中 国 骨 与 关 节 杂 志 2012 年 4 月 第 1 卷 第 2 期 Chinese Journal of Bone and Joint, April 2012, Vol 1, No of common blood concentration, higher concentr
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1 中 国 骨 与 关 节 杂 志 2012 年 4 月 第 1 卷 第 2 期 Chinese Journal of Bone and Joint, April 2012, Vol 1, No.2. 临 床 论 著 Clinical original articles. 非 甾 体 类 抗 炎 药 对 骨 肉 瘤 细 胞 株 增 殖 和 凋 亡 的 影 响 龙 海 涛 李 康 华 朱 勇 肖 文 峰 祝 伟 宏 作 者 单 位 : 长 沙, 中 南 大 学 湘 雅 医 院 骨 科 ( 龙 海 涛, 李 康 华, 朱 勇, 肖 文 峰 );423000, 郴 州 市 第 一 人 民 医 院 集 团 儿 童 医 院 ( 祝 伟 宏 ) 摘 要 目 的 研 究 不 同 种 类 的 非 甾 体 类 抗 炎 药 (NSAIDs) 对 人 骨 肉 瘤 细 胞 株 增 殖 和 凋 亡 的 影 响 方 法 采 用 有 限 稀 释 法, 从 人 骨 肉 瘤 细 胞 系 MG-63 中 分 离 培 养 出 细 胞 株, 扩 增 培 养 后 分 为 4 个 干 预 组 :Cox-1 特 异 性 抑 制 剂 组 (, 采 用 的 梯 度 分 别 为 :0μg/ml 5μg/ml 10μg/ml 15μg/ml 20μg/ml 25μg/ml) Cox 非 选 择 性 抑 制 剂 组 ( 注 射 液, 采 用 的 梯 度 分 别 为 :0mg/L 0.3mg/L 0.6mg/L 0.9mg/L 1.2mg/L 1.5mg/L) Cox-2 选 择 性 抑 制 剂 组 ( 注 射 液, 采 用 的 梯 度 分 别 为 :0μg/ml 0.4μg/ml 0.8μg/ml 1.2μg/ml 1.6μg/ml 2.0μg/ml) Cox-2 特 异 性 抑 制 剂 组 ( 注 射 用, 采 用 的 梯 度 分 别 为 :0mg/L 0.3mg/L 0.6mg/L 0.9mg/L 1.2mg/L 1.5mg/L), 设 培 养 液 中 不 加 药 物 的 作 为 对 照 组, 每 组 中 的 不 同 均 设 6 个 重 复 孔, 药 物 对 细 胞 株 干 预 72h 后, 采 用 四 唑 盐 比 色 法 (MTT) 检 测 细 胞 增 殖 抑 制 率, 流 式 细 胞 仪 测 定 细 胞 凋 亡 率 结 果 不 同 的 作 用 于 骨 肉 瘤 细 胞 株 后 均 能 不 同 程 度 地 抑 制 细 胞 株 的 生 长, 各 处 理 组 与 对 照 组 之 间 具 有 显 著 性 差 异 (P<0.05), 在 常 见 的 血 药 范 围 内, 抑 制 率 与 之 间 成 正 相 关 (P<0.05); 不 同 的 美 洛 昔 康 也 均 能 不 同 程 度 地 促 使 细 胞 株 凋 亡, 实 验 组 的 凋 亡 率 明 显 高 于 对 照 组, 其 差 异 具 有 统 计 学 意 义 (P<0.05), 在 常 见 血 药 的 范 围 内, 越 高, 凋 亡 率 就 越 高 (P<0.05) 结 论 4 种 不 同 种 类 的 NSAIDs 均 能 抑 制 骨 肉 瘤 细 胞 的 增 殖 和 促 使 其 凋 亡, 这 种 作 用 具 有 量 效 依 赖 关 系 关 键 词 NSAIDs; 骨 肉 瘤 ; 细 胞 株 ; 增 殖 ; 凋 亡 DOI: /j.issn X Effect of nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) on proliferation and apoptosis of human osteosarcomatous cell sublines LONG Haitao, LI Kanghua, ZHU Yong, XIAO Wenfeng, ZHU Weihong. Department of Orthopedics, Xiangya Hospital, Central South University, , Changsha, Hunan, PRC Abstract