桂 林 华 通 牌 尿 液 化 学 分 析 仪 及 配 套 试 纸 标 准 操 作 程 序 一 实 验 原 理 仪 器 根 据 试 纸 条 上 不 同 试 纸 块 的 颜 色 被 光 线 照 射 进 行 测 定, 其 反 射 光 被 积 分 球 接 收, 通 过 积 分 球 内 525nm 620nm 720nm 三 个 波 长 的 光 线 作 为 测 定 光 波, 取 720nm 波 长 的 光 线 作 参 考 光 波, 根 据 不 同 项 目 的 颜 色 反 应 取 不 同 的 测 定 光 波 各 波 长 的 比 例 由 测 试 项 目 决 定, 根 据 上 述 比 例 ( 反 射 比 R%) 确 定 测 试 结 果, 自 动 输 出 每 次 测 试 的 数 据 尿 液 中 某 种 成 分 含 量 高, 相 应 试 纸 块 的 反 射 光 较 暗 ; 反 之, 尿 液 中 某 种 成 分 含 量 低, 相 应 试 纸 块 的 反 射 光 则 较 强 试 纸 条 除 了 相 应 项 目 的 试 纸 块 外, 还 引 入 了 参 考 块 ( 空 白 块 ), 其 作 用 是 校 正 因 不 同 尿 样 可 能 造 成 的 误 差 反 射 比 的 方 程 式 如 下 : Tm Cs R(%)= Ts Cm R: 反 射 比 Tm: 试 纸 块 对 测 试 波 长 的 反 射 强 度 Ts: 试 纸 块 对 参 考 波 长 的 反 射 强 度 Cm: 参 考 块 对 测 定 波 长 的 反 射 强 度 Cs: 参 考 块 对 参 考 波 长 的 反 射 强 度 十 四 项 试 纸 的 反 应 原 理 : ( 一 ) 肌 酐 在 过 氧 化 物 的 条 件 下, 肌 酐 和 硫 酸 盐 生 成 络 合 物, 催 化 过 氧 化 羟 基 异 丙 苯 和 TMB, 反 应 的 颜 色 变 化 范 围 是 从 橙 色 到 绿 色, 最 终 到 蓝 色, 颜 色 的 变 化 同 肌 酐 的 含 量 成 正 比 关 系 ( 二 ) 蛋 白 质 本 测 试 对 白 蛋 白 的 敏 感 度 高 于 球 蛋 白 血 红 蛋 白 和 黏 液 蛋 白 的 敏 感 度 因 此 阴 性 结 果 不 排 除 其 它 蛋 白 存 在 于 尿 液 中 虽 然 正 常 情 况 下, 肾 脏 会 排 出 少 量 蛋 白, 但 用 传 统 方 法 检 测 不 出 它 们 的 存 在, 任 何 引 起 微 量 的 结 果 均 提 示 蛋 白 尿 的 存 在 对 于 高 度 缓 冲 的 碱 性 尿, 有 可 能 得 到 阳 性 结 果 ( 三 ) 葡 萄 糖 反 应 原 理 : 采 用 酶 法 测 定, 分 别 是 葡 萄 糖 氧 化 酶 和 过 氧 化 氢 酶 D- 葡 萄 糖 在 葡 萄 糖 氧 化 酶 作 用 下 产 生 葡 萄 糖 酸 和 过 氧 化 氢, 过 氧 化 氢 在 过 氧 化 氢 酶 作 用 下, 产 生 水 和 原 生 态 的 氧, 原 生 态 的 氧 使 指 示 剂 显 色 ( 四 ) 胆 红 素 和 尿 胆 原 反 应 原 理 ( 胆 红 素 ) 在 酸 性 条 件 下, 重 氮 盐 作 用 于 胆 红 素 的 中 央, 胆 红 素 段 开, 形 成 偶 氮 化 合 物, 产 生 颜 色 尿 胆 原 的 测 试 方 法 有 两 种 : 一 种 是 重 氮 盐 法, 另 外 是 醛 法 ( 五 ) 酮 体 尿 酮 体 包 括 乙 酰 乙 酸 丙 酮 β- 羟 丁 酸, 后 者 虽 不 属 于 酮 类, 但 经 常 与 前 1
