534 激光生物学报第 24 卷 proteinlevelsaftertransfectionwasidentifiedbyreal timepcrandwesternbloting,respectivly.theu251celprolif erationwasmeasuredbymtt.resul
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- 忧坦 朋
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1 第 24 卷第 6 期 2015 年 12 月 激光生物学报 ACTA LASER BIOLOGY SINICA Vol.24No.6 Dec.2015 doi: /j.isn pcdna3.1 Pax6 载体的构建及其对胶质瘤细胞增殖的影响 黄涛 1, 彭志宏 2 3, 黄柏胜 (1. 湖南师范大学附属中学, 湖南长沙 ;2. 长沙市雅礼中学, 湖南长沙 ; 3. 中南大学湘雅医学院生理学系, 湖南长沙 ) 摘要 : 目的 : 构建 pcdna3.1 Pax6 过表达质粒并观察其对胶质瘤 U251 细胞增殖的影响 方法 : 以 K562 细胞 cdna 为模版, 采用 RT PCR 的方法扩增 Pax6 基因, 将扩增产物酶切回收后与同样酶切回收的真核表达载体 pcdna3.1 连接 转化, 构建 pcdna3.1 Pax6 重组质粒, 再经菌落 PCR 酶切及测序鉴定重组质粒 ; 利用脂质体 li pofectamine2000 转染重组质粒至 U251 细胞 Real timepcr 检测 Pax6mRNA 的表达水平,Westernblot 检测 PAX6 蛋白的表达,MTT 法检测 U251 细胞增殖 结果 :PCR 扩增获得长度为 1131bp 的阳性产物, 经 pcdna3.1 真核表达载体克隆 酶切鉴定及序列分析后, 证实真核表达质粒 pcdna3.1 Pax6 构建成功 ;Real timepcr 结果显示,Pax6 过表达后的 U251 细胞 Pax6mRNA 表达水平明显高于正常对照组 ;Westernblot 结果显示,PAX6 蛋白表达亦明显高于正常对照组, 差异具有统计学意义 (P<0.05);MTT 结果显示, 与正常对照组细胞比较, 转染 pcdna3.1 Pax6 组的细胞, 细胞增殖能力明显降低, 差异亦具有统计学意义 (P<0.05) 结论: 成功构建人 Pax6 基因的 pcdna3.1 Pax6 重组质粒, 过表达 Pax6 基因抑制 U251 细胞的增殖 关键词 :Pax6 基因 ;pcdna3.1 真核表达载体 ; 胶质瘤细胞 ; 细胞增殖中图分类号 :R739.4 文献标志码 :A 文章编号 : (2015) ConstructionofRecombinationVectorofpcDNA3.1 Pax6andtheEfectof Pax6onProliferationofGliomaCels HUANGTao 1,PENGZhihong 2,HUANGBaisheng 3 (1.TheHighSchoolAtachedtoHunanNormalUniversity,Changsha410006,Hunan,China;2.Changsha YaliMiddleSchool,Changsha410007,Hunan,China;3.DepartmentofPhysiology,XiangyaSchool ofmedicine,centralsouthuniversity,changsha410013,hunan,china) Abstract:Objective:Toconstructover expresionplasmidofpcdna3.1 Pax6andinvestigateitsimpactonprolifera tionofgliomau251cels.methods:pax6genewasamplifiedfromcdnaofk562celsusingrt PCR.ThePax6gene wasrestrictivelydigestedandrecycled,andtheninsertedintotheeukaryoticexpresionvectorpcdna3.1.therecombi nantplasmidpcdna3.1 Pax6wasconfirmedbycolonyPCR,restrictionendonucleasedigestionandsequencing.The recombinantplasmidwastransfectedintou251celsthroughlipofectamine2000.theexpresionofpax6atmrnaand 收稿日期 : ; 修回日期 : 基金项目 : 湖南省自然科学基金 (2015J2157) 作者简介 : 黄涛, 男, 湖南长沙人, 湖南师范大学附属中学 ( 电子邮箱 )huangt @163.com 通讯作者 : 黄柏胜 (1966-), 男, 湖南永州人, 博士, 主要从事脑神经保护方向的研究 ( 手机 ) ;( 电子邮箱 )huangbs2078@163.com
2 534 激光生物学报第 24 卷 proteinlevelsaftertransfectionwasidentifiedbyreal timepcrandwesternbloting,respectivly.theu251celprolif erationwasmeasuredbymtt.results:thepurposegenegainedfrom PCRamplificationhadlengthof1131bp.Eu karyoticexpresionplasmidpcdna3.1 Pax6wasidentificatedbycolonyPCR,enzymedigestionandsequencinganaly sis.real timepcrshowedthattheexpresionofpax6mrnawasincreasedinu251celstransfectedwithpax6gene comparedtothenormalgroup.westernblotingresultsshowedthatpax6proteinlevelsinu251celstransfectedwith Pax6genewasalsoover expresedcomparedwiththenormalgroup(p<0.05).mttresultsshowedthattransfectionof pcdna3.1 Pax6inhibitedtheproliferationoftheU251celscomparedtonormalgroup(P<0.05).Conclusion:We succesfulyconstructdthepcdna3.1 Pax6recombinantplasmid.Over expresionofpax6genecouldinhibittheprolif erationoftheu251cels. Keywords:Pax6gene;eukaryoticexpresionvectorpcDNA3.1;gliomacels;proliferation 胶质瘤是临床上常见的原发性中枢神经系统恶性肿瘤, 因它具有高侵袭性, 与邻近正常脑组织无明显分界, 导致手术治疗难以根除, 常易复发 死亡率高 目前胶质瘤的常规治疗手段如手术切除 放疗 化疗效果并不满意 [1], 经治疗后的患者的中位生存期仅有 14 个月左右 [2 6], 因此寻找胶质瘤新的治疗靶点具有重要意义 研究发现, 胶质瘤组织中 Pax6 的表达水平明显低于正常脑组织 [4,7], 提示探索胶质瘤中 Pax6 表达降低的确切机制, 有望为明确胶质瘤的侵袭性指明新思路 本研究通过构建 Pax6 基因的过表达 pcdna3.1 Pax6 重组质粒, 利用脂质体 li pofectamine2000 将 pcdna3.1 Pax6 重组质粒转染胶质瘤 U251 细胞, 分别检测 Pax6 基因 mrna 和 PAX6 蛋白表达情况, 并初步探讨 Pax6 基因过表达后对 U251 细胞增殖的影响 1 材料与方法 1.1 材料 DMEM 培养基 (Hyclone 公司 ), 胎牛血清 ( 杭州四季青公司 ),Trizol(Invitrogen 公司 ),PCR TaqMix ( 广州东盛生物公司 ), 琼脂糖 (Spanish 公司 ), 凝胶回收试剂盒 (OMEGA 公司 ),pcdna3.1(+) 载体 (Invitrogen 公司 ), 脂质体 lipofectamine2000(invitro gen 公司 ), 核酸分子量标准 (TaKaRa 公司 ), 酵母浸出粉 精解蛋白胨 (Oxoid 公司 ), 质粒提取试剂盒 ( 北京博大泰克公司 ),BamHI EcoRI T4 连接酶和逆转录试剂盒 (Fermentas 公司 ), 一抗和二抗购自 Santa Cruz,K562 细胞和 U251 细胞 ( 上海细胞所 ), 大肠杆菌 DH5α 菌株为本室保存 1.2 方法 PCR 扩增目的基因 Pax6 提取培养的 K562 细胞 RNA, 逆转录为 cdna, 再以 cdna 为模版, 扩增 Pax6 基因 扩增引物由华大 基因公司合成, 序列如下 :Pax6 ORF F:GGATCCAT GCAGAACAGTCACAGC( 下划线为 BamH I 酶切位点 ),Pax6 ORF R:GAATTCTTACTGTAATCTTGGC CAGT( 下划线为 EcoRI 酶切位点 ), 预计 PCR 扩增产物大小为 1311bp 产物以 1% 琼脂糖凝胶电泳, 凝胶成像仪拍照 PCR 产物的回收纯化 酶切与连接 转化将 PCR 产物在紫外透射仪下切胶纯化, 产物回收纯化按琼脂糖凝胶回收试剂盒说明书操作步骤进行 ; 将回收纯化后的产物及 pcdna3.1 载体分别通过 BamHI EcoRI 酶切, 然后进行连接 转化 阳性克隆的鉴定采用菌落 PCR 法 酶切法及测序比对鉴定阳性克隆 挑取平板上长出的转化子重悬于 10μLLB 培养液中, 从中取 1μL 做模板进行菌落 PCR 鉴定 ; 另外取经菌落 PCR 鉴定的阳性克隆进行抽提质粒, 并对重组质粒进行双酶切鉴定, 具体操作方法按照试剂盒说明书进行 ; 测序比对鉴定则将酶切验证的阳性克隆菌液送武汉华大基因进行双向测序, 以此进一步证实插入片段 Pax6 CDS 序列的正确与否 Pax6 表达的检测 Real TimePCR 检测 Pax6mRNA 的表达将已经构建的 pcdna3.1 Pax6 重组质粒及 pcd NA3.1 空质粒分别转染培养的胶质瘤 U251 细胞, 在转染 72h 后分别收集各组细胞 Real TimePCR 引物,Pax6 正义链 AGACACAGCCCTCACAAAC, 反义链 ATCATAACTCCGCCCATTC, 扩增产物长度为 157bp; 内参 β actin 正义链 AGGGGCCGGACTCGTCATACT, 反义链 GGCGGCACCACCATGTACCCT, 扩增产物长度为 202bp WesternBlot 检测 PAX6 蛋白的表达在转染 72h 后用 0.25% 胰酶消化收集各组细
