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1 第 39 卷 20 年 0 月 分 析 化 学 (FENXI HUAXUE) 仪 器 装 置 与 实 验 技 术 Chinese Journal of Analytical Chemistry 第 0 期 52~525 DOI:0.3724/SP.J 凹 面 光 栅 整 体 组 合 狭 缝 五 通 道 原 子 吸 收 式 血 液 五 分 析 仪 的 研 制 ( 大 连 医 科 大 学, 大 连 6044) 刘 娜 张 榕 * 2 2 ( 齐 齐 哈 尔 医 学 院, 齐 齐 哈 尔 6006) 摘 要 自 行 研 制 了 一 种 凹 面 光 栅 整 体 组 合 狭 缝 五 通 道 原 子 吸 收 式 血 液 五 分 析 仪, 用 于 人 全 血 中 5 种 元 素 Ca, Cu, Mg, Fe 和 Zn 的 测 定 采 用 支 五 空 心 阴 极 灯 作 为 光 源, 以 单 反 射 方 式 聚 焦 在 火 焰 中 心, 以 凹 面 光 栅 为 色 散 元 件 设 计 了 五 锐 线 通 过 的 整 体 组 合 狭 缝 采 用 顺 序 注 射 变 速 恒 流 在 线 稀 释 的 溶 液 注 入 方 式 为 消 除 干 扰 谱 线 对 钙 的 原 子 吸 收 的 影 响, 在 钙 狭 缝 上 覆 盖 422 nm 滤 光 片 设 计 了 该 分 析 仪 器 的 操 作 软 件, 适 合 于 血 液 五 分 析 和 仪 器 的 性 能 测 试 确 定 了 以 吸 收 峰 面 积 为 定 量 依 据, 以 mg/l 十 二 烷 基 苯 磺 酸 钠 和 mol/l HCl 组 成 血 液 稀 释 液 建 立 了 血 液 中 Ca, Cu, Mg, Fe 和 Zn 的 分 析 方 法, 相 对 标 准 偏 差 RSD <5%, 回 收 率 为 95.2%~98.7% 关 键 词 钙 ; 铜 ; 镁 ; 铁 ; 锌 ; 微 量 ; 血 液 ; 原 子 吸 收 引 言 钙 铜 镁 铁 和 锌 是 人 体 必 需 的 5 种 营 养 [], 简 称 血 液 五, 它 是 反 映 人 体 营 养 状 况 的 重 要 指 标 由 于 血 液 中 Ca 和 Mg 属 于 常 量, 而 Cu, Fe 和 Zn 属 于 微 量, 因 此 血 中 五 的 含 量 相 差 悬 殊, 并 且 基 体 成 分 复 杂, 个 体 差 异 大, 对 测 定 方 法 在 灵 敏 度 准 确 度 抗 干 扰 能 力 和 重 复 性 等 方 面 的 技 术 要 求 较 高 国 内 外 虽 有 关 于 血 液 五 分 析 仪 的 报 道, 但 设 计 上 仍 有 不 足 之 处 本 研 究 建 立 了 灵 敏 快 速 分 析 血 液 五 的 方 法 本 方 法 有 别 于 经 典 的 原 子 吸 收 方 法, 采 用 一 滴 血 ( 约 40 ml), 一 次 同 时 测 量 5 种, 用 于 微 量 缺 乏 症 的 检 查 本 研 究 为 了 改 善 Ca, Mg, Fe 测 定 的 线 性 范 围, 降 低 Cu 和 Zn 的 检 出 限, 采 用 顺 序 注 射 的 分 析 方 法, 实 现 在 线 稀 释, 提 高 测 量 的 重 复 性 本 方 法 的 特 点 是 测 定 条 件 稳 定 分 析 速 度 快 线 性 范 围 宽 灵 敏 度 [2,3] 高, 检 测 自 动 化 顺 序 注 射 分 析 是 一 种 易 于 自 动 控 制 的 溶 液 配 送 方 法, 适 用 于 操 作 复 杂 的 大 批 量 样 品 分 析, 消 除 了 由 于 实 验 条 件 实 验 环 境 以 及 人 为 等 难 以 控 制 因 素 的 干 扰, 特 别 适 用 于 易 受 环 境 因 素 影 响 的 测 定, 具 有 很 好 的 应 用 前 景 2 实 验 部 分 2. 整 机 设 计 2.. 