Objective To study the influences of different types of NSAIDs on proliferation and apoptosis of human osteosarcomatous cell sublines. Methods By limiting dilution assay, osteosarcomatous cell sublines were isolated and cultured from human osteosarcomatous cell line MG-63. The cell sublines were divided into 4 intervention groups: specific Cox-1 inhibitor group (low dose aspirin, concentration gradients were 0μg/ml 5μg/ml, 10μg/ml, 15μg/ ml, 20μg/ml and 25μg/ml respectively), non-selective Cox inhibitor group (diclofenac sodium injection, concentration gradients were 0mg/L, 0.3mg/L, 0.6mg/L, 0.9mg/L, 1.2mg/L and 1.5mg/L respectively), selective Cox-2 inhibitor group (meloxicam injection, concentration gradients were 0μg/ml, 0.4μg/ml, 0.8μg/ml, 1.2μg/ml, 1.6μg/ml and 2.0μg/ ml respectively) and specific Cox-2 inhibitor group (parecoxib sodium injection, concentration gradients were 0mg/L, 0.3mg/L, 0.6mg/L, 0.9mg/L, 1.2mg/L and 1.5mg/L respectively). Pharmaceuticals were not designed to be put in the culture solution as control group. 6 duplicate samples of different concentrations in each group were designed. The cell sublines had been intervened by NSAIDs of different concentrations for 72 hours, and then the proliferation inhibition rates were measured by MTT assay and the apoptosis rates were detected by flow cytometry. Results Low dose aspirin, diclofenac sodium, meloxicam and parecoxib sodium of different concentrations could inhibit proliferation and induce apoptosis of human osteosarcomatous cell sublines to varying degrees. Significant differences existed between all intervention groups and control group (P<0.05). In the range of common blood concentration, inhibition rate and concentration had positive correlation (P<0.05). Low dose aspirin, diclofenac sodium, meloxicam and parecoxib sodium of different concentrations could induce apoptosis of cell sublines to varying degrees. Apoptosis rate in intervention group was obviously higher than control group and statistic differences existed (P<0.05). In the range