3 第 6 期黄涛等 :pcdna3.1 Pax6 载体的构建及其对胶质瘤细胞增殖的影响 535 胞,1500r/min 离心去培养基 ; 再分别用 PBS 重悬细胞,1500r/min 离心去上清, 细胞沉淀用于提取蛋白 取一定量总蛋白样品进行 SDS PAGE 电泳, 转移到 PVDF 膜上, 用 TBST 室温封闭 1h, 分别用稀释的 PAX6 或内参 β actin 一抗 4 孵育过夜 TBST 漂洗 3 次, 加入辣根过氧化物酶标记羊抗兔 IgG 二抗, 室温孵育 1h TBST 漂洗 3 次, 用 ECLWesternblot 试剂盒检测 MTT 检测细胞活力分别在转染后 0h 24h 48h 72h 处理各组细胞,96 孔板每孔加入 5mg/mL 的 MTT20μL( 终浓度为 0.5mg/mL), 孵育 4h, 弃上清, 每孔加入 200μL DMSO, 震荡 20min, 置酶标仪 570nm 处测定光密度 (OD) 值 以正常对照组细胞活力为 100%, 实验组细胞活力按以下公式计算 : 细胞活力 (%)= 实验组 OD 值 / 对照组 OD 值 100% 统计学方法用 SPSS16.0 软件分析实验数据, 结果以均数 ± 标准差表示, 组间两两单因素方差分析 (one way) 比较采用 ANOVA 检验 Real TimePCR 数值分析采用 2 ΔΔCt 分析法计算基因表达的相对比值, 以 P<0.05 为有统计学意义 2 结果 2.1 PCR 扩增目的基因 Pax6 以 K562 细胞 cdna 为模板,PCR 扩增 Pax6, 经 1% 琼脂糖凝胶电泳结果显示, 扩增的产物大小为 1 131bp, 与预期大小一致 ( 图 1) 2.2 菌落 PCR 鉴定 1% 琼脂糖凝胶电泳结果显示,5 8 号孔有阳性条带, 即为阳性转化子, 扩增条带大小与预计产物 1131bp 一致 ;1 4 号孔为阴性,N 孔为空白对照 ( 图 2) 2.3 pcdna3.1 Pax6 重组质粒的酶切鉴定阳性克隆经 BamHI/EcoRI 双酶切后,1% 琼脂糖凝胶电泳可见有两条条带, 一条与 pcdna3.1 空载体大小一致, 另一条与目的片段 1131bp 大小一致, 说明 pcdna3.1 Pax6 重组质粒构建成功 ( 图 3) 2.4 pcdna3.1 Pax6 重组质粒的测序鉴定将酶切验证正确的阳性克隆菌液送武汉华大基因公司进行双向测序, 测序结果 ( 图 4) 证实插入片段是 Pax6CDS 序列, 且与模板序列比对无点突变, Pax6 基因 CDS 序列成功插入 pcdna3.1(+) 载体中, 重组质粒构建成功 M:DS2000DNA 分子量标准 ;1:Pax6 基因的扩增产物 M:DS2000DNA ladder;1:theamplifiedproduct ofpax6 图 1 Pax6 的 PCR 扩增 Fig.1 PCRamplificationofPax6 M:DS2000DNA 分子量标准 ;5,6,7 和 8 为阳性转化子 M:DS2000DNAladder;5,6,7and8holesarepositive transformants 图 2 pcdna3.1 Pax6 的菌落 PCR 鉴定 Fig.2 IdentifyingpcDNA3.1 Pax6bycolonyPCR M:1kbDNA 分子量标准 ;1:pcDNA3.1 Pax6 重组质粒酶切条带 M:1kbDNAladder;1:DigestedpcDNA3.1 Pax6 图 3 pcdna3.1 Pax6 重组质粒的双酶切鉴定 Fig.3 Double enzymedigestionofpcdna3.1 Pax6 recombinantplasmid
4 536 激光生物学报第 24 卷 图 4 pcdna3.1 Pax6 重组质粒的序列测定 Fig.4 ThesequencingmapofpcDNA3.1 Pax6recombinantplasmid 2.5 Pax6mRNA 的表达 Real timepcr 结果显示 : 在胶质瘤 U251 细胞中, 转染 pcdna3.1 Pax6 过表达质粒,Pax6 表达上调 (P<0.05), 说明用脂质体 lipofectamine2000 能将外源性的 Pax6 转染至 U251 细胞中, 质粒转染模型构建成功 ( 图 5) 2.6 PAX6 蛋白的表达 pcdna3.1 Pax6 过表达质粒转染 U251 细胞后, 通过 WesternBlot 检测 PAX6 蛋白的表达, 结果可见 Pax6 过表达后,PAX6 蛋白表达量明显增加 (P< 0.05), 说明 Pax6 过表达质粒转染 U251 细胞模型构建成功 ( 图 6) 2.7 Pax6 对 U251 细胞增殖的影响在 U251 细胞中转染 pcdna3.1 Pax6 过表达质粒 48h 后,MTT 结果可见 U251 细胞的增殖能力较对照组开始降低, 以 72h 时增殖能力降低较显著 (P <0.05) Normal: 对照组 ;pcdna3.1: 转染 pcdna3.1 空载体组 ;pcdna3.1 Pax6: 转染 pcdna3.1 Pax6 重组质粒组 ; 与对照组比较 * P<0.05 Normal:Normalgroup;pcDNA3.1:transfectedwith pcdna3.1emptyvector;pcdna3.1 Pax6:transfect edwithpcdna3.1 Pax6recombinantplasmid; * P< 0.05,vsNormalgroup 图 5 Pax6mRNA 在 U251 细胞的表达 Fig.5 TheexpresionofPax6mRNAinU251cels 3 讨论 胶质瘤起源于胶质细胞或其前体细胞, 是临床上常见的原发性中枢神经系统恶性肿瘤, 大约占颅内肿瘤的 40% 50%, 病人确诊后 5 年存活率少于 3% [8,9] 胶质瘤具有高侵袭性, 与邻近正常脑组织无明显分界, 使得手术治疗难以根除, 常易复发 死亡率高 随着分子生物学技术的飞速发展, 人们逐渐认识到恶性肿瘤实质上是一种基因疾病, 其发生 发展涉及多种基因水平的改变, 导致正常细胞原癌基因和抑癌基因功能改变 细胞信号传导受阻, 细胞周期紊乱 细胞凋亡受到抑制等, 结果出现细胞的异常增殖 自主侵袭 血管增生等恶性表型 因此, 探索胶质瘤发病机制 有效治疗方法, 积极开展胶质瘤的基因治疗成为目前神经科学研究热点之一 Pax6 是进化上高度保守的 Pax 家族成员之一, 定位于 11p13 染色体, 该基因的正常表达在多种器官发生中起着决定性作用, 与眼 中枢神经系统 鼻 胰腺和内分泌腺等组织器官的发育有关, 在脑中持久表达 [10], 它广泛地参与细胞增殖 迁移 分化和黏附等生命活动, 在不同的组织和细胞中发挥不同的功能 如 Pax6 在多种内分泌细胞的表达上调, 对维持血糖浓度稳定和内分泌的功能稳定起着重要作用 [11] 但 Pax6 在不同类型癌症的生长 侵袭和血管生成中亦发挥不同的作用 [12 15] 研究报道,Pax6 促 [16] [17] 进人视网膜母细胞瘤细胞和乳腺癌细胞的增殖 抑制 Pax6 的表达, 可通过增加 Bcl 2 CDK1 和 PCNA 的表达, 降低 BAX 和 p21 的表达而促进人视网膜母细胞瘤细胞增殖, 减少细胞凋亡 [18] ; 但在非小细胞肺癌 A549 H1299 细胞, 抑制 Pax6 的表达, 则通过抑制 MAPK 信号通路从而抑制癌细胞增殖及细胞周期进程 [19] 然而 Pax6 在胶质瘤的表达水平明显低于邻近正常脑组织 [4,7], 过表达 Pax6 能抑制胶质瘤细胞的生长和侵袭 [13,15],Pax6 可能是通过抑制 G1 期向 S 期转化而抑制细胞生长 [15], 或通过抑制
5 第 6 期黄涛等 :pcdna3.1 Pax6 载体的构建及其对胶质瘤细胞增殖的影响 537 (a)westernblot 检测 PAX6 蛋白的表达 1: 对照组 ;2:pcDNA3.1 空载体组 ;3:pcDNA3.1 Pax6 重组质粒组 ;(b)pax6 蛋白的灰度扫描结果 Normal: 对照组 ;pcdna3.1: 转染 pcdna3.1 空载体组 ; pcdna3.1 Pax6: 转染 pcdna3.1 Pax6 重组质粒组 ; 与对照组比较 *P<0.05 (a)theexpresionofpax6proteinbywesternblot.1:normalgroup;2:pcdna3.1vectorgroup;3: pcdna3.1 Pax6recombinantplasmidgroup;(b)ThegraydensityresultsofPAX6protein.Normal:Nor malgroup;pcdna3.1:transfectedwithpcdna3.1emptyvector;pcdna3.1 Pax6:transfectedwithpcD NA3.1 Pax6recombinantplasmid; * P<0.05,vsNormalgroup 图 6 PAX6 蛋白在 U251 细胞的表达 Fig.6 TheexpresionofPAX6proteininU251cels 转染组细胞的增殖能力低于未转染细胞组, 我们的研究结果显示过表达 Pax6 降低胶质瘤细胞增殖, 提示 Pax6 基因在胶质瘤中的低表达可能是胶质瘤异常增殖 生长的原因之一 由于 Pax6 调控的基因众多, 而且 Pax6 本身又是多种 microrna 的靶基因, 对其调控机制尚未完全阐明, 究竟 Pax6 基因是如何影响胶质瘤细胞的增殖 生长的, 还需要作深入研究, 我们构建的 pcdna3.1 Pax6 重组质粒将为进一步研究 Pax6 基因的功能奠定实验基础 * P<0.05,vsNormalgroup 图 7 Pax6 对 U251 细胞增殖的影响 Fig.7 Efects ofpax6 on the proliferation of U251cels VEGFA 的表达而抑制肿瘤的生长 血管生成和转移 [20,21] 最近的研究显示,Pax6 作为 microrna 7 的靶基因促进结肠直肠癌 Caco 2 细胞 SW480 细胞的增殖 [22], 但 Pax6 作为 microrna 335 的靶基因则 [23] 抑制胶质瘤 U251 细胞 U87 细胞的增殖以及抑制乳腺癌 MCF 7 细胞的增殖 [24] 本研究中我们成功构建了 Pax6 基因的过表达 pcdna3.1 Pax6 重组质粒, 利用脂质体 lipofectamine 2000 将 pcdna3.1 Pax6 重组质粒转染至胶质瘤 U251 细胞,Real TimePCR 及 WesternBlot 结果显示 Pax6mRNA 及 PAX6 蛋白的表达均高于未转染组, 参考文献 [1] PREUSSERM,DERIBAUPIERRES,W?HRERA,etal.Cur rentconceptsandmanagementofglioblastoma[j].annneurol, 2011,70(1):9 21. [2] KREXD,KLINKB,HARTMANNC,etal.Long termsurvival withglioblastomamultiforme[j].brain,2007,130(pt10): [3] HETSCHKOH,VOSSV,HORNS,etal.Pharmacologicalin hibitionofbcl 2familymembersreactivatesTRAIL inducedap optosisinmalignantglioma[j].jneurooncol,2008,86(3): [4] GEIGERGA,FUW,KAOGD.Temozolomide mediatedradi osensitizationofhumangliomacelsinazebrafishembryonicsys tem[j].cancerres,2008,68(9): [5] ZHENGYF,LINL,ZHENGZH,etal.TGF alphainduces upregulationandnucleartranslocationofhes1 ingliomacel [J].CelBiochemFunct,2008,26(6): [6] OHGAKIH.Epidemiologyofbraintumors[J].MethodsMol
6 538 激光生物学报第 24 卷 Biol,2009,472: [7] ZHOU Y H,TAN F,HESSK R,etal.Theexpresionof PAX6,PTEN,vascularendothelialgrowthfactor,andepidermal growthfactorreceptoringliomas:relationshiptotumorgradeand survival[j].clincancerres,2003,9(9): [8] QUS,YAOY,SHANGC,etal.MicroRNA 330isanoncogen icfactoringlioblastomacelsbyregulatingsh3gl2gene[j]. PLoSOne,2012,7(9):e [9] DOLECEKTA,PROPPJM,STROUPNE,etal.CBTRUS statisticalreport:primarybrainandcentralnervoussystemtumors diagnosedintheunitedstatesin [J].NeuroOncol, 2012,14(Suppl5):v1 49. [10] SIMPSONTI,PRICEDJ.Pax6;apleiotropicplayerinde velopment[j].bioesays,2002,24(11): [11] HARTA W,MELLAS,MENDRYCHOWSKIJ,etal.The developmentalregulatorpax6isesentialformaintenanceofis letcelfunctionintheadultmousepancreas[j].plosone, 2013,8(1):e [12] LINJ,TEOS,LAMDH,etal.MicroRNA 10bpleiotropical lyregulatesinvasion,angiogenicityandapoptosisoftumorcels resemblingmesenchymalsubtype ofglioblastoma multiforme [J].CelDeathDis,2012,3(10):e398. [13] MAYESDA,HUYJ,TENGY,etal.PAX6suppresesthe