TM CommaX Blood Genomic DNA Kit 血液基因组 DNA 提取试剂盒 ( 离心柱型 ) 本说明书 (1.0 版 ) 适用于货号为 MNP002-1 MNP002-2 的产品 所有的技术文献均可以从本公司网站 www.biocomma.cn 得到 请访问本公司网站以确保您所使用的技术手册为最新版本 版本号 :BP024-1 www.biocomma.com
血液基因组 DNA 提取试剂盒 ( 离心柱型 ) 产品概述 本试剂盒采用酶裂解法裂解血液样本, 适用于从新鲜 加抗凝血剂或冷冻的血液样本中提取基因组 DNA 离心吸附柱采用的硅基质材料为本公司特有新型材料, 可特异性 高效 专一吸附 DNA, 可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物 提取的基因组 DNA 片段大, 纯度高, 质量稳定可靠 使用本试剂盒回收的 D N A 可适用于各种常规操作, 包括酶切 P C R 文库构建 Southern 杂交等实验 产品特点 提取的基因组 DNA 含量可高达 40 μg 简单 快速 无毒,40 min 内即可获得超纯的基因组 DNA 获得的 DNA 纯度高, 可直接用于 PCR 酶切 杂交等分子生物学实验 提取得率 材料 哺乳动物全血 禽类 两栖类全血 提取量 100 μl -1 ml 5 μl-20 μl DNA 得量 30 μg 40 μg 注意事项请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项 1 样品应避免反复冻融, 否则会导致提取的 DNA 片段较小 提取量下降 2 若缓冲液 GLS 中有沉淀, 可在 37 水浴中重新溶解, 摇匀后使用 3 所有离心步骤均为使用台式离心机, 室温下离心 1 本产品仅供科研使用 请勿用于医药 临床治疗 食品及化妆品等用途
试剂盒组成 产品组成 MNP002-1 (50 preps) MNP002-2 (200 preps) Buffer CLS Buffer SS Buffer GLS Buffer PSC Buffer WSC Buffer TE Proteinase K 吸附柱 C2 收集管 (2 ml) 离心管 (1.5 ml) 60 ml 30 ml 1 ml 50 个 50 个 50 个 250 ml 50 ml 50 ml 120 ml 50 ml 60 ml 4X1 ml 200 个 200 个 200 个 选配试剂 RNase A(50 mg/ml) 储存条件 该试剂盒置于室温 (15-25 ) 干燥条件下, 可保存 12 个月, 更长时间的保存可置于 2-8 2-8 保存条件下, 若溶液产生沉淀, 使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间, 必要 时可在 37 水浴中预热 10 min, 以溶解沉淀 本产品仅供科研使用 请勿用于医药 临床治疗 食品及化妆品等用途 2
操作步骤 使用前先在漂洗液 PW 中加入无水乙醇, 加入体积请参照瓶上的标签 1. 血液样本的处理 :( 本产品适用于处理 5 μl-1 ml 血液样品 ) 1 若是哺乳类血液样本, 当样本体积小于或等于 250 μl 时, 加入对应量 Buffer SS 补足到 250 μl 再进行下一步实验 ; 2 哺乳类血液样本体积超过 250 μl 时, 需要进行去除红细胞处理, 加入 1-2.5 倍样本体积的 Buffer CLS, 充分混匀后于 12,000 rpm (~13,000 g ) 离心 1 min, 除去上清, 留下有核细胞沉淀 ( 如果裂解不彻底, 可重复裂解一次 ), 然后加入 250 μl Buffer SS, 振荡至彻底混匀后再进行下一步实验 ; 3 若是禽类 两栖类等样品, 由于红细胞为有核细胞, 处理量约 10-20 μl, 然后加入 Buffer SS 补足 250 μl 后进行下一步实验 注意 : 如果需要去除 RNA, 可加入 4 μl RNase A(50 mg/ml) 溶液 ( 客户自备 ), 振荡 10-20 sec, 室温放置 5 min 2. 加入 20 μl Proteinase K 溶液, 混匀 3. 加 250 μl Buffer GLS, 充分颠倒混匀, 于 58 孵育 10-15 min, 其间颠倒混匀数次, 溶液应变清亮 ( 如溶液未彻底变清亮, 请延长裂解时间至溶液清亮为止 ) 注意 : 加入 Buffer GLS 时可能会产生白色沉淀, 一般 37 放置时会消失, 不会影响后续实验 如溶液未变清亮, 说明细胞裂解不彻底, 可能导致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 不纯 当血液体积 250 μl 且没有采用红细胞裂解处理, 或是样本储存条件不佳, 水浴后颜色可能为深褐色, 注意溶液中没有团块等沉淀 4. 