摘要 本實驗依據衛生署公佈之 護肝功能評估方法 ( 針對化學性肝損傷 ) 功能評估規範進行實驗, 針對化學性肝損傷進行護肝功能之評估 本評估方法之進行主要是以四氯化碳 (CCl 4 ) 誘導大白鼠慢性肝損傷的實驗模式, 探討不同劑量試驗樣品之處理對於大白鼠慢性肝損傷之影響 測試物為財翰公司提供之人蔘萃取物 以雄性 SD 大白鼠 (200-250 克 ) 為實驗動物, 每組 12 隻, 共分 6 組 分別為 1. 正常對照組 : 正常飲食組 ;2. 負控制組 : 四氯化碳處理組 ;3. 正控制組 : Silymarin 處理組 ;4. 實驗組 : 試驗樣品處理組, 分三種劑量組, 分別為 1 倍人體建議攝取量,3 倍劑量組及 5 倍劑量組 實驗結果顯示, 實驗前 AST 及 ALT 濃度於各組間無顯著差異, 於實驗期 8 週後負控制組之 AST 及 ALT 皆顯著高於正常控制組, 而正控制組及低 中 高劑量組較負控制組低 肝臟脂質過氧化產物 (Thiobarbituric acid reactive substances, TBARS) 數值於各組皆較正常控制組高, 但低劑量組 中劑量組及高劑量組皆較負控制組低, 具顯著差異 麩胱甘肽 (Glutathione, GSH) 實驗結果顯示, 各組皆較正常控制組低, 正控制組 低劑量組 中劑量組 高劑量組與負控制組間無顯著差異 於肝臟抗氧化酵素活性分析, 超氧化物歧化酶 (Superoxide dismutase, SOD) 於負控制組顯著高於正常控制組, 其餘各組與正常控制組無顯著差異, 低劑量組及中劑量組較負控制組低, 具顯著差異 麩胱甘肽還原酶 (Glutathione reductase, GSH Rd, GRd) 於正控制組肝臟中 GRd 的酵素活性顯著高於正常控制組, 其餘各組相較於正常控制組無顯著差異 正控制組 低劑量組 中劑量組及高劑量組亦與負控制組無顯著差異 麩胱甘肽過氧化酶 (Glutathione peroxidase, GSH Px, GPx) 於負控制組 正控制組及三劑量組之 GPx 酵素活性皆顯著較正常控制組高 Catalase (CAT) 於本次實驗結果顯示負控制組 正控制組及高劑量組顯著較正常控制組高 ; 低劑量及中劑量組顯著較負控制組低 於肝臟組織病理切片觀察中, 肝臟脂肪變性 (steatosis) 指標 肝臟損傷 (liver injury) 指標 肝纖維化 (fibrosis) 指
標, 呈現相同趨勢, 負控制組 正控制組及三劑量組之肝臟脂肪變性皆顯著較正常控制組高 但三劑量組及正控制組之肝臟脂肪變性又較負控制組顯著減少 綜合上述實驗顯示, 本測試物於三劑量組可減少因四氯化碳所造成之肝損傷酵素指標 AST 及 ALT 上升, 且於肝臟組織病理切片觀察中顯示具有降低肝臟組織病理損傷程度的效果
壹 簡介 肝臟為人體最大且機能最複雜器官, 對於代謝三大熱量營養素 維生素 膽汁等物質占有不可或缺的角色, 肝臟亦參與了血液凝固及造血的過程 除此之外, 肝臟亦為重要的解毒器官, 肝臟中含有許多解毒酵素及抗氧化酵素, 其酵素的活性及功能可避免人體受到有毒物質的傷害, 而肝臟平時具有很強的代謝能力, 因此輕微或是局部性的刺激及傷害不會造成肝臟功能發生異常, 一旦發生嚴重的肝損傷時, 肝臟無力代謝掉多餘的有害物質, 則會出現嚴重肝功能障礙 國人肝臟疾病罹患率甚高, 如慢性肝病及肝硬化等, 其為民國 92 年國人十大死亡的第六位, 因此對於預防或是治療肝臟疾病為營養研究的重要研究方向之一 人參 (Panax ginseng) 為一高經濟價值的草本植物, 常見於中國 韓國 日本等地區, 作為中藥使用已有數千年的歷史, 傳統醫學用於舒緩疲勞 治療肝病等用途, 而許多研究也報導指出人參可調節免疫系統及神經系統 抗發炎 抗氧化等功能 (Scaglione et al., 1990; 1996; Sung et al., 2005; Friedl et al., 2001; Keum et al., 2003; Hofseth et al., 2007), 並可改善治療及預防心血管疾病 糖尿病及癌症等 (Sotaniemi et al., 1995; Reay et al., 2005; Vuksan et al., 2008; Yue et al., 2007; Surh et al., 2001; Wargovich et al., 2001; Volate et al., 2005) 人參依其製備過程不同使得有不同種類色素組成, 