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宿钝邹
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1 肿瘤 214 年 3 月第 34 卷第 3 期 TUMOR Vol. 34, March 基础研究 Basic Research DOI: /j.issn Copyright 214 by TUMOR 上调 mir-181b 表达对乳腺癌细胞功能的影响李晓宇, 罗颀枫, 魏传奎, 李登峰, 房林同济大学附属第十人民医院甲状腺乳腺外科, 上海 272 [ 摘要 ] 目的 : 探讨上调 mir-181b 的表达对人乳腺癌 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞功能的影响及其可能的靶向基因方法 : 应用脂质体介导的方法将 mir-181b 模拟物 () 分别转染 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞后, 通过 MTT Transwell 和 FCM 法分别检测细胞增殖和迁移能力及细胞周期的变化将含细胞周期蛋白依赖性激酶 8(cyclin-dependent kinase 8,CDK8) 基因 3 端非翻译区 (3 -untranslated region,3 -UTR) 的重组载体 psicheck-2/cdk8-3 UTR 和共转染入人胚肾 HEK293T 细胞, 应用双荧光素酶报告系统验证 CDK8 基因 3 -UTR 是否有 mir-181b 的结合位点蛋白质印迹法检测转染后 MDA- MB-231 和 MCF-7 细胞中 CDK8 蛋白的表达情况结果 : 与转染 mir-181b 模拟物阴性对照 (negative control, NC)() 组比较, 转染组 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞的增殖和迁移能力受到抑制 (P <.5), 细胞周期主要阻滞于 G /G 1 期 (P <.1);psiCHECK-2/CDK8-3 UTR 和 mir-181b mimics 共转染组 HEK293T 细胞的荧光素酶活性下降 (P <.1), 证实 mir-181b 与 CDK8 基因 3 -UTR 可特异性靶向结合与转染组比较, 转染组 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞中 CDK8 蛋白的表达水平明显下调 (P <.5) 结论: 上调 mir-181b 的表达可显著抑制人乳腺癌细胞的增殖和迁移, 这种作用可能与 mir-181b 靶向调节 CDK8 的表达有关 [ 关键词 ] 乳腺肿瘤 ; 微 RNAs; 细胞增殖 ; 细胞周期蛋白依赖性激酶 8;miR-181b; 细胞,MDA-MB-231,MCF-7 [ 中图分类号 ] R737.9 [ 文献标志码 ] A [ 文章编号 ] (214) The effect of increasing the expression of mir-181b on the function of human breast cancer cells LI Xiao-yu, LUO Qi-feng, WEI Chuan-kui, LI Deng-feng, FANG Lin Department of Breast and Thyroid Surgery, Tenth People s Hospital, Tongji University, Shanghai 272, China [ABSTRACT] Objective: To investigate the effects of increasing the expression of mir-181b on the function of human breast cancer cell lines MDA-MB-231 and MCF-7, and to explore its possible target gene. Methods: were transfected into MDA-MB-231 and MCF-7 cells by LipofectAMINE 2 and then the capabilities of proliferation and migration as well as the cell cycle distribution of MDA- MB-231 and MCF-7 cells were evaluated by MTT, Transwell and flow cytometry methods, respectively. Recombinant vector psicheck-2/cyclin-dependent kinase 8 (CDK8)-3 -untranslated region (3 -UTR) and were co-transfected into human embryonic kidney HEK293T cells and then the targeting of mir-181b combined with 3 -UTR of CDK 8 gene was