بررسی حضور ژن های aac( 6 ')Ie/aph( 2 ) ، aph( 3 ') - IIIa 1 ، ant( 4 ') - Ia 1 و تعیین مقاومت به متی سیلین در استافیلوکوک اپیدرمیدیس و استافیلوک

Transcription

1 Arak Medical University Journal (AMUJ) 207; 9(6): -25 Original Article The Presence of aac (6 ') Ie / aph (2 "), aph (3') - IIIa, ant (4 ') - Ia Genes and Determining Methicillin Resistance in Staphylococcus Epidermidis and Staphylococcus Saprophyticus Strains Isolated from Clinical Specimens Mohammad Bokaeian, Javad Adabi 2, Behroz Zeyni 3, Hamed Tahmasebi 2* - Associate Professor, PhD of Medical Bacteriology, Department of Microbiology, Zahedan University of Medical Sciences, Center of Infectious Diseases & Tropical of Zahedan, Zahedan, Iran 2- MSc Student of Microbiology, Department of Microbiology, Zahedan University of Medical Sciences, Zahedan, Iran 3- MSc Student of Microbiology, Department of Microbiology, Hamedan University of Medical Sciences, Hamedan, Iran Received: 8 Jul 206, Accepted: 2 Nov 206 Abstract Background: Aminoglycosides are used as antibiotics in combination with beta-lactamas for many treatments of staphylococcal infections. Development of resistance in resistant strains can be done by enzymes produced by effective genes that cause the destruction of aminoglycoside antibiotics. The aim of this study was to investigate the prevalence of the aac (6 ') Ie / aph (2 "), aph (3') - IIIa, ant (4 ') - Ia genes and meca in staphylococcus strains which play an effective part in the resistance of aminoglycosides. Materials and Methods: in this descriptive cross-sectional observation, 3 clinical samples including 68 isolate of Staphylococcus epidermidis and 45 isolate of Staphylococcus saprophyticus of 459 clinical samples were identified by biochemical and molecular tests. The antibiotic susceptibility pattern of isolates was determined using MIC method by E-test strips. Then, to determine the presence of genes responsible for resistance to aminoglycosides, gene-specific primers were used. Results: Of 68 isolates obtained from saprophyticus Staphylococcus aureus, 39isolates(57.35%) were meca gene. As well, 3 isolates (9.%) have aac (6 ') Ie / aph (2 ") gene, 9 isolates (3.23%) have aph (3') - IIIa gene and 7 isolates (7.3%) have ant (4 ') - Ia gene. Of 45 isolates of Staphylococcus saprophyticus, 23 isolates(5.%) have meca genes, 8 isolates (7.77%) have aac (6') Ie / aph (2 ") gene, 4 isolates (8/8%) have aph (3 ') - IIIa gene and 2 isolates (4.4%) have gene ant (4') - Ia gen. Conclusion: Statistical analysis showed that the prevalence of aminoglycoside genes is more among strains resistant to methicillin and this would suggest that methicillin-resistant strains are easy situation for the acquisition of resistance to other antibiotics. Keywords: Aminoglycosides, Drug resistance, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus *Corresponding author; Address: Department of Microbiology, Zahedan University of Medical Sciences, Zahedan, Iran h.tahmasebi87@yahoo.com ١١

