2 5g L -1 壳聚糖 ) 中, 凝胶化 8h 后, 过滤收集小丸, 用水冲洗丸粒后,37 干燥, 再置于 50 烘箱中热处理 10h; 将以上制得小丸在 30g L -1 氯化钙溶液中搅拌 10min, 取出吸干丸粒表面溶液后, 置于 6g L -1 海藻酸钠溶液中, 包衣 10min, 过滤

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柬窦
7 years ago
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1 盐酸小檗碱羧甲基魔芋胶小丸在大鼠体内释药研究张瑜 1 2, 侯世祥 (1. 河南大学中药研究所, 河南开封 ; 2. 四川大学华西药学院, 四川成都 ) [ 摘要 ] 目的 : 研究盐酸小檗碱羧甲基魔芋胶小丸在大鼠体内的药物吸收及胃, 小肠和结肠组织中药物浓度经时变化, 评价其结肠定位释药特性方法 : 将盐酸小檗碱羧甲基魔芋胶小丸 ( 小丸组 ) 和盐酸小檗碱羧甲基纤维素混悬液 ( 对照组 ) 大鼠灌胃给药 ( 以盐酸小檗碱计, 给药剂量 50mg kg -1 ), 采用 HPLC 测定大鼠体内盐酸小檗碱在血浆, 胃, 小肠和结肠组织中的浓度, 计算药物相对靶向释药指数结果 : 盐酸小檗碱在血浆和组织匀浆中线性范围分别为 ~2 52mg L -1 (r=0 9992) 和 0 126~25 22mg L -1 (r>0 99), 血浆和组织匀浆中检测限分别为 10,8mg L -1, 小丸组血浆中药时曲线下面积 (AUC 0 ) 是对照组的倍 ; 小丸组胃, 小肠, 结肠组织 AUC 0 分别是对照组的 0 187,0 228,2 00 倍 ; 小丸组在大鼠胃, 小肠, 结肠组织的药物相对靶向释药指数分别为 ,0 4786,4 193 结论: 盐酸小檗碱羧甲基魔芋胶小丸具有较好的结肠定位释药特性 [ 关键词 ] 盐酸小檗碱 ; 羧甲基魔芋胶 ; 体内药物释放 ; 结肠定位给药系统 [ 中图分类号 ]R285.5 [ 文献标识码 ]A [ 文章编号 ] (2008) 近年来, 炎症性肠道疾病 ( 包括溃疡性结肠炎克罗恩氏病等 ) 在我国的发病率呈上升趋势, 其治疗主要采用 5 氨基水杨酸或糖皮质激素等药物的口服给药, 但普通制剂用药存在药效差副作用大等问题, 因此, 口服结肠定位给药系统 (oralcolon spe cificdrugdeliverysystem,ocdds) 成为炎症性肠道疾病新型治疗系统的研究热点 [1] 羧甲基魔芋胶 (carboxymethylkonjacglucoman nan,cmkgm) 作为我国优势植物资源魔芋提取物魔芋胶的氯乙酸醚化改性产物, 可用于新型给药系统的制备 [2,3] 前期研究发现,CMKGM 具有凝胶成丸被结肠微生物酶特异性降解等性质, 可作为载体材料用于小丸剂的制备, 体外药物释放研究发现,CMKGM 小丸具有结肠定位释药的特性 [3,4], 为进一步评价其作为 OCDDS 的可行性, 作者选择炎症性肠道疾病治疗用中药成分盐酸小檗碱 (berberinehydrochloride,bh) 为模型药物 [5], 采用滴制离子胶凝法制备 BH 羧甲基魔芋胶小丸, 通过比较小丸和 BH 羧甲基纤维素混悬液 ( 对照组 ) 大鼠灌胃给药后, 体内血浆和胃, 小肠及结肠组织中药物浓 [ 收稿日期 ] [ 通讯作者 ] 侯世祥,Tel:(028) ,E mail:housix@263. net 度的经时变化规律, 并计算药物相对靶向释药指数, 探讨小丸在大鼠体内胃肠道的释药特性, 目前国内外未见相关报道 1 材料 1.1 动物 SD 大鼠 48 只, 雌雄各半, 体重 (200±20)g 四川大学实验动物中心提供, 合格证号川实动管第 70 号 1.2 药物与试剂盐酸小檗碱 ( 四川亚宝光泰制药有限公司, 纯度 99 3%); 羧甲基魔芋胶 ( 自制, 醚化度 0 479), 甲醇 ( 色谱纯 ), 其他试剂和试药均为分析纯 1.3 仪器 Agilent1100Series 高效液相色谱仪 ( 美国 );St artorious1721 型电子天平 ( 西德 );YKH-Ⅱ 型液体快速混合器 ( 江西医疗器械厂 );SK-5200H 超声清洗仪 ( 上海科导超声仪器有限公司 );TGL-16G 台式高速离心机 ( 上海安亭科学仪器厂 ) 2 方法 2.1 制剂的制备 BH 羧甲基魔芋胶小丸配制 20g L -1 CMKGM 水溶液, 加入 BH(BH 与 CMKGM 质量比 2 1), 搅拌得均匀混悬液, 将上述混悬液滴加至 10 倍体积量的凝胶液 (ph3 0, 含 5g L -1 三氯化铁和 1591

