2008,28(9) 杜丽等 : 从大容量噬菌体抗体库中筛选抗 DNAPKcs 人源单链抗体 2 的研究, 期望筛选到具有应用前景的治疗药物, 研究还处于实验室阶段随着人源抗体制备技术的发展, 治疗性单抗已成为发展最快的生物药物之一, 是生物制药的热点, 针对恶性肿瘤的治疗性抗体是开发最活跃的领域但
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- 健妗 伊
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1 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2008,28(9):20~26 从大容量噬菌体抗体库中筛选抗 DNAPKcs 杜 丽 杨陟华 人源单链抗体 2 周丽君 徐勤枝 潘秀颉 张士猛 王 朱茂祥 豫 2 王欲晓 周平坤 ( 军事医学科学院放射与辐射医学研究所 北京 00850) (2 中国人民解放军海军总医院中心实验室 北京 00037) 摘要目的 : 从单链大容量噬菌体抗体库中筛选特异性的抗 DNAPKcs 的人源抗体, 用于肿瘤治疗或诊断目的方法 : 经抗原性分析及 BLAST 比对, 选定人 DNAPKcs 蛋白中抗原性高且与其他蛋白没有同源性的片段, 进行原核表达及纯化后将其固定在抗原管上, 通过 4 轮 吸附 - 洗脱 - 扩增 过程从大容量抗体库中筛选特异性抗体, 转化 HB25 菌, 制备抗 DNAPKcs 的可溶性单链抗体 ;ELISA 检测抗原 抗体结合活性结果 : 经生物信息学分析, 确定抗原性高且与其他蛋白没有同源性的 DNAPKcs 片段 DPK3(250 个 AA) DPK4(257 个 AA) 经过 4 轮筛选, 获得 26 个特异性结合 DPK3 及 3 个特异结合 DPK4 的克隆, 指纹分析分别有 5 种和 2 种不同的可变区片段 ; 成功制备了可溶性抗体并做了抗原结合活性鉴定结论 : 利用单链大容量抗体库获得抗 DNA PKcs 的噬菌体抗体基因并且成功制备成可溶性抗体, 为今后的研究和应用奠定了基础关键词大容量噬菌体抗体库 DNA 依赖蛋白激酶催化亚单位单链抗体中图分类号 Q5 DNA 依赖蛋白激酶催化亚单位 (DNA dependent proteinkinasecatalyticsubunit,dnapkcs) 与 Ku70, Ku80 共同构成 DNA 依赖的蛋白激酶复合物 (DNA PK), 其中 DNAPKcs 是参与 DNA 双链断裂损伤修复的直接效应亚单位 [], 由 428 个氨基酸残基组成, 相对分子量约 470kDa DNAPKcs 与 ATM,ATR 等同属于磷脂酰肌醇 3 激酶相关蛋白激酶 (phosphoinositide3 kinaserelatedproteinkinase,pi3k) 家族成员, 具有丝氨酸 / 苏氨酸激酶活性, 在电离辐射所引起的 DNA 双链断裂 (doublestrandbreaks,dsbs) 的非同源末端连接 (nonhomologousendjoining,nhej) 修复中起主要作用, 而且还参与 V(D)J 重组过程,DNAPKcs 缺陷细胞对电离辐射敏感 [,2] 收稿日期 : 修回日期 : 国家 973 计划 (2007CB94603) 国家自然科学基金 ( ) 北京市自然科学基金 ( ) 资助项目 并列第一作者 通讯作者, 电子信箱 :zhoupk@nic.bmi.ac.cn 保持一定水平的 DNAPKcs 是维护细胞基因组稳定性所必需的, 但过高量 DNAPKcs 特别是癌细胞中过量表达 DNAPKcs, 会提高癌细胞对基因毒性抗癌药物或放射线产生抗性, 不利于肿瘤的治疗近年来发现 DNAPKcs 确实在某些类型癌组织细胞中普遍高表达 [3,4], 而且与癌组织恶性程度相关我们实验室用特异的 RNA 干扰技术成功的使 DNAPKcs 蛋白表达下降, 获得了 DNAPKcs 表达沉默且对 γ 射线敏感的稳定细胞模型同时发现,DNAPKcs 表达沉默细胞的生长速度和接种裸鼠后形成肿瘤的生长速度减慢而且, 抑制 DNAPKcs 表达和活性, 导致癌基因 cmyc 蛋白表达水平显著降低 [5,6] 表明 DNAPKcs 除通过其 DNA 修复功能影响细胞的辐射敏感性外, 还可能与肿瘤细胞增殖有关这些都提示 DNAPKcs 在肿瘤发生与细胞增殖分化过程中具有重要作用, 是一个肿瘤治疗的理想靶标或肿瘤标志物 [2,6] 目前国内外已开展针对 DNAPKcs 抑制剂 sirna
2 2008,28(9) 杜丽等 : 从大容量噬菌体抗体库中筛选抗 DNAPKcs 人源单链抗体 2 的研究, 期望筛选到具有应用前景的治疗药物, 研究还处于实验室阶段随着人源抗体制备技术的发展, 治疗性单抗已成为发展最快的生物药物之一, 是生物制药的热点, 针对恶性肿瘤的治疗性抗体是开发最活跃的领域但针对胞内 DNAPKcs 的人源抗体研究, 国内外还未见报道 材料与方法. 材料.. 细胞 菌株和质粒人宫颈癌上皮细胞 (HeLa) 为本室保存大肠杆菌菌株感受态 DH5α,BL2(DE3) 购自天根公司 ;XLBlue,Bs365, 无琥珀抑制子的大肠杆菌菌株 HB25 和 VCSM3 为海军总医院中心实验科保存 ; 载体 pgemteasy 及 pet22b(+) 分别购自 Promega 公司及 Novagen 公司..2 工具酶及试剂限制性内切酶 T4DNA 连接酶和 TaqDNA 聚合酶购自 NewEnglandBiolab 公司, 质粒提取和 PCR 产物回收试剂盒购自天根生物技术公司, HisTrapHP 亲和柱购自 Pharmacia 公司 MMLV 逆转录酶购自 Promega 公司异丙基硫代 βd 半乳糖苷 (IPTG) 氧化型谷胱甘肽 (GSSG) 及还原性谷胱甘肽 (GSH) 为 Merk 公司产品 ; 蛋白分子量标准购自上海生物化学研究所卵清蛋白和铁蛋白购自 Sigma 公司 ; 辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠 IgG 兔抗鼠 IgG 为 Santa Cruz 公司产品 ;PCR 引物的合成以及 DNA 测序均由上海英骏生物技术有限公司承担..3 引物的设计与合成根据人 DNAPKcscDNA 序列及载体 pet22b(+) 酶切为点, 针对抗原性较高的两段片段 (AA96~220 及 AA226~257) 分别设计并合成两对引物, 引物 P,P2 用于克隆 DPK3 区, 引物 P3,P4 用于克隆 DPK4 区 P:5 CGCATATGTTTTAC CAAGGTTTTCTG3 ( 引入 NdeⅠ 酶切位点 );P2:5 CGCCTCGAGCACTTCATCTTTAGGGAC3 ( 引入 XhoⅠ 酶切位点 );P3:5 CGCATATGTCCGGTAAAGATCCTA AT3 ( 引入 NdeⅠ 酶切位点 );P4:5 CGCCTCGAGAAG TCCAGGGTTCTCATC3 ( 引入 XhoⅠ 酶切位点 ).2 方法.2. 抗原性分析及 BLAST 比对依据 NCBI 编号 AAB39925 (DNAdependentprotein kinase catalytic subunit[homosapiens]) 的蛋白序列, 利用生物分析软件 Biosun 中抗原表位分析程序, 采用包括亲水性 柔韧性 抗原性和电荷分布等多参数预测进行抗原性分析, 将所分析得到的抗原性高的基因序列进行 BLAST 比对选取抗原性高且与其他蛋白没有同源性的蛋白片段进行表达.2.2 细胞培养 HeLa 细胞以 0 5 接种于含 0% 胎牛血清的 DMEM 培养液中,5%CO 2 /95% 空气,37 孵育培养.2.3 总 RNA 提取及 RTPCR 收集指数生长期细胞,Trizol 提取总 RNA 定量后,MMLV 逆转录酶合成 cdna 第一链以反转录获得的 cdna 为模板, 分别用两对引物 P,P2 和 P3,P4 对目的基因片段进行 PCR 扩增扩增反应的条件均为 :95 预变性 0min,94 变性 45s,55 退火 30s,72 延伸 min, 扩增 30 个循环 PCR 扩增产物经 % 琼脂糖凝胶电泳回收纯化.2.4 重组克隆载体 pgemtdpk3 和 pgemtdpk4 的构建与鉴定将纯化的两段 PCR 产物分别连入载体 pgemteasy, 构建重组质粒 pgemtdpk3 和 pgemt DPK4, 转化感受态 E.coliDH5α 后挑取阳性克隆, 用 NdeⅠ /XhoⅠ 双酶切质粒 pgemtdpk3 和 pgemt DPK4, 将两段目的基因片段分别回收纯化.2.5 重组表达载体 pet22bdpk3 和 pet22bdpk4 的构建与诱导表达将纯化的两段目的基因与经 Nde Ⅰ /XhoⅠ 双酶切的载体 pet22b( + ) 相连接, 分别构建重组表达载体 pet22bdpk3 和 pet22bdpk4, 转化感受态 E.coliDH5α 后挑取阳性克隆, 用 NdeⅠ /Xho Ⅰ 双酶切鉴定经测序分析正确的重组质粒 pet22b DPK3 和 pet22bdpk4 转化感受态 E.coliBL2 (DE3), 挑取阳性克隆, 接种于 0mlLB/Amp + 培养基中, 于 37 培养过夜按 % 比例将工程菌转接于 500ml 新鲜的 LB/Amp + 培养基中,37 培养至 OD 600 约 0.5 时, 加入终浓度为 0.8mmol/LIPTG 诱导表, 于 37 培养 3h 表达产物用 SDSPAGE 检测取 50ml 经诱导表达的工程菌超声裂解后, 分别取上清组分及沉淀组分 SDSPAGE 分析.2.6 融合蛋白 DPK3 和 DPK4 的纯化收获的工程菌经超声破菌后, 将沉淀物用 % TritonX00 漂洗后用缓冲液 A(2mol/L 尿素,20mmol/LPBS,pH7.5) 于 4 洗涤 2h, 离心收集沉淀经粗提的包涵体溶解于缓冲液 B(8mol/L 尿素,20 mmol/l PBS ph8.0, 0.5mol/LNaCl,20mmol/L 咪唑 ),4 搅拌 2h, 使其充分溶解离心后取上清以 ml/min 的流速上样于经缓冲液 B 平衡后的 HisTrapHP 亲和柱, 上样后以缓冲液 B 洗柱 ; 而后通过梯度混合器形成从缓冲液 B 到 C
