口服结肠定位给药系统 (oral colon-specific drug delivery system,ocdds) 是一种新型给药系统, 已成为近年来人们研究的重要对象利用这种新型靶向给药系统, 能增加结肠部位的局部药物浓度, 提高便秘溃疡性结肠炎出血性结肠炎以及结肠癌等局部大肠疾病的治疗

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1 大黄结肠靶向微丸在大鼠胃肠道内的分布及释放方法学研究张丹参 1,2 梅艳飞 2 宋晓敏 2 1 庄忠宝 1. 河北科技大学, 石家庄,050018, 中国 2. 河北北方学院, 张家口,075000, 中国 2 薛贵平摘要目的 : 研究大黄结肠靶向微丸在大鼠胃肠道内的分布和释药情况方法 : 将大黄结肠靶向微丸通过自制大鼠开口器灌胃给药, 分别于给药后不同时间点将大鼠处死, 剖取胃肠道, 观察微丸外观性状并计数, 计算给药后不同时间点微丸在大鼠各胃肠道内的分布率 ; 采用 HPLC 法分别测定剩余微丸中的芦荟大黄素大黄素和大黄酚的含量和大鼠各胃肠道组织及内容物中大黄素的含量, 计算累积释放度, 并绘制药物在各胃肠道中的药 - 时曲线, 评价其释药特性结果 : 微丸能完整地运动至大鼠结肠, 具有明显迟释效应, 给药 10~12 h 后结肠分布率达最高, 为 52.7%; 药物于 8~16 h 在盲肠和结肠具有较高的药物浓度, 最终释药量可达 88.99% 结论: 大黄结肠靶向微丸具有较好的结肠定位释药特性关键词大黄结肠靶向微丸 ; 大鼠 ; 胃肠道 ; 分布 ; 药物释放中图分类号 R944,R965 文献标识码 A 文章编号 : (2015) Study on the Distribution and Drug Releasing in Digestive Tract of Colon-Targeted Pellets of Rhubarb in Rats ZHANG Dan-shen 1,2,MEI Yan-fei 2,SONG Xiao-min 2,ZHUANG Zhong-bao 1,XUE Gui-ping 2 1. Hebei University of Science & Technology,Shijiazhuang,050018,China 2. Hebei North University,Zhangjiakou,075000,China ABSTRACT Objective:To investigate the conveying and drug release in vivo of colon target pellets of Rhubarb in rats. Methods:The rhubarb colon-targeted pellets were administered by homemade rat mouth gag. The rats were respectively killed at different time points after administering,and the gastrointestinal tracts were dissected. The appearance of pellets was observed and the sum of pellets were counted. The pellets distribution rates in the digestive tract in rats were calculated at different time point after administering. After the residue level of aloeemodin,emodin and chrysophanol in pellets were respectively determined by HPLC,also the emodin in rats,gastrointestinal tissue and content. The accumulative releasing was calculated and the drug concentration-time curve in the gastrointestinal tract was drawn,then the drug release property was evaluated. Results:The pellets were transferred to colon completely and obvious late release effect. The