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冽年谢
5 years ago
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1 中华人民共和国国家标准食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素 M 1 和 B 1 的测定 National food safety standard Determination of aflatoxins M 1 and B 1 in foods 发布实施中华人民共和国卫生部发布

2 前言本标准代替 GB/T 食品中黄曲霉毒素 M 1 与 B 1 的测定本标准所代替的历次版本发布情况为 : GB/T GB/T GB/T I

3 食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素 M 1 和 B 1 的测定 1 范围本标准规定了牛乳及其制品奶油及新鲜猪组织 ( 肝肾血及瘦肉 ) 等食品中黄曲霉毒素 M 1 与 B 1 的测定方法本标准适用于牛乳及其制品奶油及新鲜猪组织 ( 肝肾血及瘦肉 ) 等食品中黄曲霉毒素 M 1 与 B 1 的测定 2 原理样品经提取浓缩薄层分离后, 黄曲霉毒素 M 1 与 B 1 在紫外光 ( 波长 365nm) 下产生蓝紫色荧光, 根据其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定含量 3 试剂和材料 3.1 甲醇 : 分析纯 3.2 石油醚 : 分析纯 3.3 三氯甲烷 : 分析纯 3.4 无水硫酸钠 : 分析纯 3.5 异丙醇 : 分析纯 3.6 硅胶 G: 层析用 3.7 氯化钠及氯化钠溶液 (40 g/l) 3.8 硫酸 (1+3) 3.9 玻璃砂 : 用酸处理后洗净干燥, 约相当 20 目 3.10 黄曲霉毒素 M 1 标准溶液 : 用三氯甲烷配制成每毫升相当于 10μg 的黄曲霉毒素 M 1 标准溶液以三氯甲烷作空白试剂, 黄曲霉毒素 M 1 的紫外最大吸收峰的波长应接近 357 nm, 摩尔消光系数为避光, 置于 4 冰箱中保存 3.11 黄曲霉毒素 M 1 与 B 1 混合标准使用液 : 用三氯甲烷配制成每毫升相当于各含 0.04 μg 黄曲霉毒素 M 1 与 B 1 避光, 置于 4 冰箱中保存 4 仪器和设备目圆孔筛 4.2 小型粉碎机 1

4 4.3 玻璃板 :5 cm 20 cm 4.4 展开槽 : 长 25 cm, 宽 6 cm, 高 4 cm 4.5 紫外光灯 :100 W~125 W, 带 365 nm 滤光片 4.6 微量注射器 5 分析步骤整个操作需在暗室条件下进行 5.1 样品提取样品提取制备表, 见表 1 表 1 试样制备样品名称 α 加 40g/L 氯化钠称样量 / 加水量 / 加甲醇量 / 提取液量 / 浓缩体积 / 滴加体积 / 方法灵敏度 / 溶液量 / (g) (ml) (ml) (ml) (ml) (μl) (μg/kg) (ml) 牛乳炼乳牛乳粉乳酪奶油猪肝猪肾猪瘦肉猪血 α 提取液量按式 (1) 计算 : 8 X (90 + A + B) 15 = (1) 式中 : X 提取液量, 单位为毫升 (ml); A 试样中的水分量, 单位为毫升 (ml)( 牛乳炼乳及猪组织的取样量为 30g, 牛乳粉乳酪的取样量为 15g); B 加水量, 单位为毫升 (ml); 注 : 样品中的水分量参照食物成分表因各提取液中含 48 ml 甲醇, 需 39 ml 水才能调到甲醇与水之体积比为 (55+45), 因此加入 40g/L 的氯化钠溶液的体积等于甲醇和水的总体积 (87mL) 减去提取液的体积 (ml) 乳与炼乳 : 称取 g 混匀的样品, 置于小烧杯中, 再分别用 90 ml 甲醇移于 300mL 具塞锥形瓶中, 盖严防漏振荡 30 min, 用折叠式快速滤纸滤于 100 ml 具塞量筒中按表 1 收集 62 ml 乳与 52 ml 炼乳 ( 各相当于 16 g 样品 ) 提取液乳粉 : 取 g 样品, 置于具塞锥形瓶中, 加入 20 ml 水, 使样品湿润后再加入 90 ml 甲醇, 以下按自振荡 30 min 起, 依法操作, 按表 1 收集 59 ml 提取液 ( 相当于 8 g 样品 ) 干酪 : 称取 g 切细过 10 目圆孔筛混匀样品, 置于具塞锥形瓶中, 加 5 ml 水和 90 ml 甲醇, 以下按自振荡 30 min 起依法操作, 按表 1 收集 56 ml 提取液 ( 相当于 8 g 样品 ) 奶油 : 称取 g 样品, 置于小烧杯中, 用 40 ml 石油醚将奶油溶解并移于具塞锥形瓶中加 45 ml 水和 55 ml 甲醇, 振荡 30 min 后, 将全部液体移于分液漏斗中再加入 1.5 g 氯化钠摇动溶 2

