Microsoft Word 张璐琪-二校
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- 费夕 水
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1 7 5 Vol. 7 No Journal of Food Safety and Quality May, β- 张璐琪 1*, 王凤美 2, 张鸿伟 2, 徐彪 2, 梁成珠 (1., ; 2., ) 2 摘要 : 目的 3 - 方法 (CLB) (RAC) (SAL)3 β-, - (LC-MS/MS) 结果 - - LC-MS/MS 83.3 % 87.5%(CLB) 12.5 %(RAC) 100%(SAL), CLB RAC SAL β- ELISA - 94 % 94% 76.2 % 75 % 结论,,, 关键词 : β- ; ; ; Detection of 3 kinds of β-agonists in animal foods by rapid test card and ELISA kit ZHANG Lu-Qi 1*, WANG Feng-Mei 2, ZHANG Hong-Wei 2, XU Biao 2, LIANG Cheng-Zhu 2 (1. College of Food Science and Engineering, Ocean university of China, Qingdao , China; 2. Technical Center for Inspection and Quarantine of Shandong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Qingdao , China) ABSTRACT: Objective To evaluate the accuracy of the rapid test card and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kit in detecting 3 kinds of β-agonists in animal foods. Method Three kinds of β-agonists residues including clenbuterol (CLB), ractopamine (RAC) and salbutamol (SAL) in animal foods were detected by rapid test card and ELISA, respectively. The results were compared with those of the liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) and the methods were evaluated. Results The coincidence rate of clenbuterol rapid test card and LC-MS/MS was 83.3%. The coincidence rates of triple rapid test card and LC-MS/MS were 87.5%, 12.5% and 100% for CLB, RAC and SAL, respectively. The coincidence rates of ELISA kits and LC-MS/MS were 94%, 94%, 76.2% and 75% for CLB, RAC, SAL and β-agonists, respectively. Conclusion The accuracy of kits are relatively high, but the false positive and false negative of some kits are obvious. While the rapid test card has the high LOD and low accuracy, it does not meet the general detecting demand. KEY WORDS: β-agonists; rapid test card; enzyme-linked immunosorbent assay; accuracy evaluation * 通讯作者 :,, @163.com *Corresponding author: ZHANG Lu-Qi, Master, College of Food Science and Engineering, Ocean University of China, Qingdao , China @163.com
2 5, : 3 β 引言 β- ( ) (clenruberol, CLB) (ractopamine, RAC) (salbutamol, SAL),,,,, [1] β-,,, [2], CLB RAC SAL (HPLC) [3-5] - (GC-MS) [6,7] (ELISA) [8,9] [10,11], [12] ELISA ELISA, - (LC-MS/MS), 2 材料与方法 2.1 材料与仪器 LC-MS/MS ( 0.05 μg/kg) (ph=3); (, Merck ) ( : CLB 3 μg/kg RAC 3 μg/kg SAL 5 μg/kg, ); ELISA ( : 0.04 μg/kg, r-biopharm, 12445); ELISA ( : 0.35 μg/kg 0.2 μg/kg,, ); β- ELISA ( : 0.1 μg/kg,, CS1506) TECAN infinite M200 ( Tecan ), Himac CR22GII ( HITACHI ),,,,, MS1Minishaker ( IKA ) 2.2 检测方法 速测卡 (1) : 3 g ; 95 10~15 min; r/min, min, (2):, 2 ( 40 μl), 30 s 1~2 ; 5 min, 盐酸克仑特罗试剂盒 (1) : 5 g, 25 ml 50 mmol/l HCl, 20 min; 8000 r/min, min; 18 ml (3 g ), 2 ml 0.5 mmol/l NaOH, 10 min; 10 ml 500 mmol/l KH 2 PO 4 (ph=3), h; 8000 r/min, min; 10 ml (1 g ), (20~25 ), RIDA C 18 (2) RIDA C 18 : 3 ml (100 %) ; 2 ml 50 mmol/l KH 2 PO 4 (ph=3); ; 2 ml 50 mmol/l KH 2 PO 4 (ph=3) ; 2 min ; 1 ml (100 %), 15 /min, ; 50~60 ; 1 ml, 20 μl (3):, ; 100 μl, 15 min;, 250 μl,, 2,, ; 20 μl, 100 μl,, 30 min;, 250 μl,,,, ; 100 μl /,, 15 min; 100 μl, 30 min 450 nm 莱克多巴胺和沙丁胺醇 ELISA 试剂盒 (1) : 2 g, 4 ml ( 20 1:20 ), 2 ml 0.1 mol/l, 30 s; 8000 r/min 10 min; 1 ml, 1 mol/l ph 6.75±0.25,, 8000 r/min 5 min, ; 50 μl (2):, ; 50 μl, 100 μl,, 10 min( 30 min);, 250 μl,, 3,,
3 ; 100 μl /,, 10 min; 100 μl, 10 min 450 nm β- 兴奋剂 ELISA 试剂盒 (1) : 4 g, 8 ml, 30 min; 8000 r/min 10 min, 4 ml, ; 1 ml ( 10 ), 2 ml, 30 s, 2000 r/min 10 min; 100 μl, 400 μl B,, 50 μl (2):, ; 50 μl, 50 μl 50 μl,, 30 min;, 250 μl, 3, ; 150 μl, 10 min; 50 μl, 450 nm 2.3 试验设计 盐酸克伦特罗速测卡 5 clen ( μg/kg) 20, 盐酸克伦特罗 - 莱克多巴胺 - 沙丁胺醇三联速测卡 2 clen ( μg/kg) 2 rac ( μg/kg) 2 sal ( μg/kg) 20, 盐酸克伦特罗试剂盒 5 clen ( μg/kg) 20, 莱克多巴胺试剂盒 5 rac ( μg/kg) 20, 沙丁胺醇试剂盒 3 sal ( μg/kg) 18, β- 兴奋剂试剂盒 2 clen ( μg/kg) 2 sal ( μg/kg) 20, 2 3 结果与分析 3.1 金标速测卡 1,, 83.3%, (3~9 μg/kg),,,,, (7~9 μg/kg) 3.2 ELISA 试剂盒 2,, 94%, β-, 76.2 % 75 %, IC 50,, 3 IC 50,, β- 表 1 快速检测卡的检出结果 Table 1 Detection results of rapid test cards Clen Rac Sal 6/10 0/4 4/4 4/4 19/20 28/28 0/28 28/28 /% : ; ;
4 5, : 3 β 表 2 Table 2 ELISA 试剂盒的检出结果 Detection results of ELISA kits ELISA β- 8/10 7/10 6/6 8/8 39/40 40/40 26/36 28/40 /% : ; ; 表 3 各试剂盒 IC 50 及线性范围比较 (μg/kg) Table 3 Comparison of IC 50 and linear ranges of kits(μg/kg) ELISA β , , , , IC ~ ~ ~ ~20.00 : IC 50 50%, 4 讨论 β-,,,,,,,,,, : (1),, [13] (2), RIDA C 18 C 18,, ;,, [14] (3),,,, (4),, (5) [15], β-,,,, 5 结论,,,,,,,,,, β-,, 参考文献 [1],,. [J].
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