colon distribution rate could reach the highest after 10~12 h,52.7%. In 8~16 h, drugs had a high concentration in the cecum and colon. Final release dosage percentage was 88.99%. Conclusion:Rhubarb colon-targeted pellets possessed the characteristic of drug release in colon. KEY WORDS rhubarb colon-targeted pellets;rat;digestive tract;distributiont;drug releasing 基金项目 : 国家自然科学基金项目 (No ) 第一作者 : 张丹参, 女, 教授, 博士生导师 ; 研究方向 : 神经药理学 ;Tel: , zhangds2011@126.com 梅艳飞, 女, 硕士 ; 研究方向 : 药物制剂学 ; @qq.com 通讯作者 : 张丹参, 女, 教授, 博士生导师 ; 研究方向 : 神经药理学 ;Tel: , zhangds2011@126.com 20

2 口服结肠定位给药系统 (oral colon-specific drug delivery system,ocdds) 是一种新型给药系统, 已成为近年来人们研究的重要对象利用这种新型靶向给药系统, 能增加结肠部位的局部药物浓度, 提高便秘溃疡性结肠炎出血性结肠炎以及结肠癌等局部大肠疾病的治疗效果 ; 而且还可以通过药物在结肠缓慢释放, 发挥长效作用, 减少服药次数和剂量, 具有多种独特的优势 [1-3] 目前, 研究的 OCDDS 按照释药原理可以分为 : ph 依赖型时间依赖型酶依赖型和压力控制型等 [4] 但由于人体胃肠道环境复杂, 各类型 OCDDS 的影响因素较多, 单独应用局限性大因此, 在实际研究工作中, 常联合两种或两种以上的原理制备联合应用型 OCDDS [5-6], 以达到较为满意的结肠定位效果在前期的研究中, 本课题组以中药大黄为模型药物, 以海藻酸钠和果胶为酶触材料制备丸心, 外层包以肠溶衣制备了大黄 ph 依赖 - 酶触型结肠靶向微丸, 并进行了体外释放度的研究, 发现该制剂具有结肠定位释药的特性, 需对其体内评价作进一步的研究 OCDDS 的体内研究主要是考察制剂用于活体后 ( 动物或人体 ) 是否具备结肠靶向性胃肠道滞留时间以及在结肠部位的释药特征现国内外应用较多的是动 [7-8] 物在体实验和 γ- 闪烁扫描技术 [9], 通过绘制模型药物在胃肠道中的药 - 时曲线来间接评价药物在胃肠道内的释放, 以及采用 γ- 闪烁扫描技术观察制剂在人体胃肠道内的转运分布和释药等情况本实验通过自制开口器对大鼠灌胃微丸后, 于 24 h 内选取 9 个时间点分别处死大鼠, 剖取胃肠道, 观察微丸的分布和外观, 并测其胃肠道组织及内容物中大黄素的含量, 通过剩余微丸中药物的含量间接得到微丸在大鼠体内的累积释放度本实验的体内评价结果结合前期体外释药的研究将进一步确定所制微丸的结肠靶向性, 为今后该制剂的药效学评价奠定基础 1 材料和方法 1.1 实验材料药品与试剂大黄结肠靶向微丸, 实验室自制 ; 芦荟大黄素标准品, 批号 : , 纯度 97.8%, 购自中国食品药品检定研究院 ; 大黄素标准品, 批号 :P02N6F5299, 纯度 98%, 购自上海源叶生物科技有限公司 ; 大黄酚标准品, 批号 : , 纯度 99.6%, 购自中国食品药品检定研究院 ; 甲醇, 色谱纯, 批号 :145979, 购自 Fisher Scientific; 磷酸, 色谱纯, 购自天津市光复精细化工研究所 ; 氯化钠 (NaCl) 无水乙醇 (C 2 H 6 O) 等均为分析纯主要仪器 Waters e2695 高效液相色谱仪, 美国 Waters 公司 ;LE225D 电子分析天平, 德国 Sartorius 公司 ;WH- 861 漩涡混合器, 北京科尔德科贸有限公司 ;3K30 高速冷冻离心机, 德国 Sigma 公司 ;4-1S 高速离心机, 德国 Sigma-Sartorius 公司 ;FSH-2 型可调高速匀浆机, 江苏大地自动化仪器厂 ;KQ5200DV 型数控超声波清洗器, 昆山市超声仪有限公司 ;GM-100 津腾隔膜真空泵, 天津市腾达过滤器件厂实验动物 Wistar 大鼠, 各半, 体质量 (190±30)g, 合格证号 :SCXK( 京 ) , 购自北京华阜康生物科技股份有限公司 1.2 