和 HMGA2- mut+mir-129 组之间的荧光素酶活性强度无显著差异 ( 图 4D) qrt-pcr 和 Western 印迹表明 : 与相比,miR-129 mimics 组 HMGA2 mrna 和蛋白表达

5 mir-129 通过靶向调控 HMGA2 抑制卵巢癌细胞侵袭迁移的作用机制邓艳蕾, 等 2333 均显著下降 (P<5; 图 4E,4F) 说明 mir-129 在卵巢癌细胞中靶向调控 HMGA2 基因 2.5 HMGA2 对 mir-129 介导的 CAOV 细胞抑制侵袭迁移作用的影响与 mir-129 mimic+ 相比,miR-129 mimic+hmga2 组 CAOV 细胞 HMGA2 mrna 和蛋白表达均明显增加 ( P<5; 图 5A, 5B), Trans wel l 小室穿膜细胞数和划痕愈合度均显著增加 ( P<5; 图 5C, 5D), 说明 mir-129 通过下调 HMGA2 抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移 A HMGA2 相对表达量 2.0 Normal Tumor B HMGA2 mrna 相对表达量 r= 0.712,P< mir-129 相对表达量 C D 荧光素酶相对活性 mir-129 mimics HMGA2-wt HMGA2-mut E HMGA2 mrna 相对表达量 mir-129 mimics F HMGA2 GAPDH mir-129 mimics 图 4 mir-129 靶基因的预测和验证 Figure 4 Prediction and validation of the mir-129 target gene (A)HMGA2 在 HGSOC 组织中的表达显著高于正常输卵管组织 ;(B)Pearson 相关分析 HGSOC 组织中 mir-129 表达与 HMGA2 mrna 表达呈负相关 ;(C) 生物信息学预测 mir-129 与 HMGA2 的结合位点 ;(D) 荧光素酶报告基因验证 HMGA2 为 mir-129 的靶基因 ;(E) 过表达 mir-129 抑制 HMGA2 mrna 的表达 ;(F) 过表达 mir-129 抑制 HMGA2 蛋白的表达 与相比,P<5 (A) Expression of HMGA2 in HGSOC tissues was significantly higher than that in normal fallopian tubes; (B) Pearson correlation analysis showed that mir-129 expression was negatively correlated with HMGA2 mrna expression in HGSOC tissues; (C) Bioinformatics predicted the binding site between mir-129 and HMGA2; (D) Luciferase reporter gene verified that HMGA2 was a target gene of mir-129; (E) Overexpression of mir-129 inhibited HMGA2 mrna expression; (F) Overexpression of mir-129 inhibited expression of HMGA2 protein. Compared with the control group, P<5.

6 2334 临床与病理杂志, 2018, 38(11) A HMGA2 mrna 相对表达量 mir-129 mimics + mir-129 mimics + HMGA2 B HMGA2 GAPDH mir-129 mimics + mir-129 mimics + HMGA2 C D 穿膜细胞数目 mir-129 mimics + mir-129 mimics + HMGA2 mir-129 mimics + mir-129 mimics + HMGA2 图 5 HMGA2 对 mir-129 介导的 CAOV 细胞抑制侵袭迁移作用的影响 Figure 5 Effect of HMGA2 on inhibition of mir-129 mediated CAOV cells invasion and migration (A)HMGA2 mrna 在过表达 mimics 和 HMGA2 的 CAOV 细胞中的表达显著高于过表达 mimics 和对照的细胞 ;(B)HMGA2 蛋白在过表达 mimics 和 HMGA2 的 CAOV 细胞中的表达显著高于过表达 mimics 和对照的细胞 ;(C)Transwell 小室检测转染 CAOV 细胞 mir-129 mimics 和 HMGA2 后细胞穿膜数量增多, 细胞侵袭能力增加 ;(D) 划痕试验检测转染 CAOV 细胞 mir-129 mimics 和 HMGA2 后细胞划痕愈合度增加, 细胞迁移能力增加 与相比,P<5 (A) HMGA2 mrna expression in CAOV cells overexpressing mimics and HMGA2 was significantly higher than that in overexpressing mimics and control cells; (B) HMGA2 protein expression was significantly higher in CAOV cells overexpressing mimics and HMGA2 than overexpressing mimics and