整 机 结 构 如 图 所 示, 五 分 析 仪 主 要 由 气 路 ( 空 气 和 乙 炔 ) 气 路 安 全 控 制 系 统 光 路 系 统 控 制 电 路 板 ( 包 括 数 据 采 集 单 元 ) 微 型 计 算 机 和 血 液 五 分 析 仪 软 件 组 成 其 中 光 路 系 统 控 制 电 路 板 和 血 液 五 分 析 仪 软 件 是 本 研 究 的 主 要 内 容 2..2 光 路 系 统 组 成 五 (Ca, Cu, Mg, Fe 和 Zn) 空 心 阴 极 灯 ( 北 京 曙 光 明 电 子 图 Fig. 五 通 道 原 子 吸 收 式 血 液 五 分 析 仪 整 机 结 构 图 Schematic diagram of five-channel atomic absorption blood five elements analyzer 光 源 仪 器 有 限 公 司 ) 光 源 凹 面 反 光 镜 (R=29) 火 焰 燃 烧 器 入 缝 凹 面 反 光 镜 (R=58) 入 缝 (0.2 mm) 凹 收 稿 ; 接 受 本 文 系 辽 宁 省 博 士 后 资 助 项 目 (No.76746) * cdc343cdc@ 63.com

2 522 分 析 化 学 第 39 卷 面 光 栅 ( 罗 兰 圆 直 径 224 mm, 200 线 /mm, 光 栅 常 数 mm) 和 5 个 出 缝, 5 支 R22 侧 窗 光 电 倍 增 管 如 图 2 所 示 2..3 整 体 组 合 狭 缝 设 计 整 体 组 合 狭 缝 是 个 高 精 度 的 光 谱 定 位 器 件, 5 个 狭 缝 采 用 细 丝 线 切 割 一 次 完 成, 保 证 相 对 位 置 的 高 精 度 入 射 狭 缝 的 位 置 和 出 射 狭 缝 宽 度 全 部 固 定, 有 利 于 安 装 和 调 试 其 位 置 要 根 据 凹 面 光 栅 方 程 计 算 根 据 光 栅 方 程 Sin(α+β ) =λd 凹 面 光 栅 的 罗 兰 圆 直 径 D= mm 光 栅 常 数 d=200 线 数 /mm 入 射 角 α= 0 和 光 谱 带 宽 计 算 出 以 光 栅 中 心 为 基 点 的 线 色 散 率 (Dd/Cos β ) mm/nm 色 散 角 度 和 狭 缝 宽 度 ( 表 和 图 2) 图 2 Fig.2 五 通 道 原 子 吸 收 式 血 液 五 分 析 仪 光 路 结 构 图 Optical structure of five-channel atomic absorption blood five elements analyzer 表 整 体 组 合 狭 缝 定 位 数 据 Table Fixed position data of integral combination slit 锐 线 波 长 Sharp line (nm) 线 色 散 率 Linear dispersion (mm/nm) 色 散 角 度 Dispersion angle ( ) 光 谱 带 宽 Spectral bandwidth (nm) 狭 缝 宽 度 Slit width (mm) Ca Cu Mg Fe Zn 条 锐 线 都 入 缝 的 关 键 是 选 择 一 条 基 准 锐 线 Ca 的 nm 谱 线 是 唯 一 肉 眼 可 见 的 谱 线, 其 光 谱 带 宽 为 0.8 nm, 作 为 基 准 锐 线 以 凹 面 光 栅 中 心 为 基 准 圆 心, 旋 转 凹 面 光 栅 使 0 级 光 从 入 缝 返 回, 再 精 密 旋 转 凹 面 光 栅 使 Ca 锐 线 首 先 入 缝, 其 余 4 条 谱 线 也 可 以 同 时 入 缝, 这 是 顺 利 入 缝 的 技 术 关 键 血 液 中 Cu 的 含 量 最 低, 测 量 的 误 差 大, 优 先 确 定 Cu 的 最 大 吸 收 的 光 栅 位 置, 因 此 Cu 的 光 谱 带 宽 为 0.4 nm, Mg, Fe 和 Zn 的 光 谱 带 宽 是.6 nm 测 量 2.3. 