实验样品制备将市售果汁和鲜榨果汁以 rpm 离心 10, 用 0.22 µm 过滤器过滤上清液将所得溶液直接进样分析取石榴皮, 晒干并磨成粉末称取石榴皮粉末适量, 用相当于粉末称样量的 5 至 7 倍的甲醇浸泡 48 h 将上述溶液用 Whatman 41 号滤纸过滤, 以

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鹰侯
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[ 应用纪要 ] 利用 ACQUITY UPLC H-Class 系统结合 PDA 检测器对石榴假种皮果汁果皮和市售果汁中的水溶性和黄酮类化合物进行定性和定量分析 Dilshad Pullancheri 1 Gopal Vaidyanathan 1 and N.

有助于开发运行时间更短的分析方法研究表明石榴皮提取物具有双重抗氧化性, 可在食品应用中作为生物防腐剂, 也可用作营养制品简介石榴 (Punica granatum L; 在古埃及称为 inhmn) 生长于亚洲西南部, 在地中海沿岸国家均有栽培石榴是落叶灌木或花朵为绯红色且带香味的树木, 然后长成质地坚硬略带微黄或微红的果实, 果实中含有鲜红色的种子

果皮和市售果汁中的水溶性微生素如抗坏血酸硫胺素核黄素氰钴胺及槲皮素黄酮类化合物进行了比较和定量研究采用 ACQUITY UPLC H-Class 系统结合 PDA 检测器进行方法开发, 然后利用此方法进行快速常规分析沃特世解决方案 ACQUITY UPLC H-Class 系统 ACQUITY UPLC HSS T3 色谱柱 ACQUITY UPLC PDA

1 [ 应用纪要 ] 利用 ACQUITY UPLC H-Class 系统结合 PDA 检测器对石榴假种皮果汁果皮和市售果汁中的水溶性和黄酮类化合物进行定性和定量分析 Dilshad Pullancheri 1 Gopal Vaidyanathan 1 and N. Gayathree 2 1 沃特世印度公司 ( 印度班加罗尔 ) 2 国家葡萄研究中心 ( 印度普纳 ) 应用优势与传统的 HPLC 系统相比,ACQUITY UPLC H-Class 系统简单易用操作方便 ACQUITY UPLC H-Class SmartStart 技术能够自动化并行管理梯度起始时间和预进样步骤通过重叠这些典型连续过程, 使循环时间最小化, 有助于开发运行时间更短的分析方法研究表明石榴皮提取物具有双重抗氧化性, 可在食品应用中作为生物防腐剂, 也可用作营养制品简介石榴 (Punica granatum L; 在古埃及称为 inhmn) 生长于亚洲西南部, 在地中海沿岸国家均有栽培石榴是落叶灌木或花朵为绯红色且带香味的树木, 然后长成质地坚硬略带微黄或微红的果实, 果实中含有鲜红色的种子在印度次大陆的不同地区, 至少种植有 14 个不同品种的石榴, 其中包括 Arakta Dholka G 137 Ganesh Jyoti Kabul Kandhari Mrudula Muskat P23 P26 和 Ruby 1 据报道, 石榴中含量相当惊人 2, 因此, 它一直位于富含的水果名单之首 2 在本应用资料中, 我们对石榴的假种皮果汁果皮和市售果汁中的水溶性微生素如抗坏血酸硫胺素核黄素氰钴胺及槲皮素黄酮类化合物进行了比较和定量研究采用 ACQUITY UPLC H-Class 系统结合 PDA 检测器进行方法开发, 然后利用此方法进行快速常规分析沃特世解决方案 ACQUITY UPLC H-Class 系统 ACQUITY UPLC HSS T3 色谱柱 ACQUITY UPLC PDA 检测器目标化合物类别保健功效抗坏血酸 ( C) 硫胺素 ( B 1 ) 核黄素 ( B 2 ) 氰钴胺 ( B 12 ) 每天摄入 C 有助于预防皮肤出现皱纹 ; 增强免疫系统机体正常功能所必需的, 可确保体内正常代谢速率并能够促进细胞生长机体正常功能所必需的, 可确保体内正常代谢速率并能够促进细胞生长对大脑和神经系统的功能具有重要作用, 还影响血液的形成槲皮素黄酮类化合物具有预防癌症的作用表 1. 各种和黄酮类化合物的保健功效 3 关键词, 黄酮类化合物, 果汁,UPLC,UV 1