control cells; (C) Transwell chamber detected the number crossed-membrane of CAOV cells transfected with overexpressing mimics and HMGA2 was increased, and cell migration ability was increased; (D) Scratch assay detected the scratch healing of CAOV cells transfected with overexpressing mimics and HMGA2 was increased, and cell migration ability was increased. Compared with the control group, P<5. 3 讨论 卵巢癌是最致命的妇科恶性肿瘤, 其病死率 高居女性生殖系统三大恶性肿瘤之首 [12-13] 随着医 学进步, 患者的预后有所改善, 但由于卵巢癌不断 复发 耐药 早期转移致手术困难和缺乏有效的分 子靶向治疗等问题的出现, 使卵巢癌患者的 5 年存 活率仍较低 [14] 因此研究卵巢癌转移的机制, 对 寻找治疗卵巢癌新的治疗策略具有重大意义 近年 来 mirna 在肿瘤的早期诊断 发生发展 肿瘤细 胞侵袭和迁移等方面发挥的重要作用引起了广大学 者的密切关注 [15] [16] Iorio 等首次比较了 mirna 在 卵巢癌及正常卵巢组织中全基因组范围内的表达情 况, 发现约 30 种表达失调的 mirna MiR-129 是新近发现的 mirna, 最早由 Lagos- [17] Quintana 等在斑马鱼 大鼠和人体等生物体内发 现, 目前是肿瘤研究的热点, 在多个肿瘤中均显 [18] 示出抑癌基因和抑癌因子的作用 Meng 等研究 发现 mir-129 可靶向 CBX4 抑制乳腺癌细胞的增殖和 侵袭 与正常胃组织比较, 胃癌组织中 mir-129 表 达下调, 其低表达与胃癌患者的肿瘤大小和淋巴 结侵袭以及预后不良密切相关, 提示 mir-129 通过 靶向调节 ADAM9 而抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能 力 [19] MiR-129 作为抑癌因子, 在多种肿瘤组织或 细胞系中表达下调, 而在卵巢癌中的表达及是否 为抑癌因子未见有报道 HGSOC 是卵巢癌的主要 组织类型, 本研究通过 qrt-pcr 发现 :mir-129 在 70 例 HGSOC 组织中的表达显著低于 30 例正常输卵 管组织, 在 3 株卵巢癌细胞系中的表达显著低于人 正常卵巢上皮细胞系,miR-129 低表达于 HGSOC 组织和卵巢癌细胞中, 提示 mir-129 可能是抑癌因 子, 可发挥抑癌作用 因此本研究通过合成 mir-

7 mir-129 通过靶向调控 HMGA2 抑制卵巢癌细胞侵袭迁移的作用机制邓艳蕾, 等 mimics 及其对照, 并且转染至卵巢癌 CAOV 细 胞株,Transwell 小室和划痕试验检测结果显示过表 达 mir-129 显著抑制 CAOV 细胞的侵袭和迁移, 说 明 mir-129 具有抑制卵巢癌细胞侵袭和迁移的抑癌 功能 每个 mirna 通常有数个靶基因, 通过调控 靶基因发挥不同的生物学功能 本研究利用生物 信息学预测到 HMGA2 mrna 的启动子区有 mir- 129 的结合位点, 进一步双荧光素酶检测结果证 实 HMGA2 为 mir-129 的靶基因, 高迁移率族蛋白 A2(high mobility group protein A2,HMGA2) 是一 种小的非组蛋白染色体蛋白, 没有内在的转录活 性, 但可以通过改变染色质结构来调节转录 [20] HMGA2 在胚胎发生中高度表达, 而在大多数成 [21] 熟和分化组织中其几乎不表达 研究表明 : HMGA2 在许多人类恶性肿瘤中高表达, 参与调节 肿瘤不同的细胞活动, 包括细胞周期调控 分化 和衰老 HMGA2 过度表达与许多人类肿瘤如乳腺 癌和胰腺癌等肿瘤的发生 发展有关 [22-23] 本研 究发现 HMGA2 在 HGSOC 组织中的表达高于正常 输卵管组织, 与 HMGA2 在乳腺癌和胰腺癌等肿瘤 [22-23] 中高表达的研究结果一致 Pearson 相关分析 显示其与 mir-129 在 HGSOC 组织中的表达呈负相 关, 而荧光素酶报告基因实验结果显示 mir-129 直 接靶向负调控 HMGA2 基因, 而 mir-129 是否通过 调控 HMGA2 发挥抑制卵巢癌细胞侵袭和迁移的功 能尚不明确 本研究结果显示 :CAOV 细胞转染 mir-129 mimics 后细胞侵袭和迁移能力下降, 如 mir-129 通过负调控 HMGA2 基因抑制细胞侵袭和转移, HMGA2 基因的过表达会削弱 mir-129 的抑制作用, 而 CAOV 细胞同时转染 mir-129 mimics 和 HMGA2 后,Transwel l 小室和划痕试验显示细胞穿膜数量 和划痕愈合度比同时转染 mir-129 mimics 和 增加, 表明 HMGA2 可以减少 mir-129 对卵巢癌细 胞侵袭和迁移能力的抑制作用,miR-129 通过负调 控 HMGA2 基因发挥抑制细胞侵袭和转移的功能, HMGA2 具有促进细胞侵袭和迁移的作用, 与 Xia [24] 等发现的下调 HMGA2 表达减少上皮间质转化来 抑制胃癌细胞的增殖 侵袭能力的结果类似 综上,miR-129 在 HGSOC 组织和卵巢癌细胞 中低表达, 通过负调控 HMGA2 可抑制卵巢癌细胞 的侵袭和迁移, 本研究结果可为研究卵巢癌的恶 