可區分為紅參 (red ginseng) 與白參 (white ginseng), 白參為經收成後經陽光乾燥, 紅參為經蒸煮後乾燥 紅 白參中所含人參皂苷 (ginsenoside) 含量也略有差異 人參中的活性成分主要分為人參皂苷 (ginseng saponin, 又稱為 ginsenoside) 及非皂苷活性物質 人參皂苷又有兩大類 protopanaxadiol 及 protopanaxatriol,rb1, Rb2, Rc, Rd 等屬於 protopanaxadiol; Re, Rf, Rg1, Rg2 等屬於 protopanaxatriol 人參皂苷攝入動物體後可再經腸道菌的去醣基化 (deglycosylation) 及與脂肪酸酯化 (esterification) 的作用形成人參皂苷代謝產物 (ginsenoside metabolites), 如 20-O-β-D-glucopyranoside (M1) and 20S-protopanaxatriol (M4) (Hasegawa, 2004)
四氯化碳會在肝臟中代謝並產生三氯甲烷, 三氯甲烷為一自由基, 會攻擊肝臟組織中的蛋白質 脂質等, 因而造成蛋白質合成受阻, 或是脂質代謝發生異常而引起三酸甘油酯堆積, 甚至會造成脂質過氧化而導致肝細胞膜受損, 造成肝中酵素滲出及細胞病變而壞死 本次實驗以皮下注射四氯化碳的方式, 建立慢性肝損傷的動物模式, 同時餵食人參萃取物, 並於實驗結束後觀察人參萃取物對肝臟傷害的影響
貳 材料與方法一 實驗動物與組別 : 本次實驗使用 72 隻 200-250 克重的雄性 SD 大白鼠 經過適應期一週後, 隨機分為 6 組 ( 每組 12 隻 ), 分組如下 : 1. 正常控制組 (Control, C): 皮下注射 olive oil + 正常飲食 2. 負控制組 ( 肝損傷組, negative control, N): 皮下注射 40% CCl 4 /olive oil + 正常飲食 3. 正控制組 (Silymarin 治療對照組, positive control, P): 皮下注射 40% CCl 4 /olive oil + 200 mg silymarin /kg BW 4. 低劑量組 ( 一倍劑量,low-dose, L): 皮下注射 40% CCl4/olive oil + 1.14 g 人參萃取物 /kg BW 5. 中劑量組 ( 三倍劑量, medium-dose, M): 皮下注射 40% CCl4/olive oil + 3.42 g 人參萃取物 /kg BW 6. 高劑量組 ( 五倍劑量, high-dose, H): 皮下注射 40% CCl4/olive oil + 5.70 g 人參萃取物 /kg BW 二 實驗設計 : 本次實驗利用每週皮下注射每公斤體重 1 ml 的四氯化碳 (40% CCl 4 /olive oil) 一次, 以建立大鼠肝臟損傷模式 正常飲食的組別 ( 正常控制組及負控制組 ) 使用 5001 粉狀飼料, 其他組別則在粉狀飼料中添加 silymarin 或不同劑量之人參萃取物, 且每日監控其飼料攝食量以確認 silymarin 及人參萃取物的攝取情形 實驗期共八週, 於實驗期結束後犧牲, 以腹腔動脈採血方式收集血液樣品, 並摘取大鼠肝臟以利後續分析其肝臟損傷程度 三 分析項目與方法 :
1. 血漿 : 測定與肝傷害相關之成分或酵素活性 A. GOT (AST) 使用商業試劑組 (RM 163-K, Iatron laboratories, Tokyo) 檢測 取 200 μl 血漿或標準溶液, 加入 500 μl reagent 並混合均勻, 於 37 下作用 30 分鐘後, 加入 3 ml stop solution, 最後利用分光光度計, 以波長 570 nm 讀取其吸光值, 將其吸光值帶入標準曲線後換算出濃度 B. GPT (ALT) 使用商業試劑組 (RM 163-K, Iatron laboratories, Tokyo) 檢測 取 200 μl 血漿或標準溶液, 加入 500 μl reagent 並混合均勻, 於 37 下作用 30 分鐘後, 加入 3 ml stop solution, 最後利用分光光度計, 以波長 570 nm 讀取其吸光值, 將其吸光值帶入標準曲線後換算出濃度 C. 