2 实验样品制备将市售果汁和鲜榨果汁以 rpm 离心 10, 用 0.22 µm 过滤器过滤上清液将所得溶液直接进样分析取石榴皮, 晒干并磨成粉末称取石榴皮粉末适量, 用相当于粉末称样量的 5 至 7 倍的甲醇浸泡 48 h 将上述溶液用 Whatman 41 号滤纸过滤, 以 rpm 离心 10, 取上清液并用 0.22 µm 滤膜过滤, 然后直接进样 UPLC 条件 UPLC 系统 : ACQUITY UPLC H-CLASS 色谱柱 : ACQUITY UPLC HSS T mm,1.8 µm 流动相 A: 0.1% 甲酸水溶液流动相 B: 含 0.1% 甲酸的甲醇流速 : 0.4 ml/ 柱温 : 35 样品温度 : 4 洗针液 : 5:1:1 乙腈 / 异丙醇 / 甲醇 (500 µl) 循环时间 : 12 进样体积 : 2 µl 注射器吸取速度 : 标准 - 自动样品 -10 µl/ 梯度 : 时间 ()%A %B 曲线检测器 : 初始波长范围 : 提取波长 : 分辨率 : 滤波器响应 : 采样速率 : 曝光时间 : ACQUITY UPLC PDA nm 270 nm 和 360 nm 1.2 nm 0.1 s 20 点 / 秒自动 2

3 结果与讨论所有数据均在 nm 波长范围内采集, 在 270 nm 波长处进行处理 ( 氰钴胺为 360 nm) 名称峰面积峰高 USP 拖尾因子 USP 分离度硫胺素 92,271 95, 抗坏血酸 15,338 16, 氰钴胺 11,308 7, 核黄素 165, , 槲皮素 83,282 63, 图 1. 硫胺素抗坏血酸氰钴胺核黄素和槲皮素标准品的参比混合物利用 UPLC 技术开发一种梯度方法, 得到上述分析标准品的色谱分离度 ACQUITY UPLC H-Class 系统可提供高分离度色谱, 能获得更尖锐的峰形利用 ACQUITY UPLC PDA 检测器记录各个标准品的谱图配制抗坏血酸硫胺素核黄素氰钴胺和槲皮素标准品的参比混合物, 并进样分析以考察方法重现性根据定性分析结果, 发现在石榴皮和市售石榴汁中只存在两种组分抗坏血酸和槲皮素化合物名称含量 ( 石榴果实 )* 线性范围 (ppm) mg/ml ppm 抗坏血酸 , 25.0, 50.0, 100.0, 200.0, 槲皮素 , 2.0, 4.0, 8.0, 16.0, 32.0 核黄素 165, , 槲皮素 83,282 63, *( 根据美国 FDA 营养成分数据库 10,2010 年 ) 表 2. 用于绘制线性图的各标准品浓度 3

4 4 5 为了进行定量分析, 根据文献调查和预期的抗坏血酸和槲皮素浓度绘制标准曲线图绘制各线性点, 对分析样品中已确定存在的化合物抗坏血酸和槲皮素进行定量校准点校准点峰面积峰面积含量含量图 2. 本研究中发现的两种主要化合物抗坏血酸和槲皮素的校准曲线利用上述线性关系对三类不同样品的未知含量被测物进行定量分析, 结果如表 3 所示样品类型硫胺素抗坏血酸氰钴胺核黄素槲皮素市售果汁 µg/ml µg/ml 果皮 µg/ml µg/ml 鲜榨果汁 ( 用石榴果实制备 ) 表 3. 三份样品中和多酚类物质的含量 4