性生物学行为侵袭和迁移的分子机制提供新的理 论基础, 为卵巢癌的治疗提供新的干预靶点 参考文献 1. Siegel RL, Miller KD, Jemal A. Cancer statistics, 2017[ J]. CA Cancer J Clin, 2017, 67(1): Torre LA, Trabert B, DeSantis CE, et al. Ovarian cancer statistics, 2018[ J]. CA Cancer J Clin, 2018, 68(4): Wang J, Li J, Chen R, et al. Contribution of lymph node staging method and prognostic factors in malignant ovarian sex cord-stromal tumors: a world wide database analysis[ J]. Eur J Surg Oncol, 2018, 44(7): Zhao R, Liu Q, Lou C. MicroRNA-299-3p regulates proliferation, migration and invasion of human ovarian cancer cells by modulating the expression of OCT4[ J]. Arch Biochem Biophys, 2018, 651: Liu DT, Yao HR, Li YY, et al. MicroRNA-19b promotes the migration and invasion of ovarian cancer cells by inhibiting the PTEN/AKT signaling pathway[ J]. Oncol Lett, 2018, 16(1): Prat J. New insights into ovarian cancer pathology[ J]. Ann Oncol, 2012, 23 Suppl 10(1): x111-x Hausser J, Zavolan M. Identification and consequences of mirnatarget interactions--beyond repression of gene expression[ J]. Nat Rev Genet, 2014, 15(9): Frith JE, Kusuma GD, Carthew J, et al. Mechanically-sensitive mirnas bias human mesenchymal stem cell fate via mtor signalling[ J]. Nat Commun, 2018, 9(1): 李辉. mir-2135 对 P19 细胞增殖及向心肌细胞分化的作用 [ J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(45): LI Hui. Effect of mir-2135 on the P19 cell proliferation and differentiation into cardiomyocytes[ J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2016, 20(45): Wang XZ, Hang YK, Liu JB, et al. Over-expression of microrna-375 inhibits papillary thyroid carcinoma cell proliferation and induces cell apoptosis by targeting ERBB2[ J]. J Pharmacol Sci, 2016, 130(2): Tan G, Cao X, Dai Q, et al. A novel role for microrna-129-5p in inhibiting ovarian cancer cell proliferation and survival via direct suppression of transcriptional co-activators YAP and TAZ[ J]. Oncotarget, 2015, 6(11): Liu J, Jiang Y, Wan Y, et al. MicroRNA-665 suppresses the growth and migration of ovarian cancer cells by targeting HOXA10[ J]. Mol Med Rep, 2018, 18(3): Siegel RL, Miller KD, Fedewa SA, et al. Cancer statistics, 2017[ J]. CA Cancer J Clin, 2017, 67(3): Cliby WA, Powell MA, Al-Hammadi N, et al. Ovarian cancer in the United States: contemporary patterns of care associated with improved survival[ J]. Gynecol Oncol, 2015, 136(1): Qu X, Gao D, Ren Q, et al. mir-211 inhibits proliferation, invasion and

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