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伍虞
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1 第 10 卷第 7 期食品安全质量检测学报 Vol. 10 No 年 4 月 Journal of Food Safety and Quality Apr., 罗 * 俊, 王晓冲, 黎舜华, 王娜娜, 应国红 ( 深圳市药品检验研究院, 深圳 ) 摘要 : 目的确认盲样考核样品中分离到的罕见可疑沙门氏菌方法依据 GB 食品安全国家标准食品微生物检验沙门氏菌检验将可疑沙门氏菌通过分离纯化生化鉴定 16S 测序 Ribo-printer 基因指纹鉴定 MALDI Biotyper 质谱鉴定以及血清型分型等方法对其进行确认结果全自动细菌鉴定 / 药敏系统对该分离菌的鉴定结果为大肠埃希菌, 而 16S 测序结果为沙门氏菌属, 基因指纹鉴定结果为沙门氏亚利桑那亚种, 质谱鉴定结果为沙门氏菌双相亚利桑那亚种, 且血清型分型也表明该菌应为 IIIb 型, 综合判断该检出菌应为沙门氏菌双相亚利桑那亚种结论采用基于不同原理的多种鉴定手段联用的鉴定方法更能确保实验结果的可靠有效关键词 : 沙门氏菌双相亚利桑那亚种 ; 鉴定 ; 盲样考核 Identification and analysis of the uncommonly suspected Salmonella LUO Jun, WANG Xiao-Chong, LI Shun Hua, WANG Na-Na, YING Guo-Hong * (Shenzhen Institute for Drug Control, Shenzhen , China) ABSTRACT: Objective To confirm of the uncommonly suspected Salmonella isolated from the unknown sample. Methods Isolation and purification of suspected Salmonella were conducted according to the GB National food safety standard-food microbiological examination-salmonella, and it was confirmed by biochemical identification, 16S sequencing, Ribo-printer automatic microbial gene fingerprint identification system, MALDI Biotyper microbial identification time of flight mass spectrometry and serotyping. Results The identification result of automatic bacterial identification/drug sensitivity system was Escherichia coli. The identification result of 16S sequencing was Salmonella. The identification result of gene fingerprint identification system was Salmonella arizonae/iiib. The identification result of was Salmonella enterica subsp. diarizonae, and serotyping also indicated that the type was IIIb, so the detected bacteria should be Salmonella enterica subsp. diarizonae. Conclusion The combination of multiple identification methods can ensure the reliability of the experimental results. KEY WORDS: Salmonella enterica subsp. diarizonae; identification; assessment