三酸甘油酯 (Triglyceride, TG) 使用商業試劑組 (Randox TR213, Antrim, UK) 檢測 取 10 μl 血漿或標準溶液, 避光後加入 1 ml reagent 混合均勻, 於 37 下水浴 5 分鐘, 並利用分光光度計, 以波長 500 nm 讀取其吸光值, 將其吸光值帶入標準曲線後換算出濃度 D. 膽固醇 (Cholesterol) 使用商業試劑組 (Randox CH201, Antrim, UK) 檢測 取 10 μl 血漿或標準溶液, 避光後加入 1 ml reagent 混合均勻, 於 37 下水浴 5 分鐘, 並利用分光光度計, 以波長 500 nm 讀取其吸光值, 將其吸光值帶入標準曲線後換算出濃度 2. 肝臟 : 測定各種與抗氧化功能相關之成分或酵素活性 A. 前處理取 0.5 g 肝臟, 加入 1.5 ml 均質液 (20 M Tris-base, 7 M NaCl, 2.5 ml Triton X-100, 250 ml dd-h 2 O), 使用均質績均質後至於冰上, 每 10 分鐘震盪 1 次, 持續 90 分鐘, 以 4,3,000 g 離心 15 分鐘後, 上清液即為肝臟萃取液, 保存於 -30 冷凍櫃內, 以待日後分析肝臟脂質過氧化產物及抗氧化酵素等
B. Glutathione (GSH) 使用商業配方試劑組 (Catalog No. 703002, Cayman) 先將 MPA 溶液 (metaphosphoric acid/dd-h 2 O=5/50(w/v), 與等體積的肝臟萃取液震盪混合均勻, 置於室溫中 5 分鐘, 以 2,000 g 離心 5 分鐘後, 取出 100 μl 的上清液, 加入 5 μl 的 4 M TEAM (triethanolamine) 溶液並立即劇烈震盪後即為待測的肝臟樣品 取 50 μl 之肝臟樣品及 GSH 標準品至 96 孔盤中, 加入 150 μl 新鮮配置的 reagent 並均勻混合, 最後利用分光光度計, 在 37, 以波長 405 nm, 讀取第 25 分鐘之吸光值, 將其吸光值帶入標準曲線後換算出濃度 C. Glutathione reductase (GSH Rd, GRd) 使用商業配方試劑組 (GR2368, Radox) 取 100 μl 肝臟萃取液, 加入 1.9 ml 0.9% NaCl 後即為待測的肝臟樣品 取 8 μl 肝臟樣品及去離子水 ( 作為 blank) 至 96 孔盤中, 加入 200 μl R1 solution 後混和均勻, 加入 40 μl R2 solution 後混合均勻, 最後利用分光光度計, 在 37, 以 340 nm, 讀取第 1, 2, 3, 4, 5 分鐘之吸光值 計算出每分鐘的吸光值變化後, 將變化值帶入公式 4983 ΔA340nm 稀釋倍數 D. Glutathione peroxidase (GSH Px, GPx) 使用商業配方試劑組 (RS505, Radox) 取 0.05 ml 肝臟萃取液, 加入 2 ml diluting agent 後即為待測的肝臟樣品 取 8 μl 肝臟樣品及去離子水 ( 作為 blank) 至 96 孔盤中, 加入 200 μl R1 solution 和 8 μl R2 solution 後混和均勻, 最後利用分光光度計, 在 37, 以 340 nm 讀取第 1, 2, 3 分鐘之吸光值 計算出每分鐘的吸光值變化後, 將變化值帶入公式 8412 ΔA340nm 稀釋倍數 E. Superoxide dismutase (SOD) 使用商業配方試劑組 (SD125, Radox) 以 0.01 mol/l phosphate buffer (ph7.0) 將肝臟萃取液稀釋 50 倍後, 及為待測的肝臟樣品 取 6 μl 肝臟樣品 標準物及 0.01 mol/l phosphate buffer ( 作為 blank), 加入 200μL R1 solution 後混和均勻, 再加入 30 ul R2 solution 後混合均勻, 最後利用分光光度計, 在 37, 以 505 nm