2 2 5g L -1 壳聚糖 ) 中, 凝胶化 8h 后, 过滤收集小丸, 用水冲洗丸粒后,37 干燥, 再置于 50 烘箱中热处理 10h; 将以上制得小丸在 30g L -1 氯化钙溶液中搅拌 10min, 取出吸干丸粒表面溶液后, 置于 6g L -1 海藻酸钠溶液中, 包衣 10min, 过滤收集小丸, 用水冲洗除去丸粒表面未凝胶化的海藻酸钠,37 干燥, 即得 (BH 含量 49 84%, 粒径 0 998mm) BH 羧甲基纤维素混悬液称取羧甲基纤维素 0 5g, 加于 90mL 蒸馏水中, 搅拌使其溶解, 然后称取 BH1 0g, 加至上述溶液中, 搅拌, 并补加蒸馏水至 100mL, 即得 (10g L -1 ) 2.2 BH 测定用高效液相色谱法的建立色谱条件迪马 C 18 色谱柱 (4 6mm 150 mm,5μm); 流动相磷酸盐缓冲液 (0 05mol L -1 磷酸二氢钾, 含 0 5% 三乙胺, 用磷酸调 ph3 5) 甲醇 (60 40); 流速 1mL min -1 ; 检测波长 345nm; 柱温 30 ; 进样量 15μL 生物样品的处理及测定方法分别称取大鼠胃, 小肠和结肠组织, 按 5mL g -1 的比例加入 0 05 mol L -1 磷酸盐缓冲液 (ph6 8), 匀浆处理得匀浆液分别精密吸取大鼠血浆组织匀浆液各 0 4mL, 置离心管中, 加入甲醇 1 2mL, 旋涡振荡 5min, 12000r min -1 离心 10min, 精密吸取 0 9mL 上清液至离心管中,50 真空挥干溶剂, 加入 0 15mL 甲醇溶解残渣, 旋涡混合 5min, 超声 15min,12000r min -1 离心 10min 后取上清液 15μL 进样, 测定在上述色谱条件下, 得空白血浆, 空白各组织及各生物样品和 BH 的色谱图, 见图 1 图 1 盐酸小檗碱的高效液相图谱 A. 空白血浆 ;B. 血浆样品 ;C. 空白结肠组织 ;D. 结肠组织样品 ;E. 盐酸小檗碱对照品 ;F. 空白胃组织 ;G. 胃组织样品 ;H. 空白小肠组织 ; I. 小肠组织样品 ;1 盐酸小檗碱由图 1 中各色谱图比较发现, 在选定的色谱条件下, 血浆及各组织中内源性物质与 BH 分离良好, 不干扰 BH 的测定, 各生物样品中 BH 的保留时间 11min 左右 mg L -1 ), 按项下操作, 将峰面积 (A) 对 BH 浓度 (C) 进行线性回归, 得标准曲线 : 血浆 A=56 87C ,r=0 9992; 胃组织 A=70 95C+3 452,r=0 9993; 小肠 A=67 36C 标准曲线的制备精密吸取空白生物样品 2 649,r=0 9992; 结肠 A=70 07C-3 398,r= 0 4mL, 分别加入不同量 BH, 配得含不同 BH 浓度的生物样品 ( 血浆分别为 ,0 126,0 252, 各生物样品中,BH 的峰面积 (A) 与其浓度 (C) 线性关系良好 0 504,1 26,2 52mg L -1 ; 胃, 小肠和结肠组织匀检测限测定当信噪比 (S/N)=3 时,BH 在浆均分别为 0 126,0 252,0 504,2 52,12 61,25 22 血浆和组织匀浆中的检测限分别为 10,8μg L

3 2.2.5 回收率和精密度测定在空白生物样品中分别加入不同量 BH, 得高中低 3 种质量浓度的含药生物样品, 按项下操作, 计算 BH 浓度, 以测得量与加入量之比计算方法回收率 ; 分别于日内测定 5 次及连续测定 5d, 计算日内和日间精密度, 结果见表 1 样品表 1 各生物样品中 BH 测定的回收率和日内日间精密度 (n=5) BH 加量 /μg 日内 RSD/% 日间回收率 /% 血浆 ± ± ±2 13 胃 ± ± ±3 81 小肠 ± ± ±4 54 结肠 ± ± ±2 78 由上表数据可知, 该方法准确, 重复性好, 可用于 BH 在生物样品中的质量浓度测定 2.3 实验设计和数据处理 SD 大鼠随机分成 6 组, 每组 8 只, 实验前禁食 12 h, 其中 3 组大鼠经口插聚乙烯管, 灌胃 BH 羧甲基魔芋胶小丸适量 ( 以 BH 计, 给药剂量为 50mg kg -1 大鼠体重 ), 同时灌服 5g