detected by dual luciferase report system. The expression of CDK8 in MDA-MB-231 and MCF-7 cells after transfection with mir-181b mimics was determined by Western blotting. Results: As compared with the -negative control (NC) tranfection group, the capabilities of proliferation and migration in MDA-MB-231 and MCF-7 cells after transfection with were significantly inhibited (P <.5), and the cell cycle was arrested at G /G 1 phase (P <.1). The luciferase activity of HEK293T cells after co-transfection with psicheck-2/cdk8-3 UTR and was reduced (P <.1), and it confirmed that mir- 181b specifically targeted with CDK8 3 -UTR. As compared with the transfection group, the expression level of CDK8 in MDA-MB-231 and MCF-7 cells after transfection with mir-181b mimics was down-regulated (P <.5). Conclusion: The up-regulation of mir-181b expression can inhibit [ 基金项目 ] 国家自然科学基金资助项目 ( 编号 : ) Correspondence to: FANG Lin( 房林 ) fanglin_f@126.com Received Accepted

2 198 李晓宇, 等. 上调 mir-181b 表达对乳腺癌细胞功能的影响 the proliferation and migration of human breast cancer cells. This effect may be related to mir-181b targeting of the expression of CDK8. [KEY WORDS] Breast neoplasms; MicroRNAs; Cell proliferation; Cyclin dependent kinase 8; mir-181b; Cell, MDA-MB-231, MCF-7 [TUMOR, 214, 34 (3): ] 乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤, 也是女性癌症死亡的主要原因之一在美国, 乳腺癌位居女性恶性肿瘤发病率的首位, 全球每年死亡病例超过 5 万 [1] 近年来, 随着乳腺癌筛查工作的开展, 早期乳腺癌确诊病例所占比例增加 ; 并且, 乳腺癌综合治疗提高了疗效, 乳腺癌患者的总体死亡率呈下降趋势, 但晚期乳腺癌患者的死亡率依然无明显下降, 乳腺癌的防治工作任重而道远因此, 寻找乳腺癌特异性标志物对临床诊断的意义重大已有研究提出, 将微小 RNA(microRNA, mirna,mir) 作为肿瘤分子标志, 辅助癌症的 [2, 诊断和预后评估 3] mirna 是一类进化上保守长度约 19 ~ 22 个核苷酸的内源性单链非编码 RNA 现有研究表明,miRNA 通过直接剪切靶 mrna, 或者通过完全或不完全与靶基因 mrna 3 末端互补结合, 抑制靶 mrna 的翻译, 在转录后水平进行基因调控, 从而参与一系列细胞生理进程 ( 包括肿瘤发生 ) [4, 5] 目前, 已有研究显示 mir-181b 在胃癌的发生和发展中起到抑癌基因的作用, 与肿瘤的发生和发展有重要关系 [6] 然而,miR-181b 在乳腺癌的发生发展侵袭和转移中的作用及机制仍不明确人类细胞周期蛋白依赖性激酶 8(cyclindependent kinase 8,CDK8) 基因定位于染色体 13q12, 包含 5 个转录本, 其中只有 1 个转录本可以编码蛋白产物, 该产物含 464 个氨基酸残基, 其相对分子质量为 CDK8 作为一种关键的细胞周期调节因子, 对维持肿瘤去分化及胚胎干细胞的多能性有重要作用 [7] 有研究证实, CDK8 在结肠癌和黑素瘤等肿瘤中起重要作用, 并且发现 CDK8 基因表达与乳腺癌和卵巢癌患者的未复发生存时间密切相关 [8] 本研究应用 mirna 靶基因在线预测软件 (miranda TargetScan 和 PicTar) 预测 mir- 181b 可能与 CDK8 结合, 通过脂质体介导将 mir-181b 模拟物 () 和阴性对照 (negative control,nc) 模拟物 (mir-181b mimics-nc) 转染人乳腺癌 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞, 