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阳缇回
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1 林业工程学报, 2017,2(4):90-95 Journal of Forestry Engineering doi: / j.issn 固定化混合菌利用戊糖和己糖共发酵制备乙醇江枫, 房伶晏, 王浩, 朱均均, 范一民, 宋向阳 ( 南京林业大学化学工程学院, 南京 ) 摘要 : 为研究固定化混合菌种对戊糖和己糖同步发酵生产燃料乙醇的影响, 以海藻酸钙为固定化载体, 采用包埋法固定化休哈塔假丝酵母 (Candida shehatae) 和酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) 混合菌发酵生产燃料乙醇, 并对固定化混合菌种的发酵条件进行优化结果表明 : 固定化混合菌种发酵可以快速利用葡萄糖, 解除葡萄糖代谢对木糖代谢的抑制作用, 提高发酵效率, 发酵时间从固定化单菌发酵的 24 h 缩短至 20 h, 发酵时间缩短 16 67% 乙醇产量从 g / L 增加至 g / L, 升高了 12 12% 固定化混合菌种的优化条件为 : 混合糖 ( 葡萄糖和木糖 ) 质量浓度为 45 g / L, 发酵温度为 30, 摇床转速为 170 r / min, 休哈塔假丝酵母和酿酒酵母菌体的比例为 4 1 在此条件下得到最佳乙醇产量为 g / L, 较优化前 (13 74 g / L) 提高了 10 70% 本研究结果可为固定化混合菌发酵生产燃料乙醇的工业化提供理论依据关键词 : 休哈塔假丝酵母 ; 酿酒酵母 ; 固定化细胞 ; 混菌发酵 ; 优化中图分类号 :TQ920 6 文献标志码 :A 文章编号 : (2017) Co fermentation of pentose and hexose to ethanol by immobilized mixed yeasts method JIANG Feng, FANG Lingyan, WANG Hao, ZHU Junjun, FAN Yimin, SONG Xiangyang ( College of Chemical Engineering, Nanjing Forestry University, Nanjing , China) Abstract:To study the effect of immobilized multi microorganisms method on ethanol fermentation, strains of Candida shehatae and Saccharomyces cerevisiae were immobilized on calcium alginate by embedding technology for the simul taneous fermentation of pentose and hexose. Meanwhile, the fermentation conditions of immobilized mixed multi mi croorganisms were optimized. The results showed that the immobilization of C. shehatae and S. cerevisiae rapidly in creased the rate of glucose consumption and effectively relieved the inhibition of xylose consumption caused by glucose metabolism. Specifically, compared with that of individually immobilized C. shehatae, the fermentation time of immobilized mixed yeast decreased from 24 h to 20 h, which reduced by 16 67%. The yield of ethanol increased from g / L to g / L, which increased by 12.12%. The optimal conditions of immobilized mixed yeast are as follows: 45 g / L of mixed sugar (glucose and xylose) as