2 مقاله پژوهشی مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراك سال 9 شماره (شماره پیاپی 6) بهمن بررسی حضور ژنهاي aac(6')ie/aph(2") ant(4')- aph(3')-iiia Ia و تعیین مقاومت به متی سیلین در استافیلوکوك و استافیلوکوك جدا شده از نمونههاي بالینی *2 3 2 محمدبکاي یان جواد ادبی بهروز زینی حامدطهماسبی.دانشیار متخصص باکتري شناسی پزشکی گروه میکروب شناسی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان مرکز بیماريهاي عفونی-گرمسیري زاهدان زاهدان ایران 2.دانشجوي کارشناسی ارشد میکروب شناسی گروه میکروب شناسی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان زاهدان ایران 3.دانشجوي کارشناسی ارشد میکروب شناسی گروه میکروب شناسی دانشگاه علوم پزشکی همدان همدان ایران چکیده تاریخ دریافت: 95/04/28 تاریخ پذیرش: 95/08/2 زمینه و هدف: آمینوگلیکوزیدها از جمله آنتیبیوتیکهایی هستند که با آنتی بیوتیکهاي بتالاکتامی براي درمان بسیاري از عفونتهاي استافیلوکوکی کاربرد دارند. بروز مقاومت در سویههاي مقاوم به واسطه آنزیم هایی صورت میگیرد که توسط ژنهاي موثري تولید میشوند که سبب تخریب ساختار آنتیبیوتیکهاي آمینوگلیکوزیدي میگردند. هدف از این مطالعه بررسی حضور ژنهاي(" aac(6')ie/aph(2 ant(4')-ia aph(3')-iiia و meca در ایزولههاي استافیلوکوك است که نقش موثري در مقاومتهاي آمینوگلیکوزیدي دارند. مواد و روشها: استافیلوکوك و در این بررسی توصیفی-مقطعی 459 از مجموع نمونه بالینی نمونه بالینی شامل استافیلوکوك با تستهاي بیوشیمیایی و مولکولی جداسازي شد. براي تعیین حساسیت آنتیبیوتیکی از روش تعیین حداقل غلظت مهاري با نوارهاي E-test استفاده شد. سپس براي تعیین حضور ژنهاي عامل مقاومت به آمینوگلیکوزیدها از پرایمرهاي اختصاصی این ژنها استفاده شد. یافتهها: از 68 ایزوله به دست آمده از استافیلوکوك 39 ایزوله( 57/35 درصد) داراي ژن meca بودند. 9 aac(6')ie/aph(2") همچنین 3 ایزوله( 9/ درصد) داراي ژن ایزوله( 3/23 درصد) داراي ژن-(' aph(3 IIIa و 5 ایزوله( 7/3 درصد) داراي ژن ant(4')-ia بودند. از 45 ایزوله استافیلوکوك نیز 23 ایزوله( 5/ درصد) داراي ژن meca 8 ایزوله( 7/77 درصد) داراي ژن aac(6')ie/aph(2") 4 ایزوله( 8/8 درصد) داراي ژن aph(3')-iiia و 2 ایزوله( 4/4 درصد) داراي ژن ant(4')-ia بودند. نتیجه گیري: با بررسی آماري انجام شده مشخص شد که شیوع ژنهاي آمینوگلیکوزیدي در بین ایزولههاي مقاوم به متی سیلین بیشتر میباشد و این امر بیان کننده این است که سویههاي مقاوم به متیسیلین شرایط مناسبی را براي کسب مقاومت به آنتی بیوتیکهاي دیگر دارا میباشند. واژگان کلیدي: استافیلوکوك استافیلوکوك آمینوگلیکوزید مقاومت دارویی *نویسنده مسي ول: ایران زاهدان دانشگاه علوم پزشکی زاهدان گروه میکروب شناسی E.mail: h.tahmasebi87@yahoo.com ١٢