2 中 国 骨 与 关 节 杂 志 2012 年 4 月 第 1 卷 第 2 期 Chinese Journal of Bone and Joint, April 2012, Vol 1, No of common blood concentration, higher concentration means higher apoptosis rate (P<0.05). Conclusions 4 different types of NSAIDs can inhibit the proliferation and induce the apoptosis of osteosarcomatous cells in a concentrationdependent manner. Key words NSAIDs; Osteosarcoma; Cell subline; Proliferation; Apoptosis 骨 肉 瘤 是 最 常 见 的 原 发 性 恶 性 骨 肿 瘤, 生 存 率 低 疼 痛 则 是 骨 肉 瘤 患 者 最 早 和 最 主 要 的 症 状, 所 有 患 者 均 伴 有 不 同 程 度 的 疼 痛, 持 续 性 剧 痛 及 夜 间 痛 往 往 令 患 者 难 以 忍 受, 患 者 为 了 提 高 生 存 质 量, 常 需 要 依 赖 于 止 痛 药 常 用 的 NSAIDs 在 止 痛 的 同 时 是 否 会 对 骨 肉 瘤 的 发 生 发 展 产 生 影 响? 国 内 外 虽 已 有 少 量 的 文 献 报 道, 但 相 关 文 献 主 要 集 中 在 Cox-2 特 异 性 NSAIDs, 目 前 尚 缺 乏 对 其 他 种 类 NSAIDs 的 研 究 本 实 验 探 讨 不 同 种 类 的 NSAIDs 对 人 骨 肉 瘤 细 胞 株 生 长 和 凋 亡 的 影 响 资 料 与 方 法 一 细 胞 系 和 主 要 试 剂 骨 肉 瘤 细 胞 系 MG-63 由 中 南 大 学 肿 瘤 研 究 所 惠 赠 ; 培 养 液 为 含 10% 胎 牛 血 清 的 RPMI1640 培 基 ; 四 甲 基 偶 氮 唑 蓝 (MTT) 购 于 Sigma 公 司 ; 二 甲 基 亚 砜 (DMSO) 购 于 上 海 生 物 工 程 公 司 ; 阿 司 匹 林 片 购 于 黑 龙 江 百 泰 药 业 有 限 公 司 ; 注 射 液 购 于 广 东 邦 民 制 药 有 限 公 司 ; 注 射 液 购 于 上 海 勃 林 格 殷 格 翰 药 业 有 限 公 司 ; 注 射 用 钠 购 于 辉 瑞 制 药 有 限 公 司 二 单 细 胞 克 隆 及 细 胞 株 的 分 离 培 养 人 骨 肉 瘤 细 胞 系 MG-63 至 对 数 生 长 期, 用 0.25% 胰 蛋 白 酶 消 化, 吸 管 吹 打 后 制 成 单 细 胞 悬 液 倒 置 显 微 镜 下 计 数 活 细 胞 密 度 将 细 胞 悬 液 移 至 刻 度 离 心 管 中 连 续 倍 数 稀 释 先 根 据 在 倒 置 显 微 镜 下 计 算 出 来 的 细 胞 密 度 值 将 细 胞 悬 液 稀 释 至 , 将 此 细 胞 悬 液 经 100 倍 稀 释, 即 为 50 个 细 胞 /ml; 再 将 50 个 细 胞 /ml 的 细 胞 悬 液 经 5 倍 稀 释, 即 为 10 个 细 胞 /ml; 最 后 将 10 个 细 胞 /ml 的 细 胞 悬 液 经 2 倍 稀 释, 即 为 5 个 细 胞 /ml 将 3 种 稀 释 好 的 细 胞 悬 液 分 制 接 种 于 96 孔 板 中, 每 孔 加 液 0.1ml, 放 入 培 养 箱 内 培 养 次 日, 在 倒 置 显 微 镜 下 观 察 培 养 板 各 孔 细 胞 数, 挑 选 只 含 1 个 细 胞 的 孔 ( 图 1), 注 意 观 察 各 孔 的 边 缘 和 环 形 内 壁, 防 止 遗 漏 细 胞, 做 好 标 记 并 补 加 0.1ml 培 养 液, 继 续 培 养 待 96 孔 中 形 成 较 大 克 隆 并 长 满 孔 底 面 积 的 1/3~1/2 时 ( 图 2), 消 化 分 离 出 克 隆 的 细 胞 株, 选 择 1 株 生 长 活 跃 的 细 胞 