通过进一步的细胞功能实验检测其对 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞增殖迁移和细胞周期的影响, 应用蛋白质印迹法检测外源性上调细胞 mirna-181b 的表达后 CDK8 蛋白的表达情况, 探讨其在人乳腺癌中可能参与的调节机制 1 材料与方法 1.1 主要试剂胎牛血清 (fetal blood serum, FBS) 和 DMEM 高糖培养液均购自美国 Hyclone 公司, 青霉素和链霉素购自美国 Gibco 公司 ; 脂质体转染试剂购自美国 Invitrogen 公司 ;mir- 181b mimics 和购自上海吉玛制药技术有限公司 ;MTT 细胞增殖检测试剂购自美国 Sigma 公司 ;Transwell 小室购自美国 Corning 公司 ; 细胞周期检测试剂盒购自美国 BD 公司 ; 含 CDK8 基因 3 端非翻译区 (3 -untranslated region,3 -UTR) 的重组载体 psicheck-2/cdk8-3 UTR 由上海生博生物医药科技有限公司构建, 双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自美国 Promega 公司 ;BCA 蛋白质浓度测定试剂盒购自北京碧云天生物技术研究所, 兔抗人 CDK8 单克隆抗体购自美国 Cell Signaling 公司, 兔抗人 β-actin 单克隆抗体 ( 内参照 ) 购自美国 Epitomics 公司, 荧光标记的羊抗兔 (82 通道 )IgG 二抗购自美国 Licor 公司 1.2 细胞及细胞培养人乳腺癌 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心人胚肾 HEK293T 细胞购自美国模式菌种保藏中心 MDA-MB-231 MCF-7 和 HEK293T 细胞用含 1% FBS 1 U/mL 青霉素和终质量浓度为 1 μg/ml 链霉素的 DMEM 高糖培养液, 置于 37 CO 2 体积分数为 5% 的培养箱中培养在倒置光学显微镜下观察细胞的生长情况,.25% 胰蛋白酶溶液消化传代, 取对数生长期的细胞用于后续实验 1.3 转染乳腺癌细胞及 MTT 法检测对乳腺癌细胞增殖能力的影响将 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞接种

3 李晓宇, 等. 上调 mir-181b 表达对乳腺癌细胞功能的影响 199 于 6 孔板中, 个细胞 / 孔, 细胞融合度为 4% ~ 5% 时, 按照脂质体转染试剂说明书提供的方法, 分别将终浓度为 5 或 1 nmol/l 的 ( 实验组 ) 或 mir-181b mimics-nc( 对照组 ) 转染至 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞 ; 收集转染 24 h 后的各组细胞, 接种于 96 孔板中,1 个细胞 / 孔, 每组设置 6 个重复孔按以下步骤, 应用 MTT 法分别检测转染和 4 d 后细胞的增殖情况 : 加入 2 μl/ 孔 MTT 溶液 ( 质量浓度为 5 mg/ml), 继续培养 4 h; 吸弃上清液, 加入 15 μl/ 孔 DMSO, 置于摇床上低速振荡 1 min, 使结晶物充分溶解 ; 在多功能酶联免疫检测仪上检测 49 nm 波长处各孔的吸光度 (D) 值, 以细胞培养时间为横坐标, 细胞吸光度 (D) 值为纵坐标绘制细胞增殖曲线, 计算细胞的增殖抑制率细胞的增殖抑制率 =( 对照组 D 值 - 实验组 D 值 )/ 对照组 D 值 1% 实验重复 3 次 1.4 Transwell 法检测对乳腺癌细胞迁移能力的影响将 Transwell 侵袭小室置入 24 孔板中, 在 Transwell 侵袭小室的下室加入含 1% FBS 的 DMEM 高糖培养液, 收集转染 1 nmol/l 或 - NC 48 h 后的 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞, 加入 Transwell 侵袭小室的上室,5 1 4 个细胞 / 室 ; 细胞培养 18 h, 在倒置光学显微镜下观察侵袭小室的下室, 待细胞穿出后终止实验取出小室, 用棉签将上室内部擦干净, 小室的下表面用 PBS 浸泡清洗, 以 4% 多聚甲醛溶液固定细胞,.1% 结晶紫染色液染色, 自来水冲洗 3 次, 拍照用 3 μl 33% 冰醋酸溶液溶解膜上的结晶紫, 在酶联免疫检测仪上测定 573 nm 波长处各孔的吸光度 (D) 值实验重复 3 次 1.5 FCM 法检测对乳腺癌细胞周期的影响收集 1 nmol/l mir-181b mimics 或转染 24 h 后的 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞, 应用细胞周期检测试剂盒检测细胞周期的改变 PBS 洗涤细胞 2 次, 加入预冷的 7% 乙醇溶液,4 固定过夜 ; 加入终质量浓度为.5 g/l 的碘化丙啶 25 μl, 4 避光染色 3 min, 上流式细胞仪检测细胞周期的变化实验重复 3 次 1.6 预测 mir-181b 的靶基因应用在线生物信息预测软件 (miranda TargetScan 和 PicTar) 对 hsa-mir-181b 可能作用的靶基因进行预测, 选择的原则是该基因具有物种保守性预测结果显示,hsa-miR-181b 靶向结合 CDK8 3 -UTR 1.7 双荧光素酶报告基因检测系统检测 mir- 181b 靶向结合 CDK8 基因 3 -UTR 将对数生长期的 HEK293T 细胞接种于 96 孔培养板中, 1 个 / 孔 ; 细胞培养 24 h 后, 应用脂质体转染试剂将重组载体 psicheck-2/cdk8-3 UTR 分别与 1 nmol/l 或 mir- 181b mimics-nc 共转染至 HEK293T 细胞收集转染 24 h 后的细胞, 按双荧光素酶报告基因检测试剂盒说明书提供的方法检测细胞中荧光素酶的活性 PBS 洗涤细胞 3 次, 加入细胞裂解液室温反应 15 min 后, 先后加入萤火虫荧光素酶检测试剂和海肾素荧光素酶检测试剂, 在多功能酶联免疫检测仪上检测萤火虫荧光素酶活性和海肾素荧光素酶活性按以下公式计算细胞荧光素酶活性, 荧光素酶活性 = 萤火虫荧光素酶活性 / 海肾素荧光素酶活性每组设 3 个重复孔, 实验重复 3 次 1.8 蛋白质印迹法检测对乳腺癌细胞 CDK8 蛋白表达的影响收集 1 nmol/l 或转染 48 h 后的 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞, 用预冷的 PBS 洗涤 2 次,RIPA 裂解液裂解细胞, BCA 法测定蛋白质浓度取 3 μg/ 孔蛋白质进行 1% SDS-PAGE, 将电泳分离后的蛋白质转移至硝酸纤维素膜 ;5% 脱脂奶粉溶液室温下封闭 1 h, 加入稀释的 CDK8 和 β-actin( 内参照 ) 抗体,4 反应过夜 ;PBST 洗膜 3 次, 加入稀释的荧光标记的羊抗兔 (82 通道 )IgG 二抗, 室温反应 3 min;pbst 洗膜 3 次, 应用 Odyssey 双色红外激光成像系统检测蛋白质条带的灰度值, 以目的蛋白质条带的灰度值与内参照 β-actin 蛋白质条带灰度值的比值表示目的蛋白质的相对表达水平实验重复 3 次 1.9 统计学方法应用 SPSS 17. 软件对结果数据进行统计学分析计量数据以 ± s 表示, 样本间均数的比较采用独立样本 t 检验,MTT 法检测结果应用两因素方差分析 P <.5 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 mir-181b 抑制乳腺癌细胞的增殖 MTT 法检测结果 ( 图 1) 显示, 与

2 李晓宇, 等. 上调 mir-181b 表达对乳腺癌细胞功能的影响转染组比较, 转染组 MDA- MB-231 和 MCF-7 细胞的增殖抑制率上升, 在一定程度上呈剂量及时间依赖性当终浓度为 1 nmol/l 的转染 4 d 时,miR-181b 对 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞的增殖抑制作用最强, 抑制率分别为 52.9% 和 26.2%(P <.5) 2.

4 2 李晓宇, 等. 上调 mir-181b 表达对乳腺癌细胞功能的影响转染组比较, 转染组 MDA- MB-231 和 MCF-7 细胞的增殖抑制率上升, 在一定程度上呈剂量及时间依赖性当终浓度为 1 nmol/l 的转染 4 d 时,miR-181b 对 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞的增殖抑制作用最强, 抑制率分别为 52.9% 和 26.2%(P <.5) 2.2 mir-181b 抑制乳腺癌细胞的迁移能力 Transwell 法检测结果 ( 图 2) 显示, 与 mir-181b mimics-nc 转染组比较, 转染组 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞穿过 Transwell 小室膜细胞的吸光度 (D) 值明显下降 (t = 9.73, P <.5;t = 17.2,P <.5) 这一结果表明,miR-181b 能够明显抑制 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞的迁移 D 49 nm D 49 nm MDA-MB-231 cells (5 nmol/l) (1 nmol/l) t/d MCF-7 cells (5 nmol/l) (1 nmol/l) mir-181b 将乳腺癌细胞周期阻滞于 G /G 1 期 FCM 法检测结果 ( 图 3) 显示, 与 mir- 181b mimics-nc 转染组比较, 转染组 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞的 G /G 1 期细胞所占比例明显增加 (t = 13.21,P <.1; t = 61.15,P <.1),G 2 /M 期细胞所占比例明显减少 (t = 4.79,P <.1;t = 18.68, P <.1),S 期细胞所占比例亦明显减少 (t =. 