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1 理 類 CN9626 行 96 年 年 參 行 97 年

2 行 離 Lactic acid bacteria 金 Staphylococcus aureus 行 離 159 API 50 CHL 行 離 159 不 度 了 行 H 2 O 2 1 Lactobacillus plantarum 了 識 益 益 來 不 利 來 益 切 了 流 Joerger 2003 Lactic acid bacteria, LAB 蘭 利 糖類 類 來 理 羅 Reuterin Bacteriocins 不 狀 易 降 不 不良 飼料 Cotter et al Bacteriocins 殺 飼料 Nisin 了拓 北 量 離 利 類 行 2

3 料 料 1. 離 料來 良 北 參 Lactococcus lactis subsp. lactis ATCC Nisin 2.2 Escherichia coli ATCC Salmonella typhi BCRC Staphylococcus aureus FR Bacillus cereus ATCC Listeria monocytogenes BCRC Saccharomyces cerevisiae strain K 來 MRS 離 0.5% CaCO 3 不 CaCO 3 PY PYG 理 3.2 參 Brain heart infusion agar 3.3 LB Potato dextrose broth 1. 離 10 不 類 行 1 ml 冷 45~50 MRS 0.5% CaCO ~3 d 狀 異 落 MRS 復 落 MRS 4 2. 離 落 行 蘭 蘭 落 4 不 3. (1) 3~5 10 ml MRS h 0.5 ml 50 ml 3

4 MRS h 4 10,000 rpm 離 10 min (2) 量 Staphylococcus aureus 50 ml rpm 2% 冷 45~50 數 列 10 8 CFU/mL 0.1 ml (3) 6 mm x 10 mm 200 µl ph h h 量 參 落 MRS 24 h 4. 理 (1) ph 2.0 離 (2)H 2 O 2 ph 2.0 離 ph 5.0 catalase 200µl (3)pepsin ph 2.0 離 pepsin 200µl 理 利 BioMerieux API 50 行 APILAB Plus 讀 BioMerieux, S.A., Marcy I'Etoile, France 行 5.2 利 Lane S rdna primers 27F/1492R 行 16S rdna 列 6. Yang et al 行 Lactobacillus plantarum MRS broth 理 1N NOH ph ,000 rpm 4 離 M ph M NaCl 1N HCl ph 離 4

5 4 7. SDS ( 0.1 SDS bromophenol blue 0.05 M Tris-HCl buffer, ph 6.8) 冷 10 µl 12.5 % 行 SDS-PAGE 論 1. 利 行 0.5 CaCO 3 MRS 來 CaCO 3 狀 異 落 利 API 50CHL 行 落 行 不 49 利 APILAB Plus 讀 (BioMerieux, S.A., Marcy I'Etoile, France) 行 行 金 Staphylococcus aureus FR 不 ( ) Lactobacillus lactis BCRC Nisin 行 H 2 O 2 bacteriocins pepsin 13 力 API 50 行 Lactobacillus plantarum primer 27F/1492R 行 16S rdna 列 16S rdna 列 13 Lactobacillus plantarum 99 % 4. 殺 硫 離 來 行 降 來 精 來 率 行硫 離 來 行 5

6 令 不 來 來 行 率 不 行 pediocin AcH Carolissen-Mackay et al SDS-PAGE 量 不 降 5. 行 SDS-PAGE 切 行 SDS-PAGE 見 參 Carolissen-Mackay V, Arendse G, Hastings JW (1997) Purification of bacteriocins of lactic acid bacteria Problema and pointers. Int. J. Food Microbiol. 34: Cotter PD, Hill C, Ross RP (2005) Bacteriocins: developing innate immunity for food. Nat. Rev. Microbiol. 3: Joerger RD (2003) Alternatives to antibiotics: bacteriocins, antimicrobial peptides and bacteriophages. Poult. Sci. 82: Lane DJ (1991) 16S/23S rrna sequencing. In Nucleic Acid Techniques in Bacterial Systematics, pp Edited by E. Stackebrandt & M. Goodfellow. Chichester: Wiley. Yang R, Johnson MC, Ray B (1992) Novel method to extract large amounts of bacteriocins from lactic acid bacteria. Appl. Environ. Microbiol. 58:

7 7

8 16S rdna 8

9 SDS-PAGE 9

10 10

11 Specific Total protein Total activity activity (mg) (AU) (AU/mg) Recovery (%)