of unknown sample 1 引言沙门氏菌是引起细菌性食物中毒的重要病原菌之一, 广泛存在于自然界, 极易污染食物水源等, 对人类健康造成极大威胁据统计由沙门氏菌引起的食物中毒事件在世界各国的细菌性食物中毒种类中常列榜首 [1-3], 因此, 沙门氏菌检测在食品安全检验中具有重要意义 [4-6], 并在我国食品安全国家标准中被列为常规的检验项目 [7] 沙门氏菌双相亚利桑那亚种 (Salmonella enterica subsp. diarizonae) 为肠道沙门菌 Ⅲb 亚种, 最早是在冷血 * 通讯作者 : 应国红, 主任药师, 主要研究方向为药品食品化妆品微生物学检验 @qq.com *Corresponding author: YING Guo-Hong, Chief Pharmacist, Shenzhen Institute for Drug Control, Shenzhen , China @qq.com

2 1872 食品安全质量检测学报第 10 卷动物中发现的, 广泛存在于禽类家养哺乳类动物中, 偶可感染人类, 引起胃肠炎, 但国内外均少有报道曲梅等曾对 5 株来自散发腹泻患者粪便样本的可疑双相亚利桑那亚种利用 VITEK 实时荧光定量 PCR 血清凝集以及 MLST 分型等方法对该菌进行了分离鉴定 [8,9] 王志伟刘杰等也曾用 VITEK 检出过沙门氏菌双相亚利桑那亚种 [10,11] 但目前利用 Phonenix100 全自动细菌鉴定 / 药敏系统对该菌进行生化鉴定的研究较少国家食品药品监督管理总局为提升国家食品安全风险监测的微生物检测能力, 于 2018 年 8 月开展国家食品安全抽检监测承检机构盲样考核, 本实验室参加了其中的沙门氏菌项目, 并从中分离到 1 株可疑沙门氏菌现结合沙门氏菌检测工作中的相关经验, 分析本次能力验证实验工作中出现的问题及解决方案, 以期为后续相关检验工作提供思路 2 材料和方法 2.1 样品来源考核样品来自中国食品药品检定研究院, 下文简称为 1# 样品沙门氏菌阳性对照品 ( 鼠伤寒沙门氏菌 ATCC14028) 来自于本实验室保藏 2.2 材料和仪器缓冲蛋白胨水 (buffered peptone water, BPW) 四硫磺酸钠煌绿 (tatrathionate broth, TTB) 增菌液亚硒酸盐胱氨酸 (selenite cystine, SC) 增菌液亚硫酸铋 (bismuth sulfite, BS) 琼脂木糖赖氨酸脱氧胆盐 (xylose lysinedesoxycholate, XLD) 琼脂沙门氏菌显色培养基三糖铁 (triple sugar iron, TSI) 琼脂沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒 TSA 琼脂 Swarm 琼脂 ( 北京陆桥技术有限责任公司 ); 沙门氏菌鉴定用多价血清 ( 泰国 S&A 公司 ); 沙门氏菌属诊断血清 ( 宁波天润生物药业有限公司 ) DPH-9272 电热恒温培养箱 ( 上海一恒科学有限公司 ); 1287 型生物安全柜 ( 美国热电公司 ); Axio Lab.A1 显微镜 ( 德国卡尔蔡司公司 ); Phonenix100 全自动细菌鉴定 / 药敏系统 ( 美国 BD 公司 ); Ribo printer 全自动微生物基因指纹鉴定系统 ; MALDI Biotyper 微生物鉴定飞行时间质谱 ( 美国 BD 公司 ) 2.3 实验方法样品前处理按照组织方要求的作业指导书进行, 后续实验操作依据 GB 食品安全国家标准食品微生物检验沙门氏菌检验 [8] 进行样品处理与前增菌将 90 ml 已灭菌的 BPW 预热至 45, 在生物安全柜中取其中 20 ml BPW 加入检样瓶内, 待巧克力样品融化后加入无菌均质袋内取 20 ml 灭菌 BPW 清洗检样瓶, 将洗液加入均质袋, 再取 20 ml 灭菌 BPW 重复清洗 1 次, 最后向均质袋加入 30 ml 灭菌 BPW, 充分均质混匀, (36±1) 增菌培养 14 h 增菌与分离培养取前增菌溶液各 1 ml 转种于 10 ml 四硫磺酸钠煌绿 (TTB) 增菌液和 10 ml 亚硒酸盐胱氨酸 (SC) 增菌液中, 分别于 (42±1) (TTB) 和 (36±1) (SC) 培养 24 h; 取上述 TTB 及 SC 增菌液各 1 环, 分别划线接种于亚硫酸铋 (BS) 琼脂平板沙门氏菌显色培养基和 XLD 琼脂平板, 于 (36±1) 培养 24 h(xld 平板和沙门氏菌显色培养基平板 ) 和 48 h(bs 平板 ), 培养基结束后观察平板上的菌落特征并同步做阳性对照疑似菌鉴定 (1) 生化鉴定从选择性平板上分别挑取 2 个以上特征菌落, 划线接种到营养琼脂平板上, 挑取纯化后的菌落按照生化鉴定试剂盒使用说明书进行生化鉴定实验操作, 经初筛确认为可疑沙门氏菌的菌株, 做革兰氏染色镜检, 确定其为革兰染色阴性杆菌后, 采用 Phonenix100 BD 全自动细菌鉴定 / 药敏系统 ( 下文简称 Phonenix100) 上机确认 (2) 16s 测序将上述疑似菌的纯培养物进行 16S rdna 基因 PCR 及测序, 16S rdna 通用引物序列为 27f (5'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3') 和 1492r(5'-GGT TACCTT GTT ACG ACT T-3') PCR 产物送至广州艾基生物技术有限公司进行测序, 测序结果提交美国国立生物技术信息中心进行 blast 比对, 即可分析得出细菌最可能所属的菌种 (3) Ribo printer 全自动微生物基因指纹鉴定系统用接种棒将上述疑似菌纯培养物转移至加有 200 μl 缓冲液的离心管中, 充分振荡混匀制得菌悬液从离心管中取 30 μl 菌悬液至载样架小管中, 再将载样架插入热处理工作站中, 25 min 后, 依次在载样架小管中加入裂解液 A 和 B 样品处理完毕后进 Ribo printer 全自动微生物基因指纹鉴定系统 [12] ( 下文简称 Ribo printer) 操作即可 (4) MALDI Biotyper 微生物鉴定飞行时间质谱用无菌接种环挑取适量上述疑似菌纯培养物涂在质谱仪样品检测板上, 迅速点样 0.5 μl 的甲酸覆盖加样的位置, 随后再点样 1 μl α- 氰基 -4- 羟基肉桂酸溶液覆盖室温放置, 待基质液干燥后, 将检测板放入质谱仪检测将质控菌株大肠埃希菌 ATCC8739 作为校准靶点先通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (matrix-assisted laser desorption/ ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS) 采集多肽和蛋白质的谱峰, 再按质量大小排序形成特征的峰谱, 即指纹图, 通过每种细菌独特的

3 第 7 期罗俊, 等 : 1 株罕见的可疑沙门氏菌鉴定结果的确认与分析 1873 蛋白组成来鉴定细菌, 应用于不同菌株的鉴定与区分以线性正性模式用最大频率 (20~200 Hz) 采集相对分子质量 2~20 kda 的图谱, 用 Biotyper 软件对所采集的谱图进行分析即可 (5) 血清学鉴定及分型将生化鉴定结果为沙门氏菌的菌株进行血清学鉴定及分型 1 检查培养物有无自凝性在洁净的玻片上滴加 1 滴生理盐水, 取待鉴定培养物于生理盐水中, 混合均匀, 将玻片轻轻摇动 30~60 s, 在黑色背景下观察反应, 无自凝现象 2 多价菌体抗原 (O) 鉴定及分型在玻片上划分 2 个区域, 其中 1 个滴 1 滴多价菌体 (O) 抗血清, 另 1 个区域滴 1 滴生理盐水, 再分别挑取 1 环 TSA 纯培养物与其混合, 用无菌接种环将 2 个区域内的菌苔研成乳状液将玻片倾斜摇动混合 1 min, 以黑暗背景观察凝集现象 ; O 多价凝集筛选后再用同样的方法对相应的因子进行 O 血清的分型, 直至最后得出阳性菌株对应的 O 抗原 3 多价菌体抗原 (H) 鉴定及分型在玻片上划分 2 个区域, 其中 1 个滴 1 滴多价菌体 (H) 抗血清, 另 1 个区域滴 1 滴生理盐水, 再分别挑取 1 环 TSA 纯培养物与其混合, 用无菌接种环将 2 个区域内的菌苔研成乳状液将玻片倾斜摇动混合 1 min, 以黑暗背景观察凝集现象 ; 查阅常见沙门氏菌抗原表, 针对上述 O 抗原结果, 有目标性的进行 H 抗原检测具体方法是 : 在无菌平板中倒入 Swarm 琼脂, 待凝固后将菌株点种在平板的中央, 于 37 培养 24 h, 取扩散生长后的菌落边缘部位用 O 抗原检测的方法进行 H 抗原的凝集实验 3 结果与分析 3.1 增菌培养与平板分离 1# 样品 BPW 增菌液 TTB 增菌液呈均匀的巧克力色混浊液, SC 