3 22 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.28No (mol/l 尿素,20mmol/LPBSpH8.0,0.5mol/LNaCl, 3mmol/LGSH,0.3mmol/LGSSG,20mmol/L 咪唑 ), 尿素浓度从 8mol/L 到 mol/l 的线性梯度, 以 0.2ml/min 的流速, 总体积 50ml 缓冲液进行梯度柱上复性, 最后用缓冲液 D(20mmol/LPBSpH8.0,0.5mol/LNaCl, 500mmol/L 咪唑 ) 洗脱蛋白洗脱的蛋白再经 20 mmol/lpbs4 透析 24h, 每 4h 换液一次每一步留取样品以备 SDSPAGE 分析, 并用 Bradford 法测定蛋白质浓度 [7,8].2.7 工作库 ( 大容量噬菌体抗体库 ) 的制备原始噬菌体抗体库采用从成年健康人外周血及新生儿脐血分离淋巴细胞, 提取总 RNA, 通过 RTPCR 扩增出全套轻重链可变区基因, 克隆到噬菌体载体 pdf, 并通过 loxpcre 重组构建大容量抗体库, 最后以辅助噬菌体将抗体基因展示和表达在噬菌体表面, 构建成人源天然大容量噬菌体抗体库将原始噬菌体抗体库以 00: 的比例 (multiplicityofinfection,moi=00) 超感染 BS365 细胞,37 水浴保温 h, 使多副本载体进入同一个细胞再以 MOI 的比例感染对数生长期的 XLBlue 菌, 回收上清, 常规 PEG 沉淀, 获得工作库.2.8 抗 DNAPKcs 抗体的筛选将 DPK3 及 DPK4 分别用 0.05mol/L 碳酸盐缓冲液稀释至 00μg/ml 包被免疫管,4 过夜,3% 脱脂奶粉封闭 2h 后, 加入 ml 噬菌体抗体库 ( 约 0 3 个 CFU),37 孵育 2h, 以 0.05%Tween20PBS 洗 5 次, 用 2 种方法回收结合于固相的噬菌体抗体 : 先加入 ml 新鲜 XLBlue 菌直接感染,37 孵育 5min 后, 转入 0mlSB 培养液中 ; 再将细菌感染回收后的免疫管中加入 ml 甘氨酸 盐酸洗脱缓冲液 37 静置 5min 后洗脱回收将洗脱缓冲液吸出后, 加入 45μl2mol/LTris 中和, 再加入 2mlXLBlue 细胞 37 静置 5min 后, 加入 7ml 的 SB 培养液分别取 2 次回收的适量菌液铺盘测定 CFU, 其余细菌 37 培养 3h, 扩大体积到 00ml, 加入 pfu 辅助病毒 VCSM3,30 振荡培养过夜次日回收上清, 常规 PEG 沉淀, 所得次级噬菌体抗体库再进行下一轮的筛选.2.9 噬菌体抗体的制备从筛选第 3 第 4 的培养盘随机挑取集落在 2YT/Amp + 培养液中过夜, 第 2 天取 30μl 细菌到 mlsb 中,37 培养至对数生长期, 加入辅助病毒 VCSM3,30 培养过夜, 收取上清即得到噬菌体抗体.2.0 ELISA 试验鉴定噬菌体抗体将抗原稀释至 0μg/ml 包被 ELISA 板,h 后用 3% 脱脂奶粉封闭后加入噬菌体抗体液,37 孵育 h, 用 0.05%Tween20PBS 洗涤 3 次, 加入 HRP 抗 M3 鼠单抗进行反应, 洗涤后加入 OPD 底物显色, 读取 A 可变区基因的多样性分析 (DNA 指纹 ) 从筛选到的阳性克隆提取质粒, 以此为模板,PCR 扩增 ScFv 基因,PCR 产物用 CL6B 凝胶微型柱离心纯化, 再用限制性内切酶 MvaⅠ37 消化 2h, 取 0μl 进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,EB 染色后根据酶谱分析其多样性.2.2 可溶性抗 DNAPKcs 抗体的表达及鉴定将 ELISA 鉴定出的特异性阳性的 DNAPKcs 噬菌体抗体一定倍数稀释后感染 E.coliHB25,37 孵育 5min 铺培养盘挑取单个集落在 2YT/Amp + 培养液中过夜, 第二天取 30μl 细菌到 mlsb 中,37 培养至对数生长期, 加入 IPTG 至 mmol/l,30 培养过夜, 收取上清即得到可溶性体抗体将抗原稀释至 0μg/ml 包被 ELISA 板,3% 脱脂奶粉封闭后加入噬菌体抗体液,37 孵育 h,0.05%tween20pbs 洗涤后加入抗 V5 二抗进行反应,0.05% Tween20PBS 洗涤后加入 HRP 鼠抗人 Fab,37 孵育 h 后 OPD 底物显色, 读取 A 竞争抑制性 ELISA 将抗原包被 ELISA 板, 3% 脱脂牛奶封闭后, 加入噬菌体抗体 25μl 的同时, 分别加入不同浓度 25μl 的 DNAPKcs 的抗原和无关抗原,37 孵育 2h,0.05% Tween20PBS 洗涤后, 加入 HRP 标记抗噬菌体抗体,37 孵育 h 后 OPD 显色读取 A 490 抑制率的计算 : 抑制率 (%)=( 对照 A 490 实验组 A490)/ 对照组 A % 对照组 A 490 为不加竞争抑制剂时所测值, 实验组为加抑制剂时所测值.2.4 抗体可变区基因测序挑取 DNA 指纹分析获得的克隆送上海英骏生物技术有限公司进行可变区基因序列测定.3 统计分析数据用 Mean±SD 表示, 分析用 t 检验进行分析 2 结果 2. 表达载体 pet22b(+)dpk3 和 pet22b(+) DPK4 的构建及鉴定应用 Biosun 软件及 Blast 比对, 我们得到 DNA PKcs 中抗原性较高且与其他蛋白无同源性的两段氨基酸片段 DPK3( 氨基酸 96~220,250 个 AA) 和 DPK4
4 ８ ８ ９ 杜 丽 等 从大容量噬菌体抗体库中筛选抗 ＤＮＡ ＰＫ 人源单链抗体 氨基酸 ７ ７个 ＡＡ 根据其 ＤＮＡ序列 分别设计了两对引物 ＲＴ ＰＣＲ反应后经琼脂糖凝胶电 ｂ 和 ７７ｂ 泳分析 结果获得分子大小分别为 ７ 的特异扩增片段 ＤＮＡ长度与预期值一致 图 将 ＰＣＲ产物分别连接 Ｔ载体后 转化细菌获得质粒 ＤＮＡ 经 Ｎ Ｘｈ Ⅰ Ⅰ双酶切初步鉴定后 再将基因片段分别 连接入经 Ｎ Ｘｈ ｂ 构 Ⅰ Ⅰ双酶切的载体 ＥＴ ＥＴ ｂ Ｋ和 ＥＴｂ Ｋ 用 Ｎ 建表达载体 Ⅰ 图 酶切鉴定重组质粒 Ｘｈ Ⅰ双酶切重组质粒 可分别切出大小约为 ７ｂ和 Ｆ Ｔｈ ｚ ｙ ｍ ｕ ｈ ７７ｂ 的 ＤＮＡ 片 段 与 预 期 值 相 符 表 明 Ｋ和 ｕ ｍ Ｋ两段基因均插入到载体 ＥＴ ｂ 中 图 进一步做 ＤＮＡ序列测定 确认插入的目的基因无碱基 Ｐ ｍ ＥＴ ｂ Ｋ ｂ Ｐ ｍ ＥＴ ｂ Ｋ Ｍ Ｍ Ｐ ｍ Ｐ ｍ ｗ ｈｎｉ Ｘｈ Ｉ ＤＮＡ ｍ ｚ ｙ ｍ 突变和读码框移位 重组表达载体 ＥＴ ｂ Ｋ和 ＥＴ ｂ Ｋ的表达及蛋白纯化 将重组表达载体分别转化感受态 Ｅ ＢＬ ＤＥ ＰＴＧ诱导表达后用 Ｓ ＤＳＰＡＧＥ分析结果表明 在分 经Ｉ 子量约为 Ｄ处有一条明显的蛋白质表达带 与预期的 分子量位置相符超声破菌后 分别取离心后的上清组分 图 ＲＴ ＰＣＲ扩增 ＤＮＡ ＰＫ 基因 ＤＮＡ片段的电泳结果 Ｆ ＲＴ ＰＣＲ ｕ ＤＮＡ ＰＫ ＤＮＡ ｍ Ｋ Ｋ Ｍ Ｍ Ｃ Ｃ Ｋ ７ｂ Ｋ ７７ｂ 和沉淀组分进行 Ｓ ＤＳＰＡＧＥ分析 结果表明 融合蛋白 Ｋ及 Ｋ均以包涵体形式存在经过８ｍ Ｌ尿素变 的可溶性蛋白 图 性及柱上复性后 得到纯度达 ９ 测定复性后的蛋白质浓度 融合蛋白 Ｋ的浓度约为 ｍ ｍ Ｋ的浓度约为 ｍ ｍ 图 Ｋ Ａ 及 Ｋ Ｂ 的表达纯化 Ｆ Ｅｘ Ｐｕ Ｋ Ｋ Ｅ Ｍ Ｍ Ｌｙ ｍ ｂ ｂ ｕ Ｌｙ ｍ ｂ ｕ ｗ ｈ ８ｍｍ ＬＩ ＰＴＧ Ｉ ｕ ｂ ｙ ｕ ｂ ｚ ｂ ｙ８ｍ Ｌｕ Ｐ ｍ ｗ ｈ ｕ ｈ７ ９ Ｗ ｈｗ ｈｂｕ Ｂ Ｅ ｕ ｗ ｈｂ ｕ Ｄ ｂ Ｍ Ｍ Ｌｙ ｍ ｂ ｂ ｕ Ｌｙ ｍ ｂ ｕ ｕ ｈ ８ｍｍ ＬＩ ＰＴＧ Ｐ ｍ ｗ ｈ ｕ ｈ ７ ８ Ｗ ｈｗ ｈｂｕ Ｂ ９ Ｅ ｕ ｗ ｈｂｕ Ｄ 工作库的制备 ｘ 介导的定位重组使同一细胞内不同载体之间的轻 从原始噬菌体抗体库中取出 ７ ＣＦＵ的噬菌体 颗粒以高比例 ＭＯＩ 感染 ＢＳ 菌 通过 重链随机交换配对 所获噬菌体上清再按低比例 ＭＯＩ Ｂ ｕ菌 获得库容为 ７ 的大容量人 感染 ＸＬ
5 中国生物工程杂志 Ｃｈ Ｂ ｈ ｙ Ｖ ８Ｎ ９ ８ 源噬菌体抗体库 所获抗体库滴度为 ＣＦＵ ｍ 相互作为对照鉴定特异性 其中抗 Ｋ有 个克隆 抗 ＤＮＡ ＰＫ 噬菌体抗体的筛选 ＥＬＩ ＳＡ检测有活性且特异性较高 抗 Ｋ有 个克 经过 轮吸附 洗脱 扩增的筛选 测定每轮洗脱回 Ｓ Ａ检测有活性且特异性较高 表 隆 ＥＬＩ 收的噬菌体滴度 发现有一定的富集从第 第 轮 洗脱回收菌落中随机挑取 个克隆 制备噬菌体抗 ＳＡ结果表明 个能与 Ｋ抗原结合 个 体ＥＬＩ 能与 Ｋ抗原结合 阳性率分别为 随后 相互作为对照鉴定 其 用卵清蛋白 铁蛋白及 Ｋ 中特异性结合 Ｋ的克隆为 个 特异性结合 Ｋ 的克隆为 个 所获得的特异性抗体菌做 ＰＣＲ扩增的基因多样 性结果 特异性结合 Ｋ的克隆进行了 ＤＮＡ指纹分析 获得了 种不同的指纹图谱 图中 指纹相同 特 异性结合 Ｋ的克隆进行了 ＤＮＡ指纹分析 获得了 种不同的指纹图谱 图 图 阳性克隆可变区基因的指纹图谱 Ｆ Ｆ ｂ 可溶性抗体的表达 筛选出的特异性克隆感染 Ｅ ＨＢ 制备可 Ｍ ＤＮＡｍ ＤＮＡ Ｋ Ｆ ｂ ｂ ｙ ｂ Ｍ ＤＮＡｍ ＤＮＡ Ｋ Ｆ ｂ ｂｙ 溶性抗体用卵清蛋白 ＯＡ 铁蛋白 Ｆ 及 Ｋ 表 抗 Ｋ可溶性抗体与不同抗原反应的 ＥＬＩ ＳＡ检测 Ｔ ｂ Ｔｈｂ ｙ ｕｂ Ｋ Ｆｗ ｈ ｂｙｅｌｉ ＳＡ Ｋ ７± ± ± ＯＡ ± ± ７± ± ８± ± ９ ８± ± ± Ｆ ± ± ± ± ± ± Ｋ ± ± ８± ± ± ± Ｃ ｍ ｗ ｈ Ｐ 表 抗 Ｋ可溶性抗体与不同抗原反应的 ＥＬＩ ＳＡ检测 Ｔ ｂ Ｔｈｂ ｙ ｕｂ Ｋ Ｆ ｗ ｈ ｂｙｅｌｉ ＳＡ Ｋ ± ± ± ７± ± ＯＡ ± ± ± ± ± Ｆ ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ７ ８ ９ Ｋ ± ８± ± ± ７ ７ ８± ＯＡ ± ± ± ± ± Ｆ ± ± ± ± ８± ± ± ± ± ± Ｋ ± ± ± ± ± ＯＡ ± ± ± ± ± Ｆ ± ± ± ± ± Ｋ ± ± ± ± ± Ｃ ｍ ｗ ｈ Ｐ ７ ＥＬＩ ＳＡ竞争抑制实验 为进一步确定所表达的 ＤＮＡ ＰＫ 单链抗体的特异 性 我们进行了竞争抑制实验竞争抑制实验显示游离 的抗原产生与剂量相关的抑制效应 图 其中 Ｋ 及 Ｋ ８ 的竞争抑制率较高 选择指纹图谱不同且竞争抑制率较高的克隆测定 其可变区基因的序列 分析发现 Ｋ抗 体 基 因 来源于不同的胚系 重链可变区基因分属 ＶＨ ＶＨ亚群 轻链可变区同属于 ＶＬ亚群 Ｋ抗 体基因重链可变区基因 ８ 分属 ＶＨ ＶＨ 亚群 轻链可变区分属于 ＶＬ ＶＬ亚群 讨 论 恶性肿瘤严重威胁着人类健康 其高死亡率 低治