Invasivenesofglioblastomacelsandtheexpresionofthema trixmetaloproteinase 2 gene[j]. CancerRes,2006,66 (20): [14] ZHOUYH,HUYJ,MAYESD,etal.PAX6suppresionof gliomaangiogenesisandtheexpresionofvascularendothelial growthfactora[j].jneurooncol,2010,96(2): [15] ZHOUYH,WUXS,TANF,etal.PAX6suppresesgrowth ofhumanglioblastomacels[j].jneurooncol,2005,71 (3): [16] LIL,LIB,ZHANG H,etal.Lentiviralvector mediated PAX6overexpresionpromotesgrowthandinhibitsapoptosisof humanretinoblastomacels[j].investophthalmolvissci, 2011,52(11): [17] ZONGX,YANGH,YU Y,etal.PosibleroleofPax6in promotingbreastcancercelproliferation and tumorigenesis [J].BMBRep,2011,44(9): [18] MENGB,WANGY,LIB.SuppresionofPAX6promotescel proliferationand inhibitsapoptosisin human retinoblastoma cels[j].intjmolmed,2014,34(2): [19] ZHAOX,YUEW,ZHANGL,etal.DownregulationofPAX6 byshrnainhibitsproliferationandcelcycleprogresionofhu mannon smalcellungcancercellines[j].plosone, 2014,9(1):e [20] QIUJF,ZHANGZQ,WANGY,etal.Lentivirus mediated RNAiknockdownofVEGFAinRKOcolorectalcancercelsde creasestumorformationandgrowthinvitroandinvivo[j].int JClinExpPathol,2012,5(4): [21] CHENCH,LAIJM,CHOUTY,etal.VEGFAupregulates FLJ10540andmodulatesmigrationandinvasionoflungcancer viapi3k/aktpathway[j].plosone,2009,4(4):e5052. [22] LIYW,LIYH,LIUYH,etal.PAX6,anoveltargetofmi crorna 7,promotescelularproliferationandinvasioninhu mancolorectalcancercels[j].digdissci,2014,59(3): [23] CHENGQ,CAOH,CHENZG,etal.PAX6,anoveltarget ofmir 335,inhibitscelproliferationandinvasioninglioma cels[j].molmedrep,2014,10(1): [24] MENGYB,ZOUQQ,LIUTQ.etal.MicroRNA 335inhib itsproliferation,cel cycleprogresion,colonyformation,and invasionviatargetingpax6inbreastcancercels[j].mol MedRep,2015,11(1):
材料 方法
生物技术通报 张发洲 杨慧兰 为了构建单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽 真核表达质粒 应用 技术从 株 的基因组中扩增 基因 并连接至真核表达载体 对阳性克隆进行菌落 酶切和测序鉴定后 成功构建了重 组质粒 用 转染试剂盒将重组质粒 转染至 细胞中 并用 及 检测其表达情况 结果显示 基因在 细胞中得到正确表达 真核表达质粒 的构建成功 为进 一步研究 对宿主细胞的影响奠定了基础 单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL
![12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL](/thumbs/91/106935627.jpg "12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL")
( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot
:TGF-β bfgf 23 KEY WORDS:transforminggrowthfactor-β ;basicfibroblastgrowthfactor; bonemarrow mesenchymalstemcels;eukaryoticexpressionvector; liposomet
2 ( )208 58 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)208,Vol.58No. TGF-β bfgf,, 2 (., 330006; 2., 5040) : -β (TGF-β ) (bfgf) (BMSCs), SD BMSCs Percol PCR TGF-β bfgf, pcdna3.(+), 3 BMSCs RT-PCR Westernblot
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
生物技术通报 材料 方法
生物技术通报 高曰文 朱耀明 王艳林 朱晨宇 秦烨 胡汉卿 韩钰 旨在探讨盐酸普鲁卡因 对人结肠癌 细胞 基因甲基化及表达的影响 应用巢式双重 甲基化特异性聚合酶链反应 检测盐酸普鲁卡因处理前后 细胞中 基因启动子的甲基 化水平 逆转录 聚合酶链反应 和蛋白印迹技术观察 细胞内 基因表达情况 检测发现人结肠癌 细胞中 基因存在甲基化 经盐酸普鲁卡因处理能够使 基因甲基化水平下降 和蛋白印迹分析结果显
期 唐 曦 胡 娅 徐炎华 等 $#' 通过下调 ( 抑制肺腺癌细胞系 &)#' 的迁移侵袭 微小 $%&#'$#' 已被证实是一种抑癌 -/$%& 可参与调控直肠癌 乳腺癌 卵巢癌等多种肿瘤细胞生长 转移和侵袭 从而发挥抑制肿瘤进 展的作用 有研究显示 $#' 在肺腺癌组织中 # 表达减少 但尚未
第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'&!& 基础研究 通过下调 抑制肺腺癌细胞系 的迁移侵袭 唐 曦 胡 娅 徐炎华 汪春林 邱 萍 王向辉 华中科技大学同济医学院附属荆州医院肿瘤科 湖北荆州 # 长江大学 医学院 湖北荆州 # 华中科技大学同济医学院附属荆州医院胸外科 湖北荆州 # 摘要 目的 探索微小 $%&#'$#' 是否通过下调 ( 抑制肺癌细胞系 &)#' 细胞的迁移和侵袭
材料 方法 载体构建 转基因植株的获得
生物技术通报 唐宏琨 曾洪梅 杨秀芬 邱德文 通过根癌农杆菌 介导转化法 将含有激发子基因 的植物表达载体 转化三生烟 获得了转基因烟草植株 用 检测确认了阳性转化株 用 杂交 和 杂交进一步证实了 基因的整合 转录和表达 对 代转基因阳性株进行 接种试验 结果显示 与非转基 因对照相比 表达 的烟草叶片枯斑数量减少 表明蛋白激发子基因 的表达提高了转基因烟草对 的抗性 激发子 基因 烟草 转化 材料
4 : pcdna3.1(+) ;PLV-EF1A-EGFP(2A) 30s,41 30s,72 2min,35 ; Puro ; TG1; (Hu min 1% manembryonickidney293cels); (Ma- din-darbycaninekidneyce
33 4 2017 6 CHINESEJOURNALOF VIROLOGY Vol.33 No.4 June 2017 1# 2#,, 2, 2, 1 3* 1*,, (1., 511436; 2., 510230; 3., 510663) : HEK-293-HA RT-PCR HA, pcdna3.1(+ ), pcdna3.1(+ )-HA pcdna3.1(+)-ha PLV-EF1a-EGFP(2A)Puro
第 卷 -.+$$$-+($-.(+"$(+$%"(+$#'$+(.$+*(.$+(%$%+.$$$+$$+-$( 7-($++$"$($(+'$+'$%*$$&$.$+$%+ $$".(+$+.$+'$+'( ".($#-$4$+" +'$".(+%+$$$++(* %$+$+$"(+'$%+$"
第 卷第 期 年 月 "## $%# - 基础医学 含 '- 野生及突变结合位点的胰岛素受体 '6,78&' 区报告基因载体的构建和鉴定 王美晨 王 璇 蓝 茜 李 癑 刘 莉 伊 静 李 靖 宋刘梅 马莎蕊 宁启兰 李冬民 西安交通大学医学部 遗传学与分子生物学系 环境与疾病相关基因教育部重点实验室 级临床医学七年制 级临床医学五年制 陕西西安 ( 摘要 目的 利用 6< *%&$%', :%''"D$"
国际肿瘤学杂志 2014 年 8 月第 41 卷第 8 期 JIntOncol,August2014,Vol 41,No edwithpcdna3.1 DCC.Results ThepopulationofcelstransfectedwithpcDNA3.1(+) DCCplasmid
628 ingprotein1asacoreregulatorofmek/erk pathway dependent genesignaturesincolorectalcancercels[j].plosgenet,2010,6 (12):e1001231. [12]TsofackSP,GarandC,SeredukC,etal.NONOandRALYproteins are required for
第 期 甘金华等 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 材料与方法 试剂及溶液
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 甘金华 邓薇 李进平 艾晓辉 中国水产科学研究院长江水产研究所 湖北荆州 武汉纺织大学环境与城建学院 湖北武汉 采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白 连接制备强力霉素 牛血清白蛋白 人工免疫抗原 并用同样方法将强力霉素与载体蛋白 连接制备人强力霉素 卵清白蛋白 人工包被抗原 经紫外扫描分析和动物免疫试验证实 强力霉素人工抗原合成成功
材料 材料和方法 人骨肉瘤细胞系 MG 63 和人成骨细胞系 hfob1.19 购自中科院上海细胞库 ; 质粒提取试剂盒 RNA 提取试剂盒 逆转录试剂盒 PCR 试剂盒及 Lipofectamine TM 2000 转染试剂盒购自 Invitrogen;MTT 购自 Sigma;Sp
1428 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013,29(8):1428 1432 [ 文章编号 ] 1000 4718(2013)08 1428 05 mir 335 靶向 Sp1 对人骨肉瘤 MG 63 细胞增殖的调控 王勇, 赵伟 ( 沈阳医学院附属中心医院骨四科, 辽宁沈阳 110024) [ 摘要 ] 目的 : 探讨 mir 335 对人骨肉瘤
第 期 焦霞 等 上调! 基因表达对肺腺癌细胞增殖与凋亡的影响 性肿瘤的发生发展 转移及血管形成 有望成为候选抑癌基因 但目前对其抑制肿瘤进展的具体机制尚不完全明了 本实验采用脂质体介导的稳定转染 将! 导入人肺腺癌, 细胞 经 1 筛选后获得稳定高表达! 的, 细胞克隆 观察该转基因细胞克隆 +
第 卷第 期 年 月 江苏大学学报 医学版!"#$%&#'#'$ #($ 上调! 基因表达对肺腺癌细胞增殖与凋亡的影响 焦霞 朱晓蔚 李顺龙 戴桂红 蒋小芹 姚娟 肖蔚 于鸿 泰州市人民医院 病理科 普外科 肿瘤科 江苏泰州 摘要 目的 建立稳定转染 7% 下游调节基因 7%' $#7#$#' ##;01 的, 细胞株 探讨! 对, 细胞增殖与凋亡的影响及其可能的分子机制 方法 经脂质体介导将含有!