5 利乐包果汁图 3. 利乐包果汁的色谱图石榴皮图 4. 石榴皮的色谱图石榴皮中抗坏血酸和槲皮素的含量分别为 µg/ml 和 µg/ml 采用本方法在样品中未检出其它化合物硫胺素氰钴胺和核黄素 5

6 鲜榨果汁如图 5 的色谱图所示, 在鲜榨果汁中, 抗坏血酸氰钴胺核黄素和槲皮素等化合物均未检出据观察, 利乐包果汁和石榴皮中含有抗坏血酸和槲皮素抗坏血酸 UV spectrum of 抗坏血酸标准品的 UV 谱图 ascorbic acid standard 图 5. 在抗坏血酸预计保留时间处有峰洗脱的石榴汁色谱图和 UV 谱图, 以及抗坏血酸标准品的 UV 谱图所示 UV 谱图确证该峰不是抗坏血酸如图 5 所示, 鲜榨果汁的色谱图显示在抗坏血酸保留时间处出现一个峰可利用 PDA 检测器在所有波长下采集的数据来确证该色谱峰是否为抗坏血酸通过对果汁的谱图进行查看, 结果明显表明该色谱峰与抗坏血酸标准品的谱图不匹配因此, 我们可以确定该样品不含抗坏血酸鲜榨果汁与富含 10 mg 抗坏血酸 /100 ml 果汁的市售石榴汁的对比研究表明, 这两种样品中抗坏血酸含量有所不同这项研究还表明, 新鲜水果中不一定富含诸如和黄酮类化合物等必需的营养成分它们可能会发生自然变异 ( 例如, 因采收时间或季节变化而发生的结果 ), 或者为提高营养价值而进行了富集所得定量结果如下 : 在假种皮果汁中未检出抗坏血酸或槲皮素, 但石榴皮中含有这两种组分利乐包果汁中含有抗坏血酸和槲皮素这与利乐包果汁生产商在产品标签上所宣称的产品富含抗坏血酸相一致, 但未在标签中说明果汁中含有槲皮素 6

7 结论利用 UPLC 技术和亚 2 µm 颗粒色谱柱分析石榴 Ganesh 变种表明, 石榴皮提取物具有双重抗氧化性, 可在食品应用中作为生物防腐剂, 也可以用作营养制品参考文献 1. 网络参考资料 : POMEGRANATE.htm 2. J Nicks. Pomegranate Fruit Facts 网络参考资料 : 4. 网络参考资料 : 5. N P Seeram, R N Schulman, D Heber. Pomegranates: Ancient Roots to Modern Medicine Waters ACQUITY UPLC UPLC 和 T he Science of W hat s Possible 是沃特世公司的注册商标其他所有商标均归各自的拥有者所有 2013 年沃特世公司印制于中国 2013 年 3 月 ZH AG-PDF 沃特斯中国有限公司沃特世科技 ( 上海 ) 有限公司北京 : 上海 : 广州 : 成都 : 香港 : 免费售后服务热线 :800 (400)

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ZH_银杏叶黄酮类提取物从分析到制备的放大 Andrew Aubin 沃特世公司 ( 美国马萨诸塞州米尔福德 ) 应用优势配有直观易用式软件的制备级 HPLC 高性能系统通过 ChromScope TM 软件对所有系统组件进行全面控制简介银杏叶入药治疗多种疾病的历史可追溯千年之久 1 银杏叶提取物中含有多种活性化合物, 尤其富含黄酮类化合物, 主要为槲皮素山柰酚和异鼠李素 ( 图 1) 图 1. 槲皮素山柰酚和异鼠李素的化学结构.