6 ８ ８ ９ 杜 丽 等 从大容量噬菌体抗体库中筛选抗 ＤＮＡ ＰＫ 人源单链抗体 成 具有较好的抗原 结 合 能 力 且 具 有 相 对 分 子 量 小 穿透能力强 体内循环半衰期短及免疫原性低等特 ＰＫ 定位于细胞核 小分子的单链抗体 性由于 ＤＮＡ 可以更容易进入细胞发挥阻抑作用 ＤＮＡ ＰＫ 的蛋白分子较大 ７ Ｄ 很难实现全 比对 长蛋白的表达 因此我们采用抗原性分析及 Ｂ 结合的生物信息学方法筛选出抗原性较高且与其他蛋 白没有同源性的蛋白片段 通过原核表达相应的蛋白片 段原核表达系统具有操作简便 成本低 产量高等优 点 能够满足噬菌体抗体库筛选中抗原纯度高 需要量 较大的要求在实验过程中经过摸索诱导条件 选用 ＥＴ ｂ载体经 ７ 诱导获得蛋白包涵体 而后经过柱 上复性过程得到纯度达到 ９ 以上的可溶性蛋白 符 合进一步筛选抗体的需要 将可溶性蛋白包被抗原管后 经过四轮 吸附 洗脱 扩增 的淘筛发现噬菌体抗体得到富集而后挑取克 图 不同抗体与游离抗原的竞争抑制率 隆通过 ＥＬＩ ＳＡ检测与不同抗原的结合能力挑选特异 Ｆ Ｔｈ ｍ ｈ ｂ ｈ 性结合的克隆进行基因多样性分析及可溶性抗体表达 ｂ ｗ ｈ 后的活性分析经过分 析 Ｋ Ｋ分 别 筛 选 出 愈率使人们 谈癌色变 目前临床上主要采用手术 放射治疗与化学治疗相结合的治疗手段然而 肿瘤组 织细胞对放疗及化疗的易耐受性是导致恶性肿瘤治愈 率低 严重影响恶性肿瘤患者生活质量的原因之一研 究发现 多种恶性肿瘤细胞中 ＤＮＡ依赖的蛋白激酶复 合物表达增多与恶性肿瘤的发生及放化疗敏感性降低 密切相关 包括本实验室在内的研究显示 某些类型肿瘤中具 有高转移特性和放化疗抗性的癌组织中 ＤＮＡ ＰＫ 等 的 表 达 活 性 显 著 增 高 ９ 应 用 抑 制 剂 抑 制 ＤＮＡ ＰＫ 活性或阻断剂阻止调节亚基功能可使细胞损伤修 复能力降低 对电离辐射的敏感性增高 促使肿瘤细胞 发生凋亡 本研究采用人源大容量噬菌体库筛选技术筛选针 ＰＫ 的单链抗体噬菌体抗体库技术是全套 对 ＤＮＡ 个 个特异性较高且有活性的抗体可溶性表达后 活性与噬菌体表达不完全一致 可能是诱导条件发生了 变化 可溶性表达结合活性发生了改变另外 可溶性 表达抗体蛋白主要在细菌的周质腔中 其立体构象发生 了变化 因此可能造成可溶性表达活性不同进一步的 竞争抑制实验目的是筛选活性较好的抗体 最终结果 Ｋ 及 Ｋ ８ 的竞争抑制率 较高 由此选出进行进一步的基因分析下一步我们还 将就所筛选出抗体的生物学效应进行深入的研究 参考文献 孙敬芬 周平坤 吴德昌ＤＮＡ修复与人类疾病研究进展 癌变 突变 畸变 Ｓｕ ＪＦ Ｚｈ ｕｐｋ ＷｕＤＣＣ Ｔ Ｍｕ Ｓ ＪＣ Ｔｈ ＬＤ Ｊ ＰＡ Ｔｈ 抗体基因展示在噬菌体表面 并能在体外模拟抗体免疫 ＰＫＯ ９ ９ ９ ｈ ＤＮＡ 系统的选择作用 呈现在噬菌体表面的抗体能够在体外 余子建 徐勤枝 周丽君 等肝癌组织中 ＤＮＡ ＰＫ 的过量 用固相化抗原进行筛选经过几轮 吸附 洗脱 扩增 的淘筛 可使特异性噬菌体抗体得到富集利用噬菌体 抗体库技术借助高效筛选系统 可以不经免疫方便地制 备 出 人 源 抗 体 单 链 抗 体 ｈ ｂ ｍ Ｆ 是 由 ＶＨ 和 ＶＬ中 间 加 一 段 Ｌ 构 表达及其靶向 ＲＮＡ分子的抗增殖作用世界华人消化杂 志 ７ ８ ８ ＹｕＺＪ ＸｕＱＺ Ｚｈ ｕｌｊ Ｗ ＪＧ ７ ８ ８ Ｈ Ｙ Ｔ ｂ Ｗ Ｎ ｗｋ Ｕ ｕ ＤＮＡ ｙ Ｓ
7 26 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.28No cancer.intjoncol,2004,25(2):46~468 [5] 安静, 隋建丽, 徐勤枝, 等.siRNA 抑制 DNAPKcs 表达及对 HeLa 细胞增殖的影响. 癌变 突变 畸变,2005,7(6): 327~33 AnJ,SuiJL,XuQZ,etal.Carcinogenesis,Teratogenesisand Mutagenesis,2005,7(6):327~33 [6]AnJ,XuQZ,SuiJL,etal.Downregulationofcmycprotein bysirnamediatedsilencingofdnapkcsinhelacels.intj Cancer,2005,7(4):53~537 [7] SblateroD,BradburyA.Exploitingrecombinationinsingle bacteriatomakelargephageantibodylibraries.natbiotechnol, 2000,8():74~80 [8] 乔媛媛, 王琰, 陈晓穗, 等. 大容量噬菌体抗体库的构建及鉴定. 中华微生物学和免疫学杂志,2004,24(3):94~ 97 QiaoY Y, WangY, ChenX H, etal.chin JMicrobiol Immunol,2004,24(3):94~97 [9]AnJ,XuQZ,SuiJL,etal.SilencingofDNAPKcsaltersthe transcriptionalprofileofcertainsignaltransductiongenesrelated toproliferationanddiferentiationinhelacels.intjmolmed, 2005,6(3):455~462 [0]MondonP,DubreuilO,BouayadiK,etal.Humanantibody libraries:aracetoengineerandexplorealargerdiversity.front Biosci,2008,3:7~29 []BeckmanRA,WeinerLM,DavisHM.Antibodyconstructs in cancertherapy: protein engineeringstrategiestoimprove exposureinsolidtumors.cancer,2007,09(2):70~79 [2]NguyenDC,ParsaB,CloseA,etal.Overexpresionofcel cycleregulatoryproteinscorelateswithadvancedtumorstagein headandnecksquamouscelcarcinomas.intjoncol,2003, 22(6):285~290 ScreeningofHumanAntiDNAPKcsscFvfrom LargeScalePhageLibrary DULi ZHOULijun 2 PANXiujie WANGYu WANGYuxiao 2 YANGZhihua XUQinzhi ZHANGShimeng ZHUMaoxiang ZHOUPingkun (BeijingInstituteofRadiationMedicine,Beijing 00850,China 2NavyGeneralHospital,Beijing 00037,China) Abstract Objective:ToclonethegenesencodinghumanantiDNAPKcsantibodiesfrom largephage antibodylibraryfortheuseofcancertherapyordiagnosisinfuture.method:humandnapkcsprotein fragmentswithhighantigenicityandlowhomologoustootherproteinsweredefinedthroughantigenicityanalysis andblastsearching.afterprokaryoticexpresionandpurification,theproteinsegmentswerecoatedonto immunotube.panningoflargescalephagelibraryagainstantigenwasconductedtoselectspecificantibodies againstdnapkcs.thebindingactivityandspecificityweretestedbyelisamethod.solublescfvwasprepared throughtransfectinghb25withtheselectedphageantibodygenes.result:250aaofdpk3and257aaof DPK4segmentsweredefinedashighantigenicityandlow homologytootherproteinthroughbioinformatic analysis.after4roundsofpanning,26cloneswereidentifiedwiththespecificbindingabilitywithdpk3,and 3cloneswithDPK4.DNA fingerprintingrevealed5individualpositiveclonestodpk3and2individual positiveclonestodpk4.sequencinganalysisshowedthatvariableregionsofthesescfvsbelongtodiferent subgroups.conclusion:humandnapkcsantibodygenesweresuccesfulyobtainedfrom largescalephage antibodylibrary. Keywords Largescalephagelibrary DNAPKcs scfvantibody
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
材料 方法