3 بررسی حضور ژنهاي aac(6')ie/aph(2") ant(4' aph(3')-iiia مقدمه آمینوگلیکوزیدها از جمله آنتیبیوتیکهایی هستند که به همراه آنتی بیوتیکهاي بتالاکتامی براي درمان بسیاري از عفونتهاي باکتریایی با منشا استافیلوکوکی کاربرد دارند( ). درمان این عفونتها با طیف وسیعی از آنتیبیوتیک سبب بروز مقاومت و ظهور سویههاي جدید شده است( 2 ). کواگولاز منفی( CoNs ) در گروه استافیلوکوك استافیلوکوكهاي ایجاد عفونتهاي ناشی از به یکی از مهمترین پاتوژنها در کارگیري کاتاترهاي بیمارستانی و آلودگی ناشی از تامپونهاي بهداشتی است( 3 ). گسترش این باکتريها در مناطق مختلف و استفاده بی رویه از گروههاي آنتیبیوتیکی متفاوت خصوصا بتالاکتامها براي درمان بیماران مبتلا به این باکتري زمینه ساز ظهور سویههاي مقاومی شده است( 4 ). از این میان میتوان به استافیلوکوك Methicillin-(MRSE) Epidermidis استافیلوکوك یا مقاوم به متی سیلین یا ResistantStaphylococcus و مقاوم به متی سیلین Methicillin-Resistant Staphylococcus (MRSS) Saprophyticus اشاره کرد( 3 5). شیوع بالاي این سویهها در نمونههاي بالینی و دامی خصوصا در مطالعات اخیر باعث اهمیت روز افزون این باکتري در سالهاي اخیر شده است( 6 ). این سویهها امروزه مقاومت چندگانهاي را نسبت به طیف وسیعی از آنتی بیوتیکها از جمله بتالاکتامها پیدا کردهاند( 7 ). مقاومت به متیسیلین در استافیلوکوكها به دلیل تولید پروتي ینی به نام PBP2a است که یک پروتي ین متصل شونده به پنی سیلین (Binding Protein: PBP-Penicillin) تغییر یافته است و تمایل کمی براي اتصال به آنتی بیوتیکهاي خانواده بتالاکتام نشان میدهد( 8 9). PBP4 و PBP2A انواع دیگري از PBP هستند که به دلیل اهمیت PBP2 در ایجاد مقاومت به متی سیلین به این پروتي ین میشود( 0 ). تولید این پروتي ین با ژنه يا روي کروموزوم باکتري مرتبط است( ). بیشتر پرداخته mec موجود بر meca حضور ژن منجر به بروز استافیلوکوكهاي مقاوم به متی سیلین میشود( 2 ). ژن meca بر روي یک المنت ژنتیکی سیار قرار دارد که به آن کاست کروموزومی استافیلوکوکی( mec Staphylococcus Casset (Cromosom mec میگویند( 3 ). به دلیل اینکه آمینوگلیکوزیدها اغلب به صورت ترکیب با بتالاکتامها و گلیکوپپتیدها در درمان بیماريهاي وابسته به استافیلوکوكهاي کواگولاز منفی مصرف میشوند مقاومت به متی سیلین میتواند زمینهساز مقاومت به آمینوگلیوزیدها را فراهم کند( 4 5). آمینوگلیکوزیدها با اتصال به زیر واحد s30 ریبوزومی سبب قطع مکانیسم ترجمه باکتري شده و اثرات ضدباکتریایی خود را اعمال میکنند( 6 ). مقاومت به آمینو گلیکوزیدها بر اساس سه مکانیسم اصلی استوار است که شامل: تغییر در جایگاه ریبوزومی اتصال دارو کاهش در نفوذپذیري دارو و غیرفعالسازي آنزیمی دارو میباشد( ). آنزیمی آمینوگلیکوزیدها غیر فعالسازي آمینوگلیکوزیدها توسط آنزیمهاي تغییردهنده (Aminoglycoside Modifyng AME) Enzymes: از اصلیترین مکانیسم مقاومت در گونههاي استافیلوکوکی آنزیمها اساس است( 7 ). فعالیت تغییر دهندگی