carbon source, fermentation temperature of 30, shaking speed of swing bed at 170 r / min, and the inoculation ratio of C. shehatae and S. cerevisiae at 4 1. Under the above fermentation conditions, the maximum yield of g / L total ethanol was achieved from the simultaneous fermenta tion of pentose and hexose. The yield of ethanol increased by 10.70% with the immobilized mixed multi microorgan isms method. The results of this study could provide some basic information for the industrialization of produce ethanol by immobilized mixed yeast method. Keywords:C. shehatae; S. cerevisiae; immobilized cells; fermentation of mixed yeasts; optimization 近年来, 石油资源短缺问题日益严重, 从可再生资源中生产燃料乙醇受到较多关注 [1] 农林废弃物和工业废渣中获得的木质纤维原料, 由于其资源丰富价格低廉环保清洁等特性, 是较为理想的用以生产燃料乙醇的原材料 [2-4] 木质纤维原料主要由纤维素半纤维素和木质素组成, 由于其结构致密, 存在天然抗降解屏障, 对生物酶具有阻抗作用, 直接酶解效率低, 因此必须对原料进行一定程度的预处理, 增加纤维表面与酶的结合程度 [5] 木质纤维原料经过预处理酶解后水解液中主要成分为葡萄糖和木糖 [6], 其中葡萄糖可以被酿酒酵母快速利用 [7], 而木糖代谢较葡萄糖代谢复杂, 自收稿日期 : 修回日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金 ( ); 江苏高校优势学科建设工程资助项目 (PAPD) 作者简介 : 江枫, 男, 研究方向为发酵工程通信作者 : 宋向阳, 男, 教授 E mail:xiangyangsong@ hotmail.com

2 第 4 期江枫, 等 : 固定化混合菌利用戊糖和己糖共发酵制备乙醇 91 然界中高效的木糖发酵菌种数量有限, 主要有假丝酵母, 毕赤酵母和管囊酵母 3 个属 [8-9], 且最好的木糖发酵菌株利用葡萄糖或木糖发酵生产乙醇的效率仅为酿酒酵母用葡萄糖生产乙醇效率的五分之一 [10], 使得木糖发酵成为阻碍木质纤维原料生产燃料乙醇商业化的一个重要因素 [6] 燃料乙醇生产主要分为游离细胞发酵和固定化细胞发酵 [11] 固定化细胞较游离细胞具有提高产量, 容易分离, 不易染菌, 可重复循环利用等优势 [12], 被广泛应用于生物科技环境食品等领域, 并取得了显著成果 [13] [14] Chandel 等研究了固定化酿酒细胞对甘蔗渣发酵的影响, 最大乙醇产率达 [15] 0 45 g / g, 可重复发酵 8 批次 Pacheco 等研究了固定化酿酒酵母发酵苹果渣, 发现乙醇浓度产率和乙醇转化率均得到提高目前, 有关固定化细胞发酵生产燃料乙醇的研究主要集中于单菌发酵方面, 而对混合菌种固定化 [16] 发酵的相关研究尚少 Lebeau 等将休哈塔假丝酵母和酿酒酵母固定化于琼脂板上研究了在生物反应器中的发酵情况, 结果表明葡萄糖能完全被利 [17] 用而木糖仅被利用 20% 李艳华等研究了嗜单宁管囊酵母和酿酒酵母固定化于海藻酸钙中发酵玉米秸秆水解液工艺, 结果表明, 固定化混合菌种能同时利用木糖和己糖共同发酵, 乙醇转化率可达 0 4 g / g 固定化混合菌种发酵主要存在代谢产物的抑制作用和混菌发酵条件的协调两方面问题 [18] 本研究以纯糖模拟液为碳源, 以海藻酸钙为材料分别固定化休哈塔假丝酵母和休哈塔假丝酵母与酿酒酵母的混合菌进行乙醇发酵试验, 并对固定化混合菌种发酵条件进行优化, 以期解决葡萄糖发酵对木糖的阻遏作用, 探索最适的混合菌种发酵条件, 为固定化混合菌种发酵生产燃料乙醇的工业化提供理论依据 1 材料与方法 1.1 试验材料休哈塔假丝酵母 ( Candida shehatae ) ATTC , 该菌种能同步发酵戊糖和己糖 ; 酿酒酵母 ( Saccharomyces