生物技术通报 张发洲 杨慧兰 为了构建单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽 真核表达质粒 应用 技术从 株 的基因组中扩增 基因 并连接至真核表达载体 对阳性克隆进行菌落 酶切和测序鉴定后 成功构建了重 组质粒 用 转染试剂盒将重组质粒 转染至 细胞中 并用 及 检测其表达情况 结果显示 基因在 细胞中得到正确表达 真核表达质粒 的构建成功 为进 一步研究 对宿主细胞的影响奠定了基础 单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
材料 方法
生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人
材料 方法 载体构建 转基因植株的获得
生物技术通报 唐宏琨 曾洪梅 杨秀芬 邱德文 通过根癌农杆菌 介导转化法 将含有激发子基因 的植物表达载体 转化三生烟 获得了转基因烟草植株 用 检测确认了阳性转化株 用 杂交 和 杂交进一步证实了 基因的整合 转录和表达 对 代转基因阳性株进行 接种试验 结果显示 与非转基 因对照相比 表达 的烟草叶片枯斑数量减少 表明蛋白激发子基因 的表达提高了转基因烟草对 的抗性 激发子 基因 烟草 转化 材料
第 期 甘金华等 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 材料与方法 试剂及溶液
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 甘金华 邓薇 李进平 艾晓辉 中国水产科学研究院长江水产研究所 湖北荆州 武汉纺织大学环境与城建学院 湖北武汉 采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白 连接制备强力霉素 牛血清白蛋白 人工免疫抗原 并用同样方法将强力霉素与载体蛋白 连接制备人强力霉素 卵清白蛋白 人工包被抗原 经紫外扫描分析和动物免疫试验证实 强力霉素人工抗原合成成功
+
~ 1 ~ ~ 2 ~ 1-1 UHPLC-SEC 法对治疗性抗体的分析 TSKgel UP-SW3 UHPLC HPLC A TSKgel UP-SW3 2 μm (4.6 mm ID. 15 cm B UHPLC-SEC 1.7 μm (4.6 mm ID. 15 cm mmol/l (ph 6.7 + 2SO4 mmol/l Na +.5 % NaN3.35 ml/ 25 UV 28 nm 5
生 物 技 术 通 报 相 关 载 体 及 试 剂 动 物 组 织 及 细 胞 培 养 总 的 提 取 及 反 转 录 内 蒙 古 白 绒 山 羊 基 因 的 分 子 克 隆 生 物 信 息 学 分 析
生 物 技 术 通 报 鲍 文 蕾 杨 娇 馥 李 彬 刘 俊 娥 王 潇 郭 旭 东 王 志 钢 侯 鑫 刘 东 军 旨 在 克 隆 内 蒙 古 白 绒 山 羊 血 管 内 皮 生 长 因 子 基 因 并 分 析 其 基 本 表 达 模 式 采 用 技 术 克 隆 基 因 将 得 到 的 基 因 序 列 及 其 编 码 的 氨 基 酸 序 列 进 行 生 物 信 息 学 分 析 利 用 半 定 量
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7 北京大学学报 医学版 # +94* 4 ' % 论著!! "# $ #% %"&!%'!! $ "( )& * $ +,-.)/ ) 01 " * ). " 2")3 )01 ( /" 433% /1 " 0 "51 " -.)/$ 6',)") 4.))%) 0
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生物技术通报 材料 方法
生物技术通报 高曰文 朱耀明 王艳林 朱晨宇 秦烨 胡汉卿 韩钰 旨在探讨盐酸普鲁卡因 对人结肠癌 细胞 基因甲基化及表达的影响 应用巢式双重 甲基化特异性聚合酶链反应 检测盐酸普鲁卡因处理前后 细胞中 基因启动子的甲基 化水平 逆转录 聚合酶链反应 和蛋白印迹技术观察 细胞内 基因表达情况 检测发现人结肠癌 细胞中 基因存在甲基化 经盐酸普鲁卡因处理能够使 基因甲基化水平下降 和蛋白印迹分析结果显
< 1+1 <! " #$% &!"#$ %&' ( )( %&* ) + ), %&- )+. )../'0 ) 1 ) "' )!"#$%&' (1% ( )* " + + %,-.2(13/01 )' 扩增 &' 基因 煮沸获得铜绿假单胞菌 ) 基因组作为模板 ) )( 作为引物
213456!"# $ % # %557;&/55/?5,/ @@@!88>>!"#!$% &'()*+ 武汉市疾病预防控制中心 武汉 /&55, % 华中科技大学同济医学院病原生物学系微生物教研室 武汉 /&55&5 & 武汉市第十一医院 武汉 /&5555,- O ' 0 ' =! 6!, 2 M*34!. 5 '2 ' 0 0* 6) 7 88^9:;0, 6! 89-4 O?@ 7%58
第 5 期 何光志等 : 抗结核杆菌人源噬菌体单链抗体库的构建及筛选 71 身免疫性疾病与病毒性疾病的鉴别研究 肿瘤的影像分析和导向治疗或基因治疗等多个领域有着潜在的优势. 该技术具有简单易行 生产成本低 筛选容量大等优点 [2]. 本研究尝试利用噬菌体展示技术构建大容量天然人源性噬菌体抗体库, 从
![第 5 期 何光志等 : 抗结核杆菌人源噬菌体单链抗体库的构建及筛选 71 身免疫性疾病与病毒性疾病的鉴别研究 肿瘤的影像分析和导向治疗或基因治疗等多个领域有着潜在的优势. 该技术具有简单易行 生产成本低 筛选容量大等优点 [2]. 本研究尝试利用噬菌体展示技术构建大容量天然人源性噬菌体抗体库, 从](/thumbs/91/105113161.jpg "第 5 期 何光志等 : 抗结核杆菌人源噬菌体单链抗体库的构建及筛选 71 身免疫性疾病与病毒性疾病的鉴别研究 肿瘤的影像分析和导向治疗或基因治疗等多个领域有着潜在的优势. 该技术具有简单易行 生产成本低 筛选容量大等优点 [2]. 本研究尝试利用噬菌体展示技术构建大容量天然人源性噬菌体抗体库, 从")
2011 年 10 月第 34 卷第 5 期 湖南师范大学自然科学学报 JournalofNaturalScienceofHunanNormalUniversity Vol.34 No.5 Oct.,2011 1, 1, 2, 1, 1, 1, 2, 1 (1 贵阳中医学院, 中国贵阳 550002;2 遵义医学院附属医院, 中国遵义 563003)! " 目的 : 构建人源噬菌体展示单链抗体 (ScFv)
生命科学研究 房 蓓 武泰存 王景安 以玉米沈单 号为材料 用溶液培养的方法研究了缺锌 低锌和正常供锌对玉米生长发育的影响 进一步明确了一定量低锌比缺锌对玉米的伤害更大 并对其 同工酶谱及蛋白质表达进行了分析 结果表明 一定浓度的低锌培养使玉米生长受抑及受害最重 且地上部分比地下部分更敏感 低锌和缺锌处理时 种同工酶的酶谱和蛋白表达与正常供锌时均有明显的差异 尤其在一定量低锌浓度时 有些同工酶的表达增强或被特异性诱导
Really Good Antibodies Bethyl 二抗产品册 超过 670 种抗小鼠 兔子 山羊和大鼠的二抗 bethyl.com
Really Good Antibodies Bethyl 二抗产品册 超过 670 种抗小鼠 兔子 山羊和大鼠的二抗 bethyl.com Bethyl 公司 Bethyl Laboratories, Inc. ) 成立于1972年 一直秉承改善生活的理念致力于科学研究的理念 提供高质量的抗体产品 和抗体定制服务 Bethyl所销售的每一个抗体都是在德克萨斯州的蒙哥马利的唯一工厂生产 并且都经过Bethyl
:TGF-β bfgf 23 KEY WORDS:transforminggrowthfactor-β ;basicfibroblastgrowthfactor; bonemarrow mesenchymalstemcels;eukaryoticexpressionvector; liposomet
2 ( )208 58 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)208,Vol.58No. TGF-β bfgf,, 2 (., 330006; 2., 5040) : -β (TGF-β ) (bfgf) (BMSCs), SD BMSCs Percol PCR TGF-β bfgf, pcdna3.(+), 3 BMSCs RT-PCR Westernblot
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin( 氨卡青霉素 )(100 mg/ml) 100 mg/ml Ampicillin 50 ml 配制方法 1. 称量 Ampicillin 置于 50 ml 离心管中 ; 2. 加入 40 ml 灭菌水, 充分混合溶解后, 定容至 50 ml; 3. 用 0.22 µm 过滤膜过滤除菌 ; 4. 小份分装 (1 ml/ 份 ) 后,-20 保存 IPTG(
pet28a + CD 1 3 ~ 4 NHL 85% ~ % B 2 CD B B B 3-4 CD 5 CD B Rituximab C2B8 CD IgG1 CHO FDA C2B8 Minibody IgG VL VH CH3 Linker VL-VH-CH3 Fc ADCC
35 3 12 9 JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY Natural Science Edition Vol 35 No 3 Sept 12 pet28a + CD 210046 Rituximab VL VH CH3 CD overlap PCR Rituximab VL VH Linker ScFv ScFv IgG1 CH3 IgG1 cdna pet28a
12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL
![12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL](/thumbs/91/106935627.jpg "12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL")
( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot
第 期 王 兴 涛 等 猪 流 行 性 乙 型 脑 炎 病 毒 种 猪 精 液 分 离 株 的 鉴 定 及 进 化 分 析 病 料 毒 株 及 细 胞 试 剂 引 物 设 计 提 取 及 基 因 克 隆 及 测 序
河 南 农 业 科 学 王 兴 涛 罗 俊 滕 蔓 樊 剑 鸣 鄂 巍 禹 斌 刘 力 张 改 平 利 用 技 术 对 河 南 省 某 规 模 化 猪 场 乙 脑 疑 似 病 例 的 种 猪 精 液 进 行 分 析 从 部 分 样 本 中 扩 增 出 与 流 行 性 乙 型 脑 炎 病 毒 基 因 和 基 因 具 有 高 度 同 源 性 的 预 期 产 物 在 日 龄 乳 鼠 脑 内 接 种 种 猪
模 型 假 设 假 设 假 设 假 设 假 设 假 设 模 型 建 立 与 推 导
系 统 工 程 罗 彪 巩 超 朱 晓 梅 报 酬 契 约 是 所 有 者 激 励 经 营 者 努 力 工 作 的 基 本 方 法 其 传 统 做 法 是 将 经 营 者 报 酬 与 企 业 业 绩 进 行 直 接 挂 钩 而 企 业 业 绩 产 出 本 身 具 有 多 源 性 特 点 除 来 自 经 营 者 的 个 人 努 力 外 还 与 行 业 结 构 资 源 特 征 与 经 营 者 能 力 等
D 慢 性 肾 炎 E 子 宫 蓄 脓 7. 支 气 管 肺 炎 的 X 线 影 征 是 A 黑 色 阴 影 B 密 度 均 匀 的 阴 影 C 大 小 不 一 的 云 絮 状 阴 影 D 边 缘 整 齐 的 大 块 状 阴 影 E 整 个 肺 野 出 现 高 密 度 阴 影 8. 以 波 幅 变
2010 年 国 家 执 业 兽 医 资 格 考 试 试 卷 ( 下 午 卷 ) 临 床 科 目 A 1 型 题 答 题 说 明 每 一 道 考 试 题 下 面 有 A B C D E 五 个 备 选 答 案, 请 从 中 选 择 一 个 最 佳 答 案, 并 在 答 题 卡 上 将 相 应 题 号 的 相 应 字 母 所 属 的 方 框 涂 黑 1. 检 查 浅 表 淋 巴 结 活 动 性 的 基
卢晓辉 等 人源性抗乳腺癌 2 噬菌体单链抗体库的构建与筛选 0 "!&%'" 7 %"- 6 " 2 7 " 2 "%'! 7 " #" 62 6%! )" 0) $! $*6 ) ;! ) "& )& 0 ; & $ ; ;! ) "& )& 0 ) # &#$ # $ )& % % 2 & &
浙江大学学报 医学版 2 7 1 6 16 61 年 月 '#9 % +,--- )&'.!#( $)' *' / * 0 /) "( 专题报道 人源性抗乳腺癌 2 噬菌体单链抗体库的构建与筛选 卢晓辉 王志文 蔡 颖 黄 静 朱丽华 杨清玲 陈昌杰 蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心 安徽蚌埠 蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室 安徽蚌埠 河南大学淮河医院检验科 河南开封 0 摘 要 目的 构建人源性抗乳腺癌噬菌体单链抗体
未命名-1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 ss a c y e vg 13 14 15 16 17 18 19 H 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 发现生命的螺旋 克里克在提出 中心法则 时曾指出 遗传信息是沿 Ｄ Ｎ Ａ - Ｒ Ｎ Ａ - 蛋白质的方向流动的 遗传信息不可能从 Ｒ Ｎ Ａ 回到 Ｄ Ｎ
大 学 化 学 第 卷 第 期 年 月 微 囊化技 术 在 生 物 医 学 中的 应 用 俞 耀 庭 陈 长 治 南 开 大学分 子 生物研 究 所 本 文 概 述 了微囊 固 定化技术基 本 应 用 原 理 摘要 的生 物 血液 相溶性 及 通透 性能 胞 在治 疗 肾 衰 肝 衰 及 清除 人体 内 中毒药物 般 性介 绍 微 囊 人 工 细 胞 的 一 般制 备方 法 各种 膜 材 料 对 人
卢全 章等 鳗鲡 肾病病原 菌 的研 究 期 鱼 放 人 水 族箱 中 饲 养 观 察 发 病情 况 生 化试 验 采用 和 常 规 方 法 药物 敏 感 试验 用 试 管稀释 方法 步 骤 和 结果 鳗鲡 肾病 症 状 病 鳗 症 状 主 要 表 现 在 鳗 鱼 前 腹 部 区 部 位 肿 大 严
卢全 章等 鳗鲡 肾病病原 菌 的研 究 期 鱼 放 人 水 族箱 中 饲 养 观 察 发 病情 况 生 化试 验 采用 和 常 规 方 法 药物 敏 感 试验 用 试 管稀释 方法 步 骤 和 结果 鳗鲡 肾病 症 状 病 鳗 症 状 主 要 表 现 在 鳗 鱼 前 腹 部 区 部 位 肿 大 严重 时 区 腹 部 皮 肤 软 化 溃 烂 穿 孔 脏 露 出 的 粘稠 状 液 体 肾脏 部 位和
材料导报 研究篇 年 月 下 第 卷第 期 种球的制备 单步溶胀法制备分子印迹聚合物微球 洗脱处理 种子溶胀聚合机理 种球用量的影响
水相中 组氨酸单分散分子印迹聚合物微球的合成 表征及其识别性能研究 李思平等 李思平 徐伟箭 较佳工艺条件下 在水性体系中选用无皂乳液聚合法制得的单分散微米级聚苯乙烯微球为种球 分别以组氨酸 甲基丙烯酸 或丙烯酸胺 乙二醇二甲基丙烯酸酯 为模板分子 功能单体和交联剂 合成了 组氨酸分子印迹聚合物微球 研究了形貌 粒径及其分布以及模板分子与功能单体之间的相互作用 分别以 激光粒度分析仪紫外分光光度法和红外光谱表征功能单体与交联剂之间的共聚情况
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 40 94 88 82 77 72 67 62 57 53 48 44 40 37 33 29 26 23 20 17 14 11 8 39 94 88 82 77 71 66 61 57 52 48 44 40 36 32 28 25 22 18 15 12 9 7 38 94 88
11. Fab 867 (Infectious bursal disease IBD) IBD ().25 mmol/l IPTG 37 4 h [1] SDS-PAGE 1 Table 1 Primers used in the amplification of the target gene P
![11. Fab 867 (Infectious bursal disease IBD) IBD ().25 mmol/l IPTG 37 4 h [1] SDS-PAGE 1 Table 1 Primers used in the amplification of the target gene P](/thumbs/81/83370048.jpg "11. Fab 867 (Infectious bursal disease IBD) IBD ().25 mmol/l IPTG 37 4 h [1] SDS-PAGE 1 Table 1 Primers used in the amplification of the target gene P")
37 11 215 11 中国预防兽医学报 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Vol. 37 No.11 Nov. 215 doi: 1.3969/j.issn.8-589.215.11.12 张瑛杰 1, 尹杰超 1, 李天鹤 2, 周兵 3, 徐鹏飞 1, 荆燕 1,4, 任桂萍 1*, 李德山 1* (1. 153 2. 49
第 卷 第 期 年 月 水 生 生 物 学 报 肠 丫 搔蒸霎 原 位杂 交 和 原 位 技 术在 鱼 类基 因 定位 中 的 应 用 黄 袁仕 取 梅 朱作言 中 国科 学 院 水 生 生 物 研 究 所 淡 水 生 态 与 生 物 技 术 国 家 重 点 实验 室 武 汉 陕 西 师 范 大学 生 命 科 学 院 西 安 # 万 尸 了夭 如 趾 郑 人 扭寿 卿 关 键词 艺 只 妙 毛山知
2015,35(4) 龚隆财等 :ctni linker TnC 融合蛋白的原核表达及鉴定 49 免疫反应鉴定, 表明重组表达的 ctni linker TnC 融合蛋白具有较好的免疫原性, 保存了 ctni 和 ctnc 单体的天然结构, 有望成为天然 ctni TnC 复合物的替代物, 为下一步
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2015,35(4):48 53 DOI:10.13523/j.cb.20150407 ctni linker TnC 融合蛋白的原核表达及鉴定 龚隆财 罗镇明 杨雁青 王振宇 向军俭 (1 暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州 510632) 王 宏 (2 广州市疾病与食品安全免疫学快速检测重点实验室暨南大学分室广州 510632)
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5 10 15 20 25 30 35 人噬菌体抗体库的构建及人源性 IL-17 抗体 # 的筛选 钮敏红 1, 闫晓霏 1, 吕卫东 2 2**, 万晓春 (1. 深圳大学第一附属医院手术室科, 深圳,518060; 2. 深圳先进技术研究院生物医药与技术研究所, 深圳,518055) 摘要 : 目的通过噬菌体展示技术构建人源单链抗体库, 筛选抗 IL-17 的特异性抗体并鉴定 方法通过采集 15
张红丽 等 部分功能域基因的原核表达与分析 第６期 发表序列 ＡＹ８１９６５０ 同源性为 １００ 与国外 １０ 株 同源性为 ９８畅 ８ 有 １３ 个碱基发生了突 变 其中 ４ 个是有意义的突变 这 ４ 个有意义的 突变分别为第 ２５７ 位 Ｔ Ｃ 第 ５０５ 位 Ａ Ｃ 第 ９０８ 位 Ａ Ｇ 第 １０１２ 位 Ｇ Ｃ 图 ４ 这些差异可 能是捻转血矛线虫株间存在地域差异所致 ２畅 ５ ＨＰＳ 原核表达与鉴定
!!