加 200 μl 无水乙醇, 充分颠倒混匀, 此时可能会出现絮状沉淀 A. 离心法 5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱 C 2 中 ( 吸附柱 C 2 放入收集管中 ), 12,000 rpm (~13,000 g ) 离心 1 min, 倒掉收集管中的废液, 将吸附柱 C2 放入收集管中 6. 向吸附柱 C2 中加入 500 μl Buffer PSC,12,000 rpm (~13,000 g ) 离心 30 sec, 倒掉收 集管中的废液, 将吸附柱 C2 放入收集管中 3 本产品仅供科研使用 请勿用于医药 临床治疗 食品及化妆品等用途
7. 向吸附柱 C2 中加入 600 μl Buffer WSC( 使用前请先检查是否已加入无水乙醇 ), 12,000 rpm (~13,000 g ) 离心 30 sec, 倒掉收集管中的废液, 将吸附柱 C2 放入收集管中 ; 重复此操作步骤一次 8. 12,000 rpm (~13,000 g) 离心 2 min, 倒掉废液 将吸附柱 C2 置于室温放置 5-10 分钟, 以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液 注意 : 这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除, 漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应 ( 酶切 PCR 等 ) 实验 9. 将吸附柱 C2 转入新的 1.5 ml 离心管中, 向吸附膜中间位置悬空滴加 50-200 μl 洗脱 Buffer TE, 室温放置 2-5 min,12,000 rpm (~13,000 g ) 离心 2 min, 将溶液收集到离心管中 注意 : 洗脱缓冲液体积不应少于 50 μl, 否则影响回收效率 另外为提高得率, 可将离心得到的溶液再加入吸附柱 C2 中, 室温放置 2 min,12,000 rpm (~13,000 g ) 离心 2 min 洗脱液的 ph 对于洗脱效率有很大影响 若用 ddh2o 做洗脱液应保证其 ph 值在 7.0-8.5 范围内, 且 DNA 产物应保存在 -20, 以防 DNA 降解 B. 负压法 5. 将试剂盒中的吸附柱 C2 插到负压装置的接口上 将上一步所得溶液和絮状沉淀转移到吸附 柱中, 调节负压装置, 吸尽吸附柱中的溶液 6. 加入 500 μl 去蛋白液 Buffer PSC, 调节负压装置, 抽尽吸附柱中的溶液 7. 加入 700 μl Buffer WSC ( 含 75% 无水乙醇 ) 调节负压装置, 抽尽吸附柱中的溶液 重复 此操作步骤一次 8. 将吸附柱放入收集管中,12,000 rpm (~13,000 g ) 离心 2 min, 去除残余漂洗液 9. 将吸附柱放于一个新的 1.5 ml 离心管中, 室温放置 5-10 min, 尽量除去膜上的乙醇 注意 :Buffer WSC 漂洗后把吸附柱管盖打开放置数分钟以除去乙醇, 否则多余的乙醇会影响后续的 ( 酶切 PCR 等 ) 实验 10. 在吸附膜中间部位加 60-100 μl 的 Buffer TE 或者 ddh2o, 室温放置 2 min,12,000 rpm (~13,000 g ) 离心 2 min, 将溶液收集到离心管中 注意 : 可将洗脱缓冲液置于 65-70 水浴中预热, 可提高洗脱效率 ; 另外洗脱液的 ph 值对洗脱效率的影响较大, 应控制洗脱液 ph 值在 7.5-8.5 范围内 本产品仅供科研使用 请勿用于医药 临床治疗 食品及化妆品等用途 4
基因组 DNA 浓度及纯度检测 得到的基因组 DNA 片段的完整性与样品保存时间 操作过程中的剪切力等因素有关 得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度 DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰,OD260 值为 1 相当于大约 50 μg/ml 双链 DNA 40 μg/ml 单 链 DNA OD260/ OD280 比值应为 1.8-2.0 如果洗脱时不使用洗脱缓冲液, 而使用 ddh2o, 比值会偏 低, 因为 ph 值和离子存在会影响光吸收值, 但并不表示纯度低 本产品仅供科研使用 请勿用于医药 临床治疗 食品及化妆品等用途 5