cerevisiae) NL22, 己糖发酵菌株两种菌均保藏于南京林业大学生物化工研究所 1.2 试验方法培养基休哈塔假丝酵母活化培养基 ( g / L): 木糖 20 00, 蛋白胨 10 00, 酵母浸膏 5 00 酿酒酵母活化培养基 (g / L): 葡萄糖 20 00, 蛋白胨 5 00, 酵母浸膏 3 00 增殖培养基 [19] ( g / L): 葡萄糖 30 00, 木糖 30 00, 蛋白胨 3 00, 酵母浸膏 2 50,KH 2 PO ,MgSO 4 7H 2 O 0 25,CaCl 发酵培养基 (g / L): 葡萄糖 30 00, 木糖 15 00,(NH 4 ) 2 SO , KH 2 PO ,MgSO 4 7H 2 O 菌种的活化保藏的斜面菌株经接种环接 2 环到装有 50 ml 活化培养基的 250 ml 锥形瓶中, 在 r / min 的恒温摇床中活化 24 ~ 36 h 再经过增殖培养基增殖到一定量, 离心 (3 000 r / min,10 min) 所得的酵母菌泥存放于 4 冰箱中, 待用固定化细胞的制备与增殖将一定量 3% 的海藻酸钠在 70 的水浴中溶解后, 于高压蒸汽灭菌锅中 121 下灭菌 15 min 灭菌结束后放入超净工作台中冷却至室温按一定比例加入相应质量浓度制备好的休哈塔假丝酵母和酿酒酵母的菌泥, 玻璃棒搅拌均匀后使用 5 ml 的医用注射器滴入到 2% 的 CaCl 2 水溶液中, 制备成 2 ~ 3 mm 的凝胶颗粒, 然后放入 4 的冰箱中固化 12 h, 过滤掉溶液, 用无菌水将固定化颗粒洗涤 3 次, 待用将制备好的凝胶小球用无菌水洗涤后接入到新鲜的增殖培养基中, 在 r / min 的摇床中进行增殖培养,24 h 后更换新的增殖培养基, 共增殖 48 h 固定化细胞的乙醇发酵将增殖过的凝胶小球用无菌水洗涤 2 ~ 3 次, 接入到新鲜的发酵培养基中其中, 发酵液的体积为 50 ml, 固液比为 3 2 将固定化小球置于 r / min 条件下进行发酵培养糖和乙醇质量浓度的测定糖和乙醇质量浓度采用高效液相色谱 (HPLC) 法测定 [19] 测定试样在 r / min 条件下离心 5 min, 上清液经 0 22 μm 的滤膜过滤, 然后在 Agilent1260 型高效液相色谱仪上, 用 Bio Rad HPX 87H 柱 (7 8 mm 300 mm),0 005 mol / L 的 H 2 SO 4 作为流动相, 流速为 0 6 ml / min, 色谱柱温为 55, 检测器采用示差折光检测器 ( RID) 采用外标法测定试样中组分糖利用率和乙醇得率采用以下公式计算糖利用率 = [ρ( 消耗葡萄糖 ) +ρ( 消耗木糖 )] 100% (1) [ρ( 初始葡萄糖 ) +ρ( 初始木糖 )]

3 ９２乙醇得率２２１第２卷林业工程学报 ρ 发酵液中乙醇１００ ρ 消耗葡萄糖０５１ ρ 消耗木糖０４６２合菌戊糖和己糖同步发酵生产乙醇加快葡萄糖代结果与分析谢速率从而缩短其对木糖代谢的抑制作用进而休哈塔假丝酵母和酿酒酵母发酵过程提高休哈塔假丝酵母对木糖利用效率在酵母细胞的混合糖发酵过程中木糖的代谢途径比葡萄糖的代谢途径更为复杂一般酵母细胞优先利用葡萄糖进行发酵７图１图２和图３分别为固定化休哈塔假丝酵母固定化酿酒酵母和固定化混合菌种在纯糖模拟液中的发酵过程图由图１可以看出质量浓度为３０９５ｇＬ葡萄糖和１４４５ｇＬ木糖的发酵液中发酵前１２ｈ葡萄糖代谢速率较木糖代谢速率快这主要是由于木糖代谢比葡萄糖复杂在酵母菌代谢过程中木糖在木糖还原酶作用下转化为木糖醇然后在木糖醇脱氢酶作用下转化为木酮糖木酮糖经过磷酸化图２固定化酿酒酵母戊糖和己糖发酵代谢过程Ｆｉｇ２ＭｅｔａｂｏｌｉｓｍｃｏｕｒｓｅｏｆｐｅｎｔｏｓｅａｎｄｈｅｘｏｓｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｅｄｂｙｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ作用进入磷酸戊糖循环经过一系列生化反应生成乙醇２０在１２ｈ时葡萄糖质量浓度为３８９ｇＬ木糖代谢逐渐加快说明葡萄糖对木糖的抑制作用减弱发酵到２４ｈ时乙醇质量浓度达到最大值为１３２８ｇＬ此时糖利用率为９３５０在２４ｈ后进一步发酵乙醇浓度逐渐下降这可能是由于发酵液中的糖浓度较低酵母细胞开始利用乙醇作为营养物质为进一步分析固定化混合菌相互作用对固定化混合菌戊糖和己糖的发酵过程进行了研究结果见图３由图３可知质量浓度为３１３６ｇＬ葡萄糖和１３７７ｇＬ木糖的发酵液中葡萄糖在４ｈ内基本被利用仅余２０６ｇＬ对比图１结果可知固定化混合菌发酵较固定化单菌发酵木糖消耗快这