药学 实践 杂志 药理 年第 卷第 期 生 物 技 术 药 品 近年 来 的 发 展 杨玉 龙 任海 祥 南 京军 区 南京 总 医 院 南京 本 文 概 述 了 近 年 来 国 内 外 生 物 技 术 药 品 与 生 化 药 品 的 研 究 与 发 展 论 述 了生 物 技 术与 生 物 药 品 摘要 间 的 关 系 介 绍 了 近 代 生物 技 术 在某 些 生 物 药 品 生 产 中 的应 用
结 果 与 讨 论
倪 卓 杜 学 晓 王 帅 邢 锋 以 脲 醛 树 脂 为 囊 壁 双 酚 型 环 氧 树 脂 为 囊 芯 采 用 原 位 聚 合 法 合 成 环 氧 树 脂 微 胶 囊 根 据 化 学 反 应 动 力 学 得 到 脲 醛 树 脂 预 聚 体 及 微 胶 囊 囊 壁 合 成 反 应 过 程 中 的 速 率 方 程 测 定 不 同 温 度 下 甲 醛 浓 度 随 时 间 变 化 的 曲 线 确 定 不
第一章 图 １ １ 传染病的特征 ９ Ｔ ｈ１ Ｔ ｈ２ 细胞调节机制简图 正调节 负调节 细胞因子与细菌的相互作用机制目前尚未完全明了 有实验表明 细胞因子与细菌之间 存在有互利和互抑双重效应 例如 Ｔ Ｎ Ｆα 和 ＩＦＮγ 可抑制放线菌的生长而 ＩＬ ６ 的作用则 反之 ＩＬ １ ２ 和 ＧＭ ＣＳＦ 可促进某些致病性大肠杆菌生长而 ＩＬ １ｒａ 可抑制之 研究表 明 某些致病性大肠杆菌有与
福建农林大学硕士学位论文番茄抗叶霉菌相关基因的鉴定及 TRV 16K 基因的功能分析姓名 : 郑璐平申请学位级别 : 硕士专业 : 分子病毒学指导教师 : 吴祖建 ; 蔡新忠 20070401 番茄抗叶霉菌相关基因的鉴定及 TRV 16K 基因的功能分析 作者 : 郑璐平
材 料 方 法 统 计 学 分 析 体 外 作 用 对 细 胞 增 殖 的 影 响
生 物 技 术 通 报 罗 春 燕 官 涛 王 红 宁 杨 艳 姜 蓉 胡 晓 舒 华 自 森 王 建 伟 旨 在 探 讨 人 参 总 皂 苷 对 细 胞 表 达 的 影 响 法 显 示 对 细 胞 增 殖 抑 制 程 度 呈 剂 量 与 时 间 依 赖 性 增 加 且 呈 正 相 关 关 系 流 式 细 胞 术 表 明 能 阻 止 细 胞 从 期 向 期 移 行 激 光 共 聚 焦 显 微 镜 观
Invitrogen 1.4 pet-gr, ICE-LGR, PCR TA, pmd18-t/gr pet-21a(+) (Nde I Xho I), E. coli DH-5,,,, pet-gr GR ORF cdna, GR, : PU: 5 -GGAATTCCAT
42 6 Vol.42, No.6 2011 11 OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA Nov., 2011 南极衣藻 (Chlamydomonas sp. ICE-L) 谷胱 * 甘肽还原酶基因的原核表达及其条件优化 1 1 燏 1 1 2 (1. 524025; 2. 266061) RT-PCR GR ORF cdna, ; IPTG,, pet-gr BL21,
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第 期 李 伟 等 用 方 法 对 中 国 历 史 气 温 数 据 插 值 可 行 性 讨 论
李 伟 李 庆 祥 江 志 红 使 用 插 值 方 法 对 已 经 过 质 量 控 制 和 均 一 化 的 年 月 年 月 中 国 全 部 基 本 基 准 站 气 温 资 料 逐 月 进 行 空 间 插 值 通 过 站 点 的 实 际 序 列 与 插 值 后 格 点 序 列 进 行 比 较 针 对 相 关 系 数 和 线 性 趋 势 等 多 个 量 来 检 验 方 法 对 气 候 资 料 插 值 的
第 卷 -.+$$$-+($-.(+"$(+$%"(+$#'$+(.$+*(.$+(%$%+.$$$+$$+-$( 7-($++$"$($(+'$+'$%*$$&$.$+$%+ $$".(+$+.$+'$+'( ".($#-$4$+" +'$".(+%+$$$++(* %$+$+$"(+'$%+$"
第 卷第 期 年 月 "## $%# - 基础医学 含 '- 野生及突变结合位点的胰岛素受体 '6,78&' 区报告基因载体的构建和鉴定 王美晨 王 璇 蓝 茜 李 癑 刘 莉 伊 静 李 靖 宋刘梅 马莎蕊 宁启兰 李冬民 西安交通大学医学部 遗传学与分子生物学系 环境与疾病相关基因教育部重点实验室 级临床医学七年制 级临床医学五年制 陕西西安 ( 摘要 目的 利用 6< *%&$%', :%''"D$"
福 建 农 业 学 报 材 料 与 方 法 药 敏 纸 片 及 药 品 培 养 基 菌 种 来 源 仪 器 检 测 抗 菌 活 性 的 测 定 数 据 处 理 结 果 与 分 析 种 抗 菌 药 物 对 临 床 分 离 鸡 大 肠 杆 菌 的 结 果
福 建 农 业 学 报 律 海 峡 刘 建 华 潘 玉 善 胡 功 政 苑 丽 许 瑞 福 建 农 业 学 报 材 料 与 方 法 药 敏 纸 片 及 药 品 培 养 基 菌 种 来 源 仪 器 检 测 抗 菌 活 性 的 测 定 数 据 处 理 结 果 与 分 析 种 抗 菌 药 物 对 临 床 分 离 鸡 大 肠 杆 菌 的 结 果 律 海 峡 等 外 排 泵 抑 制 剂 对 鸡 源 大 肠 杆
说 明
畜 禽 产 品 员 国 家 职 业 标 准 1. 职 业 概 况 1.1 职 业 名 称 畜 禽 产 品 员 1.2 职 业 定 义 从 事 畜 禽 及 畜 禽 产 品 测 试 的 人 员 1.3 职 业 等 级 本 职 业 共 设 五 个 等 级, 分 别 为 : 初 级 ( 国 家 职 业 资 格 五 级 ) 中 级 ( 国 家 职 业 资 格 四 级 ) 高 级 ( 国 家 职 业 资 格 三
2004级研究生现代免疫学实验技术结业报告
PCR PCR PCR RT-PCR PCR (Polymerase Chain Reaction,PCR) 80 DNA, DNA PCR PCR PCR DNA PCR -- -- DNA DNA 93 DNA PCR DNA DNA ( ) DNA 55 DNA DNA -- TaqDNA dntp DNA -- -- PCR PCR DNA DNA Y (1 X) n Y DNA X (Y)
人 工 抗 原 的 鉴 定
生 物 技 术 通 报 张 海 棠 王 自 良 刘 耀 东 传 统 的 理 化 分 析 方 法 在 食 品 污 染 检 测 方 面 发 挥 了 重 要 的 作 用 但 均 存 在 一 定 的 缺 陷 急 需 建 立 快 速 高 效 的 检 测 方 法 食 品 污 染 免 疫 检 测 是 一 种 新 型 的 分 析 方 法 与 理 化 分 析 方 法 相 比 具 有 省 时 省 力 费 用 低 廉 便
第 期 黄雪莲等 响应面优化绿色木霉菌培养基 材料与方法 菌种 仪器与试剂 菌种的活化 单因素试验 响应面优化试验 优化工艺的验证 数据处理 结果与分析
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 响应面优化绿色木霉菌培养基 黄雪莲 于新 仲恺农业工程学院轻工食品学院 广东广州 利用响应面分析法对绿色木霉菌的培养基进行优化 通过测量不同营养条件下绿色木霉 菌落生长直径研究其生物学特性 在单因素实验的基础上 选定葡萄糖添加量 丙氨酸添加量和磷酸二氢钾添加量 个因素进行中心组合实验 建立二次回归方程 并应用响应面分析法进行优化 结果表明 绿色木霉菌最佳培养基为葡萄糖
中国生物工程杂志! 公司 2;3 和 $ 购自 ',5 公司 92$' 底物显色液购自天根公司 92 标记的二抗山羊抗鼠 3 购自中杉生物有限公司 质粒抽提试剂盒 纯化试剂盒购自 '3 公司 引物合成和测序均在军事医学科学院生物工程研究所六室完成 个 1 单抗均为本课题组自制 & 包被液 ",<6.
中国生物工程杂志! "# 幽门螺杆菌 1 串联融合表位的表面呈现表达 封小燕 王艳春 李平超 陶好霞 王 秡 袁盛凌 王令春 王 普 刘纯杰 浙江工业大学药学院 杭州 军事医学科学院生物工程研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室 北京 & 摘要 目的 应用表达载体. 表面呈现表达幽门螺杆菌 1 串联融合表位 方法 通过引入多克隆位点的方法改造表达呈现表达载体. 并用改造后的质粒表达幽门螺杆菌 1
王 水 才 蔡 霞 贺 俊 芳 彭 菊 芳 刘 晓 李 良 璧 匡 廷 云 利 用 飞 秒 时 间 分 辨 光 谱 技 术 研 究 了 中 捕 光 天 线 内 分 子 和 分 子 传 递 光 能 到 反 应 中 心 的 时 间 特 性 实 验 测 得 分 子 用 了 分 子 用 了 理 论 研 究 得 出 是 相 邻 分 子 之 间 随 机 转 移 传 能 的 时 间 常 数 是 内 相 邻 分 子
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疾 病 名 柯 萨 奇 病 毒 感 染 英 文 名 coxsackie virus infections 缩 写 别 名 ICD 号 A08.3 概 述 柯 萨 奇 病 毒 感 染 是 由 柯 萨 奇 病 毒 引 起 的 病 毒 性 感 染 性 疾 病 临 床 表 现 复 杂 多 样, 有 无 菌 性 脑 膜 炎 脑 炎 心 肌 炎 心 包 炎 流 行 性 胸 肌 痛 疱 疹 性 咽 峡 炎 等,
程汉良 夏德全 吴婷婷 孟学平 吉红九 董志国 陈淑吟 对文蛤 青蛤 硬壳蛤 江户布目蛤 薄片镜蛤 和菲律宾蛤仔 种帘蛤科贝类和 个地理种 群文蛤 大连 连云港 湛江 防城港 的细胞色素 氧化酶亚基 基因片段的核苷酸序列进行了分析 以探讨这一序列在种质鉴定 种群遗传结构和分子系统发生研究中的应用价值 测序结果 表明 所有物种扩增片段长度均为 序列 含量 明显高于 含量 物种间共有变异位点 个 其中简约信息位点
GB 15973—1995麻风病诊断标准及处理原则
炭 疽 诊 断 标 准 及 处 理 原 则 前 言 GB 17015 1997 炭 疽 (Anthrax) 是 由 炭 疽 芽 孢 杆 菌 (Bacillus anthracis) 引 起 的 一 种 人 与 动 物 共 患 传 染 病, 主 要 存 在 于 食 草 动 物 和 牲 畜 群 落 之 中, 并 能 造 成 环 境 的 广 泛 污 染 由 于 炭 疽 芽 孢 具 有 对 外 界 环 境
doc
药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 2009, 44 (6): 597 602 597 抗表皮生长因子受体噬菌体抗体库的构建筛选及单链抗体可溶性表达 * 盛唯瑾, 苗庆芳, 甄永苏 ( 中国医学科学院 北京协和医学院医药生物技术研究所, 北京 100050) 摘要 : 近年来的研究表明, 表皮生长因子受体 (epidermal growth factor receptor,
供 试 材 料 试 验 试 剂 和 仪 器 基 因 组 提 取 分 析 方 法 反 应 体 系 最 佳 配 比 的 筛 选 退 火 温 度 对 扩 增 效 果 的 影 响
生 物 技 术 通 报 胡 立 敏 陶 兴 林 侯 栋 朱 惠 霞 张 东 琴 选 取 温 敏 花 椰 菜 不 育 系 与 杂 交 组 合 的 高 可 育 和 高 不 育 单 株 构 建 基 因 池 利 用 对 随 机 引 物 对 其 进 行 标 记 同 时 采 用 正 交 设 计 对 其 反 应 体 系 及 扩 增 条 件 进 行 优 化 试 验 结 果 表 明 在 反 应 体 系 中 含 引 物
西安交通大学学报 医学版 第 卷 巨噬细胞表面特异性高表达 然而组织巨噬细胞的极性和其功能尚不明确 现阶段的研究关键是找到细胞表面标记物并开发巨噬细胞标记物的特异性探针 抗体和抗体衍生物是研究细胞表面受体最常用的方法 特异性抗体不但可以用于基础实验研究和临 ' 床标本检测 而且可以作为受体的在体示踪
第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'& & 基础研究 靶向巨噬细胞膜蛋白 特异性纳米抗体的构建和筛选 郑 芳 罗思羽 韩 燕 宁启兰 温玉荣 西安交通大学 医学部基础医学院 西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室 陕西西安 # 生命科学与技术学院 陕西西安 $% 摘要 目的 构建 &'"!(!( $&$ 特异性纳米抗体 以期作为巨噬细胞的分子探针 方法 用 &$
张 伟 等 + 基于 0. 的神经胶质酸性蛋白质自身抗体的血清含量测定及其在脑胶质母细胞瘤诊断中的应用 ;!1 诊断技术因其高昂费用而无法得到广泛应用 因而发展基于临床血液样本且价格相对低廉的脑胶质瘤检测手段成为必须 早在 1" 年 % 就发现唾 4 液酸乳四糖神经酰胺可用于恶性脑胶质瘤的检测 随后
;!" 复旦学报 医学版!"# 基于.7 & 的神经胶质酸性蛋白自身抗体的血清含量测定及其在脑胶质母细胞瘤诊断中的应用 张 伟 危 平 施 前 复旦大学生物医学研究院蛋白组学与系统生物学研究院 上海! 摘要 目的 发展基于 0. 的血清神经胶质酸性蛋白 ((, (%) '%. 自身抗体含量测定方法 用于脑胶质瘤患者的诊断 方法 克隆 12%' 基因至 ' = #' 载体 使用大肠埃希菌中纯化得到的.
