即使在容易获得吸入糖皮质激素 (ICS) 和长效 β 2 - 受体激动剂治疗的国家中, 哮喘仍是发病率和死亡率均持续增长的常见疾病急性发作是哮喘导致个人和社会负担的主要因素多数急性发作与人鼻病毒 (HRV) 和其他呼吸道病毒感染相关 [] 有证据表明, 哮喘患者, 或者至少一部分哮喘患者

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柯房
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1 [ 哮喘 ] 控制不佳的哮喘患者抗病毒干扰素产生减少与中性粒细胞性炎症和高剂量吸入糖皮质激素有关 Jodie L. Simpson, PhD; Melanie Carroll, BS; Ian A. Yang, PhD; Paul N. Reynolds, PhD; Sandra Hodge, PhD;Alan L. James, MBBS, PhD; Peter G. Gibson, MBBS; and John W. Upham, PhD 背景哮喘是一种异质性慢性炎症性疾病, 宿主对于呼吸道病毒, 例如人鼻病毒 (HRV) 的防御能力可能异常一些研究报道哮喘患者 Ⅰ 型干扰素 (IFN) 合成减少, 而另一些研究报道哮喘患者 IFN 合成相对正常, 在这个问题上, 一直存在争议目的本次研究旨在大样本队列的控制不佳哮喘患者中, 检测其循环单个核细胞对 HRV 的反应性, 从而明确是否不同炎症表型的患者合成 INF-α 和 INF-β 的水平存在差异方法对符合要求的成年哮喘患者 (n = 86) 进行临床评估痰液诱导和血样采集根据痰液细胞计数和上清 IL-β 检测结果界定哮喘炎症亚组采用酶联免疫吸附法测定外周血单个核细胞 (PBMCs) 暴露于血清型 b 的 HRV 后释放的 IFN-α 和 INF-β 水平结果参与者 ( 平均年龄为 59 岁, 其中 76% 为特应性体质 ) 的哮喘控制状况不理想 [ 哮喘控制问卷调查 6 (ACQ 6) 平均得分.7] HRV b 刺激 PBMCs 产生 INF-α 的水平在中性粒细胞性哮喘患者 (n = 2) 较嗜酸性粒细胞性哮喘患者 (n = 35) 和寡粒细胞性哮喘患者 (n = 35) 显著降低痰液中性粒细胞比例和吸入糖皮质激素剂量是 HRV b 暴露后 INF-α 分泌量减低的独立预测因子结论中性粒细胞性气道炎症和吸入高剂量糖皮质激素的哮喘患者抗病毒 Ⅰ 型干扰素生成障碍该研究对于明确哪些控制不佳的哮喘患者在急性发作时吸入 IFN 可能获益提供重要的判断依据英文原件请参阅 CHEST 206;49(3): 缩略语 ACQ6 = 哮喘控制问卷调查 6; CXCL = CXC 趋化因子配体 ; ELISA = 酶联免疫吸附试验 ; HRV = 人鼻病毒 ; ICS = 吸入性皮质类固醇激素 ; IFN = 干扰素 ; PBMC = 外周血单核细胞 From the Department of Respiratory and Sleep Medicine (Drs Simpson and Gibson), Hunter Medical Research Institute, New Lambton, NSW; the Priority Research Centre for Asthma and Respiratory Disease (Drs Simpson and Gibson), The University of Newcastle, Callaghan, NSW; the School of Medicine (Ms Carroll and Drs Yang and Upham), The University of Queensland, St Lucia, QLD; the Department of Thoracic Medicine (Dr Yang), The Prince Charles Hospital, Chermside, QLD; the