节 中 的 3 号 标 准 溶 液, 测 量 铜 的 吸 光 度, 微 调 光 栅, 使 Cu 的 吸 光 度 达 到 最 大 实 验 表 明, 采 用 独 立 的 狭 缝 不 易 保 证 5 条 锐 线 同 时 入 缝, 且 调 试 困 难 2..4 顺 序 注 射 变 速 恒 流 在 线 稀 释 的 注 入 方 式 变 速 恒 流 进 样 的 目 的 是 为 了 改 善 Ca, Mg 和 Fe 测 定 的 线 性 范 围, 降 低 Cu 和 Zn 测 定 的 检 出 限, 实 现 在 线 稀 释, 提 高 测 量 的 重 复 性 血 液 中 的 Ca, Cu, Mg, Fe 和 Zn 的 含 量 相 差 悬 殊, 采 用 节 的 方 法 稀 释 26 倍, 适 合 于 Cu 和 Zn 测 定 ; 而 Ca, Mg 和 Fe 超 过 线 性 范 围, 需 稀 释 5 倍 测 量 的 样 液 总 量 040 ml, 采 样 时 间 20 s, 0~4 s 测 量 基 线, 4~0 s 低 速 恒 流 进 样,

3 第 0 期 刘 娜 等 : 凹 面 光 栅 整 体 组 合 狭 缝 五 通 道 原 子 吸 收 式 血 液 五 分 析 仪 的 研 制 523 进 样 速 度 50 ml/s, 测 量 Ca, Mg 和 Fe;0~ s, 停 止 进 样 s 后 进 样 速 度 00 ml/s, 测 量 Cu 和 Zn 软 件 中 设 计 了 变 速 进 样 方 式 选 择 研 制 了 程 控 2 位 4 通 道 选 择 阀 ( 见 图 3a), D 为 公 共 端, B 为 原 子 吸 收 吸 液 管, A 为 蒸 馏 水, C 为 被 测 溶 液 程 控 注 射 器 吸 被 测 液 时 DC 通, 蒸 馏 水 进 入 雾 化 器, AB 通 ( 见 图 3a) 程 控 注 射 器 推 被 测 液 时 DB 通, 蒸 馏 水 A 端 和 进 液 口 C 端 被 封 闭 ( 见 图 3b) 图 3 Fig.3 程 控 2 位 4 道 选 择 阀 的 吸 液 状 态 (a) 和 推 液 状 态 (b) State of program-controlled 2 bit 4 way valve to take liquid(a)and to push out liquid (b) 2..5 提 高 钙 测 量 的 线 性 范 围 和 降 低 检 出 限 的 方 法 在 钙 缝 之 前 加 一 个 中 心 波 长 为 420 nm, 带 宽 0 nm 的 滤 光 片, 可 降 低 检 出 限 并 提 高 线 性 度, 消 除 大 背 景 2..6 控 制 电 路 板 ( 包 括 数 据 采 集 ) 对 空 心 阴 极 灯 采 用 脉 冲 供 电 方 式, 脉 冲 频 率 200 Hz, 光 电 流 经 过 电 流 电 压 变 换 器 转 换 成 光 电 压, 范 围 ±5000 mv, 精 度 20 位 ( 模 数 转 换 精 度 字 ), 0000 mv/ 字 = mv/ 字, 软 件 定 义 4000 mv=00% 透 射 率, 吸 光 度 =0;0 mv=0% 透 射 率, 吸 光 度 精 度 完 全 满 足 测 量 吸 光 度 的 要 求 采 用 汇 编 语 言 编 写 2..7 负 高 压 的 施 加 方 式 采 用 循 环 迭 加 的 方 式 施 加 负 高 压 NHV, 每 次 循 环 施 加 NHV 的 迭 加 量 de=0.2 ( 当 前 透 光 率 :00% ) 当 前 透 光 率 接 近 00% 时 de 小, 实 现 满 度 调 整 的 微 调 ; 当 前 透 光 率 与 00% 相 差 大 时 de 大, 实 现 快 速 施 加 负 高 压 的 目 的 2.2 血 液 五 分 析 仪 软 件 采 用 VB 编 写 软 件 原 子 吸 收 是 浓 度 型 检 测 器, 测 量 吸 光 度 时, 为 了 消 除 血 液 稀 释 剂 的 总 体 积 对 测 量 结 果 的 影 响, 采 用 峰 面 积 作 为 定 量 依 据 测 量 结 束, 自 动 传 送 全 部 标 准 数 据 和 样 品 数 据 2.3 实 验 方 法 2.3. 