实验方法动物分组与给药取 Wistar 大鼠 54 只, 雌雄各半, 按时间点随机分成 9 组, 每组 6 只,3 雌 3 雄大鼠禁食不禁水 12 h 后, 将其固定于泡沫板上, 采用自制大鼠开口器打开大鼠口腔, 通过管口直径为 3 mm 的聚乙烯管将微丸送至大鼠咽部, 再缓慢注入 1.0 ml 蒸馏水, 让大鼠自己将微丸吞咽至胃部每只大鼠灌胃约 0.1 g 的微丸, 精密称定, 并对微丸计数 ( 以 N 总表示 ) 各组大鼠分别于给药后 h 时处死, 打开腹腔, 分别取胃小肠盲肠结肠各段胃肠道, 并置于冰上, 备用收集每只大鼠在给药后和处死前的粪便, 备用 [10] 微丸的转运及计数用小手术剪纵向剪开大鼠的胃小肠盲肠和结肠, 用镊子分拣出各段的微丸, 置滤纸上滚动吸去表面黏附物, 观察不同部位微丸的形态和外观并对其计数 ( 以 N X 表示 ) 后备用按照分布率 (%)=N X / N 总 100%, 计算给药后不同时间点微丸在大鼠各胃肠道内的分布率 HPLC 法含量测定的考察色谱条件 Hypersil GOLD aq 色谱柱 (250 mm 4.6 mm,5 μm), 流动相甲醇 -0.1% 磷酸 80 20, 检测波长 254 nm, 流速 1.0 ml min -1, 柱温 (30.0±0.5), 进样量 10 μl 生物样品的制备取出微丸后, 迅速分离出各段内容物, 并用适量冰生理盐水洗涤肠腔, 合并各段洗涤液及内容物 ; 洗净的各胃肠组织剪成小块, 装入西林瓶, 加 5 倍量的生理盐水匀浆,4 500 r min -1 离心 10 min, 取上清液 0.3 ml 于 1.5 ml 离心管中, 加 0.6 ml 甲醇漩涡振荡 2 min 后 -20 冷冻 12 h 沉淀蛋白, 再以 21

3 9 000 r min -1 离心 10 min, 取上清 0.7 ml, 加甲醇 0.7 ml, 振荡 30 s 后,9 000 r min -1 离心 10 min,0.45 μm 针头滤器过滤后, 得各胃肠组织样品液 ; 将取出的生理盐水内容物溶液超声 5 min,4 500 r min -1 离心 15 min, 取上清液 0.3 ml, 加 0.6 ml 甲醇漩涡振荡 2 min, 再以 r min -1 离心 10 min, 取上清 0.7 ml, 加甲醇 0.7 ml, 振荡 30 s 后,9 000 r min -1 离心 10 min,0.45 μm 针头滤器过滤后, 得各胃肠内容物样品液对照品溶液的配制精密称取芦荟大黄素大黄素和大黄酚标准品各 0.486,0.720,0.972 mg, 分别置于 10.0 ml 容量瓶中, 用色谱甲醇配成浓度为 48.6 mg L -1 的芦荟大黄素标准液,72.0 mg L -1 的大黄素标准液和 97.2 mg L -1 的大黄酚标准液三种标准液各精密吸取 1 ml 混合后, 用甲醇梯度稀释, 配制梯度浓度混合对照品溶液, 最终得到 6 组梯度混合对照液中各成分浓度如下 :1 芦荟大黄素 : mg L -1 ; 2 大黄素 : mg L -1 ;3 大黄酚 : , mg L -1 另取大黄素标准品, 精密称取 mg 置于 10 ml 容量瓶中, 用色谱甲醇配成浓度为 12.0 mg L -1 的大黄素标准液, 甲醇梯度稀释, 最终得浓度为 mg L -1 的大黄素梯度浓度对照品溶液大黄微丸供试品溶液的制备将大鼠腹部取出的微丸研细, 用 45% 的乙醇 20 ml 在 20 KHz 频率下超声提取 2 次, 每次 10 min, 每次提取后 r min -1 离心 10 min, 合并上清液于小烧杯中, 水浴挥干乙醇, 提取物加 5.0 ml 甲醇溶解, 用 1.0 ml 注射器吸取, 0.45 μm 针头滤器过滤, 得供试品溶液标准曲线的绘制用 1.0 ml 注射器分别吸取 6 组梯度混合对照液, 过 0.45 μm 针头滤器于进样瓶中, 每一浓度进样 3 次, 取平均值后求得各对照品峰面积为纵坐标 (Y), 各对照品梯度浓度为横坐标 (C), 绘制标准曲线精密吸取大黄素梯度浓度对照品溶液 1.0 ml, 置于 1.5 ml 离心管中, 挥去溶剂 ; 分别取大鼠胃小肠盲肠结肠空白组织和内容物, 按项下的方法处理后, 各取 1 ml 空白生物样品置于上述挥去溶剂的 1.5 ml 离心管中, 过 0.45 μm 滤膜后进样, 以大黄素峰面积 (Y) 对待测物梯度浓度 (C) 进行回归, 得到各生物样品的标准曲线方程和相关系数专属性实验分别取 6 只未给药大鼠的胃小肠盲肠结肠及各组织内容物, 按照项下的方法进行处理 ; 另将大黄素标准液 (12.0 mg L -1 ) 加入各空白生物样品中, 