是因为固定化混合菌种发酵时酿酒酵母可快速利用葡萄糖有效解除葡萄糖对木糖代谢的抑制作用固定化混合菌种发酵到２０ｈ时木糖剩余２５５ｇＬ而固定化单菌发酵到２４ｈ时木糖剩余２９５ｇＬ碳源质量浓度为４５ｇＬ时固定化混合菌发酵时间从固定化休哈塔假丝酵母单菌发酵的２４ｈ缩短至２０ｈ发酵时间缩短１６６７这可能是由于固定化混合菌种发酵时４ｈ利用完葡萄糖增加了木糖发酵时间从而提高了木糖利用效图１固定化休哈塔假丝酵母戊糖和己糖发酵代谢过程Ｆｉｇ１ＭｅｔａｂｏｌｉｓｍｃｏｕｒｓｅｏｆｐｅｎｔｏｓｅａｎｄｈｅｘｏｓｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｅｄｂｙｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄＣａｎｄｉｄａｓｈｅｈａｔａｅ图２为固定化酿酒酵母在混合糖中的发酵过程从图２可以看出酿酒酵母能够快速有效利用率在２４ｈ时糖利用率为９６５９此时乙醇质量浓度达到最大值１４８９ｇＬ比固定化休哈塔假丝酵母单菌发酵提高１２１２在２４ｈ后进一步发酵乙醇质量浓度开始下降这是由于发酵液中碳源基本被利用完酵母细胞开始利用乙醇为底物进行生长葡萄糖质量浓度为３１１３ｇＬ葡萄糖在４ｈ内利２２只能代谢葡萄糖而不能代谢木糖从图１可知葡的影响用完全木糖未呈现明显变化这是由于酿酒酵母固定化混合菌种发酵条件优化２２１初始碳源质量浓度对固定化混合菌种发酵萄糖的存在会对木糖利用产生抑制作用而酿酒酵碳源质量浓度能够直接影响酵母菌的发酵性母能够快速利用葡萄糖解除葡萄糖对木糖的抑制能为确定固定化混合菌种发酵最适初始碳源质作用可通过固定化休哈塔假丝酵母和酿酒酵母混量浓度本试验采用的初始碳源质量浓度分别为

4 第 4 期江枫, 等 : 固定化混合菌利用戊糖和己糖共发酵制备乙醇 93 图 3 固定化休哈塔假丝酵母和酿酒酵母混合菌戊糖和己糖发酵代谢过程 Fig. 3 Metabolism courses of pentose and hexose fermentated by immobilized C. shehatae and S. cerevisiae 30,45,60,75 和 90 g / L, 葡萄糖和木糖比例为 2 1, 在 r / min 条件下发酵 24 h, 结果如图 4 所示随碳源质量浓度增加, 糖利用率从 96 42% 下降为 84 67%, 这可能是由于随碳源质量浓度增加, 葡萄糖对木糖的抑制作用加强, 导致酵母菌对糖的利用效率下降乙醇得率随碳源质量浓度增加先增加后逐渐减少, 当碳源质量浓度为 45 g / L 时, 糖利用率为 92 05%, 此时乙醇得率最大, 为 68 98% 综合考虑糖利用率和乙醇得率, 根据试验结果可知最适初始碳源质量浓度为 45 g / L 图 4 初始碳源质量浓度对固定化混合菌发酵性能影响 Fig. 4 Effect of initial carbon source concentration on fermentation by immobilized mixed yeast 休哈塔假丝酵母和酿酒酵母比例对固定化混合菌发酵的影响发酵液中含有葡萄糖和木糖, 休哈塔假丝酵母能同步利用葡萄糖和木糖, 酿酒酵母则只能利用葡萄糖, 有效确定休哈塔假丝酵母和酿酒酵母比例对固定化混合菌发酵具有重要作用本试验中休哈塔假丝酵母和酿酒酵母的比例 ( 体积比 ) 分别为 1 1,2 1,3 1,4 1 和 5 1, 初始碳源质量浓度为 45 g / L, 在 r / min 条件下发酵 24 h, 结果如图 5 所示从图 5 可知, 休哈塔假丝酵母和酿酒酵母比例对糖利用率影响较小, 均保持在 93% 左右, 其中, 当休哈塔假丝酵母和酿酒酵母的比例为 4 1 时, 糖利用率最高, 为 94 87% 乙醇得率随休哈塔假丝酵母菌增加呈先增加后减小趋势, 这可能是因为酿酒酵母细胞只能利用葡萄糖, 而休哈塔假丝酵母可同步利用葡萄糖和木糖, 由于休哈塔假丝酵母比例增大, 提高了木糖利用效率在休哈塔假丝酵母和酿酒酵母的比例为 4 1 时, 乙醇得率最高, 为 64 65% 综合考虑糖利用率和乙醇得率, 根据试验结果可知两种菌的最适比例为 4 1 图 5 休哈塔假丝酵母和酿酒酵母比例对固定化混合菌发酵性能的影响 Fig. 5 Effect of proportion of C. shehatae and S. cerevisiae on fermentation by immobilized mixed yeast 摇床转速对固定化混合菌发酵的影响由于休哈塔假丝酵母和酿酒酵母发酵时对氧气需求量不同, 本试验通过改变摇床转速以控制两种酵母菌的需氧量初始碳源质量浓度为 