讀取第 30 秒及第 3.5 分鐘之吸光值並計算出每分鐘的吸光值變化 F. Catalase (CAT) 取 30 μl 肝臟樣品, 加入 570 μl 去離子水及 300 μl 試劑溶液 (50 mm potassium phosphate, 0.059 M H 2 O 2, ph7.0) 後均勻混合, 最後利用分光光度計, 在 25, 以 240 nm 於 60 秒內記錄每 15 秒之吸光值並計算一分鐘內的吸光值變化 3. 肝臟組織病理切片及判讀於實驗結束後, 將大白鼠犧牲取得肝最大右葉, 置入 10% 福馬林中, 進行組織包埋及切片染色步驟 以 HE stain 及 Masson stain, 評估肝脂質變性 肝細胞發炎 肝細胞壞死及肝纖維化程度 肝脂質變性評估分數由 0 至 3 級,0 代表無肝細胞受影響 ;1 代表小於 33% 肝細胞受影響 ;2 代表 33% 至 66% 肝細胞受影響 ; 3 代表大於 66% 肝細胞受影響 肝損傷評估兩指標 : 肝發炎及肝細胞壞死, 肝發炎評估分數由 0 至 3 級,0 代表無發炎細胞浸潤 ;1 代表肝小葉發炎 (lobular inflammation) 及無或輕微門脈區發炎 (portal inflammation);2 代表肝小葉發炎 (lobular inflammation) 及輕微至中度門脈區發炎 (portal inflammation);3 代表肝小葉發炎 (lobular inflammation) 且多形核細胞 (polymorphonuclear cells) 集中 Zone 3 區域及輕微至中度門脈區發炎 (portal inflammation) 肝細胞壞死評估分數由 0 至 3 級,0 代表無肝細胞受影響 ;1 代表小於 33% 肝細胞受影響 ;2 代表 33% 至 66% 肝細胞受影響 ;3 代表大於 66% 肝細胞受影響 肝纖維化評估分數由 0 至 4 級, 0 代表無肝纖維化 ;1 代表具膠原增生但未形成中隔 ;2 代表中央靜脈和門脈區間形成不完全中隔 ;3 代表形成完整的中隔 ;4 代表中隔增厚且形成完全中隔
参 結果 一 實驗動物體重於實驗期前, 大鼠之體重各組無顯著差異 實驗期 8 週後測量大鼠之體重顯示, 正控制組 ( 添加 silymarin, 並施打 CCl 4 ) 低劑量組 中劑量組 高劑量組( 添加不同劑量的人參萃取物, 並施打 CCl 4 ) 與負控制組 ( 給予正常飲食, 並施打 CCl 4 ) 間無顯著差異, 但各組皆較正常控制組 ( 給予正常飲食, 但無施打 CCl 4 ) 體重輕 結果如表一所示 二 血液生化值 1. 肝功能指數 (AST 及 ALT) 於實驗前及結束後分別測量各組大鼠血中 AST 及 ALT 濃度, 結果顯示實驗前 AST 及 ALT 濃度於各組間無顯著差異 於實驗期 8 週後數值顯示負控制組之 AST(111.58±34.44) 顯著高於正常控制組 (76.92±8.91); 而正控制組 (77.75±11.69) 以及低 中 高劑量組 (80.58±11.74; 84.67±13.24; 79.50±6.80) 亦較負控制組 (111.58 ±34.44) 低, 且與正常控制組無顯著差異 結果如表二所示 ALT 數值顯示負控制組 (68.75±10.37) 顯著高於正常控制組 (40.75±2.90); 而正控制組 (50.17±12.51) 以及低 中 高劑量組 (47.83±6.46; 49.00±10.56; 48.42±12.63) 亦較負控制組 (68.75± 10.37) 低 結果如表二所示 2. 三酸甘油酯 (Triglyceride, TG) 於各組間無顯著差異 結果如表三所示 3. 總膽固醇 (Total cholesterol, TC) 所示 負控制組及高劑量組較正常控制組低 ; 低劑量組較負控制組高 結果如表三
4. 高密度脂蛋白膽固醇與低密度脂蛋白膽固醇 (High density lipoprotein cholesterol, HDL-C; Low density lipoprotein cholesterol, LDL-C) 高密度脂蛋白膽固醇 (HDL-C) 於各組間皆無顯著差異, 低密度脂蛋白膽固醇 (LDL-C) 於高劑量組顯著低於正常控制組 ; 於正控制組及低劑量組較負控制組高 結果如表三所示 三 肝臟指標 1. 肝臟脂質過氧化產物 (Thiobarbituric acid reactive substances, TBARS) 四氯化碳被肝臟代謝後產生的自由基會攻擊組織細胞中的脂質, 因而造成脂質過氧化 於本次實驗結果中,TBARS 數值於各組皆較正常控制組高 但低劑量組 中劑量組及高劑量組皆較負控制組低, 具顯著差異 結果如表四所示 2. 麩胱甘肽 (Glutathione, GSH) GSH 可作為 GPx 的受質, 為體內抗氧化物質之一 於本次實驗結果顯示, 各組皆較正常控制組低 正控制組 低劑量組 中劑量組 高劑量組與負控制組間無顯著差異 結果如表四所示 3. 抗氧化酵素活性 A. 超氧化物歧化酶 (Superoxide dismutase, SOD) 負控制組顯著高於正常控制組, 其餘各組與正常控制組無顯著差異 低劑量組及中劑量組較負控制組低, 具顯著差異 結果如表五所示 B. Glutathione reductase (GSH Rd, GRd) 四氯化碳經肝臟代謝後會產生過量自由基, 肝臟中的 GSH 可與自由基反應, 並產生氧化態的 GSSG, 而 GRd 可將氧化態的 GSSG 再度還原成還原態的 GSH,