按照项下的色谱条件进样, 获得的空白生物样品和含药生物样品的色谱图 (Fig.1) 表明, 生物样品中的内源性物质不干扰待测物测定精密度和回收率的测定取各段胃肠道组织及内容物空白溶液, 加入不同浓度的大黄素标准液, 均分别配制成高中低 ( mg L -1 )3 个浓度的质控样品, 每个浓度平行操作 5 份, 以测定值与加入值的比值计算相对回收率 (n=5), 同时每个样品于 1 d 之内测定 3 次, 计算日内精密度 (n=5); 连续 3 批配制并测定上述浓度样品, 每日测定, 连测 3 d, 计算日间精密度 (n=3) 稳定性实验取各生物样品分别配制大黄素浓度为 mg L -1 的样品, 室温下放置, 在 h 分别测定 5 次, 以大黄素峰面积计算 RSD(n=5) 值上述 3 个浓度样品在 -20 冰箱中冷冻后取出, 室温融化测定,1 个月内反复冻融 2 次, 计算 RSD(n=3) 大黄结肠靶向微丸在大鼠胃肠道内的释放大鼠胃肠道中的药物分布的测定大鼠灌胃给药后, 于规定时间点将大鼠处死, 剖腹取出胃肠道内的微丸后, 按照项下的方法制备各生物样品, 在的色谱条件下进样, 测定大黄素的峰面积, 并根据项下所得大鼠各生物样品中大黄素测定的标准曲线分别计算出各时间点各胃肠道组织及其内容物中所含大黄素的含量 (μg), 并绘制大黄素药量 - 时间曲线 [10] 大鼠胃肠道内累积释放度的测定将大鼠腹部取出的微丸和粪便中的微丸分别按照项下的方法制备大黄微丸供试品溶液, 在的色谱条件下进样, 分别记录芦荟大黄素大黄素和大黄酚的峰面积, 根据项下所得的三种成分的标准曲线分别计算出芦荟大黄素大黄素和大黄酚的质量, 并将大鼠腹中剩余微丸中的三者之和记为 M 剩, 粪便微丸中的三者之和记为 M 粪, 根据给药前微丸中芦荟大黄素大黄素和大黄酚的总含量 M 总, 分别按照 RR=(M 总 -M 剩 )/ M 总 100% ( 粪便中无微丸 ) 和 RR=(M 总 -M 粪 -M 剩 )/(M 总 - M 粪 ) 100% ( 粪便中有微丸 ), 计算给药后不同时间点微丸在大鼠体内的累积释放度 (RR), 并以时间为横坐标累积释放度为纵坐标绘制释药曲线 2 结果 2.1 大黄结肠靶向微丸在大鼠胃肠道内的分布情况微丸给药后, 在胃部停留时间过长 (5 h 以上 ) 的少量微丸有轻微溶胀, 其余时间点胃部微丸未见明显变 22

4 化 ; 多数微丸都可以顺利通过胃和小肠中上段, 但位于小肠远端的微丸多数已失去了肠溶包衣, 且丸身有轻微溶胀, 但是微丸能完整进入结肠 ; 位于盲肠和近端结肠的微丸溶胀度最大, 但丸身仍然完整, 而位于远端结肠的微丸有体积回缩的趋势, 且微丸能随粪便排出体外, 随粪便排出的微丸体积和原药丸芯近乎相等或略有减小给药后不同时间点微丸在大鼠胃肠道内的分布, 见 Tab HPLC 法含量测定的考察结果标准曲线计算结果 HPLC 法测定剩余微丸含药量的三种对照品的标准曲线分别为芦荟大黄素 Y = C ,r 2 = , 线性范围 0.51~16.20 mg L -1 ; 大黄素 Y = C ,r 2 = , 线性范围 0.75~24.00 mg L -1 ; 大黄酚 Y = C , r 2 = , 线性范围 1.01~32.40 mg L -1 测定各胃肠道组织及内容物中大黄素含量的标准曲线线性范围和相关系数见 Tab.2 本方法中各生物 Tab.1 The distribution of pellets in rats gastrointestinal tract after administration at different times ( _ x±s,n=6) Time (h) Distribution of pellets (%) Stomach Small intestine Caecum Colon ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±1.4 Tab.2 Standard curve for the determination of emodin in each biological samples and the correlation coefficient Biological sample Linearity range(mg L -1 ) Regression equation r 2 gastric tissue 0.09~12.0 Y=33 580C alvine tissue 0.09~12.0 Y=33 567C cecal tissue 0.09~12.0 Y=33 529C colonic tissue 0.09~12.0 Y=33 546C gastric content 0.09~12.0 Y=33 579C alvine content 0.09~12.0 Y=33 562C cecal content 0.09~12.0 Y=33 531C colonic content 0.09~12.0 Y=33 552C