标题
第 35 卷第 3 期 2014 年 9 月 FOREIGN MEDICALSCIENCESECTION OF MEDGEOGRAPHY Vol.35No.3 Sep.2014 189 基础医学 含 mir-497 野生及突变结合位点的胰岛素受体 mrna3 UTR 区报告基因载体的构建和鉴定 王美晨 3 1,2 1,2 1,2 1,2, 王璇, 蓝茜, 李玥, 刘莉, 1,2 1,2 伊静, 李靖,
中国临床医学 年 月 第 卷 第 期 )*8)$ 节 功能的影响 本课题组现有的蛋白激酶 如 酪蛋白激酶 蛋白激酶 等表达质粒都构建在 与 / 相同的载体 ) 质粒上 且携带相 同的 标签 这为利用表达标签的优势研究蛋 白激酶和 / 的相互作用带来了困难 因此 本研究将 / 构建到带 * 标签的 载
)*8)$ 中国临床医学 年 月 第 卷 第 期 2- 论 著 -0. 融合蛋白对 外显子 * 可变剪接的影响 缪世琛 屈舒婷 陆 颖 唐 啸 任梁梁 顾建兰 南通大学医学院 南通 摘要 目的 构建带 * 标签的 / 及其截断体质粒 探讨 */ 融合蛋白对 外显子 可变剪接的影响 方法 采用 /) 法扩增 / 基因及其各截断体 将扩增产物和载体 双酶切后回收 连接载体和目的片段 获得重组质粒 在 +
人结肠癌 细胞系为研究对象 抑制物 转染 细胞后 观察 细胞增殖能力及!" 基因表达变化情况 预测及验证靶向调控!" 基因的 #$ 为后续科研以及临床治疗提供新的思路 材料与方法 材料人结肠癌 细胞系 正常结肠上皮组织细胞系 #%&' 细胞系来源于中南大学湘雅医学院医学检验系实验中心 &' 培养液
对人结肠癌细胞系 细胞增殖及 基因表达的影响 林琳 周刘祥 王晓春 中南大学湘雅医学院医学检验系 湖南长沙 摘要 目的 探讨 "$ 对人结肠癌 细胞增殖及 ( 基因表达的影响 方法 运用实时荧光定量 )* 检测 细胞和正常结肠上皮组织 +*, 细胞中 "$ 与 ( "+- 的表达水平 "$ 抑制剂 $/$0$1 转染 细胞后 观察细胞增殖能力 及 "$ ( "+-"$ 表达水平 1 0% 检测 (
16 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.34No 合 RNA 干扰技术进一步研究其在肺癌发生及发展进程中的作用及机制 1 材料与方法 1.1 细胞系 质粒 菌株及主要试剂 A549 肺腺癌细胞和 HEK293T 人胚肾细胞购自北京协和医学院细胞中心 ; 感
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2014,34(10):15 21 DOI:10.13523/j.cb.20141003 人 ANKRD49 基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究和 RNA 干扰靶点的鉴定 庞 1 敏 2 王海龙 郭 3 民 郭 2 睿 (1 山西医科大学第一医院太原 030001 2 山西医科大学基础医学院太原 030001) (3 山西医科大学实验动物中心太原
262 肺癌是世界上发病率 致死率和复发率最高的 肿瘤疾病, 无论手术 放疗还是化疗都难以治愈 肺癌患者的五年生存率很低 因此, 探讨新的肺癌 [1,2] 治疗手段和方法迫在眉睫 CyclinD1 ( 细胞周期 [3] 蛋白 D1) 基因是一个新的致癌基因, 其在细胞周期从 G 1 期 (DNA 合
![262 肺癌是世界上发病率 致死率和复发率最高的 肿瘤疾病, 无论手术 放疗还是化疗都难以治愈 肺癌患者的五年生存率很低 因此, 探讨新的肺癌 [1,2] 治疗手段和方法迫在眉睫 CyclinD1 ( 细胞周期 [3] 蛋白 D1) 基因是一个新的致癌基因, 其在细胞周期从 G 1 期 (DNA 合](/thumbs/49/25608880.jpg "262 肺癌是世界上发病率 致死率和复发率最高的 肿瘤疾病, 无论手术 放疗还是化疗都难以治愈 肺癌患者的五年生存率很低 因此, 探讨新的肺癌 [1,2] 治疗手段和方法迫在眉睫 CyclinD1 ( 细胞周期 [3] 蛋白 D1) 基因是一个新的致癌基因, 其在细胞周期从 G 1 期 (DNA 合")
生理学报 Acta Physiologica Sinica, June 25, 2011, 63(3): 261 266 http://www.actaps.com.cn 261 研究论文 CyclinD1 反义核酸诱导肺腺癌细胞 A549 的凋亡 李尊岭 1,*, 邵淑红 2, 谢书阳 1, 岳真 1, 马颖 1 1 滨州医学院生物化学与分子生物学教研室, 分子遗传学研究所 ; 2 应用心理学教研室,
# 杭州师范大学学报 自然科学版 年 材料和方法 主要仪器, (" 仪 杭州朗基公司 *&6 % 凝胶成像系统 上海天能科技 16 7 型 A 培养箱 9&72! 倒置相差显微镜 A %+9 荧光显微镜 A% &(7 " 数码照相系统 +6&)6 /* 流式细胞仪,&&+7 主要试剂 *7&; 试剂
第 卷第 期 年 月 杭州师范大学学报 自然科学版!"# "$%% &'" # & #! 表达载体构建及其表达对 ' 细胞增殖的影响 虞 游 张艳欧 赵文铖 白 坚 陈建明 杭州师范大学生命与环境科学学院 浙江杭州 # 摘 要 "* (" 扩增的 %!% 基因连接到 +8% * 载体并测序鉴定 经测序正确的 %!% 基因再连接到 +$.( 载体构建 +$.( 1.1# 重组质粒 重组质粒 +$.(
378 中华消化外科杂志 2012 年 8 月第 11 卷第 4 期 over expresionofpten wasobtainedandtransfectedintomkn28cels.thesurvivalofmkn28celsinthe transfectiongroupwassignifi
377 论著 PTEN PI3K/AKT 信号传导途径对胃癌细胞株 MKN28 凋亡的影响 许小涛陶泽璋宋启斌姚颐阮鹏 摘要 目的探讨 PTEN PI3K/AKT 信号传导途径对胃癌细胞株 MKN28 凋亡的调控作用及其机制 方法构建 PTEN 真核表达载体, 转染至胃癌细胞株 MKN28 中 ( 转染组 ); 同样方法转染空载体和等量的 PBS 分别作为阴性对照组和空白对照组, 检测对胃癌细胞株
! 马 纪等 ($ 过表达转基因小鼠质粒构建及其功能验证! 为 :;, 产品 逆转录试剂为 ), 产品 6 *, 为 * 产品 双荧光报告检测试剂盒为 ), 产品! 细胞株为本所保存 过表达载体的构建从 ( 数据上搜索找到 ($ +,,, 序 列 设计两对引物 表 分别用于 01) 基因上游, 区域
中国生物工程杂志! "# 过表达转基因小鼠质粒构建及其功能验证 马 纪 # 孙奋勇 张 越 # # 洪 岸 暨南大学生物工程研究所 广州 %& 上海市第十人民医院 上海 ' 广东省生物工程药物重点实验室 广州 %& # 基因工程药物国家工程研究中心 广州 %& 摘要 目的 比较两种 ($ 转基因小鼠过表达载体构建方法 为建立 ($ 过表达转基因小鼠奠定基础 方法 )( 扩增长约!*+ 的 +, $
标题
第 34 卷第 6 期西南大学学报 ( 自然科学版 ) 2012 年 6 月 Vol.34 No.6 JournalofSouthwestUniversity (NaturalScienceEdition) Jun. 2012 文章编号 :1673 9868(2012)06 0041 04 乙型肝炎病毒外膜蛋白真核 1 表达质粒的构建和表达 王丹, 童师雯, 张红敏, 李宏, 胡鹏, 杨轶轩, 张大志,
第 4 期 汪晶莹, 等. 上调双特异性磷酸酶 2 表达对胶质瘤细胞增殖凋亡及 STAT3 信号通路的影响 297 胶质瘤是人脑最常见的原发性肿瘤之一, 根据 WHO 分型分为 Ⅰ Ⅳ 型 [1] 目前胶质瘤的治疗仍以手术联合放疗 化疗的综合治疗为主, 但对于恶性程度较高的胶质瘤治疗效果仍然欠佳,
![第 4 期 汪晶莹, 等. 上调双特异性磷酸酶 2 表达对胶质瘤细胞增殖凋亡及 STAT3 信号通路的影响 297 胶质瘤是人脑最常见的原发性肿瘤之一, 根据 WHO 分型分为 Ⅰ Ⅳ 型 [1] 目前胶质瘤的治疗仍以手术联合放疗 化疗的综合治疗为主, 但对于恶性程度较高的胶质瘤治疗效果仍然欠佳,](/thumbs/93/112283381.jpg "第 4 期 汪晶莹, 等. 上调双特异性磷酸酶 2 表达对胶质瘤细胞增殖凋亡及 STAT3 信号通路的影响 297 胶质瘤是人脑最常见的原发性肿瘤之一, 根据 WHO 分型分为 Ⅰ Ⅳ 型 [1] 目前胶质瘤的治疗仍以手术联合放疗 化疗的综合治疗为主, 但对于恶性程度较高的胶质瘤治疗效果仍然欠佳,")
第 27 卷第 4 期 2017 年 7 月 江苏大学学报 ( 医学版 ) JournalofJiangsuUniversity(MedicineEdition) Vol.27 No.4 Jul.2017 上调双特异性磷酸酶 2 表达对胶质瘤细胞增殖凋亡及 STAT3 信号通路的影响 汪晶莹, 陈华标 ( 江苏大学医学院, 江苏镇江 212013) [ 摘要 ] 目的 : 探讨双特异性磷酸酶 2(DUSP2)
150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as
![150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as](/thumbs/88/114888322.jpg "150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as")
微生物学通报 JAN 20, 2009, 36(1): 149~153 Microbiology tongbao@im.ac.cn 2009 by Institute of Microbiology, CAS 生物实验室 人 SmD1 抗原的酵母真核表达及其初步应用 * 杨湘越吴文冰兰小鹏 ( 350025) 摘要 : 通过 PCR 扩增 Sm D1 基因, 与酵母表达载体 ppic9k 重组, 构建表达质粒
细 胞 生 物 学 实 验 指 导 细 胞 生 物 教 研 室 目 录 实 验 一 动 物 细 胞 的 基 本 形 态 观 察 和 显 微 测 量 1 实 验 二 线 粒 体 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 4 实 验 三 液 泡 系 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 6 实 验 四 细 胞 生 理 活 动 的 观 察 7 实 验 五 细 胞 组 分 的 化 学 反 应
第 期 黄雪莲等 响应面优化绿色木霉菌培养基 材料与方法 菌种 仪器与试剂 菌种的活化 单因素试验 响应面优化试验 优化工艺的验证 数据处理 结果与分析
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 响应面优化绿色木霉菌培养基 黄雪莲 于新 仲恺农业工程学院轻工食品学院 广东广州 利用响应面分析法对绿色木霉菌的培养基进行优化 通过测量不同营养条件下绿色木霉 菌落生长直径研究其生物学特性 在单因素实验的基础上 选定葡萄糖添加量 丙氨酸添加量和磷酸二氢钾添加量 个因素进行中心组合实验 建立二次回归方程 并应用响应面分析法进行优化 结果表明 绿色木霉菌最佳培养基为葡萄糖
浙 江大 学 学 报 农业与生命科学版 ５０ ０ 第３６卷 Ａ 烟草 ＢＹ ２ 细胞原生质体 Ｂ 烟草 ＢＹ ２ 细胞原生质体活力染色结果 Ｃ 蚕豆叶肉细胞原生质体 Ｄ 蚕豆叶肉细胞原 生质体活力染色结果 ｂａｒ ２５ μ ｍ Ｅ 烟草 ＢＹ ２ 细胞原生质体中微丝骨架的分布 Ｆ 图 Ｅ 在透射光下的成像 Ｇ 蚕豆叶肉 细胞原生质体中微丝骨架的分布 Ｈ 图 Ｇ 在透射光下的成像 ｂａｒ １０ μ ｍ
期 余钧辉 孙学军 郑见宝 等 %&' 通过 )# ",#-# 信号通路促进结肠癌细胞的增殖 结直肠癌是目前最为常见的恶性肿瘤之一 其全球范围的综合发病率在恶性肿瘤中男性排名第 女性排名第 近年来随着生活水平的提高 饮食习惯的改变 结直肠癌的发病率在我国呈逐年增长的趋势 年 我国结直肠癌新发病例数
第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'& & 基础研究 通过 信号通路促进结肠癌细胞的增殖 余钧辉 孙学军 郑见宝 王 炜 杨 魁 魏光兵 西安交通大学第一附属医院普通外科 陕西西安 $ 摘要 目的 探讨 %&' 对结肠癌细胞增殖的影响 并初步探讨其分子机制 方法 用生长曲线实验和 %% 法检测 %&'# 对结肠癌细胞 (% 增殖的影响 流式细胞仪检测 %&' 对结肠癌细胞周期的影响
赵明娜等 : IQGAP1 通过 ERK 信号通路促进非小细胞肺癌细胞增殖 肺癌是我国癌症相关死亡的首要原因 [1] 肿瘤 异质性 早期难以发现以及高复发率导致肺癌患者 5 年总生存率仅为 1% [2] 非小细胞肺癌 (non-small cell lung cancer, NSCLC) 约占肺癌总