مبناي ردهبندي این آنها میباشد که بر این به سه رده مختلف طبقه بندي میشوند و شامل: آمینوگلیکوزید استیل ترانسفرازها (Aminoglycoside-acetyltransferase: AACs) آمینوگلیکوزید فسفریل ترانسفرازها (Aminoglycoside-phosphotransferase: APHs) و آمینوگلیکوزید نوکلي وتیدیل ترانسفرازها (Aminoglycoside-nucleotidyltransferase: ANTs) هستند( 3 8). سه آنزیم APH(3 )-III AAC(6 )/APH(2 ) ( ANT(4 که به ترتیب توسط ژنهاي و aac(6 )- ant(4 )-Iaوaph(3 )-IIIa Ie/aph(2 ) رمز میشوند جز شایعترین آنزیمهاي تغییردهنده در گونههاي مختلف استافیلوکوکی میباشند و از اهمیت درمانی و بالینی برخوردارند( 9 ). براي تعیین ایزولههایی که داراي آنزیمهاي تخریب کننده آنتی بیوتیکهاي بتالاکتامی و آمینوگلیکوزیدي هستند روشهاي فنوتیپی و ژنوتیپی مختلفی وجود دارد( 20 ). روشهاي فنوتیپی گرچه از نظر صرفه اقتصادي داراي جایگاه مناسبی هستند ولی از لحاظ ١٣ مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراك سال نوزدهم شماره بهمن 395

4 بررسی حضور ژنهاي aac(6')ie/aph(2") ant(4' aph(3')-iiia دقت و سرعت تشخیص داراي حساسیت و ویژگی کمتري نسبت به روشهاي ژنوتیپی هستند. این رو هدف از این مطالعه بررسی حضور aph(3')-iiia ژنهاي(" aac(6')ie/aph(2 ant(4')-ia meca و به روش PCR در ایزولههاي استافیلوکوك کوگولاز منفی میباشد. مواد و روشها کشت نمونه استافیلوکوك در این مطالعه توصیفی-مقطعی و نمونه نمونه استافیلوکوك از بیماران بستري در مراکز درمانی شهر زاهدان در طی یک سال از اردیبهشت 93 تا خرداد سال 94 جمعآوري شدند. چیدمان متغیرهاي مورد مطالعه بر اساس انواع کیفی و کمی صورت پذیرفت. همچنین جهت معیار بندي ورود و خروج افراد جهت نمونهگیري بیمارانی مد نظر قرار گرفتند که به مدت طولانی در ییمارستان بستري و مشکوك به عفونت باکتریاي بودند. نمونههاي کشت داده شده که از بیماران داراي عفونتهاي خون زخم آلودگی با سوند و کاتاتر و عفونتهاي ادراري گرفته شده بود در ابتدا در بخش میکروب شناسی بیمارستان در محیطهاي مختلف کشت داده شد و همه کلنیهاي به دست آمده توسط محیط ترانسپورت Merck)BHI آلمان) به آزمایشگاه میکروب شناسی دانشگاه علوم پزشکی زاهدان انتقال پیدا کردند و تا کشت اولیه اولیه درون فریزر 20- تگهداري شدند. نمونهها را بر روي محیط بلادآگار( Merck آلمان) با 5 درصد خون گوسفند کشت داده و کوکسیهاي گرم مثبت توسط رنگ آمیزي گرم جداسازي شد. کلنی به دست آمده با استفاده از آزمایشهاي بیوشیمیایی اولیه مانند کوگولاز کاتالاز Sigma-Aldrich)Mannitol Salt agar آمریکا) Merck)DNAs استافیلوکوك اوري وس آلمان) غربالگري شده و نمونههاي و استافیلوکوك و از یکدیگر جداسازي شدند. کلنیهاي تایید شده براي انجام مراحل بعدي مورد استفاده قرار گرفت. تعیین استافیلوکوك و استافیلوکوك براي تفکیک استافیلوکوكهاي کوگولاز مثبت از استافیلوکوكهاي کوگولاز منفی از تست کوگولاز لولهاي استفاده شد. براي شناسایی استافیلوکوك ساپروفیتکوس از استافیلوکوك علاوه بر استفاده از دیسکهاي نووبیوسین 30 نالدیکسیک اسید تستهاي میکروگرم( MAST 30 میکروگرم( MAST Key Diagnostics