45 g / L, 休哈塔假丝酵母和酿酒酵母比例为 4 1, 摇床转速分别为 150,170,190 和 210 r / min, 在 30 条件下发酵 24 h, 结果见图 6 随摇床转速增加, 发酵液中通氧量增加, 加快了酵母菌对糖的利用效率当摇床转速为 190 r / min 时, 糖利用率达最大值, 为 97 07%, 乙醇得率为 65 53% 乙醇得率随摇床转速增加呈先增加后减少趋势, 这是因为过大氧气量使得酵母菌利用更多底物来生长酵母菌当摇床转速为 170 r / min 时, 糖利用率 95 18%, 乙醇得率最高, 可达 69 83% 综合考虑糖利用率和乙醇得率, 根据试验结果可知最适摇床转速为 170 r / min 发酵温度对固定化混合菌发酵的影响休哈塔假丝酵母和酿酒酵母的最适发酵温度不同, 一般认为, 酵母细胞的最适发酵温度为 27 ~ 35 [21] 为确定固定化混合菌的最适发酵温度, 本试验研究了固定化混合菌在温度分别为 28,30, 32 和 34 条件下的发酵效果初始碳源质量浓度为 45 g / L, 两种菌的比例为 4 1, 摇床转速为

5 94 林业工程学报第 2 卷图 6 摇床转速对固定化混合菌发酵性能的影响 Fig. 6 Effect of shaking speed on fermentation by immobilized mixed yeast 170 r / min 条件下发酵 24 h, 结果见图 7 随温度升高, 糖利用率从 95 10% 下降至 92 19%; 乙醇得率在发酵温度为 30 时达到最大值, 为 68 34%, 随后乙醇得率逐渐下降这可能是因为随温度升高, 酵母菌在发酵过程中受到抑制作用综合考虑糖利用率和乙醇得率, 根据试验结果可知 30 为最适发酵温度 2 3 图 7 发酵温度对固定化混合菌发酵性能的影响 Fig. 7 Effect of temperature on fermentation by immobilized mixed yeast 比较分析优化前后固定化混合菌戊糖和己糖同步发酵优化前后固定化混合菌戊糖和己糖同步发酵的比较结果见图 8 优化后的固定化混合菌在发酵 4 h 时葡萄糖基本被利用完, 碳源质量浓度仅剩 2 13 g / L, 葡萄糖代谢速率加快, 从而减少了对木糖的抑制效果, 提高了木糖利用效率发酵 24 h 时, 优化后的固定化混合菌发酵乙醇的质量浓度为 g / L, 比优化前提高了 10 70% 3 结论笔者以海藻酸钙为固定化载体, 通过比较固定化混合菌种和固定化休哈塔假丝酵母单菌发酵效果, 研究了固定化混合菌种对戊糖和己糖同步发酵生产燃料乙醇的影响固定化混合菌发酵时, 酿酒图 8 优化前后固定化混合菌戊糖和己糖同步发酵过程比较 Fig. 8 Comparison of pentose and hexose simultaneous fermentation by immobilized mixed yeast before and after optimization 酵母细胞能够快速利用葡萄糖, 从而解除了发酵过程中葡萄糖代谢对木糖代谢的抑制作用, 增加木糖的利用时间, 与固定化单菌发酵相比, 发酵时间缩短了 16 67%, 乙醇质量浓度提高了 12 12% 对固定化混合菌戊糖和己糖同步发酵的条件进行了优化, 并比较了优化前后固定化混合菌戊糖和己糖同步发酵效果优化后固定化混合菌发酵乙醇的质量浓度为 g / L, 比优化前提高了 10 70% 本研究利用固定化混合菌戊糖和己糖同步发酵生产燃料乙醇, 木糖代谢速率慢, 发酵时间长, 且容易积累中间产物, 影响了木糖的发酵效率, 在今后的工作中将通过对木糖发酵菌驯化或构建高效代谢的木糖发酵菌以提高木糖发酵效率参考文献 (References): [ 1 ] BÖRJESSON P. Good or bad bioethanol from a greenhouse gas per spective What determines this? [J]. Applied Energy, 2009,86 (5): [ 2 ] HASUNUMA T, OKAZAKI F, OKAI N, et al. A review of en zymes and microbes for lignocellulosic biorefinery and the possi bility of their application to consolidated bioprocessing technology [ J]. Bioresource Technology, 2013,135: [ 3 ] MENON V, RAO M L. Trends in bioconversion of lignocellulose: biofuels, platform chemicals & biorefinery concept[ J]. Progress in Energy and Combustion Science,2012,38(4): [ 4 ] 赖晨欢, 高子琦, 唐硕, 等. 