![赵明娜等 : IQGAP1 通过 ERK 信号通路促进非小细胞肺癌细胞增殖 肺癌是我国癌症相关死亡的首要原因 [1] 肿瘤 异质性 早期难以发现以及高复发率导致肺癌患者 5 年总生存率仅为 1% [2] 非小细胞肺癌 (non-small cell lung cancer, NSCLC) 约占肺癌总](/thumbs/90/102081169.jpg "赵明娜等 : IQGAP1 通过 ERK 信号通路促进非小细胞肺癌细胞增殖 肺癌是我国癌症相关死亡的首要原因 [1] 肿瘤 异质性 早期难以发现以及高复发率导致肺癌患者 5 年总生存率仅为 1% [2] 非小细胞肺癌 (non-small cell lung cancer, NSCLC) 约占肺癌总")
中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 21, 8(): 2 8 DOI: 1.11844/cjcb.21..5 研究论文 IQGAP1 通过 ERK 信号通路促进非小细胞肺癌细胞增殖 赵明娜娄加陶 * ( 上海交通大学附属胸科医院检验科, 上海 2) 摘要该研究探讨了 IQGAP1(IQ domain GTPase-activating protein
程汉良 夏德全 吴婷婷 孟学平 吉红九 董志国 陈淑吟 对文蛤 青蛤 硬壳蛤 江户布目蛤 薄片镜蛤 和菲律宾蛤仔 种帘蛤科贝类和 个地理种 群文蛤 大连 连云港 湛江 防城港 的细胞色素 氧化酶亚基 基因片段的核苷酸序列进行了分析 以探讨这一序列在种质鉴定 种群遗传结构和分子系统发生研究中的应用价值 测序结果 表明 所有物种扩增片段长度均为 序列 含量 明显高于 含量 物种间共有变异位点 个 其中简约信息位点
220 江苏大学学报 ( 医学版 ) 第 27 卷 presionofrsk2genepromotedtheproliferationofsmmc 7721cels(P<0.01).Flowcytometryre sultsshowedthatrsk2genesilencingblockedthec
第 27 卷第 3 期 2017 年 5 月 江苏大学学报 ( 医学版 ) JournalofJiangsuUniversity(MedicineEdition) Vol.27 No.3 May2017 RSK2 基因对肝癌 SMMC 7721 细胞增殖与凋亡的影响 FarmanAli 1,2, 何大伟 3, 何敖林 3, 李莎莎 3, 周明慧 3 2, 王炳芳 (1. 江苏大学医学院, 江苏镇江
untitled
DAB 70 1 S-100 2 3 EMA 4 Ig κλ B B Ig κ+/λ+ Ig κ+λ+ bcl-2 90% bcl-2 bcl-2 5 6 7 8 c-erb-2cmycp53 nm23 EGFR PCNAKi-67 Ki-67 PCNA EGFR 9 10 6 T B 10 CMVHPVHSV HBV 1 1.1 5~10 1.2 1~2ml HankRPMI-1640 500r/min
858 刘晓军, 等. 前列腺特异抗原 3 慢病毒表达载体的构建与包装 的表达后可影响其增殖 [2-3], 但 PCA3 的过表达对前列腺癌细胞是否有作用还尚未研究 本文通过 PCR 扩增 PCA3, 然后克隆到真核表达载体 pcdh-cmv-mcs-ef1-copgfp 中, 目的是构建重组质粒,
![858 刘晓军, 等. 前列腺特异抗原 3 慢病毒表达载体的构建与包装 的表达后可影响其增殖 [2-3], 但 PCA3 的过表达对前列腺癌细胞是否有作用还尚未研究 本文通过 PCR 扩增 PCA3, 然后克隆到真核表达载体 pcdh-cmv-mcs-ef1-copgfp 中, 目的是构建重组质粒,](/thumbs/92/110991495.jpg "858 刘晓军, 等. 前列腺特异抗原 3 慢病毒表达载体的构建与包装 的表达后可影响其增殖 [2-3], 但 PCA3 的过表达对前列腺癌细胞是否有作用还尚未研究 本文通过 PCR 扩增 PCA3, 然后克隆到真核表达载体 pcdh-cmv-mcs-ef1-copgfp 中, 目的是构建重组质粒,")
中国癌症杂志 2013 年第 23 卷第 11 期 CHINA ONCOLOGY 2013 Vol.23 No.11 857 前列腺特异抗原 3 慢病毒表达载体的构建与包装 刘晓军 1 王娜 2 姚旭东 1 曹达龙 1 1. 复旦大学附属肿瘤医院泌尿外科, 复旦大学上海医学院肿瘤学系, 上海 200032 ; 2. 复旦大学附属肿瘤医院肿瘤研究所, 复旦大学上海医学院肿瘤学系, 上海 200032
Really Good Antibodies Bethyl 二抗产品册 超过 670 种抗小鼠 兔子 山羊和大鼠的二抗 bethyl.com
Really Good Antibodies Bethyl 二抗产品册 超过 670 种抗小鼠 兔子 山羊和大鼠的二抗 bethyl.com Bethyl 公司 Bethyl Laboratories, Inc. ) 成立于1972年 一直秉承改善生活的理念致力于科学研究的理念 提供高质量的抗体产品 和抗体定制服务 Bethyl所销售的每一个抗体都是在德克萨斯州的蒙哥马利的唯一工厂生产 并且都经过Bethyl
第 37 卷第 19 期 2015 年 10 月 15 日 第三军医大学学报 J Third Mil Med Univ Vol.37,No.19 Oct DOI: /j 论著 MicroRNA 193b 对 K562 细
1955 DOI:10.16016/j.1000 5404.201501238 论著 MicroRNA 193b 对 K562 细胞 bcr/abl 表达的影响 舒燕, 齐杰玉, 王灿蔚, 于淑静, 陶? (400016 重庆, 重庆医科大学基础医学院免疫学教研室, 分子医学与肿瘤研究中心 ) [ 摘要 ] 目的用 Ad pre mirna 193b 重组腺病毒感染 K562 细胞, 探讨 mir
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
PCR PCR PCR RT-PCR PCR (Polymerase Chain Reaction,PCR) 80 DNA, DNA PCR PCR PCR DNA PCR -- -- DNA DNA 93 DNA PCR DNA DNA ( ) DNA 55 DNA DNA -- TaqDNA dntp DNA -- -- PCR PCR DNA DNA Y (1 X) n Y DNA X (Y)
PCR专题改.doc
Primer3 http://frodowimitedu/cgi-bin/primer3/primer3_wwwcgi Primer5 Oligo665 Primer5 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=38536 Oligo667 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=40898 1 PCR 1
儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 耳鼻咽喉科学 ( 专业学位 ) 非定向 全国统考
2017 年医学院 ( 含转化院 遗传所 ) 硕士研究生上线考生名单 准考证号 报考专业 外语政治 业务 1 业务 2 总分 报考类别 考试方式 备注 103357000912484 72 72 242 0 386 非定向 全国统考 103357000912003 71 72 242 0 385 非定向 全国统考 103357000911503 77 73 234 0 384 非定向 全国统考 103357000911098
标题
吉林农业大学学报 ２０１６ ３８ １ ８７ ９１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｔｔｐ ｘｕｅｂａｏ ｊｌａｕ ｅｄｕ ｃｎ Ｅ ｍａｉｌ ｊｌｎｄｘｂ ｖｉｐ ｓｉｎａ ｃｏｍ 神 经 生 长 因 子 ｍｒｎａ 在 鹅 等 级 前 卵 泡 中 的 表达 刘璐璐 隋玉健 朱海洋 武惠岩 杨 辉 孙永峰 吉林农业大学动物科学技术学院 长春 １３０１１８
卷 期 %"' "'" '# 草 业 科 学!! "#$"%" "& 植物生产层 林烟草 个防卫反应信号蛋白编码基因的 克隆及 植物表达载体的构建 路子峰 " 张超 " 李彦忠 草地农业生态系统国家重点实验室兰州大学草地农业科技学院 甘肃兰州 " " 中国农业科学院生物技术研究所 北京 % 摘要 为
卷 期 %"' "'" '# 草 业 科 学 "#$"%" 植物生产层 林烟草 个防卫反应信号蛋白编码基因的 克隆及 植物表达载体的构建 路子峰 " 张超 " 李彦忠 草地农业生态系统国家重点实验室兰州大学草地农业科技学院 甘肃兰州 " " 中国农业科学院生物技术研究所 北京 % 摘要 为了分析林烟草 基因对烟草花叶病毒 ()**+ ) *, -./ 产生抗性的信号途径 培育抗 / 植物新品种 选取!"#
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pegfp-n/tnfr 载体的构建及鉴定 叶顺传, 曾秋棠, 吴辉文, 吕云波华中科技大学同济医学院协和医院心研所, 湖北武汉 (430022) E-mail:yeshunchuan@gmail.com 摘要 : 目的 : 本研究旨在构建人肿瘤坏死因子受体 (TNFR ) 绿色荧光蛋白表达载体 pegfp-n/tnfr, 为研究 TNFR 细胞内转位奠定实验基础 方法 : 培养 U937 细胞,
自然科学版 预处理 视盘粗定位 视盘垂直坐标的粗定位 视盘水平坐标的粗定位
自然科学版 文章编号 视网膜图像中视盘的快速自动定位方法 赵晓芳 林土胜 李碧 摘 要 基于眼底视网膜血管的分布结构及视盘本身的特点 提出一种快速自动定位视盘的方法 首先根据视网膜血管的网络分布结构大致定位视盘的垂直坐标 然后根据视盘 的亮度信息及视盘与血管的关系来定位视盘的水平坐标 最后把视盘限定在以粗定位的视盘为中心的一个小窗口内 用 变换精确定位视盘中心 该方法不需要事先分割视网膜血管 也不需要对算法进行训练
干细胞和再生医学 科学学位 免考 免考 非定向 干细胞和再生医学 科学学位 免考 85 非定向 干细胞和再生医学 科学学位 免考 69 非定向 护理学 科学学位 免考 免考 非定向 护理学 科学学位
2018 年秋季报考博士上线考生名单 序号 准考证号 报考专业名称 学位类型外语成绩专业基础课成绩报考类别 备注 1 180371 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 2 180393 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 3 180427 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 4 180436 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 5 180474
2 和 p53 再生化合物 (reactivatorofp53andinductionof tumorapoptosis,rita), 三环噻吩衍生物, 是一种潜在的抗癌先导化合物 研究表明,RITA 与 p53 结合, 激活野生型 p53, 促进 p53 的累积 ; 同时在体内外抑制 p53 与
1 检测肿瘤凋亡和 p53 再生化合物对不同 p53 状态人脑胶质瘤细胞的生长抑制作用 论著 冯小丽 1, 何小艳 2#, 曾焕超 1, 宋鑫培 1, 肖维威 1 1, 吴清华 1. 南方医科大学公共卫生学院三级生物安全实验室, 广东广州 51515; 2. 南方医科大学南方医院神经外科, 广东广州 51515 摘要 : 目的探讨 p53 靶向小分子 RITA 对不同 p53 状态人脑胶质瘤细胞的生长抑制作用
960 第三军医大学学报,2018,40(11) htp://aammt.tmmu.edu.cn techniquewasusedtotreattheu 87MGcels(withhighexpresionofTRIM29),andthenthecelswere dividedinto3groups
959 DOI:10.16016/j.1000 5404.201802062 TRIM29 基因在胶质瘤中的表达及其对胶质母细胞瘤细胞 U 87MG 增殖与迁移的影响 王雨涛 1, 周济 2, 杨冬 1 1,3, 张云东 400042 重庆, 陆军军医大学 ( 第三军医大学 ) 第三附属医院 ( 野战外科研究所 ) 神经外科 1 ;100088 北京, 解放军火箭军总医院神经外科 2 3 ;401120
HGC27 MKN45 SGC7901 MGC803 BGC823 AGS GES μl ATCC RPMI X F12K Sigma SDS-PAGE PBS 4 d CCK-8 Tris-base Biosharp 10% CCK μ
516 1002-0217 2017 06-0516 - 05 3 1,2, 1, 1, 1 1. 210029 2. 244000 3 RT-PCR Western-blot RNA CCK-8 Western-blot P < 0. 05 P < 0. 001 LC3Ⅱ P < 0. 001 P62 P < 0. 001 3 R 735. 2 A DOI 10. 3969 / j. issn.