Pty)PYR انگلستان) و انگلیس) از استرالیا) آزمون دکربوکسیلاسیون اورنیتین تولید اسید از قندهاي مالتوز ترهالوز مانیتول و سوکروز و عدم تخمیر گلوکوز در شرایط بی هوازي براي جداسازي این دو گونه از یکدیگر انجام گرفت. در روش دیسک انتشاري ابتدا یک سوسپانسیون باکتري از کشت 2 یا 24 ساعته با کدورتی معادل 0/5 مک فارلند تهیه شد و از این سوسپانسیون روي محیط مولر هینتون آگار( Merck آلمان) با ضخامت 5 میلیمتر کشت داده شد. دیسک را با یک پنس استریل بر روي محیط قرار داده و به مدت 24 ساعت در دماي 37 درجه سانتیگراد انکوبه شد. طبق آخرین نسخه Clinical (CLSI)& Laboratory Standards Institute با استفاده از دیسکهاي نووبیوسین 30 میکروگرم باسیتراسین 0 میکروگرم و پلی میکسین 00 B واحدي استافیلوکوك را از استافیلوکوك جدا میکنیم. در صورتی که قطر هاله ایجاد شده نسبت به دیسک نووبیوسین بیشتر از 6 میلیمتر نسبت به پلیمیکسین B بیشتر از 0 میلیمتر و نسبت به باسیتراسین بیشتر از 9 میلیمتر باشد به عنوان استافیلوکوك در نظر گرفته شدند و در صورتی که قطر هاله نسبت آنتی بیوتیکهاي فوق کمتر از این مقدار باشد به عنوان استافیلوکوك در نظر گرفته میشود( 2 22). براي استافیلوکوك هومینیس از استافیلوکوك هم از آنتی بیوتیکهاي فسفومایسین و دیسفریوکسامین استفاده شد و نمونههایی که براي آنتیبیوتیک فسومایسن داراي قطر هالیه بیشتر از 30 میلیمتر و براي سفریوکسامین داراي قطر هاله بیشتر از 20 میلیمتر بودند استافیلوکوك در نظر گرفته شدند. در این روند شناسایی از سویه استافیلوکوك اوري وس ATCC3359 به عنوان سویه استاندارد کنترل مثبت و از ١٤ مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراك سال نوزدهم شماره بهمن 395

5 بررسی حضور ژنهاي aac(6')ie/aph(2") ant(4' aph(3')-iiia سویه استاندارد استافیلوکوك اوري وس براي کنترل منفی استفاده شد( 23 24). تعیین سویههاي مقاوم آمینوگلیکوزید با MIC E-test مقاومت به متی سیلین به ATCC25923 به متیسیلین مهاري( MIC ) با استفاده از نوارهاي و واسطه تعیین حداقل E-test اوگزاسیلین( liofilchem ایتالیا) تعیین شد. براي این کار ابتدا کلنیهاي جداسازي شده از باکتريهاي به دست آمده را به صورت چمنی بر روي محیطهاي Merck)MHA آلمان) با ضخامت 5 میلیمتر کشت داده شد.سپس نوارها را با استفاده از یک پنس استریل کنار شعله بر روي محیطها قرار داده و به مدت 24 ساعت در دماي 35 درجه سانتیگراد گرم خانه گذاري شد. براي تعیین مقاوم آمینوگلیکوزیدي هم از نوارهاي E-test جنتامایسین آمیکاسین توبرامایسین و کانامایسین مطابق با روش بالا استفاده شد. نتایج به دست آمده با استفاده از آخرین نسخه CLSI مورد ارزیابی قرار گرفت. براي کنترل کیفی و ارزیابی نتایج از استافیلوکوك اوري وس ATCC2923 به عنوان کنترل منفی و استافیلوکوك ATCC2228 به عنوان کنترل مثبت استفاده شد( 23 ). استخراج DNA جهت استخراج DNA ژنومیک مراحل زیر را انجام شد. ایزولههاي بالینی ذخیره شده در 20 -درجه سانتیگراد روي محیط بلاد آگارساب کالچر داده شد و در دماي 37 درجه سانتیگراد به مدت 24 ساعت انکوبه شد. سپس یک کلنی از هر ایزوله کشت داده