增菌液呈现均匀的砖红色混浊液 1# 样品经 2 次增菌后划线到 3 种选择性平板上进行分离培养, 均发现可疑或典型菌落 ( 见表 1) 表 1 可疑沙门氏菌在不同培养基上的菌落特征 Table 1 Colony characteristics of suspected Salmonella on different media 样品编号 XLD 沙门氏菌显色培养基 BS 1# 圆形菌落, 带黑色中心, 周边半透明, 扁平蓝绿色圆形菌落, 表面湿润黑色的圆形菌落, 有金属光泽边缘整齐表面湿润阳性对照黑色的圆形菌落, 菌落周边无色或粉色紫红色的圆形菌落, 表面湿润黑色的圆形菌落, 有金属光泽边缘整齐表面湿润表 2 可疑沙门氏菌的生化反应结果 Table 2 Biochemical results of suspected Salmonella 实验项目 1# 样品分离菌鼠伤寒沙门氏菌大肠埃希菌斜面 K K A 三糖铁琼脂底层 A A A 产气产硫化氢 + 赖氨酸脱羧酶氰化钾靛基质 + 尿素甘露醇山梨醇 ONPG + Phonenix100 BD 全自动细菌鉴定 / 药敏系统大肠埃希菌 Escherichia coli (cofidence=99%) 沙门氏菌某些种 Salmonella species (cofidence=99%) 大肠埃希菌 Escherichia coli (cofidence=99%) 注 : K 为产碱 ; A 为产酸 ; + 为阳性 ; 为阴性

4 1874 食品安全质量检测学报第 10 卷 3.2 生化鉴定针对上述选择性平板上出现可疑或典型菌落的样品进行生化鉴定实验, 挑取 TSA 平板上纯化后的菌落按照生化鉴定试剂盒使用说明书进行操作, 实验结果表明 1# 样品中分离得到的菌株为可疑沙门氏菌 ; 但经全自动细菌鉴定 / 药敏系统确认结果却为大肠埃希菌为确认上机结果的可靠性, 用生化鉴定试剂盒全自动细菌鉴定 / 药敏系统分别对大肠埃希菌及鼠伤寒沙门氏菌标准菌株进行实验结果见表 2 从表 2 中可知, 1# 样品分离菌大肠埃希菌和鼠伤寒沙门氏菌在生化反应上, 差别很明显, 大肠埃希菌斜面不产碱 ONPG 为阴性及靛基质阳性, 而 1# 样品分离菌斜面产碱 ONPG 阳性靛基质阴性, 两者经全自动细菌鉴定 / 药敏系统上机确认却均为大肠埃希菌 ; 鼠伤寒沙门氏菌经上机确认为沙门氏菌某些种由此可见, 全自动细菌鉴定 / 药敏系统对 2 株标准菌株的鉴定结果基本可信, 而 1# 样品分离菌的鉴定结果值得探究 3.3 其他鉴定方法的验证为考察全自动细菌鉴定 / 药敏系统结果可靠性, 采用 16S 测序 Ribo printer 以及 MALDI Biotyper 等鉴定手段, 对 1# 样品中分离到的可疑菌进行鉴定以上 3 种辅助鉴定手段原理各不一样, 分别从 DNA RNA 以及蛋白质水平进行鉴定, 取 1# 样品分离菌及鼠伤寒沙门氏菌 ( 阳性对照 ) 的 TSA 纯培养物采用上述 3 种方法分别测试, 结果见表 3, 由此可见, 1# 样品分离菌 3 种鉴定手段结果均指向沙门氏菌, 16S 测序只能鉴定到属的水平, Ribo printer( 图 1) 和 MALDI Biotyper( 图 2) 鉴定结果均能匹配到种的水平, 但两者鉴定结果略有差别, 仪器给出的相似度值或分值如下 : 与 Ribo printer 菌库中匹配度最高的菌株相似度值为 0.86( 该设备相似度 0.85 为可信结果 ), 而 MALDI Biotyper 分值为 2.396( 该设备分值以上为可信结果, 2.300~3.000 为高度可信结果, 满分 3.000), 由此可见 MALDI Biotyper 的鉴定结果更可信, 而查询 Ribo printer 菌库得知, 本次鉴定结果相似度较低的原因可能是由于该设备菌库中没有与目标微生物同源性较高的菌株, 至此可以基本判定全自动细菌鉴定 / 药敏系统得到大肠埃希菌的结果不可信 3.4 血清学鉴定及分型依法对 1# 样品分离菌株进行血清学鉴定, 结果表明 1# 样品分离菌与 O Poly.A-S OMC OMD OME OMF 不凝集, 与 OMG 及 Poly.H 凝集, 生理盐水对照未发生凝集反应表 3 基于不同鉴定原理的可疑沙门氏菌鉴定结果 Table 3 Identification results of suspected Salmonella based on different