File
8-*+* P(M-3: (A 3-/* C&&= CC L ; = $%&& ( *+,-.*- / 0 1.*.% (1 223456 223476 89234:6 *+ 892345 ;$%*&,*$. (=* $%& (&* +, ( -%.* / 0, 1%&* 23& / (.* /& (& 43. >;/8>,8 ;>,@ABCD B;G,89 5678,99% :;=, ;,>,,
中 国 畜 牧 兽 医 卷 疱 脓疱 痂皮为主要特征 羊口疮不仅给中国畜牧业造成巨大的经济损失 而且严重威胁着人类的健康 $)% 属于痘病毒科副痘病毒属 病毒对乙醚和氯仿较敏感 紫外线照射可使其在短时间内失 活 病毒基因组全长约 8 中央编码区 $)$) 比较保守 $) 位于病毒基因组中部高度保守区
中国畜牧兽医! " # 羊口疮病毒,! 基因的真核表达研究 朱 姝 庞 峰 李国华 李亚颖 彭冬梅 杨小健 聂 鑫 曹瑞勇 王凤阳 杜 丽 海南大学农学院 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室 海口市动物基因工程重点实验室 海口! 摘 要 试验旨在扩增羊口疮病毒 0:'0/$)%1- 基因并进行真核表达 提取羊 $)% & 弱毒株基因组为模板 参照 (- 上 1- 的基因序列 利用 +,,+ 设计引物
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sirna-survivin 与 p53 共表达质粒的构建及对前列腺 1 癌细胞生长的影响 邵月婷 1, 邵晨 1, 刘亚男 1, 李晓洁 1, 汲坤 1, 张灵 1, 赵丹 1, 孙连坤 1, 赵雪俭 1, 徐德启 2, 胡嘉弟 3 1, 李扬 1 吉林大学白求恩医学院病理生理教研室, 长春 (130021) 2 美国食品与药品管理局,Bethesda (20892) 3 美国马里兰大学医学院,Baltimore
22 赵冰冰, 等. TIZ 基因过表达对卵巢上皮癌细胞生物学特性的影响 [KEY WORDS] Ovarian neoplasms; Tumor necrosis factor receptor-associated peptides and proteins; Zinc fingers; Gen
![22 赵冰冰, 等. TIZ 基因过表达对卵巢上皮癌细胞生物学特性的影响 [KEY WORDS] Ovarian neoplasms; Tumor necrosis factor receptor-associated peptides and proteins; Zinc fingers; Gen](/thumbs/92/109277383.jpg "22 赵冰冰, 等. TIZ 基因过表达对卵巢上皮癌细胞生物学特性的影响 [KEY WORDS] Ovarian neoplasms; Tumor necrosis factor receptor-associated peptides and proteins; Zinc fingers; Gen")
肿瘤 212 年 1 月第 32 卷第 1 期 TUMOR Vol. 32, January 212 www.tumorsci.org 21 基础研究 Basic Research DOI: 1.3781/j.issn.1-7431.212.1. 4 Copyright 212 by TUMOR TIZ 基因过表达对卵巢上皮癌细胞生物学特性的影响 赵冰冰, 张玮, 王琪, 阳志军, 李力广西医科大学肿瘤医院妇瘤科,
８０ 南昌大学学报医学版 ２０１７ 年 １２ 月 第 ５７ 卷第 ６ 期 节作用 大多数 ｍｒｎａ 通 过 ５ 端 第 ２ ８ 个 核 苷 瘤中的作用进行简单介绍 酸位置的 序 列 与 靶 向 ｍｒｎａ 分 子 ３ 端 ＵＴＲ 序 列 １ １ ｍｒｎａ ９６ 与乳腺癌 互补作 用 抑 制 其 翻 译
南昌大学学报医学版 ２０１７ 年第 ５７ 卷第 ６ 期 Ｊ Ｎ Ｕ ２０１７ Ｖ ５７Ｎ ６ Ｍ ７９ Ｍ ＲＮＡ 和 ＹＹ１ 对肿瘤的调控作用及相互间的影响 段 静 梅任美 陈厚文 熊丽霞 南昌大学基础医学院病理生理学教研室 南昌 ３３０００６ 摘要 Ｍ ＲＮＡ ｍｒｎａ 是 近 年 来 发 现 的 单 链 非 编 码 小 ＲＮＡ 通 过 与 靶 ｍｒｎａ 的 特 定 序 列 结 合 诱 导 靶
中国科学技术大学 材料工程 05 校外调剂 0870 化学工程 吉林大学 应用化学 05 校外调剂 0870 化学工程 四川大学 制药
045700000787 东北大学 07030 分析化学 05 校外调剂 07030 无机化学 68 66 94 04 34 063700000004 沈阳药科大学 07030 分析化学 04 校内跨专业调剂 070303 有机化学 73 56 9 00 30 0007008903 北京大学 0780Z 药学类 05 校外调剂 070303 有机化学 75 67 09 8 4 085750830 苏州大学
张 伟 等 + 基于 0. 的神经胶质酸性蛋白质自身抗体的血清含量测定及其在脑胶质母细胞瘤诊断中的应用 ;!1 诊断技术因其高昂费用而无法得到广泛应用 因而发展基于临床血液样本且价格相对低廉的脑胶质瘤检测手段成为必须 早在 1" 年 % 就发现唾 4 液酸乳四糖神经酰胺可用于恶性脑胶质瘤的检测 随后
;!" 复旦学报 医学版!"# 基于.7 & 的神经胶质酸性蛋白自身抗体的血清含量测定及其在脑胶质母细胞瘤诊断中的应用 张 伟 危 平 施 前 复旦大学生物医学研究院蛋白组学与系统生物学研究院 上海! 摘要 目的 发展基于 0. 的血清神经胶质酸性蛋白 ((, (%) '%. 自身抗体含量测定方法 用于脑胶质瘤患者的诊断 方法 克隆 12%' 基因至 ' = #' 载体 使用大肠埃希菌中纯化得到的.
何平
中国肿瘤生物治疗杂志 http://www.biother.org Chin J Cancer Biother, Dec. 2017, Vol. 24, No. 12 1392 DOI:10.3872/j.issn.1007-385x.2017.12.009 基础研究 ZNF148 可变剪切在结直肠癌发生发展中的作用 何平 1, 高显华 2, 许硕贵 2, 丁杰 2 2, 况飞 (1. 南昌大学第三附属医院普外科江西南昌
! 黄 芬等 过表达热休克蛋白 % 提高 *+ 细胞表达抗体的能力! 别转染表达抗 #* 的质粒 最后应用 234 ' 检测两组细胞表达抗 #* 的能力 结果显示 实验组细胞 * % 基因的表达量明显高于对照组细胞 过表达 * % 的 *+ 细胞组抗 #* 的表达量高于对照组细胞 5/$ 研究首次揭
中国生物工程杂志!" 过表达热休克蛋白 提高 细胞 表达抗体的能力 黄 芬 安小平 李 存 何彰华 张宝中 米志强 王 娟 童贻刚 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 北京 % 陕西师范大学生命科学学院 西安 %& 摘要 通过在中国仓鼠卵巢细胞 *+ 中过表达热休克蛋白 % 以提高其表达抗体的能力 首先从中国仓鼠基因组,-' 中扩取 * % 基因 构建真核表达质粒.,-'
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海洋无脊椎动物组织总 RNA 提取方法的探讨 冯政夫, 王琳, 李文侠, 部凡, 胡彦江, 朱伟 (, 266109) 摘要 : RNA 提取是分子生物学研究的基础实验, 由于海洋无脊椎动物组织结构以及体成分的特殊性, 导致现有的 RNA 提取方法不能完全胜任此工作 作者以刺参 (Apostichopus japonicus) 栉孔扇贝 (Chlamys farreri) 和凡纳滨对虾 (Litopenaeus
生命科学研究 房 蓓 武泰存 王景安 以玉米沈单 号为材料 用溶液培养的方法研究了缺锌 低锌和正常供锌对玉米生长发育的影响 进一步明确了一定量低锌比缺锌对玉米的伤害更大 并对其 同工酶谱及蛋白质表达进行了分析 结果表明 一定浓度的低锌培养使玉米生长受抑及受害最重 且地上部分比地下部分更敏感 低锌和缺锌处理时 种同工酶的酶谱和蛋白表达与正常供锌时均有明显的差异 尤其在一定量低锌浓度时 有些同工酶的表达增强或被特异性诱导
材料 方法
生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人
256 ( ) ratsinothergroupswerefedwithxiaochengqidecoctionplushungertoestablishthespleendeficiencysyndrome models.afterthemodelestablishingt
41 2 2015 3 ( ) JournalofJilinUniversity(MedicineEdition) Vol.41 No.2 Mar.2015 255 [ ] 1671-587Ⅹ(2015)02-0255-06 DOI:10.13481/j.1671-587x.20150210 12 1 2 (1. 430065; 2. 445000) [ ] : :60 SD 10 0.5 1.0
第 卷 期 # 年 ## 月 天津医科大学学报 :)6 ( ) >? < = ( # 对胃癌细胞凋亡影响的体外研究 ( 天津医科大学肿瘤医院消化肿瘤内科, 国家肿瘤临床医学研究中心, 天津市 肿瘤防治 重点实验室, 天津市恶性肿瘤临床医学研究中心, 天津 )!" #! 2 4"#$%
第 卷 期 # 年 ## 月 :)6( ) >?