藉此維持體內抗氧化物質的平衡 於本次實驗結果中, 正控制組肝臟中 GRd 的 酵素活性顯著高於正常控制組, 其餘各組相較於正常控制組無顯著差異 正控制 組 低劑量組 中劑量組及高劑量組亦與負控制組無顯著差異 結果如表五所示 C. Glutathione peroxidase (GSH Px, GPx) 還原態的 GSH 可藉由 GPx 的作用清除細胞中過多的自由基, 並降低氧化壓力 負控制組 正控制組及三劑量組之 GPx 酵素活性皆顯著較正常控制組高 結果如表五所示 D. Catalase (CAT) Catalase 可作為清除過氧化氫的抗氧化酵素 於本次實驗結果顯示負控制組 正控制組及高劑量組顯著較正常控制組高 ; 低劑量及中劑量組顯著較負控制組低 結果如表五所示 四 肝臟組織病理切片觀察 1. 肝臟脂肪變性 (steatosis) 指標肝臟組織切片以 HE 染色, 評估肝脂質變性 發炎及肝細胞壞死程度 ( 如圖一 ) 負控制組 正控制組及三劑量組之肝臟脂肪變性皆顯著較正常控制組高 但三劑量組及正控制組之肝臟脂肪變性又較負控制組顯著減少 結果如表六所示 2. 肝臟損傷 (liver injury) 指標 負控制組 正控制組及三劑量組之肝臟損傷皆顯著較正常控制組高 但三劑 量組及正控制組之肝臟損傷又較負控制組顯著減少 結果如表六所示 3. 肝纖維化 (fibrosis) 指標
肝組織切片以 Masson stain, 評估肝纖維化程度 ( 如圖二 ) 負控制組 正控制組及三劑量組之肝纖維化皆顯著較正常控制組高 但三劑量組及正控制組之肝纖維化又較負控制組顯著減少 結果如表六所示 於肝臟脂肪變性 肝臟損傷及肝纖維化三指標, 呈現相同趨勢, 三劑量組可減少肝臟組織之病理損傷程度
肆 討論肝功能指數之測量於實驗結果中顯示, 皮下注射 CCl 4 並給予正常飲食的負控制組之 AST 及 ALT 皆顯著高於無施打 CCl 4 的正常控制組, 顯示每週皮下注射 40% CCl 4 一次, 確實會造成大鼠肝臟損傷, 因而導致肝功能指數上升 在本實驗中亦表示此 CCl 4 誘發肝損傷的動物模式是成功的, 並據以進行後續測試物之餵食及保護效果之評估 在大鼠飲食中添加 silymarin 之正控制組可降低 CCl 4 誘發之 AST 及 ALT, 於本實驗中正控制組可作為具保護效果之比較組別 三種不同劑量的人參萃取物 ( 低 中及高劑量組 ) 餵食後可降低其 AST 及 ALT 指數, 顯示在大鼠飲食中添加此不同劑量的人參萃取物可降低四氯化碳對肝臟的傷害, 於本實驗中, 低劑量組 (1.14g 人參萃取物 /Kg 體重 ) 即有保護效果, 相較於負控制組具顯著差異, 與正常控制組 中劑量組及高劑量組間無差異 ( 表二 ) 肝臟脂質過氧化物的測量指標 TBARS 數值, 於各組皆較正常控制組高 但低劑量組 中劑量組及高劑量組又較負控制組低, 具顯著差異 於本次結果顯示皮下注射 CCl 4 並給予正常飲食的負控制組其肝臟 TBARS 數值顯著較無施打 CCl 4 的正常控制組高, 顯示 CCl 4 經肝臟代謝後產生的大量自由基具攻擊組織細胞中脂質的能力, 並造成脂質過氧化, 於此實驗中由 TBARS 數值升高可見其變化 給予低 中及高劑量組人參萃取物餵食後, 具有降低因 CCl 4 誘發後 TBARS 指標上升的效果, 亦即於三劑量組雖無法達到完全降低脂質過氧化的效果, 但仍具有抑制 CCl 4 傷害後脂質過氧化的形成 ( 表四 ) 肝臟中抗氧化酵素活性之測量, 於超氧化物歧化酶 (SOD) 結果顯示, 負控制組顯著高於正常控制組, 其餘各組與正常控制組無顯著差異 推測肝細胞為了加強代謝四氯化碳產生的自由基, 因而代償性增加 SOD 的活性 低劑量組及中劑量組較負控制組低, 具顯著差異 此 SOD 活性有下降的趨勢, 可能因人參萃取物可降低四氯化碳對肝臟的傷害, 而使得因四氯化碳誘發之代償性增加的效應減少, 需觀察到 SOD 活性有下降的現象 人參中具有護肝功能的物質主要分為人參皂苷 (ginseng saponin, 又稱為