identification principles 鉴定项目 1# 样品分离菌鼠伤寒沙门氏菌 ( 阳性对照 ) 16S 测序沙门氏菌属 Salmonella 沙门氏菌属 Salmonella Ribo printer 全自动微生物基因指纹鉴定系统 MALDI Biotyper 微生物鉴定飞行时间质谱沙门氏亚利桑那亚种 Salmonella arizonae/iiib 沙门氏菌双相亚利桑那亚种 Salmonella enterica subsp. diarizonae 鼠伤寒沙门氏菌 Salmonella typhimurium 鼠伤寒沙门氏菌 Salmonella typhimurium Fig.1 图 1 Ribo printer 全自动微生物基因指纹鉴定结果 Results of Ribo printer automatic microbial gene fingerprint identification system Fig.2 图 2 MALDI Biotyper 微生物鉴定飞行时间质谱鉴定结果 Results of MALDI Biotyper microbial identification time of flight mass spectrometry

5 第 7 期罗俊, 等 : 1 株罕见的可疑沙门氏菌鉴定结果的确认与分析 1875 根据血清学鉴定结果进一步对该菌株进行血清学分型用 OMG 多价血清对应的单因子逐一进行凝集反应实验, 结果与 O60 发生凝集, 其余不凝集, 初步判定为 60 群, 查询 GB 的附录 B 中常见沙门氏菌抗原表得知 1# 样品分离菌不在常见沙门氏菌抗原表中根据已知 O 群结果, 查阅沙门菌属血清型诊断 [13], 缩小 H 多价血清范围, 发现 H 多价 3 凝集, 再分别利用单因子逐一验证, 结果发现 Hr 凝集, 其余均不凝集, 故确定 H 抗原第一相为 Hr, 查阅沙门菌属血清型诊断得知 H 抗原第 2 相应为 H 多价 2 血清对应的其中 1 种或多种单因子血清 ; 于是将该分离菌做位相变异实验, 在蔓延生长的菌苔边缘取菌检查, 用 H 多价 2 对应的单因子血清逐一验证, 发现 He, n, x 凝集, 其余均不凝集综上该分离菌株的血清型应为 : O 抗原为 60; H 抗原第 1 相为 r, 第 2 相为 e, n, x, 如表 2 表 4 可疑沙门氏菌的血清型鉴定和分型结果 Table 4 Serotype classification and identification results of suspected Salmonella 菌株编号 1# 样品分离菌对照实验血清型鉴定多价抗原 (0) OM G 多价抗原 (H) 注 : 表示无凝集现象 4 结论与讨论 O 抗原血清型分型第 1 相 H 抗原第 2 相 VI 抗原 Poly.H 60 r e, n, x 无论是基于何种原理的鉴定手段, 都有其自身局限性, 各有优缺点本文中的 16S 测序, 因 16S rrna 基因高变区的序列无法告诉我们特征微生物的种属信息, 只有保守区的差异才对鉴定有一些价值, 然而由于获知的信息比较有限, 所以 16S 测序只能鉴定到种属水平, 无法达到菌株水平的鉴定分析, 但该方法普及率高, 商业化运作较为成熟, 实验室不需要自行拥有相关设备, 将分离好的可疑菌纯培养物外送给第三方实验室即可, 单株菌的检测成本非常低当实验室做定性检验, 且实验室鉴定手段有限时, 16S 测序不失为一种选择, 特别是分离得到的可疑菌落其生化鉴定结果又不可信时, 对确认检验结果十分必要 Ribo printer 是基于核糖体分型技术, 使用常用限制性内切酶消化目标菌 DNA 产生基因片段, 该基因片段经过电泳分离后转移到硝酸纤维素膜上, 与其 DNA 探针杂交, 该探针包含编码高度保守 16S RNA 和 23S RNA 的 DNA 片段及间隔序列, 杂交后化学发光产生信号由相机捕获传至工作站处理, 产生条形码状条带图像 (Ribo printer) 模式即 rrna 基因指纹图, 并与数据库比较从而达到细菌鉴定分型的目的该方法适用于分析菌株间, 尤其是相似度同源性较高菌株间的细微差异, 因此被广泛应用于制药企业的微生物污染调查中但由于其菌种库的局限性, 当遇到像文中的特定微生物时, 并不能给出准确的结果, 且耗材成本非常高这时就需要其他的鉴定手段辅助, 如文中的 MALDI Biotyper, 该设备拥有丰富的菌种数据库, 鉴定快速, 