两 者 伴 随 出 现, 因 而 统 称 为 酮 体 反 应 原 理 : 碱 性 条 件 下, 尿 中 的 乙 酰 乙 酸 丙 酮 与 亚 硝 基 铁 氰 化 钠 反 应, 生 成 紫 红 色 的 复 合 物 这 种 测 试 方 法 对 乙 酰 乙 酸 的 敏 感 度 为 5-10mg/dl, 对 丙 酮 的 敏 感 度 为 10-70 mg/dl, 并 且 不 与 β- 羟 丁 酸 反 应 ( 六 ) 比 重 比 重 测 试 可 测 定 尿 液 中 1.000~1.030 之 间 的 比 重, 高 度 缓 冲 的 碱 性 尿 会 使 检 测 结 果 较 其 它 方 法 所 得 比 重 偏 低, 尿 液 存 在 一 定 数 量 蛋 白 时 (1~7.5g/L) 可 使 比 重 偏 高 比 重 反 应 了 肾 脏 对 尿 液 的 浓 缩 能 力, 是 尿 液 常 规 检 验 的 很 重 要 的 指 标 目 前 的 方 法 可 以 测 试 尿 液 的 一 价 离 子 及 一 价 和 二 价 离 子, 最 可 靠 的 方 法 还 是 用 折 射 的 方 法 比 较 可 靠 ( 七 ) 潜 血 利 用 血 红 蛋 白 质 中 的 亚 铁 血 红 素 的 假 过 氧 化 物 酶 活 性 催 分 解 过 氧 化 物, 产 生 新 生 态 的 氧, 氧 化 指 示 剂, 使 指 示 剂 显 色, 从 显 色 的 强 度 可 以 得 知 尿 液 中 血 的 浓 度 临 床 意 义 : 尿 液 中 混 有 0.1% 以 上 的 血 液 时, 便 呈 肉 眼 血 尿 的 特 征, 血 量 在 此 以 下 便 只 能 用 潜 血 反 应 或 尿 沉 渣 镜 检 才 能 证 明 血 尿 常 见 路 炎 症 ( 急 性 肾 炎 肾 结 核 尿 道 炎 等 ) 结 核 肿 瘤, 有 白 细 胞 时 则 表 示 有 火 症 ; 蛋 白 质 性 尿 沉 渣 中 有 肾 上 皮 细 胞 管 型 等 时, 应 考 虑 肾 炎 ; 特 别 是 有 红 细 胞 管 型 时, 是 肾 实 质 出 血 的 佐 证 ( 八 ) PH PH 试 纸 的 应 用 是 非 常 广 泛 的,PH 的 反 应 原 理 是 基 于 PH 指 示 剂 法, 目 前, 一 般 的 尿 液 PH 分 析 试 纸 中 含 有 甲 基 红 [PH4.2( 红 )-6.2( 黄 )], 溴 甲 酚 绿 [PH3.6 ( 黄 )-5.4( 绿 )] 溴 百 旱 香 酚 蓝,[PH6.7( 黄 )-7.5( 蓝 )], 这 些 混 合 的 酸 碱 指 示 剂 适 量 配 合 可 以 反 映 尿 液 PH PH4.5-9.0 的 变 异 范 围 ( 九 ) 亚 硝 酸 盐 尿 液 中 的 亚 硝 酸 盐 与 试 纸 块 中 的 对 氨 基 苯 砷 酸 或 磺 胺 发 生 重 氮 化 反 应, 生 成 重 氮 盐, 生 成 的 重 盐 再 与 试 纸 上 的 N-1- 萘 基 乙 二 胺 盐 酸 或 四 氢 苯 并 喹 啉 -3- 酚 偶 合 生 成 红 色 的 偶 氮 化 合 物 ( 盖 氏 试 剂 ) ( 十 ) 白 细 胞 尿 液 中 白 细 胞 测 定 的 反 应 原 理 是 利 用 中 性 粒 细 胞 内 酯 酶 催 化 水 解 吲 哚 酚 酯 水 解, 产 生 游 离 酚, 游 艺 机 离 酚 氧 化 偶 合 或 与 试 纸 中 的 重 氧 盐 偶 合 而 显 色 临 床 意 义 ; 在 各 种 尿 路 炎 症 情 况 下, 尿 液 中 都 可 能 出 现 白 细 胞 白 细 胞 的 干 化 学 检 查 可 以 和 别 的 检 查 项 目 一 起 对 尿 液 进 行 过 筛 检 查 ( 十 一 ) 抗 坏 血 酸 尿 液 VC 试 纸 的 反 应 原 理 是 利 用 VC 的 还 原 性, 使 氧 化 态 的 2,6- 二 氯 酚 靛 酚 变 成 还 原 态 的 2,6- 二 氯 二 对 酚 胺 使 用 权 试 纸 颜 色 由 粉 红 色 变 成 无 色, 颜 色 变 化 的 强 弱 与 尿 中 VC 的 浓 度 相 关 临 床 意 义 : 检 测 尿 液 是 维 生 素 的 含 量 可 以 测 试 人 体 的 营 状 况, 口 服 维 生 素 C500mg 后, 尿 维 生 素 C 排 泄 量 在 15-57 2