5 解, 待分层后, 按上表收集 80 ml 提取液 ( 相当于 8 g 样品 ) 于具塞量筒中新鲜猪组织 : 取新鲜或冷冻保存的猪组织样品 ( 包括肝肾血瘦肉 ) 先切细, 混匀后称取 g, 置于小乳钵中, 加玻璃砂少许磨细, 新鲜全血用打碎机打匀, 或用玻璃珠振摇抗凝混匀后称取 g, 将各样品置于 300 ml 具塞锥形瓶中, 加入 90 ml 甲醇, 以下按自振荡 30 min 起依法操作按上表收集 59 ml 猪肝,61 ml 猪肾,58 ml 猪瘦肉及 61 ml 猪血等提取液 ( 各相当于 16 g 样品 ) 5.2 净化用石油醚分配净化 : 将以上收集的提取液移入 250 ml 分液漏斗中, 再按各种食品加入一定体积的氯化钠溶液 (40 g/l)( 见表 1) 再加入 40 ml 石油醚, 振摇 2 min, 待分层后, 将下层甲醇 - 氯化钠水层移于原量筒中, 将上层石油醚溶液从分液漏斗上口倒出, 弃去再将量筒中溶液转移于原分液漏斗中再重复用石油醚提取两次, 每次 30 ml, 最后将量筒中溶液仍移于分液漏斗中奶油样液总共用石油醚提取两次, 每次 40 ml 用三氯甲烷分配提取 : 于原量筒中加入 20 ml 三氯甲烷, 摇匀后, 再倒入原分液漏斗中, 振摇 2 min 待分层后, 将下层三氯甲烷移于原量筒中, 再重复用三氯甲烷提取两次, 每次 10 ml 合并于原量筒中弃去上层甲醇水溶液用水洗三氯甲烷层与浓缩制备 : 将合并后的三氯甲烷层倒回原分液漏斗中, 加入 30 ml 氯化钠溶液 (40 g/l), 振摇 30 s, 静置待上层混浊液有部分澄清时, 即可将下层三氯甲烷层收集于原量筒中加入 10 g 无水硫酸钠, 振摇放置澄清后, 将此液经装有少许无水硫酸钠的定量慢速滤纸过滤于 100 ml 蒸发皿中氯化钠水层用 10 ml 三氯甲烷提取一次, 并经过滤器一并滤于蒸发皿中最后将无水硫酸钠也一起倒于滤纸上, 用少量三氯甲烷洗量筒与无水硫酸钠, 也一并滤于蒸发皿中, 于 65 水浴上通风挥干, 用三氯甲烷将蒸发皿中残留物转移于浓缩管中, 蒸发皿中残渣太多, 则经滤纸滤入浓缩管中于 65 用减压吹气法将此液浓缩至 0.4 ml 以下, 再用少量三氯甲烷洗管壁后, 浓缩定量至 0.4 ml 备用 5.3 测定硅胶 G 薄层板的制备薄层板厚度为 0.3 mm,105 活化 2 h, 在干燥器内可保存 1d~2d 点板取薄层板 (5 cm 20 cm) 两块, 距板下端 3 cm 的基线上各滴加两点, 在距第一与第二板的左边缘 0.8 cm~1 cm 处各滴加 10 μl 黄曲霉毒素 M 1 与 B 1 混合标准使用液, 在距各板左边缘 2.8 cm~3 cm 处各滴加同一样液点 ( 各种食品的滴加体积见表 1), 在第二板的第 2 点上再滴加 10 μl 黄曲霉毒素 M 1 与 B 1 混合标准使用液一般可将薄层板放在盛有干燥硅胶的层析槽内进行滴加, 边加边用冷风机冷风吹干展开横展 : 在槽内加入 15 ml 事先用无水硫酸钠脱水的无水乙醚 ( 每 500 ml 无水乙醚中加 20 g 无水硫酸钠 ) 将薄层板靠近标准点的长边置于槽内, 展至板端后, 取出挥干, 再同上继续展开一次纵展 : 将横展两次挥干后的薄层板再用异丙醇 - 丙酮 - 苯 - 正己烷 - 石油醚 ( 沸程 60 ~90 ) - 三氯甲烷 ( ) 混合展开剂纵展至前沿距原点距离为 10 cm~12 cm 取出挥干横展 : 将纵展挥干后的板再用乙醚横展 1 次 ~2 次, 展开方法同观察与评定结果在紫外光灯下将第一二板相互比较观察, 若第二板的第二点在黄曲霉毒素 M 1 与 B 1 标准点的相应处出现最低检出量 (M 1 与 B 1 的比移值依次为 0.25 和 0.43), 而在第一板相同位置上未出现荧光 3