检验耗材成本低廉一般在定性检验时, 往往会挑选大量的可疑菌进行确认, 如果所有的可疑菌株均通过生化鉴定确认, 工作量会非常大, 而且非常耗时, 甚至影响检验时限, 上述特点使其在做高通量菌株筛选时优势明显但该方法设备购置成本较高, 仪器维护成本较高, 对实验室环境控制较为严格而生化鉴定结果一直以来都是作为国标中的金标准, 是报告中必须的数据支撑因此全自动细菌鉴定 / 药敏系统的鉴定结果也很关键国标 GB 规定生化鉴定结果为沙门氏菌, 且血清学鉴定凝集时, 才可判定检出沙门氏菌, 两者缺一不可但因不同的检测机构血型学分型能力有差异, 对检验者的能力和经验也有一定要求, 所以血清型分型一直作为选做项目本文中 1# 样品分离菌如果按照国标去检验, 会发现其生化反应与血清型分型结果均在国标中找不到依据, 但如果依赖全自动的生化鉴定设备, 也会有报错的风险如本文所述, 1# 样品分离菌采用全自动细菌鉴定 / 药敏系统进行生化鉴定, 结果显示为大肠埃希菌, 若不对该结果进一步确认, 则很可能造成假阴性结果最后笔者通过对分离菌进行 16S 测序 Ribo printer MALDI Biotyper 以及血清学分型等多种手段联合验证, 确认了 Phonenix100 的生化鉴定结果不可信, 该分离菌应为沙门氏菌亚利桑那亚种由此可见, 为了得到准确的鉴定结果, 基于不同原理的多种鉴定手段联用才更能确保实验结果的可靠有效分析生化鉴定系统报错的原因, 无外乎设备硬件软件数据库以及样本生物活性等几方面原因, 首先笔者查询到 Phonenix100 的菌种库包含了沙门氏菌亚利桑那双相亚种, 说明在数据库匹配性上应该不存在问题, 而针对样本生物活性的问题, 笔者将文中可疑菌经多次传代, 反复上机, 结果均为大肠埃希菌, 同步用其他手段鉴定得到的结果也均指向沙门氏菌, 说明样本生物活性也应能满足要求, 再考虑设备硬件问题, 该设备每年均正常维保, 各种易耗损配件也均在有效期内, 但该设备服役年限将近 10 年, 是否存在其他未检测到的原因尚不明确另外 Phonenix100 针对沙门氏菌亚利桑那双相亚种检测灵敏度的问题也有待进一步考证最后, 微生物鉴定手段多种多样, 除本文中提到的几

1876 食品安全质量检测学报第 10 卷种方法之外, 还有利用酶联免疫反应的检测方法, 如免疫磁性分离技术酶联免疫吸附实验 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) [14] 斑点免疫金渗滤法 [15] 荧光免疫分析法 (fluorescence immunoassay, FIA) [16] 和全自动荧光免疫分析仪 (BioMerieux

(loop-mediated isothermalamplification, LAMP) [19] 等 ; 其他还有电阻抗技术生物传感器技术和微量热量测定法等 [20] 这些设备在不同的领域都有其独特的优势, 多种技术的联用还有待进一步研究参考文献 [1] Mcsorley SJ.

6 1876 食品安全质量检测学报第 10 卷种方法之外, 还有利用酶联免疫反应的检测方法, 如免疫磁性分离技术酶联免疫吸附实验 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) [14] 斑点免疫金渗滤法 [15] 荧光免疫分析法 (fluorescence immunoassay, FIA) [16] 和全自动荧光免疫分析仪 (BioMerieux mini VIDAS automated immunoassay analyzer, VIDAS) [17] ; 利用分子生物学技术的方法, 如聚合酶链式反应技术 (polymerase chain reaction, PCR) 扩增片段长度多态性技术(restriction fragment length polymorphism, AFLP) [18] 环介导等温扩增技术 (loop-mediated isothermalamplification, LAMP) [19] 等 ; 其他还有电阻抗技术生物传感器技术和微量热量测定法等 [20] 这些设备在不同的领域都有其独特的优势, 多种技术的联用还有待进一步研究参考文献 [1] Mcsorley SJ. Immunity to intestinal pathogens: Lessons learned from Salmonella [J]. Immunol Rev, 2015, 260(1): [2] Ramírez-Castillo FY, Loera-Muro A, Jacques M, et al. Waterborne pathogens: Detection methods and challenges [J]. Pathog, 2015, 4(2): [3] 江志杰, 王似锦, 高春. 