ginsenoside) 及非皂苷活性物質兩種 其中又以人參皂苷做為主要的活性成分, 其具有三種主要型態, 分別為 protopanaxadiol (PPD) protopanaxatriol (PPT) oleanolic acid,ppd 中以 Rb1 含量最多, 且生物活性也最大, 過去研究顯示其可降低大鼠肝臟中的三酸甘油酯含量 (Park et al., 2002); 在一個以 tert-butyl hydroperoxide 誘發肝損傷的實驗中, 其結果指出經口給予每公斤體重 25 mg Rb1 或 50 mg compound K 具保護效果 (Lee HU, et al., 2005a); 另一研究指出腸道缺血再灌流的大鼠模式下, 每公斤體重 20 或 40 mg Rb1 亦具有降低肝損傷的效果 (Wang et al., 2008) 而 PPD 中的 Rd 成分也被發現可以降低自由基產生的傷害 (Yokozawa et al., 2004),Rg3 則可抑制肝功能指數上升 (Lee JH et al., 2005); 降低 LPS 誘發之肝臟及腎臟損傷於餵食介入每公斤體重 5 或 10 mg Rg3 劑量下 (Kang et al., 2007); 每公斤體重 25 或 50 mg Rg3 及其代謝產物 Rh2 提供 tert-butyl hydroperoxide 所誘發肝損傷的肝臟保護效果 (Lee HU, et al., 2005b) 非皂甘的活性成分包含 polyacetylene 酚類 (phenol) 多醣體 (polysaccharide) 等, polyacetylene 物質, 包含 panaxydol panaxynol panaxytriol, 被認為可以抗癌且具有抗氧化的作用 酚類物質, 如 maltol, 具有很強的抗氧化功能, 為一脂質過氧化抑制劑, 因此具有抗老化的功能
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表一 實驗動物體重變化 Initial weight Final weight Group 1 (g) (g) C 264.00 ± 9.85 468.31 ± 29.00 N 256.00 ± 12.69 405.71 ± 49.37 # P 264.04 ± 14.01 414.23 ± 42.73 # L 255.35 ± 16.44 402.35 ± 33.07 # M 264.00 ± 15.16 410.54 ± 32.54 # H 259.58 ± 10.82 418.42 ± 27.03 # Values are presented as the mean ± SD. 1 C: control group; N: negative control group; P: positive control group; L: low-dose group; M: medium-dose group; H: high-dose group. # p<0.05, significant difference compared with control group. * p<0.05, significant difference compared with negative group. C: 正常控制組 N: 負控制組 P: 正控制組 L: 低劑量組 M: 中劑量組 H: 高劑量組
表二 實驗動物血液中肝功能指數 Group 1 Initial AST Final AST Initial ALT Final ALT (U/L) (U/L) (U/L) (U/L) C 97.58 ± 6.69 76.92 ± 8.91 61.08 ± 9.11 40.75 ± 2.90 N 94.08 ± 8.08 111.58 ± 34.44 # 61.17 ± 4.97 68.75 ± 10.37 # P 98.83 ± 7.73 77.75 ± 11.69 * 59.50 ± 8.99 50.17 ± 12.51 #* L 94.58 ± 8.36 80.58 ± 11.74 * 68.42 ± 11.55 47.83 ± 6.46 #* M 91.33 ± 9.23 84.67 ± 13.24 * 67.17 ± 15.27 49.00 ± 10.56 #* H 90.58 ± 9.17 79.50 ± 6.80 * 66.50 ± 8.55 48.42 ± 12.63 * Values are presented as the mean ± SD. 1 C: control group; N: negative control group; P: positive control group; L: low-dose group; M: medium-dose group; H: high-dose group. # p<0.05, significant difference compared with control group. * p<0.05, significant difference compared with negative group. C: 正常控制組 N: 負控制組 P: 正控制組 L: 低劑量組 M: 中劑量組 H: 高劑量組
表三 實驗動物血脂濃度 Group 1 TG TC HDL-C LDL-C (mg/dl) (mg/dl) (mg/dl) (mg/dl) C 39.67 ± 4.38 60.75 ± 7.66 10.92 ± 2.07 5.33 ± 1.15 N 34.75 ± 5.74 47.58 ± 17.02 # 11.50 ± 3.12 3.75 ± 1.82 P 38.17 ± 8.67 58.33 ±10.03 10.75± 2.05 5.83 ± 1.80 * L 39.92 ± 12.23 62.33 ± 13.34 * 11.58 ± 2.81 5.33 ± 1.67 * M 42.00 ± 7.95 56.25 ± 10.75 11.25 ± 2.56 4.67 ± 1.23 H 40.75 ± 8.53 54.17 ± 9.93 # 10.50 ± 2.15 4.08 ± 0.90 # Values are presented as the mean ± SD. 1 C: control group; N: negative control group; P: positive control group; L: low-dose group; M: medium-dose group; H: high-dose group. # p<0.05, significant difference compared with control group. * p<0.05, significant difference compared with negative group. TG: triglyceride; TC: total cholesterol; HDL-C: high density lipoprotein cholesterol; LDL-C: low density lipoprotein cholesterol. C: 正常控制組 N: 負控制組 P: 正控制組 L: 低劑量組 M: 中劑量組 H: 高劑量組
表四 肝臟中過氧化物指標及麩胱甘肽 (GSH) 濃度 Group 1 TBARS GSH (nm/mg protein) (nmole/mg protein) C 7.92 ± 1.75 8.79 ± 2.38 N 11.46 ± 2.34 # 6.24 ± 1.61 # P 13.48 ± 2.92 # 4.89 ± 0.96 # L 10.47 ± 2.69 #* 6.97 ± 1.87 # M 9.68 ±1.34 #* 6.09 ± 1.61 # H 9.74 ± 1.62 #* 6.73 ± 1.65 # Values are presented as the mean ± SD. 1 C: control group; N: negative control group; P: positive control group; L: low-dose group; M: medium-dose group; H: high-dose group. # p<0.05, significant difference compared with control group. * p<0.05, significant difference compared with negative group. TBARS: thiobarbituric acid reactive substrates; GSH: glutathione. C: 正常控制組 N: 負控制組 P: 正控制組 L: 低劑量組 M: 中劑量組 H: 高劑量組