umol(3-10mg) 每 4 h 为 正 常 ; 大 于 57umol(10mg) 每 4h 为 充 裕 ; 小 于 17 umol(3mg) 每 4h 为 不 足, 尿 液 维 生 素 C 降 低, 常 见 于 维 生 素 C 摄 入 量 不 足 或 坏 血 病 尿 液 维 生 素 C 长 期 增 高 可 能 与 肾 结 石 形 成 有 关 在 尿 液 分 析 试 纸 中,VC 试 纸 还 可 以 判 断 尿 液 中 的 VC 对 其 他 试 纸 的 影 响 程 度 ( 十 二 ) 钙 离 子 尿 液 中 的 钙 离 子 在 碱 性 条 件 下, 与 试 纸 中 的 百 里 香 酚 蓝 结 合, 生 成 一 种 蓝 色 的 络 合 物, 加 入 适 量 δ- 羟 基 喹 啉 可 消 除 镁 离 子 干 扰 ( 十 三 ) 微 量 白 蛋 白 微 量 白 蛋 白 反 应 块 对 白 蛋 白 比 对 球 蛋 白 血 红 蛋 白 Bence~Jones 氏 蛋 白 和 粘 蛋 白 灵 敏, 所 以 检 出 一 个 阴 性 结 果 并 不 能 说 明 没 有 这 些 蛋 白 微 量 白 蛋 白 试 纸 能 灵 敏 检 测 尿 中 的 白 蛋 白, 对 其 它 蛋 白 的 灵 敏 度 要 比 白 蛋 白 低 几 倍 对 于 高 度 缓 冲 的 碱 性 尿, 有 可 能 得 到 假 阳 性 结 果 如 果 尿 样 被 季 铵 盐 类 化 合 物 及 某 些 防 腐 剂 或 清 洗 剂 污 染 也 会 导 致 假 阳 性, 肉 眼 可 见 的 血 尿 也 可 能 影 响 蛋 白 的 测 试 二 尿 液 的 收 集 及 准 备 用 洁 净 和 干 燥 的 容 器 收 集 新 鲜 尿 液 使 用 未 离 心 过 的 尿 液 时 应 在 测 试 前 将 其 混 匀, 尿 液 的 存 放 时 间 不 得 超 过 4 小 时, 任 何 时 候 均 应 在 洁 净 条 件 下 操 作 注 意 : 请 用 新 鲜 尿 液 作 为 检 测 尿 样, 不 要 向 尿 样 中 加 防 腐 剂, 装 尿 样 的 容 器 一 定 要 洁 净, 防 止 残 留 的 洗 涤 剂 和 消 毒 剂 干 扰 测 定 三 使 用 试 剂 方 法 1. 将 试 纸 条 完 全 浸 入 的 新 鲜 尿 液 中,2 秒 后 取 出 放 入 仪 器 中 测 试, 或 目 测 2. 仪 器 测 试 : 请 按 尿 液 分 析 仪 使 用 说 明 书 进 行 操 作, 自 动 打 印 出 结 果, 仅 限 专 业 人 员 使 用 目 测 比 色 : 横 握 试 纸 条, 与 瓶 贴 上 的 色 标 比 较, 找 出 相 接 近 值, 记 录 其 结 果 注 意 : 1. 为 防 止 灵 敏 度 降 低, 请 将 试 纸 放 在 30 以 下 干 燥 处, 并 避 免 阳 光 直 照, 长 期 贮 存 时 请 置 于 2~10 的 低 温 环 境 中 2. 试 纸 条 必 须 在 原 瓶 中 贮 存, 勿 取 出 干 燥 剂 ; 使 用 时 才 能 将 试 纸 从 瓶 中 取 出, 取 出 后 立 即 盖 紧 瓶 盖 四 使 用 仪 器 : 桂 林 华 通 生 产 的 HT-2000 型 尿 液 化 学 分 析 仪 五 操 作 步 骤 : 样 见 HT-2000 型 尿 液 化 学 分 析 仪 SOP 六 质 控 品 使 用 水 平 及 频 率 : 每 天 一 次 七 计 算 方 法 : Tm Cs R(%)= Ts Cm R: 反 射 比 Tm: 试 纸 块 对 测 试 波 长 的 反 射 强 度 Ts: 试 纸 块 对 参 考 波 长 的 反 射 强 度 Cm: 参 考 块 对 测 定 波 长 的 反 射 强 度 Cs: 参 考 块 对 参 考 波 长 的 反 射 强 度 3