L -1 羧甲纤维素钠溶液 1 ml, 作为小丸组 ; 另 3 组大鼠灌胃 BH 羧甲基纤维素混悬液适量 ( 给药剂量同小丸组 ), 作为对照组大鼠给药后, 分别于 0 5,1,2,4,6,8,12,24h 时间点, 经股动脉取血 4mL 置于含肝素钠的离心管中,6000r min -1 离心 10min 得血浆, 冷藏备用 ; 然后将大鼠处死, 取除去内容物的胃, 小肠和结肠组织用 ph6 8 的 PBS 漂洗 3 次, 每次 30mL, 吸干水分后, 冷藏备用 ; 按项下操作, 测定样品中 BH 浓度采用相对靶向释药指数 (drugdeliveryindex, DDI) 对 BH 羧甲基魔芋胶小丸的结肠定位释药特性进行评价 [6] 药物的相对靶向释药指数 (DDI)= (AUC 1/AUC 2 ) (AUC 3 /AUC 4 ) 其中 AUC 1,AUC 3,AUC 2,AUC 4 分别表示小丸组的各组织和血浆中药物浓度时间曲线下面积和对照组的各组织和血浆中药物浓度时间曲线下面积 AUC 0 采用梯形法计算, 其中消除速度常数 k 通过残数法求取 ;T max 和 C max 采用实测值采用 SPSS 10 0 软件对小丸组和对照组的体内药动学参数进行两两 t 检验 3 结果 3.1 血浆药物浓度变化大鼠灌胃给药后, 血浆药物浓度的经时变化曲线见图 2 图 2 不同 BH 制剂大鼠灌胃给药的血浆药时曲线珋对照组药时曲线无时滞,T max 为 2h,C max 为 (0 345±0 084)mg L -1,AUC 0 为 3 950mg h -1 L -1 ; 小丸组药时曲线存在 1h 时滞,T max 延后至 8h,C max 为 (0 136±0 085)mg L -1 低于对照组,AUC 0 (1 884mg h -1 L -1 ) 为对照组的倍另外血浆中药物浓度较低, 这与 BH 胃肠道吸收差有关 ; 对照组的药时曲线出现双峰现象, 这与 BH 存在肝肠循环有关 [7] 3.2 胃组织药物浓度变化大鼠灌胃给药后, 胃组织药物浓度的经时变化曲线见图 3 图 3 不同 BH 制剂大鼠灌胃给药的胃组织药时曲线珋与对照组相比, 小丸组 T max 由 0 5h 延后至 4h, C max 明显降低 (P<0 01),AUC 0 (92 08μg h -1 g -1 ) 为对照组 (491 6μg h -1 g -1 ) 的倍 1593

4 3.3 小肠组织药物浓度变化大鼠灌胃给药后, 小肠组织药物浓度的经时变化曲线见图 4 图 4 不同 BH 制剂大鼠灌胃给药的小肠组织药时曲线珋与对照组相比, 小丸组 T max 由 2h 延后至 4h, C max 明显降低 (P<0 01),AUC 0 (180 6μg h -1 g -1 ) 为对照组 (790 5μg h -1 g -1 ) 的倍 3.4 结肠组织药物浓度变化大鼠灌胃给药后, 结肠组织药物浓度的经时变化曲线见图 5 图 5 不同 BH 制剂大鼠灌胃给药的结肠组织药时曲线珋对照组药时曲线的 T max 为 6h,C max 为 (60 66± 9 54)μg g -1,AUC 0 为 805 2μg h -1 g -1 ; 小丸组药时曲线前 6h 药物浓度低于对照组,T max 延后至 8h, 而 C max 为 (95 96±23 62)μg g -1 明显高于对照组 (P<0 05),AUC 0 (1610 3μg h -1 g -1 ) 为对照组的 2 倍 3.5 相对靶向释药指数的计算与对照组相比, 小丸组的胃, 小肠和结肠组织的 DDI 值分别为 ,0 4786, 讨论目前,OCDDS 的体内释药特性评价方法主要有种 :1 血药浓度经时变化规律 [8] ;2 胃肠道不同部位药物浓度及分布规律 [9] ;3 制剂进行放射性标记, 采用 γ 闪烁成像法监测其在胃肠道内的转运及存在状态, 了解制剂所处位置及其崩散情况, 特别适用于剂量单元制剂 ( 如片剂胶囊剂等 ) [10] 本研究中, 考虑到 γ 闪烁成像法要进行放射性标记, 存在一定的安全性问题, 并且 BH 羧甲基魔芋胶小丸属于剂量多单元制剂, 给药后在整个胃肠道中广泛分布, 不便于对制剂在胃肠道的崩散释药情况进行评价, 确定采取测定小丸给药后血药浓度和胃, 小肠及结肠组织中药物浓度的经时变化, 并计算药物对胃, 小肠和结肠组织的 DDI 值, 来评价小丸剂的大鼠体内释药特性考虑到试验中生物样品处理操作方法简便, 确定采用 HPLC 外标法进行体内生物样品的测定, 