5 Fig.1 Liquid chromatogram of the specific test A:vacancy gastric tissue;b:vacancy gastric tissue + emodin;c:vacancy alvine tissue;d:vacancy alvine tissue + emodin;e:vacancy cecal tissue;f:vacancy cecal tissue + emodin;g:vacancy colonic tissue;h:vacancy colonic tissue + emodin;i:vacancy gastric content;j:vacancy gastric content + emodin;k:vacancy alvine content;l:vacancy alvine content + emodin;m:vacancy cecal content;n:vacancy cecal content + emodin;o:vacancy colonic content;p:vacancy colonic content + emodin;1:emodin. 24

6 样品的定量限为 0.04 mg L 方法学考察结果生物样品中的内源性物质不干扰待测物测定 (Fig.1) 日内精密度 RSD<5.8%, 日间精密度 RSD<7.3%, 回收率 98.1%~115.6%, 均符合生物样品分析要求室温稳定性 RSD 0.3~9.3%, 冻融稳定性 RSD 0.6~11.8% 2.3 大黄结肠靶向微丸在大鼠胃肠道内的释放情况大鼠各胃肠道组织及内容物药量 - 时间曲线大鼠灌胃微丸后,4 h 前在胃内没有释放, 但 4 h 后略有释放 ;3 h 时检测到小肠部位有释放 ;5 h 后, 当微丸进入盲肠和结肠后, 微丸开始较为持续大量释放药物,8~14 h 释药量稳定, 药物释放可维持至 24 h (Fig. 2) 微丸在大鼠体内的累积释放度随着微丸持续不断的转运至大鼠结肠, 微丸释药量也逐渐增加, 且从 5 h 开始结肠部位的释药量迅速增加, 最终释药量可达 88.99%(Fig. 3) 3 讨论本实验通过对微丸在大鼠体内的转运和释药情况的研究, 以探求其体内的结肠靶向释药性进行此项研究首先要解决的便是大鼠灌胃给药方法的问题笔 Fig.2 Dose-time curve of the gastrointestinal tissues and the contents in rats(n=6) Fig.3 Pellets cumulative release in rats(n=6) 25

7 者查阅了大量文献 [7,11-12], 发现大鼠灌胃微丸的方法多数为插胃管给药, 使用的胃管主要有两种, 一种是聚乙烯管, 一种是硅胶管, 管径为 2 mm 3 mm 但是从预实验结果来看,2 mm 3 mm 的硅胶管管径太大, 无法顺利插入体重在 200 g 左右大鼠的食道,1.5 mm 2.5 mm 的硅胶管虽然可以顺利插入, 但微丸只能一颗一颗的通过管道, 且很容易发生堵塞现象, 操作起来十分困难 ; 聚乙烯管材质较硬, 很容易对大鼠的食道和胃部造成损伤, 影响实验结果, 且也易发生堵塞现象如何寻找一种能让大鼠自己吞咽微丸的方法, 以更加真实的模拟人类口服用药的方法呢? 经过反复思考和多次尝试, 并根据家兔开口器的原理, 自制了一种大鼠开口器首先将大鼠在清醒状态下固定, 通过大鼠开口器将微丸送至大鼠咽部, 再缓慢注入少量水, 让大鼠自己吞咽下微丸, 从而得出了一种安全, 便捷, 快速, 有效的大鼠微丸给药方法, 成功解决了实验中大鼠给药难的问题大鼠服用微丸后各时间点的分布率显示 (Tab.1): 1 胃部 : 微丸在大鼠胃内的排空呈连续性, 排出 50% 约需 2~3 h, 完全排出约需 8~10 h;2 小肠 : 在给药 1 h 后即可检测到少量的微丸,3~5 h 分布可达峰值, 这说明微丸由于粒径较小, 可以通过闭合的幽门, 从而减少在胃内的滞留时间 [13] ;3 盲肠 : 在给药 3 h 后即有部分大鼠的盲肠内存在少量微丸, 说明微丸通过胃到达小肠后, 会以较快的速度转运, 约在 2 h 内经过整段小肠, 不会在小肠内滞留太长时间, 与当前对小肠转运的认识一致, 且在盲肠部位停留约 