株, 转 种 于 24 孔 和 6 孔 培 养 板 扩 大 培 养, 以 备 下 一 步 的 研 究 三 实 验 分 组 和 药 物 配 制 根 据 NSAIDs 对 Cox-1 和 Cox-2 的 选 择 性 不 同, 我 们 将 实 验 药 物 分 为 4 组 :Cox-1 特 异 性 NSAIDs 组, 该 组 使 用 ; C o x 非 选 择 性 NSAIDs 组, 该 组 使 用 注 射 液 ;Cox-2 选 择 性 NSAIDs 组, 该 组 使 用 注 射 液 ; Cox-2 特 异 性 NSAIDs 组, 该 组 使 用 注 射 用 帕 瑞 昔 布 钠 根 据 各 种 药 物 在 体 内 常 见 的 血 药 范 围 来 配 置 含 相 应 药 物 的 培 养 液 阿 司 匹 林 片 在 无 菌 条 件 下 用 2ml 生 理 盐 水 溶 解 后 用 RPMI 1640 培 养 基 稀 释 成 25μg/ml 含 药 物 的 培 养 液, 根 据 需 要 将 其 稀 释 成 20μg/ml 15μg/ml 10μg/ml 5μg/ml 等 浓 度 ; 注 射 液 2ml 被 稀 释 成 1.5mg/L 含 药 物 的 培 养 液, 然 后 将 其 稀 释 成 1.2mg/L 0.9mg/L 0.6mg/L 0.3mg/L 等 不 同 ; 注 射 液 1.5ml 被 稀 释 成 2.0μg/ml 含 药 物 的 培 养 液, 然 后 将 其 稀 释 成 1.2mg/L 0.9mg/L 0.6mg/L 0.3mg/L 等 不 同 ; 注 射 用 钠 粉 末 用 2ml 生 理 盐 水 溶 解 后 被 稀 释 成 1.5mg/L 含 药 物 的 培 养 液, 然 后 将 其 稀 释 成 1.2mg/L 0.9mg/L 0.6mg/L 0.3mg/L 等 不 同 四 MTT 法 检 测 细 胞 增 殖 活 力 将 对 数 生 长 期 的 骨 肉 瘤 细 胞 株 消 化 后 以 每 孔 个 细 胞 接 种 于 96 孔 板 24h 后 细 胞 贴 壁, 吸 弃 原 培 养 液, 分 别 加 入 含 不 同 药 物 的 培 养 液 180μl, 设 培 养 液 中 不 加 药 物 及 细 胞 的 作 为 空 白 组, 不 加 药 物 的 作 为 对 照 组, 每 组 设 6 个 重 复 孔 小 剂 量 阿 司 匹 林 组 的 终 为 :0μg/ml 5μg/ml 10μg/ml 15μg/ml 20μg/ml 25μg/ml; 组 的 终 浓 度 为 :0mg/L 0.3mg/L 0.6mg/L 0.9mg/L 1.2mg/ L 1.5mg/L; 组 的 终 为 :0μg/ml 0.4μg/ ml 0.8μg/ml 1.2μg/ml 1.6μg/ml 2.0μg/ml; 帕 瑞 昔 布 组 的 终 为 :0mg/L 0.3mg/L 0.6mg/L 0.9mg/L 1.2mg/L 1.5mg/L 培 养 72h 后 各 孔 加 入 5mg/L MTT 20μl, 继 续 培 养 4h, 弃 上 清, 加 入 DMSO 200μl, 振 荡 仪 上 室 温 振 摇 10min 酶 标 仪 490nm 检 测 各 孔 吸 光 度 A 值, 根 据 公 式 计 算 细 胞 抑 制 率 R=[1-( 实 验 组 A 值 - 空 白 组 A 值 )/( 对 照 组 A 值 - 空 白 组 A 值 )] 100% 实 验 重 复 3 次
3 中 国 骨 与 关 节 杂 志 2012 年 4 月 第 1 卷 第 2 期 Chinese Journal of Bone and Joint, April 2012, Vol 1, No.2 五 细 胞 凋 亡 的 检 测 取 对 数 生 长 期 的 细 胞, 加 入 含 不 同 小 剂 量 阿 司 匹 林 (5μg/ml 10μg/ml 15μg/ml 20μg/ml 25μg/ml) 的 培 基, 不 含 阿 司 匹 林 的 培 基 (0μg/ml) 为 对 照 组, 培 养 72h 并 用 胰 酶 消 化 后 制 成 单 细 胞 悬 液, 调 整 细 胞 数 为 /L, 离 心,PBS 液 洗 涤 3 次,70% 冷 乙 醇 混 匀 固 定,4 冰 箱 放 置 4h 后, 离 心 弃 上 清 后 重 悬,1ml 碘 化 丙 啶 染 色,4 避 光 放 置 30min, 使 用 美 国 BD 公 司 的 流 式 细 胞 仪 检 测, 实 验 重 复 5 次 双 氯 芬 酸 钠 组 (0.3mg/L 0.6mg/L 0.9mg/L 1.2mg/L 1.5mg/L) 组 (0.4μg/ml 0.8μg/ml 1.2μg/ ml 1.6μg/ml 2.0μg/ml) 组 (0.3mg/L 0.6mg/L 0.9mg/L 1.2mg/L 1.5mg/L) 的 实 验 方 法 同 上, 设 不 含 相 应 药 物 的 培 基 (0μg/ml 或 0mg/L) 为 对 照 组 统 计 学 分 析 : 实 验 数 据 用 均 数 ± 标 准 差 (x _ ±s) 表 示, 应 用 SPSS 统 计 软 件 处 理, 不 同 组 与 对 照 组 的 组 间 比 较 时 采 用 One-Way ANOVA 过 程, 与 抑 制 率 凋 亡 率 的 相 关 性 分 析 采 用 Bivariate 过 程 结 果 酸 钠 ) 作 用 骨 肉 瘤 细 胞 株 72h 后 均 能 不 同 程 度 地 促 进 细 胞 的 凋 亡, 与 对 照 组 之 间 的 差 别 具 有 显 著 性 意 义 (P<0.05) 在 常 见 血 药 浓 度 的 范 围 内, 随 着 药 物 的 增 高, 凋 亡 细 胞 比 例 也 增 高, 与 凋 亡 率 呈 量 效 依 赖 关 系 (P<0.05) ( 表 1,2, 图 4) 本 实 验 中, 四 种 药 物 在 最 大 时, 对 细 胞 凋 亡 率 进 行 比 较 时 发 现 : 组 的 凋 亡 率 低 于 组 组 和 组 (P<0.05), 组 组 和 组 之 间 的 差 别 无 显 著 性 意 义 (P>0.05) 讨 论 骨 肉 瘤 是 常 见 的 原 发 于 骨 组 织 的 恶 性 肿 瘤, 约 占 骨 骼 系 统 肿 瘤 的 15%~20%, 全 身 恶 性 肿 瘤 的 0.2% [1-2] 疼 痛 是 骨 肉 瘤 最 早 的 症 状, 约 60% 的 患 者 发 生 于 膝 关 节 周 围, 先 为 持 续 性 局 部 隐 痛, 很 快 发 展 为 持 续 性 剧 痛 及 夜 间 痛, 难 以 忍 受 此 外, 骨 肉 瘤 患 者 在 围 手 术 期 化 疗 期 及 手 术 后 康 复 期 均 会 伴 一 单 细 胞 克 隆 及 细 胞 株 分 离 的 结 果 有 限 稀 释 后 发 现 96 孔 培 养 板 中 部 分 孔 中 存 在 多 个 细 胞, 而 部 分 孔 中 无 细 胞, 仅 其 中 的 13 个 孔 中 各 只 有 一 个 细 胞 ( 图 1) 培 养 7-10d 后,13 个 孔 中 出 现 多 个 单 细 胞 克 隆 集 落 ( 图 2) 选 择 一 个 生 长 旺 盛 的 单 细 胞 克 隆 集 落, 扩 增 培 养 后 形 成 1 株 细 胞 株 二 NSAIDs 对 细 胞 株 增 殖 的 抑 制 作 用 不 同 的 NSAIDs ( 双 氯 芬 酸 钠 ) 作 用 骨 肉 瘤 细 胞 株 72h 后 均 能 不 同 程 度 地 抑 制 细 胞 株 的 生 长, 各 处 理 组 与 对 照 组 之 间 的 差 别 具 有 显 著 性 意 义 (P< 0.05) 在 常 用 血 药 的 范 围 内, 抑 制 率 与 之 间 成 正 相 关 (P<0.05), 越 大, 抑 制 率 就 越 高 ( 表 1,2, 图 3) 本 实 验 中, 对 四 种 药 物 在 最 大 时 抑 制 率 的 比 较 研 究 中, 初 步 发 现 : 组 和 组 高 于 组 和 组 (P<0.05), 但 组 与 组 之 间 美 洛 昔 康 组 与 组 之 间 的 差 别 无 显 著 性 意 义 (P> 0.05) 三 NSAIDs 对 骨 肉 瘤 细 胞 株 凋 亡 的 影 响 不 同 的 NSAIDs ( 双 氯 芬 图 1 有 限 稀 释 后 形 成 的 单 细 胞 ( 10) Fig.1 The single cell after limiting dilution assay ( 10) 图 2 单 细 胞 形 成 的 细 胞 集 落 ( 10, 包 围 的 区 域 ) Fig.2 The cell colony originated from single cell ( 10, in the line)