经标准曲线制备, 方法回收率和日内日间精密度试验结果证实, 此方法简便快速可靠 ;BH 作为季铵型生物碱, 在 C 18 反相 HPLC 系统中拖尾严重, 采用在流动相中添加三乙胺, 并用磷酸调节流动相 ph 的方法, 可有效抑制 BH 拖尾考虑到 BH 胃肠道吸收差, 为提高血浆药物浓度, 确定大鼠灌胃给药剂量为 50mg kg -1 ( 以 BH 计 ) 由于 BH 在水中溶解度低, 作者采用羧甲基纤维素配制 BH 混悬液作为对照组制剂, 溶液中羧甲基纤维素浓度为 5g L -1, 过高不利于灌胃操作, 过低则 BH 在混悬液中不易均匀分散, 影响给药剂量的准确性 BH 羧甲基魔芋胶小丸和 BH 混悬液灌胃给药后, 两种制剂在大鼠胃肠道的药物释放及吸收情况有所不同, 表现为 :1 与对照组相比, 小丸组血浆药时曲线存在时滞,T max 延后,C max 和 AUC 0 均有所降低 ;2 小丸组胃, 小肠组织中药物浓度始终低于对照组 ;3 小丸组结肠组织中药物浓度开始低于对照组, 6h 后则高于对照组,T max 延后,C max 和 AUC 0 均高于对照组 ;4 与对照组相比, 小丸组对胃, 小肠组织的 DDI 值均小于 1, 而对结肠组织的 DDI 值大于 1 以上结果提示,BH 羧甲基魔芋胶小丸在胃肠道上段的药物释放量较少, 造成胃, 小肠组织药物浓度低, 同时药物吸收存在时滞并且吸收量减少, 表现为血浆药时曲线中 T max 延后,C max 和 AUC 0 降低 ; 小丸转运至结肠部位后, 在结肠特有微生物酶的降解作用下, 丸粒骨架溶蚀而大量释放药物, 造成小丸组

5 的结肠组织中药物浓度高于对照组由此可见,BH 羧甲基魔芋胶小丸在大鼠体内具有结肠定位释药特性, 其价值还需进一步通过对炎症模型动物的治疗效果评价来证实 [ 参考文献 ] [1] FriendDR.Neworaldeliverysystemsfortreatmentofinflamma toryboweldisease[j].drugdevindpharm,2005,57:247. [2] JianD,SunR,ZhangSh,etal.Novelpolyelectrolytecarboxym ethylkonjacglucomannan chitosannanoparticlesfordrugdelivery [J].MacromolRapidCommun,2004,25(2):954. [3] 张瑜, 凌春生, 侯世祥. 结肠定位盐酸小檗碱羧甲基魔芋胶小丸释药机制的研究 [J].,2008,33(1):23. [4] 张瑜, 武亚玲, 侯世祥. 羧甲基魔芋胶的结肠定位酶降解性能研究 [J].,2007,32(22):2360. [5] 纪桂贤, 王邦茂, 方维丽. 盐酸小檗碱对 DSS 诱导的结肠炎小鼠血小板活化功能的影响 [J]. 天津医科大学学报,2004,10 (2):182. [6] RichardNF,BarbaraH,LonmieR,etal.Colonicdeliveryof dexamethasonefromaprodrugaccelerateshealingofcolitisinrats withoutadrenalsuppresion[j].gastroenterology,1995,108 (9):1688. [7] 山原条二, 后藤胜, 田德之助. 黄连およびベルベリン型アルカロイドの生物学的研究 ( 第二报 ) 代谢および治疗效果 [J]. 生药学杂志,1972,26(1):53. [8] KrishnaiahYSR,VeerRP,DineshKB,etal.Pharmacokinet icevaluationofguargum basedcolon targeteddrugdeliverysys temsofmebendazoleinhealthyvolunteers[j].jcontrolrel, 2003,88:95. [9] TozakiH,OdoribaT,OkadaN,etal.Chitosancapsulesforco lon specificdrugdelivery:enhancedlocalizationof5 aminosali cylicacidinthelargeintestineaccelerateshealingoftnbs in ducedcolitisinrats[j].jcontrolrel,2002,82:51. [10] SinhaVR,MitalBR,KumriaR.Invivoevaluationoftimeand