2~3 h;4 结肠 : 在给药 10~12 h 后结肠分布率可达最高, 但仅为 52.7%, 这是由于微丸可随粪便排出, 并不能在结肠完全降解这与前期所做的体外释放度考察的结果有所不同, 虽然有研究表明 [14], 作为降解多糖的主要细菌, 人体大肠中的拟杆菌和双歧杆菌的活菌数目与大鼠盲肠中的活菌数目相近, 但微丸并不能在大鼠结肠部位完全降解分析其原因可能与该大黄微丸的释药原理相关由于微丸丸芯所采用的辅料是海藻酸钠和果胶, 利用海藻酸钠和果胶能与 Ca 2+ 形成凝胶骨架的原理, 因此骨架溶蚀作用是释药的原理之一, 且又因两者均为多糖, 其酶降解也应发挥作用与体外释放相比, 大鼠结肠内的水分较少, 这无疑会不利于微丸骨架的溶蚀 ; 另外, 结肠细菌对多糖的降解是一个缓慢的过程, 可能导致了微丸在有限的时间内不能完全降解如何使药物在细菌的作用下尽快释放出来发挥药效仍需要进一步研究在测定大鼠胃肠道内药物含量时发现, 大鼠灌胃微丸后,4 h 前在胃内没有释放, 但 4 h 后略有释放, 结合解剖出微丸的形态推测个别微丸由于在胃内滞留时间过长, 使得微丸出现涨破包衣的现象, 从而略有释放 ;3 h 时检测到小肠部位有释放, 而此时转运较快的微丸已到达小肠远端, 运动至小肠远端的微丸已失去包衣, 少量药物从丸身细小的空洞中被缓慢释放出来 ; 当微丸进入盲肠和结肠后, 在上述两种因素作用下开始较为持续大量释放药物, 且药物于 8~16 h 在盲肠和结肠内具有较高的药物浓度经过前期的体外释放的研究以及本次大鼠在体实验体内释放的研究, 可以初步断定所制备的大黄结肠靶向微丸具有较好的结肠定位释药的特性, 达到了预期实验设计的目的参考文献 [1] Renaat Kinget,Willbrord Kalala,Liesbeth Vervoort,et al. Colon drug targetting [J]. J Drug Target,1998,6(2):129. [2] Abdul W Basit. Advances in colonic drug delivery[j]. Drugs,2005,65(14): [3] 任飞亮, 裴元英. 口服结肠定位释药系统的研究进展 [J]. 中国药学杂志,2005,40(17): [4] 张建伟, 刘力, 徐德生. 结肠定位释药系统的研究进展 [J]. 中国医院药学杂志,2013,33(21): ,1816. [5] 倪文娟, 张永生, 章文红, 等. 离心造粒包衣技术制备姜黄素 ph 依赖 - 时控型结肠靶向小丸 [J]. 中国现代医生, 2014,52(6):71-73,76. [6] 张勇钢, 揭晶. 苦参碱双敏感结肠定位小丸的制备及体外释放研究 [J]. 中国中药杂志,2014,39(9): [7] 杨志欣, 徐珍, 杜素美, 等. 5- 氨基水杨酸结肠定位渗透泵微丸在大鼠体内释药特性考察 [J]. 中国实验方剂学杂志, 2013,19(7):1-6. [8] Masataka Katsuma,Shunsuke Watanabe,Hitoshi Kawai, et al. Studies on lactulose formulations for colon-specific drug delivery[j]. Int J Pharm,2002,249(1-2): [9] Tuuli Marvola,Janne Marvola,Hanna Kanerva,et al. Neutron activation based gamma scintigraphic evaluation of enteric-coated capsules for local treatment in colon[j]. Int J Pharm,2008,349(1-2):24. [10] 谢兴亮, 韩丽, 杨明. 三种原理苦参结肠靶向微丸在大鼠体内转运及释药性能的对比研究 [J]. 中国医药生物技术, 2011,6(4): [11] 邹海艳, 王玉蓉, 姜丽. ph- 酶触型盐酸小檗碱结肠定位片大鼠体内的释药研究 [J]. 辽宁中医药大学学报,2011,13 (5): [12] 谢兴亮, 杨明, 韩丽. ph 敏感双层型苦参结肠靶向微丸在大鼠体内的药代动力学研究 [J]. 中国实验方剂学杂志, 26

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g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min 25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.