Department of Thoracic Medicine (Drs Reynolds and Hodge), Royal Adelaide Hospital, Adelaide, SA; the Lung Research Laboratory (Drs Reynolds and Hodge), Hanson Institute, Adelaide, SA; the Department of Pulmonary Physiology and Sleep Medicine (Dr 302 CHEST 中文版 206 年 0 月第 2 卷第 5 期

2 即使在容易获得吸入糖皮质激素 (ICS) 和长效 β 2 - 受体激动剂治疗的国家中, 哮喘仍是发病率和死亡率均持续增长的常见疾病急性发作是哮喘导致个人和社会负担的主要因素多数急性发作与人鼻病毒 (HRV) 和其他呼吸道病毒感染相关 [] 有证据表明, 哮喘患者, 或者至少一部分哮喘患者, 其宿主对呼吸道病毒的防御能力是异常的 [2,3] 一些研究报道哮喘患者对 HRV 的气道局部和全身免疫反应异常, 该因素会加重下气道对其他轻微呼吸道病毒感染的炎症反应 HRV 感染的哮喘患者的气道上皮细胞病毒复制水平较正常对照组升高, 这与 IFN-β 和 IFN-λ 合成减少相关, 上述发现独立于 ICS 治疗 [3,4] HRV 激活的哮喘患者的肺泡巨噬细胞也较正常个体产生的 IFN-λ 减少 [4] 相类似, 哮喘患者的循环白细胞群对 RNA 病毒和病毒核酸的应答均较健康对照减弱 [2,5], 产生的 IFN-α 减少, 多条抗病毒信号通路表达降低 [6] 关于哮喘患者的异常病毒反应的概念存在争议, 据相关文献报道, 哮喘患者和健康个体的气道上皮产生等量的 IFN-β [7,8], 尤其是控制良好的哮喘患者 [9] 一项研究报道, 哮喘患者血单个核细胞在体外合成 IFN 正常 [9], 而 Durrani 等研究报道 [0] 哮喘患儿血单个核细胞在病毒刺激下产生的 IFN 量显著降低此外, 这种抗病毒反应缺陷被高亲和力 IgE 受体 (FcεRI) 交联放大因此可能仅在一组特定的哮喘患者中存在这种抗病毒 IFN 产生缺陷的情况, 可能是最严重的哮喘患者 [] 或者近期暴露于变应原的高敏感性个体这些病人最有可能发生哮喘急性发作哮喘是一种异质性炎症性疾病, 根据痰中性粒细胞和嗜酸性粒细胞计数, 被划分为不同的炎症亚型不同的亚型有不同的炎症和免疫学特征, 对糖皮质激素治疗的 [2 ~ 反应也不相同 4] 炎症反应被大量的炎症介质精确调控, 包括 IL-6 和 IL-β 这些炎症介质出现 [5 ~ 在哮喘 7] [8 ~, 尤其是中性粒细胞性哮喘中 22] 评估炎症表型和抗病毒 INF 产生之间关系的研究进展甚微近期有研究应用吸入 IFN 缓解病毒诱导的哮喘急性发作, 这种治疗方法在难治性哮喘亚组中尤为有效 [23] 我们需要界定哪些患者表现为抗病毒 IFN 产生缺陷, 由此将其归到可能从吸入 IFN 获益的特定亚组本研究的目的是检测控制不佳且有急性发作倾向的较大哮喘队列人群全身抗病毒 IFN 合成水平我们的研究假设是不同炎症表型的患者 HRV 诱导的 INF-α 和 IFN-β 合成水平不同 James), Sir Charles Gairdner Hospital, Nedlands, WA; the School of Medicine and Pharmacology (Dr James), The University of Western Australia, Nedlands, WA; the Woolcock Institute of Medical Research (Dr Gibson), Sydney, NSW; and the Department of Respiratory Medicine (Dr Upham), Princess Alexandra Hospital, Woolloongabba, Brisbane, QLD, Australia. This study was funded by project grants from the National Health and Medical Research Council of Australia [Grants and ]. CORRESPONDENCE TO: Jodie L. Simpson, PhD, Level 2, West Wing, Hunter Medical Research Institute, Lot Kookaburra Circuit, New Lambton Heights, NSW, 2305, Australia; jodie.simpson@ newcastle.edu.au 方法研究设计和入选患者作为一项大型多中心随机对照试验的一部分, 本项横断面研究评估符合条件的成年哮喘患者 (n = 86) 在开始应用研究药物之前的情况以美国胸科协会指南作为哮喘的诊断标准哮喘患者处于稳定期, 但有临床症状, 尽管应用 ICS 维持治疗, 哮喘控制问卷调查 6 (ACQ6) 评分 > 0.75 [24 ~ 26] 患者入组前 4 wk 无急性发作, 无呼吸疾病治疗药物 303

3 表 ] 研究对象的特征特征结果 (n = 86) 年龄 / 岁, 均值 ( 范围 ) 59 (20 ~ 80) 性别, 女性 (%) 54 (63) 特应性反应, 例数 (%) 65 (76) 既往吸烟, 例数 (%) 43 (52) 包 -y 20 (6, 40) FEV / % 预计值, 均值 ( 标准差 ) 79.8 (7.7) FEV / FVC / %, 均值 ( 标准差 ) 70.9 (0.2) ACQ6, 均值 ( 标准差 ).7 (0.8) ICS 剂量 / mg d - 80 (800, 2 000) 在过去 y 因哮喘加重口服糖皮质激素的疗程 (0, 2) 血清 IL-6 / pg ml -.9 (.3, 2.7) 痰炎性细胞计数 4.0 (2.6, 9.0) 全细胞计数 / 0 6 ml - 活性 / % 8 (70, 85) 中性粒细胞 / % 38.4 (2.0, 53.3) 嗜酸性粒细胞 / %.5 (0.3, 9.0) 巨噬细胞 / % 44.5 (3.0, 60.5) 淋巴细胞 / % 0.5 (0.0,.0) 柱状上皮细胞 / %.6 (0.5, 4.8) 扁平细胞 / % 4.9 (2.0, 9.5) 痰液 IL-b / pg ml - (n = 80) 3.5 (5.8, 8.) 除非另有说明, 表中数据以中位数 (q, q3) 表示 ACQ6 = 哮喘控制问卷调查 6;ICS = 吸入性皮质类固醇激素改变排除标准和患者评估详见补充材料研究方案获当地机构审查委员会的批准, 所有患者均签署书面知情同意书诱导痰分析入组患者接受肺功能检查 (CPFS / D USB Spirometer, BreezeSuite v7., MGC Diagnostics), 抽取静脉血, 并根据 Gibson 等吸入 4.5% 高渗盐水诱导痰 [27] 报道的方法, 痰液处理详见 e- 附录 [27] 根据痰液嗜酸性粒细胞和中性粒细胞比例区分哮喘亚型, 嗜酸性粒细胞性哮喘患者痰液嗜酸性粒细胞计数 3%, 中性粒细胞性哮喘患者痰液中性粒细胞计数 > 6% [22] 外周血单个核细胞分离和培养采用密度梯度离心法分离获得外周血单个核细胞 (PBMC) [5], 详见补充方法用 RPMI 640 培养液 (Life Technologies) 5% 自体血浆和青霉素 / 链霉素 / 谷氨酰胺 (Life Technologies) 培养细胞 PBMC 单独加入培养液或者活的 HRV b ( 病毒感染复数, 0.) 培养 24 h, 收集上清应用酶联免疫吸附法 (ELISA) 检测 CXC 趋化因子配体 0 [CXCL, 又名 IFN-γ 诱导蛋白 0 (IP-0)] CXCL8, 双抗夹心法测定 IL-6 (BD Biosciences), 检测下限为 3.9 pg / ml 夹心 ELISA 试剂盒检测 IFN-α (PBL Assay Science) 和 INF-β (elisakit.com), 检测下限分别为 2.5 pg / ml 和.9 pg / ml 对于细胞因子浓度低于检测下限的样本, 无法确定细胞因子的真实浓度, 在本研究中被赋值为检测下限的一半浓度鼻病毒的增殖和滴定 [28] 鼻病毒在 Ohio Hela 细胞内增殖传代后经碘克沙醇溶液 (Sigma-Aldrich) 纯化根据 Carroll [29] 等描述的方法, 通过 Ohio Hela 细胞剂量滴定实验确定 50% 组织培养感染剂量 IL-β 和 IL-6 对鼻病毒刺激干扰素合成效果的影响 9 例健康志愿者 ( 中位年龄为 35 岁, 范围为 25 ~ 6 岁 ) 的 PBMC 在加入 HRV b ( 病毒感染复数, 0.) 之前与 IL-6 或者 IL-β (BD Biosciences) 共同孵育 4 h 24 h 后收集上清进行 ELISA 检测统计分析对于连续变量的数据, 以均数 ± 标准差表示 ; 对于不符合正态分布的数据, 以中位数和四分位间距表示分析方法详述见补充方法结果本研究纳入的 86 例哮喘患者 ( 平均年龄为 59 岁 ), 大部分有特应性体质 (76%), 平均 ACQ6 评 304 CHEST 中文版 206 年 0 月第 2 卷第 5 期

4 分.7 ( 表 ) 其中 83 人联合吸入糖皮质激素和长效 β 2 - 受体激动剂基于诱导痰细胞计数, 35 例患者 (4%) 属于嗜酸性粒细胞性哮喘表型, 35 例患者 (4%) 属于寡粒细胞性哮喘表型, 2 例患者 (4%) 属于中性粒细胞性哮喘表型, 4 例患者 (5%) 属于嗜酸性 / 中性粒细胞混合性哮喘表型由于混合表型患者为数甚少, 故未纳入统计分析不同炎症表型患者的临床特征外周血淋巴细胞和单核细胞计数见 e- 表中性粒细胞性哮喘患者的 FEV (% 预计值 ) 显著下降, 外周血淋巴细胞较嗜酸性粒细胞性哮喘患者减少正如预期, 中性粒细胞型哮喘患者痰液白细胞总数和中性粒细胞比例升高 ( 表 2) 吸烟状况或吸烟包年数在各炎症表型之间无统计学意义上的显著差异 (P > 0.05, 数据未列 ) 80 份痰液样本 ( 有足够的上清液 ) 进行 IL-β 检测, 结果显示中性粒细胞性哮喘患者痰液 IL-β 水平较嗜酸性粒细胞和寡粒细胞性哮喘患者显著增高 85 例患者行血清 IL-6 检测, IL-6 水平在 4 个炎症表型组之间变异较大, 在中性粒细胞和混合表型组中浓度最高外周血单个核细胞暴露于人鼻病毒 b 的反应所有患者的细胞因子释放水平见 e- 图所有患者的 PBMC 暴露于 HRV b 均产生应答, 暴露组 PBMC 较仅加入培养液组释放更多的 IFN-α 和 CXCL 0 HRV b 刺激后, 90% 患者的 PBMC 释放 IFN-β, 7% 患者的 PBMC 释放 IL-6, 60% 患者的 PBMC 释放 IL-β, 46% 患者的 PBMC 释放 CXCL 8 这一比例在不同的炎症表型中相似 PBMC 单独与培养液孵育的结果见 e- 表 2 图所示根据基线 ( 未刺激 ) 细胞因子水平校正后的 HRV b 刺激后细胞因子释放水平, 通过 HRV b 刺激后的细胞因子水平减去基线细胞因子水平即获得上述数值因此, 0 代表刺激后较未刺激时细胞因子没有额外释放详细数据见 e- 图中性粒细胞性哮喘患者 HRV b 刺激后 PBMC 释放的 IFN-α 和 IFN-β 水平较嗜酸性粒细胞和寡粒细胞哮喘患者为低 ( 事后秩和检验, 分别为 P = 和 P = 0.022) 尽管中性粒细胞性哮喘患者表 2 ] 不同炎症表型哮喘患者的炎性细胞计数和介质变量嗜酸性粒细胞 (n = 35) 寡粒细胞 (n = 35) 中性粒细胞 (n = 2) 嗜酸性 / 中性粒细胞混合性 (n = 4) P 值全细胞计数 / 0 6 ml (2.6, 7.7) 3.3 (2., 9.8) 7.8 (4.2, 28.3) a,b 7.4 (4.3, 8.7) 0.00 活性 / % 78 (70, 85) 80 (470, 83) 88 (80, 97) 74 (66, 79) 中性粒细胞 / % 30.4 (20.5, 42.5) 32.5 (6.3, 49.3) 85.4 (68.6, 90.9) a,b 65 (6.5, 82.0) a,b < 0.00 嗜酸性粒细胞 / % 9.3 (4.0, 34.0) 0.3 (0.0,.0) a 0.6 (0.3,.0) a 4.5 (3.3, 3.3) b < 0.00 巨噬细胞 / % 4.0 (30.8, 58.8) 58.0 (47.5, 78.8) 2.8 (6.3, 28.4) a,b 7.7 (3.4, 30.3) b < 0.00 淋巴细胞 / % 0.5 (0.0,.0) 0.25 (0.0,.0) 0.5 (0.0,.5) 0.3 (0., 0.5) 柱状上皮细胞 / %.8 (0.3, 5.5) 2.0 (.0, 8.0) 0.0 (0.0,.2) 0.3 (0.3, 0.3) 扁平细胞 / % 5.0 (2.2, 9.5) 5.0 (2.9, 3.6).0 (0.4, 9.3) 3.8 (0.5, 2.8) 0.63 痰液 IL-b / pg ml (5.6, 26.).9 (4.7, 58.4) 63.4 (82.0, 090) a,b (n = 2) < 0.00 (n = 80) 血清 IL-6 / pg ml -.9 (.3, 2.4).8 (.3, 2.7) 2.6 (.9, 3.8) 2.7 (2.5, 2.9) (n = 85) 表中数据以中位数 (q, q3) 表示 a 与嗜酸性粒细胞性哮喘表型患者相比,P < 0.008; b 与寡粒细胞性哮喘患者相比,P <

5 A P = B 400 P = * # IFN-b pg / ml * # 0 0 n = 2 n = 35 n = 35 n = 9 n = 28 n = 26 C CXCL-0 pg / ml P = 0.83 D P = CXCL-8 pg / ml n = 2 n = 35 n = 35 n = 9 n = 9 n = 7 E P = 0.77 F P = 0.50 IL-β pg / ml IL-6 pg / ml n = 7 n = 26 n = 29 n = 0 n = 27 n = 32 图外周血单个核细胞暴露于人鼻病毒 b 导致炎性细胞因子入上清液 ( 已对基线未刺激水平进行校正 ) 条带代表 IFN-a (A) IFN-b (B) CXCL0 (C) CXCL8 (D) IL-b (E) 和 IL-6 (F) 的中位水平 ; 虚线代表各细胞因子的 0 水平 ; 采用 Kruskal-Wallis 检验对所有 3 组结果进行比较, 标示概率值 ; 任两组间存在显著差异 (P < 0.05, 事后秩和检验 ), 与嗜酸性粒细胞性哮喘比较, 以 * 表示, 与寡粒细胞性哮喘相比, 以 # 表示 ;CXCL = CXC 趋化因子配体 ;Eos = 嗜酸性粒细胞性哮喘 ;IFN = 干扰素 ;Neut = 中性粒细胞性哮喘 ;Pauci = 寡粒细胞性哮喘 HRV b 刺激后 PBMC 释放的 CXCL 0 CXCL 8 和 IL-6 少于别的炎症亚型, 但差异不具有统计学意义临床和炎症相关的人鼻病毒 b 诱导的 IFN-α 释放 HRV b 刺激后 PBMC 释放 IFN-α 水平与 ICS 剂量 ( 图 2A) 哮喘控制 (ACQ6 评分, 图 2B) 痰中性粒细胞比例 ( 图 2C) 血清 IL-6 水平 ( 图 2D) 痰液 IL-β 水平 (2E) 呈显著负相关, 与特应性体质 ( 经皮肤过敏测试确定, 图 2F) 随机前外周血淋巴细胞数量 ( 图 2G) 呈正相关, 与患者年龄性别吸烟包年数无显著相关性应用逐步多元线性回归法, 经年龄和性别校正后, 痰液中性粒细胞比例和 ICS 剂量是影响 IFN-α 释放的独立预测因子 ( 表 3) 该模型包含 79 个数 306 CHEST 中文版 206 年 0 月第 2 卷第 5 期

6 A r = P < 0.00 B r = P = C E ICS μg / d r = P < 中性粒细胞 / % r = P = 0.0 D F ACQ-6 r = P < IL-6 pg / ml P = 无有 IL-β pg / ml 特应性 G r = 0.2 H P = 淋巴细胞 ( 0 9 / ml) r = 0.26 P = 单核细胞 ( 0 6 / ml) 图 2 人鼻病毒 b 诱导的 IFN 释放与 ICS 每日剂量 (A) 平均 ACQ-6 得分 (B) 痰中性粒细胞 % (C) 血清 IL-6 (D) 痰 IL-b (E) 特应性体质 (F) 血淋巴细胞 (G) 和血单核细胞 (H) 的关系采用 Mann-Whitney 检验评估比较特应性与非特应性体质参与者 ;ACQ6 = 哮喘控制问卷调查 6;ICS = 吸入性皮质类固醇激素 ; 未列缩略语的注解参见图 307

7 表 3 ] 单变量和逐步多变量回归分析变量系数均数标准误 P 值 95% CI 单变量年龄性别特应性体质 ACQ ICS 剂量 < 中性粒细胞 / % < 血淋巴细胞 / 0 9 ml -a 血清 IL-6 / pg ml 痰 IL-b / pg ml 多变量年龄性别 ICS 剂量中性粒细胞 / % 特应性体质系数 < 模型纳入 79 个数据点, 可解释 IFN-b 水平的 27% 变异 (P < );ACQ6 = 哮喘控制问卷调查 6;ICS = 吸入性皮质类固醇激素 a 随机入组前 2 ~ 4 wk 评估外周血淋巴细胞据点, 解释了 27% 的 IFN-α 释放水平变异 (P < ) IL-β 在外周血单个核细胞对人鼻病毒 b 应答中的效应因为中性粒细胞性哮喘和 IL-β 通路过度表达相关 [22], 因为我们观察到血清 IL-6 ( 图 2) 和痰液 IL-β 水平与 HRV 诱导的 IFN-α 释放呈负相关后续我们通过体外实验探索 IL-β 对 HRV b 激活的 PBMC 合成 Ⅰ 型干扰素能力的潜在影响健康人的 PBMC 预先暴露于 IL-β, HRV b 感染后释放 IFN-α 和 IFN-β 的水平显著下降 ( 图 3) 与之相反, IL-6 对于 HRV 诱导的 IFN-α 和 IFN-β 的释放无影响 ( 数据未列 ) 讨论从本研究中获得的主要发现是, 与嗜酸性粒细胞性和寡粒细胞性哮喘患者相比, 成人中性粒细胞性哮喘患者 HRV b 激活的 PBMC 合成 IFN-α 和 IFN-β 的能力显著降低应用逐步多元线性回归法, 确定痰液中性粒细胞比例和吸入糖皮质激素剂量是影响 Ⅰ 型 IFN 合成的独立预测因子本研究是目前所知关注控制不佳哮喘患者抗病毒 IFN 合成水平的最大样本量的研究, 首次系统性地探讨了 Ⅰ 型 IFN 合成与哮喘炎症表型之间的关系本研究中, 中性粒细胞性哮喘患者 ( 占研究队列总人数的 4%) 的 IFN-α 和 IFN-β 释放最少这组患者的特征如下 : 痰细胞总数升高, 痰中性粒细胞比例升高, 痰 IL-β 水平显著升高在中性粒细胞性哮喘患者中 HRV b 激活的 PBMC 释放的一些其他促炎细胞因子和趋化因子水平也较低, 但未达到统计学意义上的显著差异血清 IL-6 作为全身炎 308 CHEST 中文版 206 年 0 月第 2 卷第 5 期

8 症指标在本研究所有患者中, 无论何种炎症表型, 均可检测出, 但以在痰中性粒细胞计数升高的患者中 IL-6 水平为最高 IFN-α 和 IFN-β 构成抗病毒感染防线的一部分这些干扰素由气道固有细胞和循环的骨髓来源的细胞产生在病毒感染过程中, 循环骨髓来源的细胞作为储备可以快速聚集到肺部 HRV 刺激 PBMC 可快速地产生 IFN-α 和 IFN-β, 这些细胞绝大多数来自于浆细胞样树突状细胞, 小部分来源于单核细胞 [6,30] 体内研究发现, 急性呼吸道病毒感染可以诱导外周血的特异性基因表达谱 [3], 新近的数据表明 HRV 体外刺激 PBMC 诱导的基因表达谱与 HRV 活体感染的结果高度相关 [32] 据报道, 儿童 [33] 成年哮喘性 [34] [6] 患者和妊娠产后哮喘女的 PBMC 释放 IFN-α 减低 Wright 等期研究发现哮喘患者 Toll 样受体 9 依赖的 PBMC 合成 IFN-α 功能特异性受损, 没有发现 COPD 患者或健康对照受试者中存在这种情况考虑到研究的哮喘和 COPD 患者都接受高剂量 ICS 治疗, 且哮喘患者的严重程度相似, 这一发现尤为有趣严重哮喘患儿的气道上皮细胞也表现出 Ⅰ 型干扰素合成受损 [], 然而一些研究报道控制良好的成人哮喘患者的气道上皮细胞分泌 Ⅰ 型干扰素的功能与健康人 [35] 近相似 [9] 近期的一项研究结果提示, 哮喘患者 Ⅰ 型干扰素合成功能受损仅局限在支气管肺泡灌洗细胞, 而鼻病毒激活的血液单个核细胞合成干扰素的功能与健康人相似 [36] 此项研究中多数哮喘患者的肺功能相对较好, 支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数量较少, 患者均无中性粒细胞性气道炎症 [35] 我们的研究拓展了上述发现, 发现中性粒细胞性炎症亚型哮喘患者最有可能存在 Ⅰ 型干扰素合成受损一项纳入 25 例严重哮喘患者的小样本研究结果提示, 痰液细胞分类计数与 IFN-α 水平无相关性 [35], 这和我们的研究结果相反, 可能与两项研究之间样本量和统计效力的差别有关 ICS 剂量与 IFN 合成负相关有待商榷 ( 表 3) [37] Bratke 等研究结果表明, 应用 ICS 的哮喘患者 Toll 样受体 9 介导下浆细胞样树突状细胞分泌 IFN-α 水平较不使用 ICS 的哮喘患者为低高剂量 ICS 通过全身吸收可能抑制 HRV 刺激 PBMC 合成 IFN-α 的功能体外实验在类固醇浓度大于等于 0-8 M 时观察到这种抑制情况 [38], 但是该浓度不太可能在本研究中给予患者全身应用此外, 如前所述, 哮喘患者应用 ICS 剂量与 PBMC 刺激 IFN-α 分泌低下相关, 而 COPD 患者中未发现类似情况 [35] 我们推测高剂量 ICS 和 IFN-α 水平低下之间并非直接相 A P = B 800 P = IFN-b pg / ml HRVB IL-β + HRVB HRVB IL-β + HRVB 图 3 IL-β 对人鼻病毒刺激健康受试者外周血单核细胞引起 IFN-α 和 IFN-β 分泌的影响 HRV = 人鼻病毒 ; 未列缩略语的注解参见图 309

9 关, 因为非嗜酸性粒细胞气道炎症的哮喘患者对于标准剂量 ICS 治疗往往是耐药的, 因此需接受高剂量 ICS 治疗高剂量 ICS 治疗是评估哮喘严重性的一个指标, ICS 对于 IFN 分泌的直接药理作用可能是次要效应后续研究将聚焦于降低 ICS 剂量对气道炎症和病毒诱导 IFN 合成的影响, 有可能阐明本研究中的不确定问题中性粒细胞性哮喘患者中循环白细胞 IFN-α 和 IFN-β 合成减少的机制尚不明确, 中性粒细胞性哮喘患者具有内在性 ( 可能从胚系开始 ) IFN-α 和 IFN-β 合成缺陷, 因此影响所有细胞类型, 最终导致中性粒细胞性气道炎症是可能的原因之一这个概念尽管很有趣, 但目前尚缺乏足够的证据支持此外, 中性粒细胞性气道炎症可能改变循环细胞的功能中性粒细胞性哮喘较其他表型哮喘患者的全身炎症问题更为突出 [9], 这可能会改变骨髓中免疫祖细胞的功能我们的研究应用单因素分析方法, 观察到 IFN-α 合成与痰液 IL-β 血清 IL-6 水平呈负相关 ( 表 3), 尽管应用逐步多元线性回归法分析上述相关性无统计学意义初期体外实验结果显示, IL-β 能够抑制 HRV 刺激健康人的细胞引起的 IFN 分泌, 而 IL-6 则无抑制作用 ( 图 3) 根据这个概念推测, 可能体内实验也有类似的结果, 当然这仍需进一步的研究证实应该承认, 本研究仍有很大的局限性横断面研究受设计限制, 无法进行因果分析, 因此现阶段尚无法明确研究结果的临床意义进一步的研究对于确定是否 IFN-α 和 IFN-β 合成水平低的哮喘亚组有更高的急性发作风险是非常重要的我们的研究队列是一组症状控制不佳的老年患者, 尽管中性粒细胞性表型更多与老年相关, 在年轻人和儿童中并不普遍, 但是今后的研究需要明确年轻人和儿童是否也存在不同哮喘表型 IFN 分泌的差异尽管近期有研究发现重度哮喘 IFN-α 分泌缺陷与其急性发作频率之间无相关性, 但此项研究将急性加重作为研究终点可能并不合适 [35] 也有可能痰嗜酸性粒细胞计数与哮喘急性发作的相关性独立于 Ⅰ 型干扰素水平中性粒细胞性气道炎症和哮喘预后不良相关, 尤其是在那些气流受限更严重的患者, 我们研究结果提示这可能部分与 Ⅰ 型 IFN 分泌减少相关还需要前瞻性的研究检验 Ⅰ 型 IFN 与病毒相关哮喘急性发作之间的关系, 并进行潜在的机制探讨尽管我们研究应用的是 HRV b, 一种 A 型 HRV, 但是机体对其他血清型的 HRV 应答可能是不同的 [39,40], 接下来的研究中我们需要检测不同 HRV 刺激后 IFN 的分泌水平最后, 我们的研究缺少一组与哮喘患者年龄匹配的健康对照受试者, 但考虑到本研究的主要目的是不同哮喘表型之间 IFN-α 和 IFN-β 分泌的差异, 不比较哮喘和健康人之间的差异, 因此该问题得以合理解释本项研究最可贵之处在于受试对象是一大组经过严格挑选的控制不佳哮喘患者总而言之, 在中性粒细胞性气道炎症和接受高剂量 ICS 治疗的患者中, 抗病毒 IFN-α 和 IFN-β 合成受损我们的研究对于明确哪些控制不佳哮喘患者在急性发作时可能从吸入 IFN 中获益具有重要的意义 ( 戴然然时国朝译 ) 参考文献 Beran D, et al. Burden of asthma and chronic obstructive pulmonary disease and access to essential medicines in lowincome and middle-income countries. Lancet Respir Med 205;3(2): Gehlhar K, et al. Impaired virus-induced interferon-alpha2 release in adult asthmatic patients. Clin Exp Allergy 2006;36(3): Wark PA, et al. Asthmatic bronchial epithelial cells have a deficient innate immune response to infection with rhinovirus. J Exp Med 2005;20(6): CHEST 中文版 206 年 0 月第 2 卷第 5 期

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Williams-Campbell 2-3 Marfan's syndrome / % ~ 48% common variable immunodeficiency CVID X- X-linked agammaglobulinemia XLA lga - IgA Ig

Williams-Campbell 2-3 Marfan's syndrome / % ~ 48% common variable immunodeficiency CVID X- X-linked agammaglobulinemia XLA lga - IgA Ig 315 2012 COPD 2005 2011 [1-2] 2010 [3-4] [5] 3.7 / 10 [6] 52 / 10 [5] 100 / 10 18 ~ 34 4.2 / 10 70 272 / 10 [7] CT 50 CT - COPD 15% ~ 30% COPD 50% [11] DOI: 10. 3877/ cma. j. issn. 1674-6880. 2012. 05.