食品中沙门氏菌检出能力验证结果与分析 [J]. 食品安全质量检测学报, 2015, 6(5): Jiang ZJ, Wang SJ, Gao C. Proficiency testing results and analysis of Salmonella detection ability in food [J]. J Food Saf Qual, 2015, 6(5): [4] 张红莉, 欧露真. 能力验证试验中沙门氏菌的分离与鉴定 [J]. 食品安全质量检测学报, 2016, 7(12): Zhang HL, Ou LZ. Isolation and identification of Salmonella in proficiency testing [J]. J Food Saf Qual, 2016, 7(12): [5] 孙晶, 王歆睿, 魏静元, 等. 食品中金黄色葡萄球菌和沙门氏菌检出能力验证结果与分析 [J]. 食品安全质量检测学报, 2017, 8(9): Sun J, Wang QR, Wei JY, et al. Proficiency testing results and analysis of detection ability of Staphylococcus aureus and Salmonella in food [J]. J Food Saf Qual, 2017, 8(9): [6] 高晗, 何娟, 严礼. 3 种沙门氏菌检测方法能力验证 [J]. 食品安全质量检测学报, 2017, 8(2): Gao H, He J, Yan L. Capability verification of three detection methods of Salmonella [J]. J Food Saf Qual, 2017, 8(2): [7] GB 食品安全国家标准食品中致病菌限量 [S]. GB National food safety standard-food microbiological examination: Limit of pathogenic bacteria [S]. [8] GB 食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验 [S]. GB National food safety standard-food microbiological examination-salmonella [S]. [9] 曲梅, 黄瑛, 吕冰, 等. 引起腹泻的肠道沙门氏菌双相亚利桑那亚种病原学鉴定 [J]. 中国预防医学杂志, 2016, 17(6): Qu M, Huang Y, Lu B, et al. Etiological identification of Salmonella enterica subspecies diarizonae isolate [J]. Chin Prev Med, 2016, 17(6): [10] 王志伟, 徐琼, 陈欣钦, 等. 能力验证样品中沙门氏菌的分离与鉴定 [J]. 食品研究与开发, 2016, 37(7): Wang ZW, Xu Q, Chen XQ, et al. Isolation and identification of Salmonella in the proficiency testing sample [J]. Food Res Dev, 2016, 37(7): [11] 刘杰, 黄淑华, 陈磊, 等. 开封市首次检出 2 株亚利桑那沙门菌的鉴定与分析 [J]. 河南预防医学杂志, 2013, 24(4): Liu J, Huang SH, Chen L, et al. Two rare occurring Salmonella arizonae strains detected in Kaifeng city [J]. Henan J Prev Med, 2013, 24(4): [12] Liu JC, Jiang TM, Jiang AC, et al. Rapid bacterial identification with dupont qualicon riboprinter system [J]. Sci Technol Food Ind, 2013, 34(13): [13] 朱超, 许学斌. 