八 参 考 范 围 维 生 素 C(Vc)0.6-1.4mmol 白 细 胞 (LEU)0-15Leu/ul 潜 血 (BLD)0-0.3mg/l 尿 胆 原 (URO)3.4umol/l 胆 红 素 (BIL)0-17umol/l 尿 比 重 (SG)1.005-1.020 酸 碱 度 (PH)5.5-7.0 蛋 白 质 (PRO)0-0.2g/l 亚 硝 酸 盐 (NIT)0 葡 萄 糖 (GLU) 0-2.8mmol/l 酮 体 (KET)0-50mg/l 肌 酐 (CRE)0.9-4.4mmol/l 钙 离 子 (Ca) 1.25mmol/l 微 量 白 蛋 白 (MCA)10mg/l 九 操 作 性 能 概 要 1 所 测 质 控 品 的 相 对 偏 差 为 ±5% 2 精 密 度 批 内 变 异 系 数 3% 批 间 变 异 系 数 5% 十 超 出 可 报 告 范 围 的 处 理 当 尿 样 本 的 测 试 值 超 出 各 项 的 最 大 值 时, 应 将 样 本 用 0.9% 生 理 盐 水 稀 释 后 在 测 试, 测 得 的 结 果 乘 以 稀 释 倍 数 十 一 危 急 性 : 3+ 十 二 方 法 的 局 限 性 1. 请 用 新 鲜 尿 液 作 为 检 测 尿 样, 不 要 向 尿 样 中 加 防 腐 剂, 装 尿 样 的 容 器 一 定 要 洁 净, 防 止 残 留 的 洗 涤 剂 和 消 毒 剂 干 扰 测 定 2. 服 用 注 射 大 量 的 Vc 会 使 亚 硝 酸 盐 胆 红 素 尿 胆 原 隐 血 检 验 结 果 偏 低 及 呈 假 阴 性 请 停 服 10 小 时 后 再 进 行 测 定 ( 少 量 Vc 对 反 应 干 扰 不 大, 但 当 Vc 浓 度 超 过 250mg/L 时, 亚 硝 酸 盐 胆 红 素 隐 血 可 能 呈 假 阴 性 ) 3. 由 于 低 比 重 尿 碱 性 尿 室 温 较 高 和 放 置 时 间 较 长 的 尿 样 白 细 胞 容 易 溶 解, 造 成 白 细 胞 测 定 结 果 比 镜 检 结 果 偏 高, 因 此 测 定 时 必 须 采 用 新 鲜 尿 样 高 比 重 尿 淋 巴 细 胞 尿 高 葡 萄 糖 尿 (10~20g/L 以 上 ) 标 本 温 度 和 室 温 低 于 20 以 及 一 些 药 物 干 扰 可 造 成 白 细 胞 测 定 结 果 偏 低 或 假 阴 性 4. 测 定 亚 硝 酸 盐 的 尿 样 最 好 在 膀 胱 内 滞 留 4 小 时 以 上 5. 测 定 温 度 以 20~25 为 标 准, 温 度 太 高 或 太 低 都 会 影 响 测 定 结 果 的 准 确 性 6. 不 要 用 手 摸 试 剂 块 部 分, 防 止 污 染 试 剂 条, 还 要 避 免 其 它 挥 发 性 药 品 对 试 纸 条 的 污 染 7. 试 纸 应 迅 速 完 全 浸 入 尿 中, 保 持 1~2 秒 再 取 出, 不 宜 太 短 或 太 长, 以 免 影 响 测 定 8. 使 用 前 若 试 纸 已 过 期 或 明 显 变 色, 请 不 要 使 用 十 三 临 床 意 义 检 测 尿 液 微 量 白 蛋 白 的 临 床 意 义 * 微 量 白 蛋 白 的 检 测 是 糖 尿 病 人 微 血 管 并 发 症 的 敏 感 指 标 : 可 以 预 测 糖 尿 病 性 肾 病 发 展 的 早 期 诊 断, 糖 尿 病 性 肾 病 出 现 最 早 的 临 床 信 号 是 出 现 微 量 白 蛋 白, 所 以 检 测 它 有 助 于 提 前 对 糖 尿 病 人 采 取 保 护 肾 功 能 措 施 * 对 高 血 压 肾 病 合 并 症 的 早 期 诊 断 : 高 血 压 病 人 的 尿 微 量 白 蛋 白 排 泄 率 明 显 高 于 正 常 人, 尿 微 量 白 蛋 白 异 常 是 心 血 管 疾 病 的 进 展 的 重 要 预 测 指 标 * 微 量 白 蛋 白 的 检 测 对 于 早 期 的 肾 小 球 损 伤, 观 察 肾 小 球 的 通 透 性 变 化 也 有 十 分 重 要 的 临 床 意 义 * 当 试 验 结 果 异 常 时, 应 对 尿 液 进 行 连 续 几 天 测 试, 若 尿 液 中 偶 尔 异 常 时, 可 能 是 生 理 性 的, 如 果 连 续 几 天 均 异 常, 请 结 合 对 血 糖 血 压 的 测 试, 最 后 用 免 疫 学 的 方 法 确 认 4