试 剂 配 制 五 检 测 试 剂 ( mg/l 十 二 烷 基 苯 磺 酸 钠 mol/l HCl) ~ 3 号 标 准 溶 液 的 配 制 过 程 用 五 检 测 试 剂 稀 释 标 准 溶 液 浓 度 见 表 2 0 号 标 准 溶 液 是 五 检 测 试 剂 血 液 采 集 及 血 液 被 测 溶 液 的 配 制 准 备 支 ml 离 心 塑 料 管, 加 入.00 ml 五 表 2 5 种 混 合 标 准 溶 液 浓 度 表 Table 2 Concentration of standard solution for five elements 编 号 No. Ca Cu Mg Fe Zn 检 测 试 剂 采 集 40 ml 末 梢 血 样, 在 没 有 凝 结 的 状 态 下 立 即 加 入 至 ml 离 心 塑 料 管 中, 混 匀, 防 凝 血 样 稀 释 26 倍 主 要 操 作 步 骤 调 整 透 射 率 T=00%, 吸 光 度 调 至 零 吸 液 头 插 入 蒸 馏 水 中, 点 击 开 始 测 量 按 钮, 出 现 吸 液 等 待 时 间 的 倒 计 时, 倒 计 时 为 0 时 出 现 立 即 吸 液 提 示, 吸 液 头 快 速 插 入 待 测 试 液 中, 测 量 时 间 与 吸 光 度 的 变 化 曲 线 被 测 液 全 部 吸 完 后, 吸 液 头 迅 速 移 至 蒸 馏 水 中 完 成 测 量 后, 仪 器 自 动 暂 停, 等 待 下 次 测 量 3 结 果 与 讨 论 3. 五 空 心 阴 极 灯 的 光 谱 图 五 空 心 阴 极 灯 的 光 谱 曲 线 很 复 杂 在 SK-2 型 原 子 光 谱 分 析 仪 上 扫 描 了 200~450 nm 范 围 内

4 524 分 析 化 学 第 39 卷 的 光 谱 曲 线 ( 图 4) Ca: 7 号 峰 ; Cu: 号 峰 ; Mg: 5 号 峰 ; Fe: 3 号 峰 ; Zn: 号 峰 图 4 Fig.4 五 空 心 阴 极 灯 的 光 谱 曲 线 3.2 杂 散 光 和 基 线 噪 音 宽 测 量 Spectra of five elements of hollow cathode lamp 杂 散 光 是 没 有 光 输 入 时 的 光 的 信 号 总 和 杂 散 光 影 响 标 准 工 作 曲 线 的 线 性 和 灵 敏 度 遮 挡 入 光 口, 测 量 杂 散 光, 检 测 时 间 00 s 结 果 以 透 光 率 计 :Ca 0.20%, Cu 0.268%, Mg 0.297%, Fe 0.2%, Zn 0.07% 检 测 血 液 五 的 最 长 时 间 低 于 30 s, 因 此 测 量 基 线 噪 音 宽 时 规 定 检 测 时 间 为 00 s 基 线 噪 音 宽 定 义 为 空 白 信 号 的 标 准 差 的 3 倍 静 态 噪 音 宽 是 不 点 火 状 态 下 基 线 噪 音 宽 在 ±0.003 范 围 内 ; 不 点 火 基 线 噪 音 宽 ( 以 吸 光 度 Abs 计 ):Ca , Cu , Mg , Fe , Zn 火 焰 噪 音 宽 是 点 火 状 态 下 的 基 线 噪 音 宽 在 ± 范 围 内 点 火 基 线 噪 音 宽 ( 以 吸 光 度 Abs 计 ):Ca , Cu , Mg , Fe , Zn 回 归 分 析 按 节 测 量 表 2 中 的 五 检 测 试 剂 及 ~3 号 标 准 溶 液, 连 续 7 次 测 量 3 号 标 准 溶 液 测 量 吸 光 度 A 直 线 回 归 分 析 : 浓 度 C=aA+b, 得 到 直 线 回 归 分 析 数 据 见 表 3, 线 性 误 差 大 抛 物 线 回 归 分 析 : 浓 度 C=aA 2 +ba+c, 得 到 抛 物 线 回 归 分 析 数 据 见 表 3, 线 性 误 差 小 表 3 直 线 回 归 分 析 和 抛 物 线 回 归 分 析 数 据 Table 3 Data of linear regression analysis and parabola regression analysis