标题
第 35 卷第 期西南大学学报 ( 自然科学版 ) 3 年 月 Vol.35 No. JouralofSouthwestUiversity (NaturalScieceEditio) Feb. 3 文章编号 :673 9868(3) 69 4 一类积分型 Meyer-KiḡZeler-Bzier 算子的点态逼近 赵晓娣, 孙渭滨 宁夏大学数学计算机学院, 银川 75 摘要 : 应用一阶 DitziaṉTotik
国际肿瘤学杂志 2014 年 9 月第 41 卷第 9 期 JIntOncol,September2014,Vol 41,No )to(37.71±2.52)(F=282.05,P<0.01).Theapoptosisratioofthetumorcelwhichtransfe
684 国际肿瘤学杂志 2014 年 9 月第 41 卷第 9 期 JIntOncol,September2014,Vol 41,No 9 [8]ZhangJY,LinMT,YiT,etal.ApoptosissensitizationbyEuphorbia factorl1 inabcb1 mediatedmultidrugresistantk562/adr cels [J].Molecules,2013,18(10):12793
# $ 234# #& 列腺癌组织和细胞中的表达 观察在前列腺癌细胞株中过表达 %% 对前列腺癌细胞凋亡的影响 并研究此过程细胞中一些凋亡相关蛋白的表达情况 材料与方法 材料 %% 和随机对照序列 广州市锐博生物科技有限公司 人前列腺永生化上皮细胞 6, 以及人前列腺癌细胞系 6<3%/ 和 中国武
现代泌尿外科杂志 #& 年 月第 # 卷第 期 #/ 基础研究 微小核糖核酸 对前列腺癌细胞凋亡的影响李森茂 李 昂 胡 嘏 余 羉 王少刚 叶章群 华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科 湖北武汉 %&&& #%#$$$&# #& # ::-323 @-7,=
高 云 钟良军 张源明 周晓欢 梁 平 徐 隽 探讨兔牙周炎对动脉粥样硬化炎性因子的影响及抗生素对其的作用 将 只雄性新西兰大白兔随机分为 组 组为对照组 组为牙周炎组 组为动脉粥样硬化组 组为牙周炎 动脉粥样硬化组 组为干预组 牙周炎 动脉粥样硬化 替硝唑组 各组分别按照实验设计进行相应干预处理 周末处死动物 检测牙周指标 血清中总胆固醇 三酰甘油 高密度脂蛋白胆固醇 低密度脂蛋白胆固醇 反应蛋白
< 1+1 <! " #$% &!"#$ %&' ( )( %&* ) + ), %&- )+. )../'0 ) 1 ) "' )!"#$%&' (1% ( )* " + + %,-.2(13/01 )' 扩增 &' 基因 煮沸获得铜绿假单胞菌 ) 基因组作为模板 ) )( 作为引物
213456!"# $ % # %557;&/55/?5,/ @@@!88>>!"#!$% &'()*+ 武汉市疾病预防控制中心 武汉 /&55, % 华中科技大学同济医学院病原生物学系微生物教研室 武汉 /&55&5 & 武汉市第十一医院 武汉 /&5555,- O ' 0 ' =! 6!, 2 M*34!. 5 '2 ' 0 0* 6) 7 88^9:;0, 6! 89-4 O?@ 7%58
肖仲清, 等. 沉默 DJ-1 基因表达对子宫内膜癌 Ishikawa 细胞增殖及凋亡的影响 925 此, 本研究拟选用子宫内膜癌 Ishikawa 细胞, 应用基因转染 RNA 干扰 实时荧光定量 PCR 蛋白质印迹法及 FCM 等分子生物学手段, 从细胞水平上探讨 DJ-1 对子宫内膜癌细胞增殖
924 基础研究 Basic Research www.tumorsci.org 肿瘤 2014 年 10 月第 34 卷第 10 期 TUMOR Vol. 34, October 2014 DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2014.11. 392 Copyright 2014 by TUMOR 沉默 DJ-1 基因表达对子宫内膜癌 Ishikawa 细胞增殖及凋亡的影响
标题
2017 年 9 月第 27 卷第 9 期 中国比较医学杂志 CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE September, 2017 Vol. 27 No. 9 研究报告 mir 143 通过负向调控 Bcl 2 抑制食管癌细胞的增殖 胡琛琛, 张 莉 ( 湖北省肿瘤医院重症医学科, 武汉 430079) 摘要 目的探讨 mir 143 通过负向调控 B 淋巴细胞瘤
htp://aammt.tmmu.edu.cn 第三军医大学学报,2017,39(17) 1735 目前, 结直肠癌是世界上第三大常见的恶性肿瘤 [1-2] 在美国, 其死亡率在癌症患者中高居第 2 位, 仅次于肺癌 [3] 当结直肠癌被早期诊断发现且未转移时, 通过手术可以治愈 但是, 仅有 39
![htp://aammt.tmmu.edu.cn 第三军医大学学报,2017,39(17) 1735 目前, 结直肠癌是世界上第三大常见的恶性肿瘤 [1-2] 在美国, 其死亡率在癌症患者中高居第 2 位, 仅次于肺癌 [3] 当结直肠癌被早期诊断发现且未转移时, 通过手术可以治愈 但是, 仅有 39](/thumbs/93/112406444.jpg "htp://aammt.tmmu.edu.cn 第三军医大学学报,2017,39(17) 1735 目前, 结直肠癌是世界上第三大常见的恶性肿瘤 [1-2] 在美国, 其死亡率在癌症患者中高居第 2 位, 仅次于肺癌 [3] 当结直肠癌被早期诊断发现且未转移时, 通过手术可以治愈 但是, 仅有 39")
1734 DOI:10.16016/j.10005404.201612168 下调 STYK1 基因表达可抑制结直肠癌细胞生长与侵袭 唐佳佳, 叶林 (400016 重庆, 重庆医科大学附属第一医院重症医学科 ) [ 摘要 ] 目的探讨 STYK1 基因下调对结直肠癌细胞 HCT15 增殖 凋亡和迁移以及 MEK/ERK 和 PI3K/AKT 信号通路的影响 方法采用基因干扰技术抑制结直肠癌细胞 HCT15
4 期曹佳, 等. PGC-1β 基因干扰载体的构建及其对乳腺肿瘤细胞增殖的影响 375 隆抗体,ab176328,Abcam,USA);GAPDH 抗体 ( 羊抗鼠单克隆抗体,2D4A7,Novus Biologicals, USA); 二抗 (HRP 羊抗兔 #7074 HRP 羊抗鼠 #707
374 宁夏医科大学学报 Journal of Ningxia Medical University 第 39 卷 4 期 2017 年 4 月 文章编号 :1674-6309(2017)04-0374-05 论著 PGC-1β 基因干扰载体的构建及其对乳腺肿瘤细胞增殖的影响 曹佳 1, 王曦 1, 严秀蕊 2, 金毅然 2 3, 王立斌 (1. 宁夏医科大学临床医学院, 银川 750004; 2.
中国畜牧兽医 7! " # 猪紧密连接蛋白 基因克隆及其, - 片段的筛选 曹丽华 王 萍 郝文艳 代小丽 陈培芳 石德顺 李湘萍 广西大学 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室 南宁 0 摘 要 试验旨在筛选有效抑制猪紧密连接蛋白 : 8' 基因表达的 5 # 干扰片段 为后期利
中国畜牧兽医 7 猪紧密连接蛋白 基因克隆及其 - 片段的筛选 曹丽华 王 萍 郝文艳 代小丽 陈培芳 石德顺 李湘萍 广西大学 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室 南宁 0 摘 要 试验旨在筛选有效抑制猪紧密连接蛋白 6-+-6:' 基因表达的 干扰片段 为后期利用 干扰技术深入了解 ' 基因在猪卵母细胞成熟过程中的功能奠定基础 本研究首先克隆了猪 ' 基因 并构建了其真核表达载体 而后筛选了有效抑制
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吴亦明 : '. ',,, -,,, -,., -..., -. - -.,, ( ),,,,,,,,,,,,,,,, :,,, :,, ; (, : ) :, ;,,,, ;, ; ;,,, -,,. %, %,,. %, ;. % ;. % (, : ),,, :,,,, (, : ),,,, -,, (, : ), -,,,,,,,,, - (, : ),,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,.
第 期 张玲 等 外源性 ( 基因在胃癌 B=( 细胞株中的表达及鉴定 公司 B=( 胃癌细胞株 中国科学院上海细胞库 胎牛血清 高糖 & & 美国 = 公司 胰蛋白酶 美国 /- 公司 (& # % ( 及 ( & # % 质粒 美国 5 =# # 公司 抗生素 = 美国 +- # 公司 反转录试
第 卷第 期 年 月 江苏大学学报 医学版! "# %&#' # ' 外源性 ( 基因在胃癌 B=( 细胞株中的表达及鉴定 张玲 高硕 张斌 王梅 许潇 钱晖 许文荣 江苏大学基础医学与医学技术学院 江苏镇江 江苏大学附属医院医学检验科 江苏镇江 摘要 目的 建立 ( 稳定转染的 B=( 细胞株 为 ( 基因在胃癌发生发展中的作用研究奠定基础 方法 采用脂质体介导法将 (& # % ( 及 (& #
北柴胡分泌道的发育及组织化学研究
Fu 334 武汉植物学研究第 26 卷 周亚福等 : 图版 I ZHOU Ya et a1. : Plate I . Fu 第 4 期周亚福等 : 北柴胡分泌道的发育及组织化学研究 335 周亚福等 : 图版 Ⅱ ZHOU Ya et a 1. : Plate Ⅱ l2 . Fu? 336 武汉植物学研究第 26 卷 周亚福等 : 图版 Ⅲ ZHOU Ya et a 1. : Plate m :
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Vol.9 No.3 2016 年 2 月 February 2016 酿酒酵母 GPD2 基因沉默表达载体的构建 王 斌 1, 苏秋琼 1, 冯佳乐 1, 叶晓丹 1, 薛婷 1, 陈由强 (1. 福建师范大学生命科学学院, 福州 350117; 2. 福建师范大学福建省发育与神经生物学重点实验室, 福州 350117) 1, 2* 摘要 : 根据 5 -UTR 的二级结构能够阻碍基因转录的原理,
124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na
![124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na](/thumbs/91/105785327.jpg "124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na")
河南农业科学,2013,42(2):123-127 JournalofHenanAgriculturalSciences PCR PRRSV CSFV PCV2,, (, 450011) : 根据 TaqMan 复合荧光探针设计原则, 应用 Primer5.0 和 Oligo6.0 软件设计检测猪繁殖 与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 猪瘟病毒 (CSFV) 和猪圆环病毒 2 型 (PCV2) 的特异性引物和探针,
celsco-culturedwithesfbutnotin MD-M-31celsculturedalone.InadditionFSP-1washighly expressedinthecancertissuewithco-growthofmd-m-31celsandesfinnudemicea
( )016 56 4 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)016Vol.56No.4 1-1 a b a a a ( a. ; b. 330006) : -l(fibroblast-specificprotein-1fsp-l) Transwel MD-M-31 ESF; RT-qPCR MD-M-31 ESF FSP-1 mrn ; MD-M-31
连接
502 南方医科大学学报 J South Med Univ 202;32(4) 基础研究 小鼠前列腺干细胞抗原的原核表达 纯化及抗原活性检测 董金凯 2 罗 津 3 阎瑾琦 2 张 亮 2 高江平 于继云 2 中国人民解放军总医院泌尿外科 北京 00853 2 军事医学科学院基础医学研究所 北京 00850 3 湖南省永州 市人民医院 湖南 永州 425000 摘要 目的 RT-PCR 扩增小鼠前列腺干细胞抗原
2017,37(6) 范梦恬等 : 趋化因子受体 CX3CR1 对人肝癌细胞 7721 和 HepG2 的作用及其机制的研究 23 LO2 细胞株由重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室保存备用 两种细胞均用含 10% 胎牛血清的 DMEM 高糖完全培养基培养, 置于 37 5%CO 2 的培养