沙门菌属血清型诊断 [M]. 上海 : 同济大学出版社, Zhu C, Xu XB. Serological diagnosis of Salmonella-species [M]. Shanghai: Tongji University Press, [14] Alcocer I. Rapid detection of Salmonella Enteritidis in food by ELISA assay [J]. Food Sci Technol, 2003, 23(3): [15] Cao C, Jiao X, Liu H, et al. Rapid detection of O_(9) antigen of Salmonella by dot immuno-gold filtration assay [J]. Chin J Zoon, 2005, 21(3): [16] Croci, Luciana, Palleschi, et al. Evaluation of a classic PCR method and an electrochemical ELISA method coupled with an FIA system for the detection of Salmonella in meat [J]. Rev Méd De Chil, 2003, 116(10): [17] Crowley E, Bird P, Fisher K, et al. Evaluation of VIDAS Salmonella (SLM) easy Salmonella method for the detection of Salmonella in a variety of foods: Collaborative study [J]. J AOAC Int, 2011, 94(6): [18] Vaz CSL, Streck AF, Tramontina T, et al. Use of a modified AFLP protocol to discriminate Salmonella enterica sub sp.enterica serovar Enteritidis isolates [J]. Acta Sci Vet, 2007, 35(1): [19] Kokkinos PA, Ziros PG, Bellou M, et al. Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) for the detection of Salmonella, in food [J]. Food Anal Methods, 2014, 7(2): [20] Bansal N, Drake MA, Piraino P, et al. Suitability of recombinant camel (Camelus dromedarius ) chymosin as a coagulant for Cheddar cheese [J]. Int Dairy J, 2009, 19(9): 作者简介 ( 责任编辑 : 韩晓红 ) 罗俊, 主管药师, 主要研究方向为食品微生物学检验 ljrobby@126.com 应国红, 主任药师, 主要研究方向为药品食品化妆品微生物学检验 @qq.com

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Microsoft Word 王似锦-二校 681 6 2 Vol. 6 No. 2 2015 2 Journal of Food Safety and Quality Feb, 2015 VIDAS 王似锦 *, 高春 ( ( ), 100035) 摘要 : 目的 (VIDAS) 方法 21 BPW BPW, VIDAS, 结果 21, BPW ; BPW 20 VIDAS GB, 95.2% 结论 VIDAS 96 h, VIDAS 48 h VIDAS,,

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