4 中 国 骨 与 关 节 杂 志 2012 年 4 月 第 1 卷 第 2 期 Chinese Journal of Bone and Joint, April 2012, Vol 1, No ( /10) ( /10) μg/ml 或 mg/l μg/ml 或 mg/l 图 3 不 同 NSAIDs 对 细 胞 株 增 殖 抑 制 率 的 影 响 Fig.3 Effect of different NSAIDs on proliferation inhibition rates of cell sublines 图 4 不 同 NSAIDs 对 细 胞 株 凋 亡 率 的 影 响 Fig.4 Effect of different NSAIDs on apoptosis rates of cell sublines 表 1 和 对 细 胞 株 增 殖 的 抑 制 率 及 凋 亡 率 (x - ±s) Tab.1 Effect of low dose aspirin and diclofenac sodium on proliferation inhibition rates and apoptosis rates of cell sublines (x - ±s) 梯 度 (μg/ml) (mg/l) 对 照 组 ± ±0.9 实 验 组 ± ± ± ±2.2 实 验 组 ± ± ± ±2.6 实 验 组 ± ± ± ±3.7 实 验 组 ± ± ± ±3.9 实 验 组 ± ± ± ±3.5 表 2 和 对 细 胞 株 增 殖 的 抑 制 率 及 凋 亡 率 (x - ±s) Tab.2 Effect of meloxicam and parecoxib sodium on proliferation inhibition rates and apoptosis rates of cell sublines (x - ±s) 梯 度 (μg/ml) (mg/l) 对 照 组 ± ±0.4 实 验 组 ± ± ± ±2.5 实 验 组 ± ± ± ±3.0 实 验 组 ± ± ± ±2.8 实 验 组 ± ± ± ±3.6 实 验 组 ± ± ± ±3.7 有 不 同 程 度 的 疼 痛, 明 显 降 低 了 患 者 的 生 存 质 量 和 生 活 质 量, 而 相 关 的 止 痛 治 疗 往 往 必 不 可 少 [ 3 ] 年 J o h n 等 经 研 究 提 出 非 甾 体 抗 炎 药 (NSAIDs) 的 经 典 假 说, 即 NSAIDs 作 为 一 类 药 物, 通 过 抑 制 环 氧 合 酶 (Cox), 阻 断 花 生 四 烯 酸 合 成 炎 症 介 质 - 前 列 腺 素, 从 而 发 挥 止 痛 及 抗 炎 的 作 用 环 氧 化 酶 (Cox) 可 分 为 Cox-1 与 Cox-2 二 种 异 构 体 Cox-1 是 结 构 酶, 主 要 介 导 生 理 性 前 列 腺 素 形 成, 调 节 正 常 生 理 功 能 ;Cox-2 是 诱 导 酶, 主 要 介 导 病 理 性 前 列 腺 素 形 成, 促 使 炎 症 介 质 前 列 腺 素 的 合 成 并 引 起 炎 症 反 应 发 热 和 疼 痛 [4-5] 临 床 上 根 据 药 物 对 Cox-1 与 Cox-2 选 择 性 的 不 同, 将 NSAIDs 分 为 以 下 四 类 :(1) Cox-1 特 异 性 : 只 抑 制 Cox-1, 对 Cox-2 没 有 活 性, 目 前 只 有 被 列 入 此 类 ;(2) Cox 非 选 择 性 : 同 时 抑 制 Cox-1 和 Cox-2, 如 : 等 ; (3) Cox-2 选 择 性 : 在 抑 制 Cox-2 的 同 时 并 不 明 显 抑 制 Cox-1, 但 在 较 大 剂 量 时 也 抑 制 Cox-1, 如 : 美 洛 昔 康 等 ;(4) Cox-2 特 异 性 : 只 抑 制 Cox-2, 对 Cox-1 没 有 活 性, 如 : 塞 来 昔 布 等 本 研 究 在 4 类 NSAIDs 中 各 挑 选 一 个 代 表 性 的 药 物 进 行 骨 肉 瘤 细 胞 株 的 体 外 干 预 实 验, 比 较 不 同 NSAIDs 对 骨 肉 瘤 细 胞 株 的 生 长 及 凋 亡 的 影 响 环 氧 合 酶 2 (Cox-2) 和 前 列 腺 素 E2 (PGE 2 ) 在 很 多 人 类 肿 瘤 的 发 生 与 发 展 中 起 着 重 要 作 用,NSAIDs 可 以 通 过 抑 制 Cox-2 而 减 少 病 理 性 PGE 2 合 成 [6-7] 研 究 表 明,Cox-2 在 骨 肉 瘤 组 织 中 高 表 达, 与 患 者 的 预 后 密 切 相 关 [8-9] Cox-2 特 异 性 抑 制 剂 塞 来 昔 布 可 下 调 