42 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology Vol.28No RNA, 以 oligo(dt) 为引物进行反转录, 然后以上述引物进行 PCR 扩增 :0 LATaqbufer5μl dntp5μl 上游引物 μl 下游引物 μl LATaq 酶 (5U/μl)0.5μ
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2008,28(5):4~45 前列腺素脱氢酶在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定 李美宁 解 军 常冰梅 张悦红 2 殷云勤 ( 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室太原 03000) (2 山西医科大学第一医院消化检验中心太原 03000) 程牛亮 摘要 5? 羟基前列腺素脱氢酶 (PGDH) 属于抑癌基因, 在多种肿瘤中表达缺失, 在肿瘤的发生发展中起着重要作用
兽医临床诊断学实验指导
兽 医 临 床 诊 断 学 实 验 指 导 河 北 科 技 师 范 学 院 动 物 科 学 系 临 床 兽 医 学 实 验 室 2009 年 2 月 目 录 学 生 实 验 守 则... 3 实 习 一 动 物 的 接 近 保 定 和 基 本 检 查 法...4 实 习 二 临 床 基 本 检 查 法 及 一 般 检 查...10 实 习 三 循 环 系 统 的 临 床 检 查...15 实 习 四
说 明 为 了 反 映 教 运 行 的 基 本 状 态, 为 校 和 院 制 定 相 关 政 策 和 进 行 教 建 设 与 改 革 提 供 据 依 据, 校 从 程 资 源 ( 开 类 别 开 量 规 模 ) 教 师 结 构 程 考 核 等 维 度, 对 2015 年 春 季 期 教 运 行 基
内 部 资 料 东 北 师 范 大 教 运 行 基 本 状 态 据 报 告 2015 年 春 季 期 教 务 处 2015 年 10 月 27 日 说 明 为 了 反 映 教 运 行 的 基 本 状 态, 为 校 和 院 制 定 相 关 政 策 和 进 行 教 建 设 与 改 革 提 供 据 依 据, 校 从 程 资 源 ( 开 类 别 开 量 规 模 ) 教 师 结 构 程 考 核 等 维 度,
石 和 荣 张 为 民 刘 晓 春 柯 浩 林 浩 然 研 究 了 生 长 抑 素 抑 制 剂 半 胱 胺 盐 酸 盐 和 促 黄 体 素 释 放 激 素 类 似 物 对 黄 鳍 鲷 生 长 激 素 分 泌 的 影 响 黄 鳍 鲷 垂 体 后 均 显 著 提 高 注 射 后 恢 复 正 常 黄 鳍 鲷 血 清 中 含 量 在 单 独 注 射 不 同 剂 量 水 平 在 注 射 后 和 后 均 明 显
26 %%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%% 南方医科大学学报 (J%South%Med%Univ)%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%
2010;30(1)%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%% 南方医科大学学报 (J%South%Med%Univ) 25 抗表皮生长因子受体 Ⅲ 型突变体噬菌体单链抗体库的构建与初步筛选 韩东刚 1, 段小艺 2, 郭佑民 3, 周琦 1, 王全颖 4, 杨广笑 4 1 ( 西安交通大学医学院第二附属医院超声研究室, 3 影像中心,
编号：
编 号 : 企 业 内 高 技 能 人 才 培 养 评 价 实 施 方 案 ( 仅 适 用 于 企 业 特 有 行 业 特 有 工 种 ) 实 施 单 位 ( 公 章 ) 申 报 日 期 年 _ 月 日 1 企 业 内 高 技 能 人 才 培 养 评 价 项 目 实 施 方 案 申 报 表 项 目 名 称 等 级 项 目 性 质 课 时 申 报 单 位 联 系 人 通 讯 地 址 电 话 手 机 电
PCR专题改.doc
Primer3 http://frodowimitedu/cgi-bin/primer3/primer3_wwwcgi Primer5 Oligo665 Primer5 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=38536 Oligo667 http://wwwbioonnet/dispbbsasp?boardid=25&id=40898 1 PCR 1
细 胞 生 物 学 实 验 指 导 细 胞 生 物 教 研 室 目 录 实 验 一 动 物 细 胞 的 基 本 形 态 观 察 和 显 微 测 量 1 实 验 二 线 粒 体 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 4 实 验 三 液 泡 系 的 活 体 染 色 及 电 镜 照 片 观 察 6 实 验 四 细 胞 生 理 活 动 的 观 察 7 实 验 五 细 胞 组 分 的 化 学 反 应
附件1：
附 件 5 增 列 硕 士 专 业 学 位 授 权 点 申 请 表 硕 士 专 业 学 位 类 别 ( 工 程 领 域 ): 工 程 硕 士 ( 控 制 工 程 领 域 ) 申 报 单 位 名 称 : 上 海 工 程 技 术 大 学 一 申 请 增 列 硕 士 专 业 学 位 授 权 点 论 证 报 告 申 请 增 列 硕 士 专 业 学 位 授 权 点 论 证 报 告 一 专 业 人 才 需 求
Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : Buffer 标准 1 标准 2 样品 试剂 ( 荧光染色 ) 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng
Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng/μl 100 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 5000ng/ml 0~5000 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit dsdna
李 培 邓 慧 慧 本 文 描 述 了 年 以 来 京 津 冀 地 区 在 人 口 迁 移 的 活 跃 程 度 和 空 间 分 布 的 新 特 征 通 过 建 立 计 量 模 型 对 年 和 年 影 响 京 津 冀 地 区 人 口 迁 移 的 综 合 因 素 进 行 了 比 较 分 析 结 论 显 示 人 均 差 距 已 经 成 为 影 响 人 口 迁 移 的 首 要 因 素 市 场 化 水 平 产
网址 : 电话 : 客服电话微信 : 邮箱 : 地址 : 烟台市开发区珠江路 32 号留创园 3 号楼 E 栋 247 室 Gel Free cl
Gel Free cloning TM 不跑胶载体构建试剂盒 Gel Free Cloning TM Kit Gel Free cloning 技术是一种简单 快速并且高效的载体构建技术, 可将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点 该技术不受酶切位点限制, 也不需要线性化质粒, 只需要两步 PCR 即可将目的片段构建到载体的任意位点, 具有省时, 简便的特点 克隆阳性率可达 90% 以上 Gel Free
材料 方法
生物技术通报 陆敏 许黎明 吴宏宇 张继恩 李国栋 黄青山 溶葡萄球菌酶 是一种能高效裂解葡萄球菌细胞壁的肽链内切酶 已有研究表明其能够有效预防和去除奶牛乳腺中葡萄球菌的感染 但该酶在牛奶中的性质研究还缺少详细的研究数据 现对重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的一些性质进行研究 检测了加入溶葡萄球菌酶后牛奶性状的变化和重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的酶活的稳定性以及溶葡萄球菌酶在牛奶中的抑 杀菌活性 结果显示 重组溶葡萄球菌酶未改变牛奶的外观性状
124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na
![124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na](/thumbs/91/105785327.jpg "124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na")
河南农业科学,2013,42(2):123-127 JournalofHenanAgriculturalSciences PCR PRRSV CSFV PCV2,, (, 450011) : 根据 TaqMan 复合荧光探针设计原则, 应用 Primer5.0 和 Oligo6.0 软件设计检测猪繁殖 与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 猪瘟病毒 (CSFV) 和猪圆环病毒 2 型 (PCV2) 的特异性引物和探针,
研 究 对 象 研 究 角 度 研 究 工 具 数 据 收 集 和 预 处 理 网 络 密 度 与 平 均 距 离 分 析
基 于 社 会 网 络 分 析 法 的 我 国 网 上 书 店 研 究 余 菜 花 袁 勤 俭 采 用 社 会 网 络 分 析 方 法 从 网 络 密 度 平 均 距 离 中 心 性 凝 聚 子 群 以 及 核 心 边 缘 结 构 等 角 度 对 我 国 网 上 书 店 关 系 进 行 研 究 通 过 研 究 得 出 我 国 网 上 书 店 网 络 密 度 和 平 均 距 离 较 小 中 心 度 偏
( ) 表达载体 于外源 DNA 的表达 1 原核表达载体: 在原核细胞表达外源基因 (1) 启动 : 转录 mrna 必需元件 (2)SD 序列 : 提供核糖体结合位点 (3) 转录终 序列 : 有助于 效表达外源基因 2 真核表达载体: 在真核细胞表达外源基因 (1) 真核表达载体特点 : 1
二 重组 DNA 技术中常用的载体 ( ) 克隆载体 于外源 DNA 的克隆 1 克隆载体应具备的主要特点 2 常 克隆载体 (1) 质粒 (plasmid): 最常 的克隆载体 (2)λ 噬菌体克隆载体 (3) 其他克隆载体 : 增加载体容量 ( ) 表达载体 于外源 DNA 的表达 基本特性 : 克隆必需元件 : 复制 ; 多克隆酶切位点 ; 选择性标志转录必需元件 : 启动 和终 翻译必需元件
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, 90, 6000 t, 1333 ha,, 500 600 t,, 131.3 ha,,,,,,,,,, ,, 9 10, 11 12, 3 4,,,,, 0.067ha 500 1000kg,, 0.067ha 2000 3000kg, 4000 5000kg,,,,,,,,,,,,,,,, ,, ( ),,,,, : 1.,,,,,,,,,,,,, 2., 11, 23 31 , 7, 37,,,
连接
502 南方医科大学学报 J South Med Univ 202;32(4) 基础研究 小鼠前列腺干细胞抗原的原核表达 纯化及抗原活性检测 董金凯 2 罗 津 3 阎瑾琦 2 张 亮 2 高江平 于继云 2 中国人民解放军总医院泌尿外科 北京 00853 2 军事医学科学院基础医学研究所 北京 00850 3 湖南省永州 市人民医院 湖南 永州 425000 摘要 目的 RT-PCR 扩增小鼠前列腺干细胞抗原
30 %%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%% 南方医科大学学报 (J%South%Med%Univ)%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%2010;30(1) 人源抗
30 %%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%% 南方医科大学学报 (J%South%Med%Univ)%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%2010;30(1) 人源抗 Peroxiredoxin%I 肺腺癌噬菌体抗体的制备及鉴定 罗弋 1, 庞华 2, 李淑杰 1,