1 2 Fig. 1 The proliferation of MDA-MB-231 and MCF-7 cells transfected with or mir-181b mimics-negative control (NC) was detected by MTT assay (n=3). * P<.5, vs group. 图 1 MTT 法检测或 mir-181b mimics-nc 转染后 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞的增殖情况 t/d 3 4 Fig. 2 The effect of mir-181b on the ability of migration of MDA-MB-231 and MCF-7 cells (crystal violet staining, 2) (n=3) transfected with or -negative control (NC) for 48 h. The quantification of the migratory cells by solubilization of crystal violet and spectrophotometric reading at D 573 nm. * P<.5. 图 2 Transwell 法检测 mir-181b 对 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞迁移的影响

5 李晓宇, 等. 上调 mir-181b 表达对乳腺癌细胞功能的影响 21 MDA-MB-231 cells Cell number 6 4 Cell numberr 6 4 Cell cycle/% G /G 1 S G 2 /M MCF-7 cells Cell number Cell number 6 4 Cell cycle/% G /G 1 S G 2 /M Fig. 3 The effect of mir-181b on the cell cycle distribution of MDA-MB-231 and MCF-7 cells transfected with or -negative control (NC) for 24 h was detected by flow cytometr y (n =3). ** P <.1. 图 3 FCM 法检测 mir-181b 对 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞周期的影响 14.58,P <.1;t = 14.3,P <.1) 这一结果提示,miR-181b 可以将 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞阻滞于 G /G 1 期 2.4 mir-181b 靶向结合 CDK8 基因 3 -UTR 双荧光素酶报告基因检测结果 ( 图 4) 显示, psicheck-2/cdk8-3 UTR 质粒和 mir-181b mimics 共转染组 HEK293T 细胞的荧光素酶活性 (4.629±.23) 是 psicheck-2/cdk8-3 UTR 质粒和 mir-181-nc 共转染组 HEK293T 细胞荧光素酶活性 (9.637±.517) 的 39.3%(t = 9.1, P <.1) 这一结果表明,miR-181b 与 CDK8 基因的 3 -UTR 有特异性结合 2.5 mir-181b 抑制乳腺癌细胞 CDK8 蛋白的表达蛋白质印迹法检测结果 ( 图 5) 显示, 与转染组比较,miR-181b mimics 转染组 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞中 CDK8 蛋白的表达水平明显下调 (t = 6.25, P <.5;t = 9.,P <.5) Relative luciferase activity 1 5 mir-181b mimics mir-181b mimics-nc F ig. 4 D ual luciferase repor t was used to test the combination of mir-181b and cyclin-dependent kinase 8 (CDK 8) 3 -untranslated region (3 -UTR) (n =3). The relative luciferase activity (firefly/renilla) was measured in HEK293T cells after co-transfection of the CDK 8 luciferase construct psicheck-2/cdk8-3 UTR and or -negative control (NC). ** P<.1. 图 4 双荧光素酶报告基因检测 mir-181b 与 CDK 8 基因 3 -UTR 的结合

22 李晓宇, 等. 上调 mir-181b 表达对乳腺癌细胞功能的影响 Fig. 5 The effect of mir-181b on the expression levels of cyclin-dependent kinase 8 (CDK8) in MDA-MB-231 and MCF-7 cells was detected by Western blotting (n=3).