表五 肝臟中抗氧化酵素活性 Group 1 SOD GRd GPx CAT (U/mg protein) (μu/mg protein) (μu/mg protein) (U/mg protein) C 5.37 ± 0.72 203.29 ± 52.20 268.99 ± 90.48 23.36 ± 3.74 N 6.59 ± 1.15 # 245.62 ± 73.04 402.64 ± 95.73 # 30.94 ± 4.96 # P 6.28 ± 1.77 254.93 ± 66.19 # 369.47 ± 81.41 # 27.80 ± 4.05 # L 5.40 ± 1.45 * 238.04 ± 75.75 359.03 ± 66.84 # 23.98 ± 7.72 * M 5.42 ± 0.77 * 215.32 ± 56.01 372.33 ± 113.34 # 23.37 ± 4.05 * H 5.72 ± 1.16 236.24 ± 64.49 438.00 ± 99.25 # 33.68 ± 8.27 # Values are presented as the mean ± SD. 1 C: control group; N: negative control group; P: positive control group; L: low-dose group; M: medium-dose group; H: high-dose group. # p<0.05, significant difference compared with control group. * p<0.05, significant difference compared with negative group. SOD: superoxide dismutase catalase; GRd: glutathione reductase; GPx: glutathione peroxidase; CAT: catalase. C: 正常控制組 N: 負控制組 P: 正控制組 L: 低劑量組 M: 中劑量組 H: 高劑量組
表六 組織病理分級之肝臟損傷程度比較 Group 1 Steatosis Liver injury Fibrosis (Grade 0-3) (Grade 0-6) (Grade 0-3) C 0.00 ± 0.00 0.17 ± 0.58 0.00 ± 0.00 N 1.67 ± 0.78 # 2.75 ± 0.75 # 1.58 ± 0.51 # P 0.67 ± 0.65 #* 1.92 ± 0.79 #* 0.42 ± 0.51 #* L 0.33 ± 0.49 #* 1.58 ± 0.79 #* 0.42 ± 0.51 #* M 0.42 ±0.51 #* 1.50 ± 0.67 #* 0.50 ± 0.52 #* H 0.67 ± 0.49 #* 1.83 ± 0.58 #* 0.67 ± 0.49 #* Values are presented as the mean ± SD. 1 C: control group; N: negative control group; P: positive control group; L: low-dose group; M: medium-dose group; H: high-dose group. # p<0.05, significant difference compared with control group. * p<0.05, significant difference compared with negative group. C: 正常控制組 N: 負控制組 P: 正控制組 L: 低劑量組 M: 中劑量組 H: 高劑量組
圖一 肝組織 HE 染色, 評估肝脂質變性 發炎及肝細胞壞死程度 C: 正常控制組 N: 負控制組 P: 正控制組 L: 低劑量組 M: 中劑量組 H: 高劑量組 C L N M P H
圖二 肝組織 Masson stain, 評估肝纖維化程度 C: 正常控制組 N: 負控制組 P: 正控制組 L: 低劑量組 M: 中劑量組 H: 高劑量組 C L N M P H