实验一 氨基酸的分离鉴定—纸层析法
生 物 化 学 实 验 讲 义 内 蒙 古 科 技 大 学 生 物 与 化 学 工 程 学 院 基 础 生 物 教 学 部 2010 年 1 月 目 录 实 验 一 氨 基 酸 的 分 离 鉴 定 纸 层 析 法 2 实 验 二 琼 脂 糖 电 泳 法 分 离 DNA...3 实 验 三 乳 中 酪 蛋 白 的 分 离.5 实 验 四 3,5 二 硝 基 水 杨 酸 法 测 定 还 原 糖.6 实
刘伟侠等 单链抗体抑制乙肝病毒的研究 $ 重组复合型干扰素在抗病毒的临床应用中显示出 比普通 /# 具有更好的效果! 刘顺爱等成功构建了人源性抗 +(0 的单链抗体与重组复合型干扰素的融合表达载体 原核表达后的融合蛋白具有特异的抗 +(0 活性和复合型干扰素活性 对 +, 的复制具有特异的抑制作用
中国生物工程杂志!" 综 述 单链抗体抑制乙肝病毒的研究 刘伟侠 陈 智 浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室 杭州 摘要 单链抗体已用于抗乙肝病毒 ()* ( +, 的研究 目前已研制出作用于各种靶点 如 +, 表面抗原 * #- 核心蛋白 ()* ( * +./0 聚合酶及 1 蛋白的多种单链抗体 单链抗体对偶联的分子具有靶向定位作用 因此 对抗原的亲和性大小 对靶细胞内化 * '
精 勤 求 学 自 强 不 息 Born to win! 解 析 : 由 极 限 的 保 号 性 知 存 在 U ( a) 当 a 时 f ( ) f ( a) 故 f ( ) 在 点 a 不 取 极 值 f ( ) f ( a) f ( ) f ( a) lim lim a a a a ( a)
年 考 研 数 学 二 模 拟 题 ( 二 ) 参 考 答 案 本 试 卷 满 分 5 考 试 时 间 8 分 钟 一 选 择 题 :~8 小 题 每 小 题 分 共 分 下 列 每 小 题 给 出 的 四 个 选 项 中 只 有 一 项 符 合 题 目 要 求 的 请 将 所 选 项 前 的 字 母 填 在 答 题 纸 指 定 位 置 上 () 在 点 处 不 存 在 极 限 的 函 数 是 (
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. ( CIP), 2004 /. 2. : (. ) ISBN 7-5077-2116-7......... : :. R473. 71-44 CIP ( 2004 ) 022284 : : : : : : 2 1 : 100078 : : 787mm 1092mm 16 : 7. 5 : 180 : 2005 3 2 : 2005 3 2 : 00001 10000 : 100. 00 ( 10
* 北京大学学报 医学版 :3 73:09 ;: 9 8 ;:939;0 &35 * 提高乳腺癌细胞对抗微管生成药物的敏感性 & 研究还发现 ;3 的高表达与结直肠癌 乳腺癌等肿瘤的预后密切相关 是预后判断的潜在标志物 &&>&* 但 ;3 的生物学功能及其在肿瘤发生发展中的作用目
北京大学学报 医学版 57 3 8 92:3 73:09 ;: 9 8 ;:939;0 &35 * & 论著 抗! 3 单克隆抗体识别的抗原表位区域的确定 谢 玮 苏亚辉 刘彩云 寿成超 北京大学临床肿瘤学院 北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所生物化学与分子生物学研究室 恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室 北京 && * 摘 要 目的 确定已获得的多株抗突触蛋白 ;3 单克隆抗体识别的抗原表位区域
深圳市新亚电子制程股份有限公司
证 券 代 码 :002388 证 券 简 称 : 新 亚 制 程 公 告 编 号 :2016-053 深 圳 市 新 亚 电 子 制 程 股 份 有 限 公 司 2016 年 第 二 次 临 时 股 东 大 会 决 议 公 告 本 公 司 及 董 事 会 全 体 成 员 保 证 公 告 内 容 真 实 准 确 和 完 整, 不 存 在 虚 假 记 载 误 导 性 陈 述 或 者 重 大 遗 漏 特
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第 第 卷 海 欺 环 洋 科 境 学 月 年 铜 锌 镐 汞 锰 铬 对 斑 节 对 虾仔虾 急性 致毒 的研 究 高淑 英 邹栋梁 厦 门 大学 海洋 系 厦 门 摘 仔虾 的 急 性 致 毒 效 应 土 本文在恒温 要 结果 表 明 值 分别 为 充 气条 件下 研 究 了 值分 别为 十 对斑节对虾 对 斑 节对 虾 仔 虾 值分 别 为 值 分别 为 六 种重 金 属 的 毒性 顺 序 为
中 国 畜 牧 兽 医 卷 基因组的 89 区 开放阅读框 ( 约为 % 共编码 个氨基酸 由于 基因组中 含量过高 扩增全长较困难 因此通常截取含 有 & 蛋白抗原表位的一段基因片段进行表达 研究证实 & 蛋白是抗体的主要靶子 虽然在猪体内存在着 &&&1 核衣壳蛋白等抗体 但在行使免疫性和诱导免
中国畜牧兽医! " 猪伪狂犬病病毒 " 蛋白表达及免疫原性分析 贾 刚 樊梅娜 谷 巍 山东宝来利来生物工程股份有限公司研究院 泰安 泰安大凡神农制药有限公司研究院 泰安 摘 要 本试验旨在研究猪伪狂犬病病毒 '"%& 蛋白的表达并分析其免疫原性 以 病毒液为模板 设计特异性引物 扩增大小为 %' 的保守片段并测序 将其克隆到表达载体 '1" 中 转化表达菌 9)1 经诱导表达 纯化得到目的蛋白 进行
Microsoft Word - tck-103-4y-10-1(衛生)
103 學 年 度 技 術 校 院 四 年 制 與 專 科 學 校 二 年 制 統 一 入 學 測 驗 衛 生 與 護 理 類 ( 專 一 ) 試 題 試 題 分 析 : 今 年 衛 護 類 專 一 ( 基 礎 生 物 ) 部 分, 考 題 概 念 簡 單, 選 項 敘 述 也 不 繁 瑣, 且 大 部 分 皆 為 考 古 題 相 關 概 念, 要 拿 高 分 甚 至 滿 分 都 不 是 太 困 難
（精校版）陕西省语文卷文档版（含答案）-2011年普通高等学校招生统一考试.doc
绝 密 启 封 前 2015 年 普 通 高 等 学 校 招 生 全 国 统 一 考 试 生 物 试 题 ( 江 苏 卷 ) 一 单 项 选 择 题 : 本 部 分 包 括 20 题, 每 题 2 分, 共 计 40 分 1. 下 列 关 于 淀 粉 脂 肪 蛋 白 质 和 核 酸 4 种 生 物 分 子 的 叙 述, 正 确 的 是 ( ) A. 都 能 被 相 应 的 酶 水 解 B. 都 是
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王 卫 平 内 容 提 要 : 本 文 历 史 地 分 析 了 明 清 时 期 江 南 地 区 慈 善 事 业 的 发 展, 指 出 了 明 代 江 南 地 区 慈 善 事 业 由 官 营 向 民 营 转 移, 从 个 别 富 人 的 义 举 发 展 到 有 组 织 的 团 体 机 构 等 特 点 清 代 在 明 代 的 基 础 上, 江 南 地 区 的 民 间 慈 善 事 业 进 一 步 发 展,
国家职业标准：网络课件设计师
国 家 职 业 标 准 : 网 络 设 师 1. 职 业 概 况 1.1 职 业 名 称 网 络 设 师 1.2 职 业 定 义 运 用 学 习 理 论 和 教 学 设 原 理, 依 托 多 媒 体 与 网 络 技 术, 从 事 网 络 内 容 分 设 制 作 和 评 价 等 工 作 的 人 员 1.3 职 业 等 级 本 职 业 共 设 三 个 等 级, 分 别 为 : 四 级 网 络 设 师 (
2. 对 DNA 载 体 的 控 制 元 件 和 选 择 标 记 的 序 列 与 来 源, 如 : 真 核 启 动 子 增 强 子 终 止 序 列 抗 生 素 抗 性 标 记 等 进 行 分 析 建 议 避 免 使 用 抗 青 霉 素 或 其 它 饽 邗 0 房 咕 氐 目 剐 员 昙 牵 好 使
预 防 用 DNA 疫 苗 临 床 前 研 究 技 术 指 导 原 则 一 前 言 DNA 疫 苗 是 将 外 源 目 的 基 因 片 段 构 建 在 DNA 质 粒 中, 重 组 后 的 DNA 导 入 机 体 后 可 表 达 目 的 蛋 白, 目 的 蛋 白 刺 激 机 体 产 生 特 异 性 免 疫 学 反 应 而 达 到 预 防 某 种 疾 病 的 生 物 制 剂 该 指 导 原 适 用 于
曹 学 丽 王 尉 裴 海 闰 北 京 工 商 大 学 化 学 与 环 境 工 程 学 院 北 京 市 植 物 资 源 研 究 开 发 重 点 实 验 室 北 京 逆 流 色 谱 是 一 种 新 型 高 效 的 液 液 分 配 色 谱 分 离 技 术 由 于 它 不 需 要 固 体 分 离 介 质 因 而 具 有 传 统 的 液 固 色 谱 所 不 具 备 的 独 特 优 势 本 文 在 简 介 分
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痤 瘡 的 治 療 概 況 王 雷 山 東 中 醫 大 學 研 究 生 痤 瘡 是 青 春 期 男 女 的 常 見 皮 膚 病 多 因 皮 脂 腺 分 泌 過 旺,; 或 過 食 辛 辣, 煎 炒 燥 熱 及 油 膩 食 品 而 生 輕 者 形 成 粉 刺 紅 色 丘 疹, 重 則 反 復 感 染 造 成 局 部 膿 瘡 炎 症 結 節 或 囊 腫 樣 皮 膚 損 害 [1] 痤 瘡 的 治 療 方
为 了 改 进 SEC 色 谱 柱 的 分 离 表 现 - 色 谱 填 料 - 1. 更 小 的 粒 径 更 高 的 理 论 塔 板 数 更 高 的 反 压, 更 小 的 孔 隙 容 量. 更 大 的 孔 隙 容 量 ( 校 准 曲 线 的 斜 率 更 为 平 缓 ) 分 离 系 数 ; 需 要 被
新 款 适 用 于 UHPLC/HPLC 的 SEC 色 谱 柱 的 介 绍 东 曹 ( 上 海 ) 生 物 科 技 有 限 公 司 Jan, 015 为 了 改 进 SEC 色 谱 柱 的 分 离 表 现 - 色 谱 填 料 - 1. 更 小 的 粒 径 更 高 的 理 论 塔 板 数 更 高 的 反 压, 更 小 的 孔 隙 容 量. 更 大 的 孔 隙 容 量 ( 校 准 曲 线 的 斜 率
年 第 期 % %! & % % % % % % &
国 际 关 系 理 论 类 比 认 知 与 毛 泽 东 的 对 外 政 策 张 清 敏 潘 丽 君 人 的 认 识 过 程 经 常 受 到 认 知 能 力 有 限 决 策 环 境 不 确 定 以 及 信 息 过 量 等 问 题 的 制 约 在 这 个 过 程 中 人 们 经 常 借 用 类 比 从 历 史 中 寻 找 启 发 帮 助 认 知 环 境 和 制 定 政 策 作 者 依 据! 毛 泽 东
150 微生物学通报 2009, Vol.36, No.1 (systemic lupus erythematosus, SLE), Sm(B B D1), Sm D1, SLE [1], Sm D1 (immunoblot, IBT) (enzyme linked immunosorbent as
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微生物学通报 JAN 20, 2009, 36(1): 149~153 Microbiology tongbao@im.ac.cn 2009 by Institute of Microbiology, CAS 生物实验室 人 SmD1 抗原的酵母真核表达及其初步应用 * 杨湘越吴文冰兰小鹏 ( 350025) 摘要 : 通过 PCR 扩增 Sm D1 基因, 与酵母表达载体 ppic9k 重组, 构建表达质粒
生物真题+模拟卷（14）.FIT)
教 师 招 聘 考 试 中 学 生 物 全 真 模 拟 试 卷 ( 一 ) 渊 时 间 院 120 分 钟 满 分 院 100 分 冤 一 尧 单 项 选 择 题 渊 圆 园 小 题 袁 每 小 题 员 分 袁 共 圆 园 分 冤 员 援 关 于 人 体 细 胞 功 能 和 结 构 的 叙 述 袁 正 确 的 是 渊 粤 援 在 细 胞 核 内 砸 晕 粤 能 够 传 递 和 表 达 遗 传 信 息