a 直 线 回 归 Linear regression b Correlation coefficient (r) 线 性 误 差 Line error 抛 物 线 回 归 Parabola regression a b c Correlation coefficient (r) 线 性 误 差 Line error Ca Cu Mg Fe Zn 直 线 回 归 (Linear regression):dc= aa+b-c ; 抛 物 线 回 归 (Parabola regression):dc= aa 2 +ba+c-c ; 线 性 误 差 (Line error): E=[ (00 dc/c)]/3 3.4 性 能 指 标 检 测 以 透 光 率 99% ( 吸 光 度 A= ) 对 应 的 被 测 物 浓 度 为 特 征 浓 度 以 连 续 7 次 测 量 3 号 标 准 溶 液 吸 光 度 的 相 对 标 准 偏 差 RSD 表 征 重 复 性 以 连 续 7 次 测 量 3 号 标 准 溶 液 峰 面 积 的 标 准 差 的 3 倍 对 应 的 被 测 物 浓 度 为 检 出 限 结 果 列 于 表 4 表 4 性 能 指 标 检 测 表 Table 4 Checklist of performance indicators 重 复 性 Repeatability 特 征 浓 度 Characteristic Concentration 检 出 限 Detection limit Ca Cu Mg Fe Zn

5 第 0 期 刘 娜 等 : 凹 面 光 栅 整 体 组 合 狭 缝 五 通 道 原 子 吸 收 式 血 液 五 分 析 仪 的 研 制 样 品 分 析 3.5. 血 样 测 定 全 血 样 品 由 某 志 愿 者 捐 献, 经 2.3 节 所 述 方 法 进 行 测 定, 加 入 标 准 物 进 行 回 收 率 实 验, 结 果 见 表 质 量 控 制 血 样 测 定 测 定 了 批 号 SERO00392 冻 干 粉 全 血 微 量 样 品 ( 挪 威 Seronorm 公 司 ) 的 五 含 量 结 果 见 表 6 SERO00392 样 品 中 加 入 78 ml 五 检 测 试 剂, 得 到 相 当 于 稀 释 26 倍 的 3.00 ml 原 血 样 表 明 本 法 测 量 结 果 可 靠 表 5 血 样 的 检 测 结 果 和 回 收 率 (n=7) Table 5 Results and recovery rates of blood samples (n=7) 含 量 Content RSD 加 入 含 量 Added 回 收 率 Recovery Ca.86 mmol/l mmol/l 96.8 Cu 9.7 mmol/l mmol/l 94. Mg.83 mmol/l mmol/l 98.7 Fe 9.45 mmol/l mmol/l 97.4 Zn 88.4 mmol/l mmol/l 95.2 表 6 质 量 控 制 血 样 测 定 Table 6 Comparison of blood samples between marked value and measured value 标 示 值 Marked value 本 法 测 定 值 Measured value Ca 4.0± Cu.20± Mg 5.6± Fe 333± Zn 7.659± References WANG Kui( 王 夔 ).TraceinLifeScience( 生 命 科 学 中 的 微 量 ).Beijing( 北 京 ):China Metrology PublishingHouse( 中 国 计 量 出 版 社 ),992:9~28 2 RuzickaJ,MarshalGD.Anal.Chim.Acta,990,237(2):329~343 3 WANGJiaṉYa,FANGZhao-Lun,XUShu-Kun( 王 建 雅, 方 肇 伦, 徐 淑 坤 ).ChineseJ.Anal.Chem.