尿 液 钙 离 子 / 肌 酐 临 床 意 义 * 是 反 映 尿 液 中 钙 离 子 排 泄 量 的 一 个 重 要 指 标 ; * 正 常 人 尿 液 中 的 钙 离 子 排 泄 量 24 小 时 是 恒 定 的 范 围 ; * 正 常 人 尿 液 中 的 钙 离 子 / 肌 酐 比 值 是 恒 定 的 范 围 ; * 但 是 单 位 体 积 尿 液 中 的 钙 离 子 会 因 尿 液 的 稀 释 或 浓 缩 发 生 变 化 ; * 当 尿 液 中 的 钙 离 子 / 肌 酐 的 比 值 异 常 时, 表 明 人 体 钙 离 子 的 排 泄 量 异 常 注 意 : 其 它 项 临 床 意 义 见 试 纸 附 带 说 明 书 十 四 参 考 文 献 1. Salem MA, El-Habashy SA, Saeid OM, et al. Urinary excretion of n-acetyl-beta-d-glucosaminidase and retinol binding protein as alternative indicators of nephropathy in patients with type 1 diabetes mellitus. Pediatr Diabetes. 2002, 3:37-41. 2. Weir MR. Microalbuminuria in type 2 diabetics: an important, overlooked cardiovascular risk factor. J Clin Hypertens ( Greenwich ). 2004, 6:134-41. 3. Lane JT. Microalbuminuria as a marker of cardiovascular and renal risk in type 2 diabetes mellitus: a temporal perspective. Am J Physiol Renal Physiol. 2004, 286:F442-50. 4. 李 明 洲 张 玉 梅 邓 开 伯 等 高 血 压 患 者 微 量 白 蛋 白 尿 的 阳 性 率 及 相 关 因 素 中 国 心 血 管 杂 志 1998, 3 : 405-7 5. Palatini P. Microalbuminuria in hypertension. Curr Hypertens 2003, 5: 208-14. 6. Parving HH, Andersen S, Jacobsen P, et al. Angiotensin receptor blockers in diabetic nephropathy: Renal and cardiovascular end points. Semin Nephrol. 2004, 24:147-57. 7. Asselbergs FW, de Boer RA, Diercks GF, et al. Vascular endothelial growth factor: the link between cardiovascular risk factors and microalbuminuria? Int J Cardiol. 2004, 93:211-5. 8. 汤 天 清 徐 仲 武 陈 仁 涉 等 尿 微 量 白 蛋 白 检 测 在 原 发 性 肾 脏 疾 病 中 的 临 床 价 值 中 国 临 床 医 药, 下 : 1005-7. 9. Shihabi ZK, Konen JC, O'Connor ML. Albuminuria vs urinary total protein for detecting chronic renal disorders. Clin Chem. 1991, 37:621-4. 10. Deckert T, Feldt-Rasmussen B, Borch-Johnsen K, Jensen T, Kofoed-Enevoldsen A. Albuminuria reflects widespread vascular damage. Diabetologia. 1989, 32: 219-26. 5