6 22 李晓宇, 等. 上调 mir-181b 表达对乳腺癌细胞功能的影响 Fig. 5 The effect of mir-181b on the expression levels of cyclin-dependent kinase 8 (CDK8) in MDA-MB-231 and MCF-7 cells was detected by Western blotting (n=3). MDA-MB-231 and MCF-7 cells were transfected with or -negative control (NC) for 48 h. * P<.5. 图 5 蛋白质印迹法检测 mir-181b 对 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞 CDK8 蛋白表达水平的影响 3 讨论近年来, 中国乳腺癌的发病率呈逐年上升的趋势, 严重危害女性的健康和生命, 而肿瘤晚期转移是导致患者死亡的主要原因 [9] 癌细胞侵入细胞外基质, 黏附在内皮细胞壁从而穿出脉管系统, 可在远处形成新的转移病灶 [1] 寻找与乳腺癌发生和发展相关的特异性生物标志物, 能为阐明乳腺癌发生的分子机制提供新的依据, 并为乳腺癌的诊断和治疗提供可能的新靶点研究发现,miRNA 与肿瘤细胞的生物学行为密切相关目前已发现人类 mirna 有 1 2 多种, 这些 mirna 调节人类基因组中约 3% 基因的表达, 涉及生命过程中的很多领域 ( 如细胞增殖凋亡分化侵袭和转移 ) 近年来, 利用包括 mirna 芯片检测技术在内的多种研究手段发现了在肿瘤细胞中存在一系列表达异常的 mirna, 这一现象提示人们 mirna 可能对肿瘤细胞的发生和发展起调节作用 [11] 随着研究的深入, 人们对 mirna 与恶性肿瘤的关系有了进一步的了解肿瘤转移过程中 mirna 的异常表达可能是由于 mirna 基因位于肿瘤相关染色体区域所导致的 mirna 增多或缺失 [12] 研究表明, 肿瘤相关的 mirna 主要被一些癌基因或抑癌基因调节, 其本身也可调节癌基因或抑癌基因 [13] 对基因组中肿瘤相关基因区域的序列分析发现, 约 52.5% mirna 编码基因位于其附近, 提示 mirna 对肿瘤相关基因具有调控作用 [14] 现已证实,miRNA 可导致靶基因的降解或抑制其翻译, 其参与肿瘤的发生发展浸润和转移, 甚至耐药性的形成, 对于 mirna 靶基因的确定将为人类认识和攻克肿瘤提供广阔的前景 [15] 本研究通过 MTT Transwell 和 FCM 法检测证实,miR-181b 对人乳腺癌细胞的增殖和转移有抑制作用, 且主要将细胞周期阻滞于 G /G 1 期应用生物信息学软件预测发现,miR-181b 有超过 1 个靶基因, 在众多靶基因中选择与肿瘤细胞周期有明确相关性的 CDK8 进行后续实验将成功构建的包含 CDK8 基因 3 -UTR 报告基因的重组载体和共转染后发现, 细胞中的荧光素酶活性被显著抑制, 验证了生物信息学软件的推测结果, 证实了 mir-181b 与 CDK8 的结合蛋白质印迹法检测结果表明, 转染了的乳腺癌细胞中 CDK8 蛋白的表达水平明显下调, 进一步证明了 mir-181b 可靶向调控 CDK8 的表达 CDK8 基因的编码产物是由 464 个氨基酸分子组成的蛋白质, 其相对分子质量为 CDK8 与肿瘤的发生和发展密切相关, 通过影响细胞特定周期肿瘤特异性抗原的表达和肿瘤细胞的增殖及凋亡, 发挥影响肿瘤细胞生长的作用 [16] CDK8 基因位于人类 13 号染色体上, 参与了基因表达调控, 与其他已知的 CDK 家族激酶不同的是, CDK8 在细胞分裂中不起作用 [17] 已有研究表明, 作为一个转录调节因子,CDK8 基因参与了转录并 [18, 调节结肠癌原癌基因的表达 19] CDK8 在结肠癌和黑素瘤中也发挥着重要作用 [2] CDK8 基因的表达与乳腺癌和卵巢癌患者无复发生存时间之间存在相关性,CDK8 低表达的乳腺癌患者无病生存时

7 李晓宇, 等. 上调 mir-181b 表达对乳腺癌细胞功能的影响 23 [21, 间比 CDK8 高表达的患者长约 7 年 22] 本研究发现, 转染 mirna-181b mimics 后, 人乳腺癌 MDA-MB-231 和 MCF-7 细胞的增殖和转移能力受到显著抑制, 并将细胞阻滞于 G / G 1 期,CDK8 蛋白的表达水平下调以上结果提示,miR-181b 可能通过靶向 CDK8 基因, 在乳腺癌的发生和发展中发挥重要作用本研究结果还需得到后续实验的进一步证实若明确 mir- 181b 在乳腺癌中的调控作用, 可以为今后乳腺癌的治疗提供一个新的靶点 [ 参考文献 ] [1] Desantis C, Ma J, Bryan L, et al. Breast cancer statistics, 213[J]. CA Cancer J Clin, 213[Epub ahead of print]. [2] Li X, Wang Q, Zheng Y, et al. Prioritizing human cancer micrornas based on genes functional consistency between microrna and cancer[j]. Nucleic Acids Res, 211, 39(22):e153. [3] Liu J, Zheng M, Tang YL, et al. MicroRNAs, an active and versatile group in cancers[j]. Int J Oral Sci, 211, 3(4): [4] Luo Q, Li X, Gao Y, et al. MiRNA-497 regulates cell growth and invasion by targeting cyclin E1 in breast cancer[j]. Cancer Cell Int, 213, 13(1):95. [5] Vrba L, Muñoz-Rodríguez JL, Stampfer MR, et al. MiRNA gene promoters are frequent targets of aberrant DNA methylation in human breast cancer[j]. PLoS One, 213, 8(1):e [6] Iliopoulos D, Jaeger SA, Hirsch HA, et al. STAT3 activation of mir-21 and mir-181b-1 via PTEN and CYLD are part of the epigenetic