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2017,37(6):22 30 DOI:10.13523/j.cb.20170604 趋化因子受体 CX3CR1 对人肝癌细胞 7721 和 HepG2 的作用及其机制的研究 范梦恬陈思成郭杨柳李亚孙艳婷李汪施琼 ( 重庆医科大学检验医学院临床诊断教育部重点实验室重庆 400016) 摘要目的 : 探究趋化因子受体 CX3CR1(C X3 Cmotifchemokinereceptor1,CX3CR1)
第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!" #$# # %&'& & 基础研究 缺氧诱导的肿瘤特异性基因治疗载体的靶向性鉴定 贺 赛 郑见宝 孙学军 陈南征 周培华 贾蓬勃 魏光兵 王 晖 姚建锋 禄韶英 西安交通大学医学院第一附属医院普通外科 陕西西安 $ 摘要 目的 检测本课题组已构建的
第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'& & 基础研究 缺氧诱导的肿瘤特异性基因治疗载体的靶向性鉴定 贺 赛 郑见宝 孙学军 陈南征 周培华 贾蓬勃 魏光兵 王 晖 姚建锋 禄韶英 西安交通大学医学院第一附属医院普通外科 陕西西安 $ 摘要 目的 检测本课题组已构建的缺氧诱导的 %&'% 基因启动子 '&%&'% 调控的基因表达载体调控元件的肿瘤特异性和对缺氧诱导的反应性
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生物工程学报 Chin J Biotech 2009, January 25; 25(1): 109-115 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn 2009 Institute of Microbiology, CAS & CSM, All rights reserved 医学与免疫生物技术
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生物工程学报 Chin J Biotech 2008, August 25; 24(8): 1367-1372 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn 2008 Institute of Microbiology, CAS & CSM, All rights reserved 研究报告
doc
724 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2010, 45 (6): 724 729 神经突触核蛋白 -γ 过表达降低肝癌细胞对抗微管药物的敏感性 1, 程世翔 2, 张赛 2, 张豪 1, 宋丹青 1, 王宇萍 1, 李玉环 游雪甫 1, 王跃明 1, 蒋建东 1* 1, (1. 中国医学科学院 北京协和医学院医药生物技术研究所, 北京 100050; 2. 中国人民武装警察部队医学院附属医院,
重庆理工大学学报 社会科学 ｑ ｊ ｍ Ａ ｍ ｍ ｍ Ｋ ｗ ＥＲＦｍ ｑ 缩减 数据的准确性可得到保障 此外 一引言 随着我国对生态文明建设的重视建设资源节约 型和环境友好型社会成为国家发展的一大任务 随着我国经济的不断发展和人们生活水平的 因此环保 绿色也会成为各个行业未来发展的一 提高 尤其
经济 管理 重庆理工大学学报 社会科学 年第 卷第 期 Ｊ Ｃ ｑ Ｕ Ｔ Ｖ Ｎ ｊ 基于 ＥＲＦ模型的我国快递行业服务质量 评价指标体系研究 梁 雯王媛媛 安徽大学 商学院合肥 摘要 以绩效感知服务质量模型 ＥＲＦ模型 为基础 并结合先前学者的研究 利用问卷 调查和探索性因子分析设计出由 个指标构成的快递服务质量评价体系 并将它们分别归为 和 个一级维度 个维度的命名并不是严格按照原有 模型 而是结合实际调查数据分析进行相应调整的结果
- 西安交通大学学报 医学版 第 卷 舌鳞状细胞癌是口腔颌面部常见的恶性肿瘤之一 占全身癌的 占头颈部癌的 + ++ 占口腔癌的 + 居口腔癌之首 近年来舌癌的发病率越来越高 患者的生存率却无明显改善 人们对其关注度也随之增加 基因治疗已经成为对放化疗效果不满意的肿瘤患者的一种新的治疗探索 白细胞介
第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'&!& 基础研究 基因联合二萜生物碱对舌鳞癌细胞的增殖抑制与促凋亡作用 胡雅琳 侯美玲 郑文娇 张泽南 何韶衡 李志刚 锦州医科大学 研究生院 附属第一医院变态反应与临床免疫研究中心 附属第二医院口腔修复科 辽宁锦州 摘要 目的 探讨人 #$% 基因联合二萜生物碱对舌鳞癌细胞 &' 的增殖抑制与促凋亡作用 方法 构建 % %#$% 质粒
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誰 的 債 券 利 率 下 行 最 多? 一 方 面, 不 同 行 業 債 券 融 資 結 構 存 差 異 ; 另 一 方 面, 不 同 行 業 受 益 於 不 同 債 券 品 種 收 益 率 的 下 行 綜 合 而 言, 紡 織 服 裝 食 品 飲 料 行 業 受 益 較 大, 其 中 紡 織 服
2015 年 12 月 16 日 宏 觀 經 濟 尋 找 高 負 債 風 險 下 的 幸 運 兒 融 資 成 本 節 約 的 分 行 業 測 算 負 債 有 多 大? 非 金 融 上 市 企 業 總 負 債 約 23 萬 億, 有 息 負 債 達 10.5 萬 億 有 息 負 債 增 長 腳 步 雖 已 放 緩, 但 有 息 負 債 率 居 高 不 下,12 年 至 今 維 持 在 近 30% 的
标题
2018 年 4 月第 38 卷第 4 期文章编号 : 1001 6325 ( 2018 ) 04 0475 05 基础医学与临床 Basic & Clinical Medicine April 2018 Vol.38 No.4 研究论文 sirna 靶向抗酶抑制剂 下调前列腺癌细胞 PC3 中鸟氨酸脱羧酶表达 金涛 1 ꎬ 李倩 2 ꎬ 欧洁 3 ꎬ 王艳林 2 2ꎬ 3 ꎬ 吴红艳 (1 三峡大学人民医院
2015内镜杂志-WMD.FIT)
第 27 卷第 10 期 中国现代医学杂志 Vol. 27 No.10 2017 年 5 月 China Journal of Modern Medicine May 2017 DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2017.10.006 文章编号 : 1005-8982(2017)10-0030-05 抑制 2 基因启动子甲基化促进乳腺癌细胞凋亡的研究 樊艳 ( 河南省中医院乳腺科,
2183 (colagentypeialpha1,col1a1) 是细胞外基质 (ex tracelularmatrix,ecm) 的重要组成成分, 对细胞的黏附和分化有重要作用, 研究发现,COL1A1 基因在乳腺导管癌和乳腺小叶癌中均有不同程度的高表达, 并且可能与乳腺癌的发生和转移存在一定相关
2182 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012,28(12):2182-2186 [ 文章编号 ] 1000-4718(2012)12-2182-05 靶向 COL1A1 基因的 shrna 对人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞增殖与凋亡的影响 余海浪 1, 刘安玲 1, 周珏宇 1, 孟伟 1, 郑文岭 2 1, 马文丽 ( 1 南方医科大学基因工程研究所,
医学研究杂志 年 月 第 卷 第 期 论 著 0+.%$. 0 1$.# 1,4 : (54!& ,6 8& 295,!&-,:478(4 4&5 &7-9! A, 5 7 *-42&54,,6:478(8(4! & + 7 (& !. (
5 &( $ *( 7 254, 7!8-&5,7968 254, 3&-& 2 4 5 * 4( 87 D7,- 0 ' @&-4&, %4!,5@,(5& 7 254-9(68 254, & 2&: 7;,(&-,5-4&-2 -( %7,!D7,- '' 0 7& C,> C +&-& 2 % 7,,(,&--,2&-4B&54,! (5782587 & >*7 ((4, *&5 7,6 2,*&74(,
1332 第 37 卷第 13 期 Results TheRIexpresionatmRNAandproteinlevelswassignificantlyincreasedinB16celstransfected withpires2egfpriplasmidcomprisedwiththeoth
1331 DOI:10.16016/j.10005404.201410010 论著 上调核糖核酸酶抑制因子对小鼠黑色素瘤 B16 细胞生长和凋亡的影响 潘湘阳 1, 彭源 2 1, 陈俊霞 (400016 重庆, 重庆医科大学基础医学院 : 细胞生物学与遗传学教研室 1, 第一临床学院 2 ) [ 摘要 ] 目的研究核糖核酸酶抑制因子 (ribonucleaseinhibitor,ri) 基因表达对小鼠黑色素瘤
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2 研究论文 1 μmol/l of LiCl and Ad-GFP-HepaCAM could reverse the inhibition effect of HepaCAM on protein expression levels of β-catenin, c-myc and cyclind
215-5-5 18:4 http://www.cnki.net/kcms/detail/31.235.q.21555.184.4.html 中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 215, 37(5): DOI: 1.11844/cjcb.215.5.31 HepaCAM 通过 Wnt/β-catenin 信号通路抑制膀胱癌细胞 T24 的增殖 万雪莲马菲菲马红莹吕长坤
考生编号政治政治分外语外语分科目 1 科目 1 分科目 2 科目 2 分总分专业代码专业名称考试方式报名号 思想政治理论缺考英语一 45 生物综合 38 生理学缺考 药理学全国统考 思想政治理论
100019008910001 思想政治理论缺考英语一 45 生物综合 38 生理学缺考 83 078006 药理学全国统考 110190172 100019008910002 思想政治理论 61 英语一缺考药学综合 ( 缺考生理学 51 112 078006 药理学全国统考 110199187 100019008910003 思想政治理论缺考英语一缺考生物综合缺考 生物化学与分子生物学 缺考 --
2011,31(1) 刘晓志等 : 利用 FRET 技术研究 Hepcidin 和 Fpn 相互作用 57 Taq 酶,T 4 DNA 连接酶, 限制性内切核酸酶为 TaKaRa 公司产品 ; 核酸分子质量 Marker 等为华美公司产品 ; 质粒小量提取试剂盒 胶回收试剂盒为上海华舜公司产品 ;
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2011,31(1):56?60 利用 FRET 技术研究 Hepcidin 和 Fpn 相互作用 1,2 刘晓志 3 赵会景 1,2 陈伟斌 1 常彦忠 1 段相林 (1 河北师范大学分子神经生物学及神经药理学研究所石家庄 050016) (2 华北制药集团新药研究开发中心石家庄 050050 3 石家庄市第四十一中学石家庄 050081)
福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析
福建农业学报 林 甦 朱春华 陈 珍 刘斌琼 施少华 江 斌 蔡国漳 林 羽 黄 瑜 甦 男 硕士 助理研究员 主要从事病毒学和动物传染病学研究 福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 福建农业学报 讨 论 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 责任编辑
42 研究论文 reduced. GRP78 may promote ECA-109 cell proliferation by regulating the cell cycle. Key words GRP78; over-expression; RNAi; proliferation; cel
中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2013, 35(1): 41 46 http://www.cjcb.org GRP78 在食管癌细胞 ECA-109 增殖过程中的功能研究 丁伟超 1,2,3 马岩岩 1,2 邱贤秀 1,2 王绍祥 1,2 王莹 3* 任哲 1,2* ( 1 暨南大学生物医药研究开发基地, 广东省生物工程药物重点实验室, 广州 510632;
WHO ---- ---- , 200 5% 8.6% 18.8% 200, 140 , MS MS 60 80 X 1999 WHO MS (2004.12) 1. BMI>25 >24 >28 BMI kg / m 2 2. 6.1mmol/L, 2h 7.8mmol/L 3. BP 140/90mmHg ( ) 4. TG 1.7 mmol/l /L HDL-C C