( 分 析 化 学 ), 2002,30(3):307~3 ResearchonFive-channelAtomicAbsorptionBloodFive AnalyzerwithConcaveGratingandIntegralCombinationSlit (DalianMedicalUniversity,Dalian6044) LIU Na,ZHANG Rong *2 2 (QiqihaerMedicalUniversity,Qiqihaer6006) Abstract Afive-channelatomicabsorptionbloodfiveelementsanalyzer withconcavegratingand integralcombinationslitwasdevelopedforthedeterminationoffiveelements(calcium,copper,magnesium,ironandzinc)inblood.aholowcathodelampoffiveelementswasusedandthelightwas focusedonthecentreofflamebythesimplereflectionandtheconcavegratingwasusedasthedispeṟ siveelement.theintegralcombinationslitwasdesignedtoalowthesharplinesforthefiveelements through.thesolutionswereorderinjection which wasdesignedtobeanonlinedilutepatern with variablespeedbutconstantcurrent.toavoidtheinfluenceofinterferencespectraonthecalcium atomicabsorption,thefilterof422nm wascoveredonthecalciumslit.aprogramofsoftwarewitha goodperformancefortheoperationforfiveelementsanalyzerwaswriten.thepeakareaasquantitativebasis wasdefined.theblood diluentconsistsof mg/l sodium dodecylbenzenesulfonate (SDBS)and0.060mol/L HCl.Theproposedmethodwasappliedtothedeterminationofzinc,iron, calcium,magnesiumandcopperintheblood.therelativestandarddeviation (RSD)waslessthan 5% andtherecoveryratewas95.2%-98.7%. Keywords Calcium;Copper;Magnesium;Iron;Zinc;Traceelements;Blood;Atomicabsorption analyzer (Received8February20;accepted9June20)

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标题 第 39 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究 第期 20 年月 Chinese Journal of Analytical Chemistry ~ DOI:0.3724/SP.J.096.20.00000 凹面光栅整体组合狭缝五通道原子吸收式血液五分析仪的研制 ( 大连医科大学, 大连 6044) 刘娜 张榕 * 2 2 ( 齐齐哈尔医学院, 齐齐哈尔 6006) 摘要自行研制了一种凹面光栅整体组合狭缝五通道原子吸收式血液五分析仪,

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