switch linking inflammation to cancer[j]. Mol Cell, 21, 39(4): [7] Adler AS, Mccleland ML, Truong T, et al. CDK8 maintains tumor dedifferentiation and embryonic stem cell pluripotency[j]. Cancer Res, 212, 72(8): [8] Porter DC, Farmaki E, Altilia S, et al. Cyclindependent kinase 8 mediates chemotherapyi n d u c e d t u m o r - p r o m o t i n g p a r a c r i n e activities[j]. Proc Natl Acad Sci U S A, 212, 19(34): [9] Lubinski J. Breast cancer genetics: 2 years later[j]. Clin Genet, 213[Epub ahead of print]. [1] Jaiswal R, Luk F, Dalla PV, et al. Breast cancerderived microparticles display tissue selectivity in the transfer of resistance proteins to cells[j]. PLoS One, 213, 8(4):e [11] 钟警, 李蓉芳, 陈亚军, 等. 靶向 PRMT2 基因的 microrna 对雌激素介导的乳腺癌 MCF7 细胞增殖的影响 [J]. 肿瘤, 211, 31(11): [12] Harquail J, Benzina S, Robichaud GA. MicroRNAs and breast cancer malignancy:an overview of mirna-regulated cancer processes leading t o m e t a s t a s i s [ J ]. C a n c e r B i o m a r k, 2 1 2, 11(6): [13] Wee EJ, Peters K, Nair SS, et al. Mapping the regulatory sequences controlling 93 breast cancer-associated mirna genes leads to the identification of two functional promoters of the Hsa-mir-2b cluster, methylation of which is associated with metastasis or hormone receptor status in advanced breast cancer[j]. Oncogene, 212, 31(38): [14] Chen W, Cai F, Zhang B, et al. The level of circulating mirna-1b and mirna-373 in detecting lymph node metastasis of breast cancer: potential biomarkers[j]. Tumour Biol, 213, 34(1): [15] Zhong XY, Yu JH, Zhang WG, et al. MicroRNA-421 functions as an oncogenic mirna in biliary tract cancer through down-regulating farnesoid X receptor expression[j]. Gene, 212, 493(1): [16] Gu W, Wang C, Li W, et al. Tumor-suppressive effects of CDK8 in endometrial cancer cells[j]. Cell Cycle, 213, 12(6): [17] Firestein R, Bass AJ, Kim SY, et al. CDK8 is a colorectal cancer oncogene that regulates b e t a - c a t e n i n a c t i v i t y [ J ]. N a t u r e, 2 8, 455(7212): [18] He L, Lu N, Dai Q, et al. Wogonin induced G 1 cell cycle arrest by regulating Wnt/β-catenin signaling pathway and inactivating CDK8 in human colorectal cancer carcinoma cells[j]. Toxicology, 213, 312: [19] Seo JO, Han SI, Lim SC. Role of CDK8 and betacatenin in colorectal adenocarcinoma[j]. Oncol Rep, 21, 24(1): [2] G a l b r a i t h M D, D o n n e r A J, E s p i n o s a J M. CDK8: a positive regulator of transcription[j]. Transcription, 21, 1(1):4-12. [21] Firestein R, Shima K, Nosho K, et al. CDK8 expression in 47 colorectal cancers in relation to beta-catenin activation, other molecular alterations and patient survival[j]. Int J Cancer, 21, 126(12): [22] Donner AJ, Szostek S, Hoover JM, et al. CDK8 is a stimulus-specific positive coregulator of p53 target genes[j]. Mol Cell, 27, 27(1): [ 本文编辑 ] 张毅

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL ( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot