艾德科技 ( 北京 ) 有限公司一站式采购实验室好伙伴 * 仅用于实验室, 不用于诊断和治疗请随时跟我们索取并使用最新版本的说明书 DNA 甲基化极易修饰试剂盒目录号 : A-P (50 次 ) A-P (200 次 ) 适用于 MS

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破隐惠
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1 * 仅用于实验室, 不用于诊断和治疗请随时跟我们索取并使用最新版本的说明书 DNA 甲基化极易修饰试剂盒目录号 : A-P (50 次 ) A-P (200 次 ) 适用于 MS-PCR, 实时定量 MS-PCR, 以及甲基化微阵列等下游实验分析操作手册请以配套的英文操作手册为准! 在您收到定购的产品时, 请确认操作手册是配套的! 同时, 有翻译不妥的地方还请各位老师批评指正! 反馈信箱 :tech@aderr.com 2014 年 11 月, 第 1 版, 对应英文第版艾德科技 ( 北京 ) 有限公司 A&D Technology Corporation

2 目录操作试剂盒组成运输和保存产品介绍重要说明一般产品信息简述原理和程序用法需要的材料 ( 需单买 ) 使用步骤附录使用甲基化特异性 qpcr 解决问题订购信息相关产品如何下单

3 操作试剂盒组成内容 Cat no.a-p (50 次 ) 储存温度转换混合溶液 8ml 室温 DNA 结合液 20 ml 室温脱硫液 0.5ml 室温洗脱液 2ml 室温离心柱 * 50 室温收集管 50 室温使用手册 1 室温 * 注意 : 在将离心柱放入微型离心机之前, 始终将离心柱盖子旋紧盖严运输和保存该试剂盒按室温运输所有组件在室温下 (15-22 C ) 避光保存在合适的保存情况下, 所有的产品组件有效期是一年, 自发货之日算起

4 产品介绍重要说明使用 : DNA 甲基化极易修饰试剂盒修饰使用一种独一的溶液配方和基于离心柱纯化修饰的 DNA, 以快速, 可信和便利为设计每个试剂盒包括足够的组件可以使用 50 次反应高得率, 转化后的 DNA 可以适用于各种下游甲基化分析, 包括常规 MS-PCR, 芯片分析, 实时定量 MS-PCR,MS-HRM, 在 post-bisulfite adaptor ligation 后的 NGS 分析, 以及甲基化微阵列 DNA 输入量 : 每次修饰,DNA 用量为 0.1 1μg 为得到最佳修饰, DNA 输入量为 100ng 如果您使用该 DNA 甲基化极易修饰试剂盒做 MSP, 并且起始 DNA 量极其少 ( 比如 :<10ng), 那么 PCR 循环数就要高于 45 为得到最佳 PCR 结果, 被放大的靶区不能少于 250bp 亚硫酸氢盐修饰后的 DNA 纯化率取决于 DNA 输入量 DNA 性质以及起始材料的来源起始材料 : 材料包括各种组织或细胞样本, 如细胞培养瓶或微孔板培养的细胞, 显微解剖样本, 石蜡包埋组织血浆 / 血清样品, 体液样本等等

5 预防措施 : 为了避免交叉污染, 以下预防事项对于指导如何使用离心柱是非常必要的 : 小心的使用移液器将样本或溶液移入到离心柱中使用气溶胶屏障的移液器枪头, 在使用移液器进行不同样本或溶液的转移时, 要及时不停的更换枪头在将离心柱放入微型离心机之前, 始终将离心柱盖子旋紧盖严在整个实验程序中需要戴手套且不同样品之间的接触, 应立即更换手套一般产品信息质控 : 每批 DNA 甲基化极易修饰试剂盒按照预定技术规范进行检测, 以确保稳定的产品质量我司保证所有产品的性能跟说明书中的描述一致质量保证 : 此品如果没有达到您的实验期望, 可以给我们的技术发送邮件到 :tech@aderr.com 如果您有任何意见或新的应用领域及产品性能和技术, 我们也鼓励您随时与我们联系安全防护 : 对于实验人员工作时, 实验室应配备安全的外套, 一次性手套, 和适当的防护眼罩

6 产品更新 : 我司有权更改或修改任何产品, 以提高其性能和设计这个操作指南的信息是可能随时变更, 恕不另行通知因此, 此使用指南仅为提供此品用户时配套使用使用限制 : DNA 甲基化极易修饰试剂盒是为研究用途, 不适合诊断或治疗的应用知识产权 : DNA 甲基化极易修饰试剂盒中使用的原理和方法, 我司有产品专利简述胞嘧啶环中 5- 碳上的甲基若具备共有原子价的条件, 就能引发 DNA 的甲基化, 产生 5- 甲基胞嘧啶 (5-mC) 在生物进化, 发展, 生长和变异方面, 对于基因的表达的调节与 DNA 甲基化有着潜在的联系异常的甲基化变化通常伴随这疾病的发生, 如 : 癌症, 自身免疫的失常和精神分裂症因此, 基因 / 特定基因区域或全基因组的 DNA 甲基化分析, 对于疾病诊断和治疗目标基因区域的开发 DNA 甲基化标志物重亚硫酸氢盐修饰的基因组 DNA 通过 PCR 扩增, 克隆 - 测序或全基因组测序是评估单个 DNA 分子胞嘧啶的甲基化是当前最为可信的方法使用重亚硫酸氢盐处理 DNA, 使得胞嘧啶脱硫后转化未尿嘧啶, 然而 5- 甲基胞嘧啶完整保留

7 传统的亚硫酸氢盐转化方法需要个小时进行亚硫酸氢盐处理,DNA 严重降解 (>80%), 高不相称的甲基胞嘧啶脱氨基 (>3.5%), 低胞嘧啶转化率 (<95%) 在 2005 年三月份, 我司成为第一个研发快速 DNA 亚硫酸氢盐修饰方法的公司, 我司的方法客服了其他方法所存在的一系列问题将亚硫酸氢盐过程从 16 小时缩短至只需要 1.5 小时, 显著的提高了胞嘧啶转化效率 (>99.9%), 并有效的防止了修饰后的 DNA 降解为了有效的配备转化后的 DNA 用于各种下游分析, 一种理想的亚硫酸氢盐修饰方法应该具备 (1) 高度精确允许胞嘧啶完全转化为尿嘧啶 ( 正确的转化 ) 而不会产生甲基胞嘧啶脱氨基成为胸腺嘧啶 ( 不正确的转化 );(2) 极速, 使亚硫酸氢盐过程尽可能的缩短, 因为对于基本研究, 特别是临床应用, 都要求进行快速 DNA 甲基化分析我公司再接再厉, 在 DNA 甲基化极速修饰试剂盒

8 (A-P-1026) 的基础上, 创新研发 DNA 甲基化极易修饰试剂盒 (A-P-1054), 完美的演绎了 DNA 亚硫酸氢盐修饰方法, 从而取得更好的 DNA 甲基化分析该试剂盒极大的改进了目前所使用的 DNA 亚硫酸氢盐修饰试剂盒具备新颖且能最大利用的亚硫酸氢盐合成物, 该 DNA 修饰试剂盒能够使 DNA 修饰步骤缩短在 1 个小时之内, 并获得胞嘧啶完全充分的转化结果更重要的是, 它能极大的减少 5- 甲基胞嘧啶不正确转化为胸胞嘧啶 (<0.1%) 该 DNA 修饰试剂盒适用于 MS-PCR, 实时定量 MS-PCR, 以及甲基化微阵列, 二代测序等等下游实验该 DNA 甲基化极易修饰试剂盒具有以下优势和特点 : 操作快速 : 整个操作步骤可在 1 个小时内完成流线型 : 热变性和 C 到 T 的转化步骤同步进行, 无需单独的 DNA 变性步骤完整转化 : 完全的将未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶 (>99.99%), 不合适的和错误的转化甲基胞嘧啶转化为胸腺嘧啶极其微小 (<0.1%), 可以忽略稳定性好 : 简单, 可信和实验条件始终如一容易遵循的操作手册和高得率原理和程序作为下一代亚硫酸氢盐转化工具,DNA 甲基化极易修饰试剂盒包含所有组件, 对 DNA 样本进行超简便的亚硫酸氢盐转化由于独特的转化混合溶液包含功效强大的 DNA 保护试

9 剂, 在整个亚硫酸氢盐 DNA 转化过程中,DNA 的变性状态都能得到保持, 因此, 能使 100% 的 DNA 在单链的形态下得到修饰, 而不会进行化学降解和嗜热降解因此, 这种新颖的方法能加速使胞嘧啶转化为尿嘧啶, 产生可以忽略不计的甲基胞嘧啶脱氨基作用无毒的 DNA 捕获溶液使 DNA 紧密的吸附在柱基质上, 因此 DNA 净化就能在柱子上进行, 并有效的去除残留的亚硫酸氢盐和盐分高得率, 转化的 DNA 非常适合下游的实验程序, 如 :PCR 分析, 芯片分析和二代测序 (NGS 分析 ) DNA 甲基化极易修饰试剂盒流程图图 A: 使用 DNA 甲基化极易修饰试剂盒对 HeLa 基因组 DNA 进行修饰转化采用快速 MS-qPCR 试剂盒 (A-P-1028) 对转化后的 DNA 进行扩增实验针对 β-actin 的等位基因, 将已经设计好的甲基化和非甲基化引物, 按照 DNA 输入的不同数量, 进行实时荧光定量 PCR, 所得 Ct 均值图 B: 针对转化后的 DNA 不用目标基因的 Ct 值同时也演示了内参 β-actin 的 Ct 值

10 用法需要的材料 ( 需单买 ) 热循环仪带加热盖 * * 由于亚硫酸氢盐反应不用矿物油, 只有热循环仪带加热盖比较适合这个步骤台式离心机 ( 高达 14,000 rpm) 移液器和移液枪头 0.2 ml PCR 管或 PCR 板 1.5 ml 微型离心机管 90% 乙醇使用步骤为得到最好的结果, 在实验开始前, 请全面仔细地阅读本使用步骤起始材料 DNA 输入量 : DNA 最佳量是 100 ng/ 反应起始 DNA 可放在水或者缓冲液中例如 TE DNA 提取 : 您可以使用自己的方法进行 DNA 提取. 我公司提供一系列全基因组 DNA 提取试剂盒方便您的使用 ( 看第 16

11 页订购信息下面 ) DNA 保存 : 提取好的全基因组 DNA, 在使用前可保存在 4 C 或者 -20 C 条件下亚硫酸氢盐 DNA 转化 1. 针对 PCR 板的每个孔或 0.2 ml PCR 管, 添加 150 μl 转换混合溶液, 紧接着添加 2-15 μl 你自己样本 DNA( 最佳量是 :100 ng) 2. 把 PCR 管子盖紧, 并且将它们放到带盖的热循环仪中, 设置并执行温度为 80 C, 放置 45 分钟修饰后 DNA 洗脱 1. 将离心柱放置在 2 ml 的收集管中添加 300 μl 的 DNA 结合液到每个离心柱中然后将每个 PCR 管 ( 亚硫酸氢盐步骤 2) 中的样本转移到离心柱中 12,000 转 rpm 离心 30 秒从收集管中移走离心柱并弃废液从新将离心柱放入收集管中 2. 添加 200 μl 90% 的乙醇溶液到每个离心柱中 12,000 转 rpm 离心 30 秒

12 3. 通过添加 25 μl 的脱硫液到每 1 ml 90% 乙醇, 并混合来制备最终的脱硫溶液将 150μl 终脱硫液到每一个柱子中然后将离心柱从收集管中拿出并弃废液从新将离心柱放入收集管中 4. 添加 200μl 90% 的乙醇溶液到每一个离心柱中在 12, 000rpm 下离心 30 秒然后将离心柱从收集管中拿出并弃废液从新将离心柱放入收集管中再次添加 200μl 90% 的乙醇溶液到每一个离心柱中在 12,000rpm 下离心 45 秒 5. 将离心柱插入到一个新的 1.5ml 管子中直接添加 10-20μl 洗脱液到柱基质上在 12,000rpm 下离心 3 0 秒来洗脱转化后的 DNA 修饰好了的 DNA 现在可以使用了或者也可储存在 20 C 或低于该温度的条件下, 可以存放至少六个月我们推荐每次实时 qpcr 时, 使用 1 2μl DNA; 终点法 PCR 电泳检测, 建议使用 2-4μl DNA 您可以使用自己成功的方法来做甲基化特异性 - 实时 PCR 为您方便, 以及得到更好的结果, 我司提供配套的快速 MS-qPCR 试剂盒 (A-P-1028), 能充分利用于快速甲基化特异性 qpcr 反应,70 分钟就能完成 ( 请看下面使用甲基化特异性 qpcr )

浓度下, 提供多功能混合液, 只需加引物和模板, 更易于准备 PCR 反应如果采用该试剂盒,MS-qPCR 能缩短在

13 附录使用甲基化特异性 qpcr 当做 MS-qPCR 时, 我们推荐使用快速 MS-qPCR 试剂盒 (Cat. No. A-P-1028), 它包含热启动聚合酶系统, 并且能极大的减少全部甲基化特异性 qpcr 扩增时间在 2X 浓度下, 提供多功能混合液, 只需加引物和模板, 更易于准备 PCR 反应如果采用该试剂盒,MS-qPCR 能缩短在 70 分钟之内完成准备 PCR 反应作为阴性对照, 使用不含 DNA/RNA 的水代替 DNA 样本设置 PCR 反应

14 解决问题问题可能的原因建议 DNA 修饰不完全 DNA 质量不好 (DNA 严重降解 ) 检查看 DNA 样本 260/280 比率是否在之间, 通过跑电泳看 DNA 是否降解太少的 DNA 或者太多的 DNA( 例如 < 100pg 或者 >1 μg) 添加或者减少 DNA 量, 使其达到正常的范围或者达到最佳的量范围 100 ng 模版含太高 GC 区或二级结构延长第二步热循环仪程序时间 5-10 分钟温度和热循环仪条件不对检查并调整到合适的温度和热循环仪条件 DNA 转化混合液被污染或是长时间暴露在空气中受到影响检查 DNA 转化混合液有任何颜色变化 ( 深褐色或棕色 ) 或不能溶解的沉淀物如果是这样的话, 建议定购新的 DNA 转化混合液或试剂盒

15 洗脱液含有很少或者不含有 DNA 下游甲基化特异性 PCR 结果不好试剂盒储存或者使用不当放入的 DNA 质量不行 ( 降解 ) DNA 结合液没有足够的加入到样本中作为 DNA 清洗的乙醇溶液的浓度不正确样本没有完全通过柱子上的过滤膜即便在阳性对照中, 很少或者没有 PCR 产物将所有组件保存在室温下每次打开或使用后, 旋紧 DNA 转化混合液的盖子通过跑电泳来检查 DNA 是否降解确保在转化后 DNA 洗脱步骤中的第 1 步中 DNA 结合液被加入使用 90% 的乙醇用作 DNA 清洗在 12,000 rpm 条件下离心一分钟, 直到整个样本都通过过滤膜确保所有的 PCR 组件都加入了, 并且使用了合适的 PCR 程序 (PCR 循环应 >40) PCR 引物和探针设计不合适或不正确确保引物和探针适合于做 MS-PCR

16 DNA 纯化不足显著产生非特异性 PCR 产品确保 PCR 中使用的模板 DNA 量足够在转化后 DNA 的洗脱步骤中, 第 3 步, 每 1ml 90% 的乙醇中确保添加了 25ul 的脱硫液亚硫酸氢盐转化失败确保所有修饰和清洗步骤都按照说明书中执行, 并且输入 DNA 量也是在推荐的范围内引物和探针不是专门用来处理修饰后的 DNA 或者目标基因检查引物和探针的设计是否正确

17 订购信息货号 # 描述规格 A-P DNA 甲基化极易修饰 50 次 A-P 试剂盒 200 次相关产品 DNA 样本准备货号 # 描述 A-P-1003 常规组织切片 DNA 提取试剂盒 A-P-1004 血浆 / 血清 DNA 提取试剂盒 A-P-1006 DNA 浓缩试剂盒 A-P-1007 凝胶 DNA 提取试剂盒 A-P-1009 石蜡包埋组织切片 DNA 提取试剂盒 A-P-1017 尿脱氧核糖核酸 (DNA) 提取试剂盒 A-P-1018 血液和培养细胞 DNA 抽提试剂盒 DNA 亚硫酸氢盐修饰货号 # 描述 A-P-1001 DNA 修饰试剂盒 A-P-1002 双链 DNA 提取 & 修饰试剂盒 A-P 孔 DNA 修饰试剂盒 A-P-1016 全细胞亚硫酸氢盐修饰试剂盒 A-P-1026 DNA 甲基化极速修饰试剂盒 A-P 孔 DNA 甲基化极速修饰试剂盒 ( 磁珠法 )

18 DNA 甲基化 / 羟甲基化定量检测试剂盒货号 # 描述 A-P-1034 DNA 甲基化定量检测试剂盒 ( 比色法 ) A-P-1035 DNA 甲基化定量检测试剂盒 ( 荧光法 ) A-P-1036 DNA 羟甲基化定量检测试剂盒 ( 比色法 ) A-P-1037 DNA 羟甲基化定量检测试剂盒 ( 荧光法 ) A-E3317S EpiMark 5-hmC 和 5-mC 分析试剂盒 --- 热销 A-P-1011 通用甲基化 DNA 修饰试剂盒 A-P-1019 通用甲基化 DNA 配备试剂盒 A-P-1028 快速 MS-qPCR 试剂盒如何下单 1. 电话, 传真或邮件定购 : 电话 : ; 传真 : ; 邮件 : ordering@aderr.com 2. 在线定单定购 :

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20 艾德科技 ( 北京 ) 有限公司 A&D Technology Corporation 地址 : 北京昌平区中关村生命科学园东 60 米 (102206) 电话 : 传真 : 网址 : 电邮 :tech@aderr.com

ibm

ibm * 仅用于实验室, 不用于诊断和治疗 96 孔 DNA 甲基化极速修饰试剂盒 ( 磁珠法 ) 目录号 : A-P-1050-096( 96 次 ) A-P-1050-192(192 次 ) 适用于 MS-PCR, 实时定量 MS-PCR, 以及甲基化微阵列操作手册请以试剂盒中配套的英文手册为准! 在您收到定购的产品时, 请确认操作手册是配套的! 同时, 有翻译不妥的地方还请各位老师批评指正! 反馈信箱

艾德科技 ( 北京 ) 有限公司一站式采购 实验室好伙伴 * 仅用于实验室, 不用于诊断和治疗 请随时跟我们索取并使用最新版本的说明书 DNA 甲基化极易修饰试剂盒 目录号 : A-P (50 次 ) A-P (200 次 ) 适用于 MS

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