PI3K/Akt 信 号 转 导 通 路, 抑 制 多 种 肿 瘤 细 胞 的 增 殖 并 诱 导 其 凋 亡 [10] 导 入 Cox-2 DNA 可 增 强 低 表 达 Cox-2 人 骨 肉 瘤 细 胞 的 增 殖 迁 移 和 侵 袭 能 力 [11] 非 Cox-2 特 异 性 抑 制 剂 ( 阿 司 匹 林 舒 林 酸 吲 哚 美 辛 布 洛 芬 等 ) 均 对 大 肠 癌 也 有 防 治 作 用, 但 与 使 用 时 间 及 累 积 剂 量 有 一 定 联 系 [12-14] Korishnan [12] 等 认 为 阿 司 匹 林 抑 制 直 肠 上 皮 细 胞 前 列 腺 素 合 成
5 中 国 骨 与 关 节 杂 志 2012 年 4 月 第 1 卷 第 2 期 Chinese Journal of Bone and Joint, April 2012, Vol 1, No.2 与 直 接 抑 制 Cox 转 录 有 关, 而 与 乙 酰 化 导 致 Cox 失 活 无 关 一 项 基 于 例 绝 经 后 妇 女 的 样 本 分 析 研 究 发 现 长 期 服 用 布 洛 芬 的 患 癌 风 险 较 阿 司 匹 林 小, 但 对 乙 酰 氨 基 酚 及 对 降 低 乳 腺 癌 的 发 病 率 没 有 效 果 [15] 但 非 Cox-2 特 异 性 抑 制 剂 对 骨 肉 瘤 细 胞 会 产 生 何 种 影 响?Cox-1 特 异 性 抑 制 剂 Cox 非 特 异 性 抑 制 剂 是 否 也 存 在 抑 制 作 用, 其 作 用 效 果 与 Cox-2 选 择 性 和 特 异 性 抑 制 剂 是 否 不 同?Cox-2 选 择 性 抑 制 剂 与 Cox-2 特 异 性 抑 制 剂 之 间 是 否 不 同? 对 于 这 些 问 题, 目 前 尚 无 研 究 本 研 究 发 现 除 了 Cox-2 选 择 性 抑 制 剂 ( ) 和 Cox-2 特 异 性 抑 制 剂 ( ) 能 抑 制 骨 肉 瘤 细 胞 株 的 增 殖 及 诱 导 其 凋 亡, 其 他 两 类 NSAIDs:Cox-1 特 异 性 抑 制 剂 ( ) 和 Cox 非 特 异 性 抑 制 剂 ( ), 也 能 发 挥 相 似 的 药 理 作 用 提 示 NSAIDs 在 抑 制 骨 肉 瘤 细 胞 的 过 程 中, 除 了 通 过 抑 制 Cox-2 外, 可 能 还 存 在 其 他 复 杂 的 机 制, 如 : 抑 制 Cox-1, 或 Cox-1 和 Cox-2 相 互 作 用, 或 其 他 因 素 的 加 入 等, 这 些 都 需 要 深 入 的 研 究 在 每 种 药 物 各 自 常 见 的 血 药 的 范 围 内, 与 药 效 呈 量 效 依 赖 关 系, 提 示 在 临 床 使 用 时, 根 据 患 者 各 自 的 适 应 证, 在 正 常 剂 量 允 许 的 范 围 内, 大 剂 量 药 物 的 防 治 作 用 可 能 会 更 强 此 外, 因 为 美 洛 昔 康 的 临 床 血 药 受 到 分 子 量 药 代 动 力 学 药 物 相 互 作 用 等 众 多 因 素 的 影 响, 不 同 药 物 间 的 药 效 ( 抑 制 率 和 凋 亡 率 ) 也 难 以 进 行 科 学 的 横 向 比 较, 其 相 互 比 较 的 结 果 欠 严 谨, 仅 可 作 为 临 床 参 考 综 上 所 述, 不 同 种 类 的 NSAIDs 在 体 外 实 验 时 均 具 有 抑 制 骨 肉 瘤 细 胞 的 作 用, 这 对 临 床 使 用 具 有 一 定 的 参 考 作 用, 但 具 体 机 制 等 仍 需 深 入 研 究 参 考 文 献 [1] Bacci G, Lari S. Current treatment of high grade osteosarcoma of the extremity: review. J Chemother, 2001, 13(3): [2] 柳 剑, 郭 卫, 杨 荣 利, 等. 骨 肉 瘤 术 前 化 疗 效 果 的 MRI 评 估. 