6 点, 则样品中黄曲霉毒素 M 1 与 B 1 含量在其所定的方法灵敏度以下 ( 见表 1) 如果第一板的相同位置上出现黄曲霉毒素 M 1 与 B 1 的荧光点, 则第二板第二点的样液点是否各与滴加的标准点重叠, 如果重叠, 再进行以下的定量与确证试验稀释定量样液中的黄曲霉毒素 M 1 与 B 1 荧光点的荧光强度与黄曲霉毒素 M 1 与 B 1 的最低检出量 ( μg) 的荧光强度一致, 则乳炼乳乳粉干酪与奶油样品中黄曲霉毒素 M 1 与 B 1 的含量依次为 0.1 μg/kg 0.2 μg/kg 0.5 μg/kg 0.5 μg/kg 及 0.5 μg/kg; 新鲜猪组织 ( 肝肾血瘦肉 ) 样品均为 0.2 μg/kg( 见表 1) 如样液中黄曲霉毒素 M 1 与 B 1 的荧光强度比最低检出量强, 则根据其强度逐一进行测定, 估计减少滴加微升数或经稀释后再滴加不同微升数, 直至样液点的荧光强度与最低检出量点的荧光强度一致为止确证试验在做完定性或定量的薄层板上, 将要确证的黄曲霉毒素 M 1 和 B 1 的点用大头针圈出喷以硫酸溶液 (1+3), 放置 5 min 后, 在紫外光灯下观察, 若样液中黄曲霉毒素 M 1 和 B 1 点与标准点一样均变为黄色荧光, 则进一步确证检出的荧光点是黄曲霉毒素 M 1 和 B 1 6 分析结果的表述黄曲霉毒素 M 1 或 B 1 的含量按式 (2) 进行计算 X V = D (2) V m 2 式中 : X 黄曲霉毒素 M 1 或 B 1 含量, 单位为微克每千克 (μg/kg); V 1 样液浓缩后体积, 单位为毫升 (ml); V 2 出现最低荧光样液的滴加体积, 单位为毫升 (ml); D 浓缩样液的总稀释倍数 ; m 浓缩样液中所相当的试样质量, 单位为克 (g); 黄曲霉毒素 M 1 或 B 1 的最低检出量, 单位为微克 (μg) 4

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<4D6963726F736F667420576F7264202D203231D3A4D3D7B6F9CAB3C6B7BACDC8E9C6B7D6D0D6ACB7BEB5C4B2E2B6A82E646F63> 中华人民共和国国家标准 GB 5413.3 2010 食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中脂肪的测定 National food safety standard Determination of fat in foods for infants and young children, milk and milk products 2010-03-26