siteofdisintegrationofpolysaccharidetabletpreparedforcolon specificdrugdelivery[j].intjpharm,2005,289:79. Studiesoninvivoreleaseofberberinehydrochloridefrom carboxymethylkonjacglucomannanpeletsinrats ZHANGYu 1,HOUShi Xiang 2 (1.InstituteofChineseMaterialMedica,HenanUniversity,Kaifeng475004,China; 2.WestChinaSchoolofPharmacy,SichuanUniversity,Chengdu610041,China) [Abstract] Objective:Toobservetheabsorptionandconcentrationofberberinehydrochloride(BH)ingastric,entric,colon ictisueafterintragastricadministrationofbh containingcarboxymethylkonjacglucomannanpeletsforevaluatingcolon specificdrug deliverycharacteristicsofthepelets.method:bh containingcarboxymethylkonjacglucomannanpelets(peletsgroup)andbh con tainingcarboxymethylcelulosesuspension(controlgroup)wereintragastricadministratedtoratsatthedoseof50mg kg -1,respec tively.ahighperformanceliquidchromatographymethoddeterminatedbhconcentrationinratplasmaandtisue.drugdeliveryindex (DDI)wascalculated.Result:TherangeofBHinplasmaandtisueinratswere mg L -1 (r=0 9992)and mg L -1 (R>0 99),respectively.ThedetectionofBHinplasmaandtisuewere10μg L -1 and8μg L -1,respectively. Theareaunderthecurve(AUC 0 )intheplasmasamplesofpeletsgroupwas0 477timesthatofthecontrolgroup;inthegastric, entric,colonictisue,theauc 0 ofpeletsgroupwasasmuchas0 187,0 228,2 00timesthatofthecontrolgroup,respectively. TheDDIofthepeletswas0 3924,0 4786,4 193inthegastric,entric,colonictisueoftherat,respectively.Conclusion:Car boxymethylkonjacglucomannanpeletsmaybeausefulcarierofbhforcolon specificdelivery. [Keywords] berberinehydrochloride;carboxymethylkonjacglucomannan;invivodrugrelease;colon specificdrugdelivery system [ 责任编辑古云侠 ] 1595

图对片剂累积释放度的影响

图对片剂累积释放度的影响岳红坤常明游雅邱树虹王婧乔宇石家庄学院化工学院河北石家庄为筛选盐酸小檗碱胃漂浮片的处方并评价其漂浮和体外释放特性根据辅料性质及制剂质量要求通过单因素实验及正交试验确定影响盐酸小檗碱胃漂浮片性能的主要参数确定了最优处方采用干粉直接压片制得盐酸小檗碱胃漂浮片在人工胃液中考察其漂浮性能及溶出度并用紫外可见分光光度法检测其释药量优选的处方为每片含碳酸氢钠羧甲基淀粉钠聚乙二醇