中 国 骨 肿 瘤 骨 病, 2008, 7(3): [3] Burger D, Travis S. Conventional medical management of inflammatory bowel disease. Gastroenterology, 2011, 140(6): [4] Tanaka K, Suemasu S, Ishihara T, et al. Inhibition of both Cox-1 and Cox-2 and resulting decrease in the level of prostaglandins E2 is responsible for non-steroidal antiinfla-mmatory drug (NSAID)-dependent exacerbation of colitis. Eur J Pharmacol, 2009, 603(1-3): [5] Brzozowski T, Konturek PC, Konturek SJ, et al. Classic NSAID and selective cyclooxygenase (Cox)-1 and Cox-2 inhibitors in healing of chronic gastric ulcers. Microsc Res Tech, 2001, 53(5): [6] Mohan, Sivani, Epstein, et al. Carcinogenesis and cyclooxygenase: the potential role of Cox-2 inhibition in upper aerodigestive tract cancer. Oral Oncology, 2003, 39(6): [7] Rupp J, Berger M, Reiling N, et al. Cox-2 inhibition abrogates Chlamydia pneumoniae-induced PGE2 and MMP-1 expression. Biochem Biophys Res Commun, 2004, 320(3): [8] Rebello G, Spencer S, Millis MB, et al. Surgical dislocation in the management of pediatric and adolescent hip deformity. Clin Orthop Relat Res, 2009, 467(3): [9] Rodriguez NI, Hoots WK, Koshkina NV, et al. Cox-2 expression correlates with survival in patients with osteosarcoma lung metastases. J Pediatr Hematol Oncol, 2008, 30(7): [10] Liu B, Shi ZL, Feng J, et al. Celecoxib, a cyclooxyg-enase-2 inhibitor, induces apoptosis in human osteosarcoma cell line MG-63 via down-regulation of PI3K/Akt. Cell Biol Int, 2008, 32(5): [11] Lee EJ, Choi EM, Kim SR, et al. Cyclooxygenase-2 promotes cell proliferation, migration and invasion in U2OS human osteosarcoma cells. Exp Mol Med, 2007, 39(4): [12] 梅 俏, 于 皆 平. 非 甾 体 类 抗 炎 药 与 大 肠 癌 化 学 预 防. 中 国 药 理 学 通 报, 2001, 17(5): [13] Thun MJ. Aspirin and gastrointestinal cancer. Adv Exp Med Biol, 1997, 400A: [14] Qiao L, Hanif R, Sphicas E, et al. Effect of aspirin on induction of apoptosis in HT-29 human colon adenocar-cinoma cells. Biochem Pharmacol, 1998, 55(1): [15] 汪 颖, 潘 献 柱, 王 林. 非 甾 体 类 抗 炎 药 在 癌 化 学 预 防 中 的 作 用. 国 外 医 学 药 学 分 册, 2005, 32(4): ( 收 稿 日 期 : ) ( 本 文 编 辑 : 周 预 )
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