木质素基表面活性剂对玉米秸秆纤维素酶水解的促进作用 [J]. 林业工程学报, 2016, 1(6): LAI C H, GAO Z Q, TANG S, et al. Enhancement of lignin based surfactants on the enzymatic hydrolysis of corn stover[ J]. Journal of Forestry Engineering, 2016, 1(6): [ 5 ] 游艳芝, 吉骊, 秦书百川, 等. 碱性亚硫酸盐耦合低压蒸汽预处理对慈竹转化乙醇得率的影响 [ J]. 林业工程学报, 2016, 1(6): YOU Y Z, JI L, QIN S B C, et al. Effect of alkaline sulfite cou pling low pressure steam pretreament on ethanol production from

6 第 4 期江枫, 等 : 固定化混合菌利用戊糖和己糖共发酵制备乙醇 95 bamboo( Neosinocalamus affinis) [ J]. Journal of Forestry Engi neering, 2016,1(6): [ 6 ] MISHRA A, SHARMA A K, SHARMA S, et al. Lignocellulosic ethanol production employing immobilized Saccharomyces cerevisiae in packed bed reactor[ J]. Renewable Energy, 2016, 98: [ 7 ] 李晴, 宋向阳, 范晓阳, 等. 混菌戊糖己糖发酵产乙醇的研究 [J]. 林产化学与工业, 2015,35(2): LI Q, SONG X Y, FAN X Y, et al. Production of ethanol by fer mentation of glucose and xylose using mixed yeasts[ J]. Chemistry and Industry of Forest Products, 2015,35(2): [ 8 ] BOTHAST R J, SAHA B C. Ethanol production from agricultural biomass substrates [ J ]. Advances in Applied Microbiology, 1997, 44: [ 9 ] LYND L R, WYMAN C E, GERNGROSS T U. Biocommodity en gineering[j]. Biotechnology Progress, 1999,15(5): [10] CHANDRAKANT P, BISARIA V. Simultaneous bioconversion of cellulose and hemicellulose to ethanol[ J]. Critical Reviews in Bi otechnology, 1998,18(4): [ 11] RAZMOVSKI V, VUCUROVIC V. Ethanol production from sugar beet molasses by S. cerevisiae entrapped in an alginate maize stem ground tissue matrix [ J ]. Enzyme and Microbial Technology, 2011,48(4-5): [12] CHAN E, RUDRAVARAM R, NARASU M L, et al. Economics and environmental impact of bioethanol production technologies: an appraisal[ J]. Biotechnology and Molecular Biology Reviews, 2007,2(1): [13] JUNTER G A, JOUENNE T. Immobilized viable microbial cells: from the process to the proteome or the cart before the horse [ J]. Biotechnology Advances, 2004,22(8): [14] CHANDEL A K, NARASU M L, CHANDRASEKHAR G, et al. Use of Saccharum spontaneum( wild sugarcane) as biomaterial for cell immobilization and modulated ethanol production by thermotol erant Saccharomyces cerevisiae VS3[ J]. Bioresource Technology, 2009,100(8): [15] PACHECO A M, GONDIM D R, GONCALVES L R. Ethanol production by fermentation using immobilized cells of Saccharo myces cerevisiae in cashew Apple bagasse [ J ]. Applied Biochemistry and Biotechnology, 2010,161(1-8): [16] LEBEAU T, JOUENNE T, JUNTER G A. Long term incomplete xylose fermentation, after glucose exhaustion, with Candida she hatae co immobilized with Saccharomyces cerevisiae[ J]. Microbio logical Research, 2007,162(3): [17] 李艳华, 张雯, 房彩琴, 等. 固定化混合菌种发酵玉米秸秆水解液的研究 [J]. 北京化工大学学报 ( 自然科学版 ), 2008,35 (5): LI Y H, ZHANG W, FANG C Q, et al. Fermentation of corn stalk hydrolysate by co immobilized multi microorganisms [ J ]. Journal of Beijing University of Chemical Technology ( Natural Science Edition), 2008,35(5): [18] 付小全, 周新萍. 植物纤维混菌发酵产酒精的研究进展 [ J]. 食品研究与开发, 2011,32(2): FU X Q, ZHOU X P. Research progress on ethanol production by plant fiber mixed fermentation[ J]. Food Research and Develop ment, 2011,32(2): [19] 宋向阳, 李全, 欧阳嘉, 等. 树干毕赤酵母和酿酒酵母混合糖发酵产乙醇 [J]. 生物加工过程, 2012,10(6):1-6. SONG X Y, LI Q, OUYANG J, et al. Co fermentation of mixture of glucose and xylose to ethanol by Pichia stipitis and Saccharomy ces cerevisiae [ J]. Chinese Journal of Bioprocess Engineering, 2012,10(6):1-6. [20] JEFFRIES T W, JIN Y S. Metabolic engineering for improved fer mentation of pentoses by yeasts[ J]. Applied Microbiology and Bi otechnology, 2004,63(5): [21] 李聪. 酿酒酵母培养条件及发酵培养基的优化 [J]. 中国农学通报, 2014,30(9): LI C. Optimization of culturing conditions and fermentation culture media of Saccharomyces cerevisiae [ J ]. Chinese Agricultural Science Bulletin, 2014,30(9):

甘蔗糖业2011年电子合订本

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