شده به 5 میلیلیتر محیط کشت لوریا برتانی براث که قبلا درون لولههاي دربدار شیشهاي به تعداد ایزولهها تقسیم و شماريگذاري شده بودند تلقیح شد و به مدت 20 ساعت در دماي 37 درجه سانتیگراد انکوبه گردید. بعد از سپري شدن زمان مورد نظر( 20 ساعت) لولهها از انکوباتور خارج شد. /5 سیسی از محیط کشت حاصل درون میکروتیوبهاي درب دار /5 پلاستیکی ریخته شد و مراحل استخراج DNA ژنومی با استفاده از کیت استخراج شرکت سینا ژن ایران و طبق پروتوکل شرکت سازنده انجام شد. براي تایید کار و کیفیت سنجی DNAهاي استخراج با ابتدا شده رقتسازي DNAهاي استخراج شده OD آنها مورد خوانش قرار گرفت و همچنین محصولات DNA را به میزان 5 لاندا بعد از ترکیب با Thermo) Loading dye آمریکا) بر روي ژل اآگارز درصد لود شد. DNAهاي حاصل تا زمان انجام ازمایش PCR در دماي 20- ذخیره سازي شد. آماده سازي پرایمرها و آزمایش PCR براي آمادهسازي پرایمرها که همگی از شرکت ماکروژن به سفارش شرکت پیشگام ایران تهیه شده بودند بعد از اضافه کردن حجم اب مقطر درج شده بر روي تیوب به رقت اولیه 00 پیکومولار رسانده شد. سپس در رقت 20 پیکومولار ازپرایمرها تهیه شد. بعد از قرار دادن پرایمرهاي در دماي 4+ درجه سانتیگراد به مدت 4 ساعت رقتهاي استوك براي انجام آزمایشات بعدي تهیه و در دماي 20- نگهداري شد. در این روند از پرایمرهاي زیرجهت تکثیر ژنهاي aph(3')-iiia aac(6')ie/aph(2") ant(4')-ia و meca در نمونههاي مورد نظر استفاده شد. aph(3')-iiia جدول. لیست پرایمرهاي اختصاصی استفاده شده براي شناسایی ژنهاي حضور ژنهاي aac(6')ie/aph(2") ant(4')-ia و meca ایزولههاي بالینی استافیلوکوكهاي کواگولاز منفی ژنهاي مورد نظر aac(6')ie/aph(2") aph(3')-iiia ant(4')-ia meca اندازه bp) ( طول توالی رفرنس Abdalو ۴۵١ GAAGTACGCAGAAGAG همکاران( 25 ( ACATGGCAAGCTCTAGA Abdalو همکاران( 2 ( ٢۴٢ AAATACCGCTGCGTA CATACTCTTCCGAGCAA Abdalو همکاران( 2 ( ١٩۵ AATCGGTAGAAGCCCAA GCACCTGCCATTGCTA Noguchi ۵۴۴ GTGGAAGTTAGATTGGGATCATAGC و همکاران( 26 ( GTCAACGATTGTGACACGATAGC ١٥ مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراك سال نوزدهم شماره بهمن 395

6 بررسی حضور ژنهاي aac(6')ie/aph(2") ant(4' aph(3')-iiia انجام جهت PCR واکنش براي هر ژن 25 میکرولیتر از محلول نهایی شامل: میکرولیتر از DNA الگو میکرولیتر از هر پرایمر با غلظت 5 پیکومولار و 2/5 از میکرولیتر مستر میکس 2x and.5 mm آلمان) که شامل- Tris Ampliqon (شرکت MgCl2 Hcl PH8.5, (NH 4 ) SO 4, 3mM Mgcl 2, unit 0/2 MmdNTP 4/4 0.2%Tween20 Insert red dye and Ampliqon polymeras stabilizer بود براي تهیه میکس اولیه مورد استفاده قرار گرفت. براي رساندن به حجم نهایی از آب مقطر دیونیزه استفاده شد. از مخلوط PCR فاقد DNA الگو به عنوان کنترل منفی استفاده شد( 4 ). آزمون PCR براي ژنها با دستگاه از استفاده ترموسایکلر- CGI Corbett 96 (آمریکا) طبق الگوي زیر براي تنظیم گردید. در این آزمون از استافیلوکوك اوري وس ATCC43300 به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. واسرشتگی اولیه در 95 درجه سانتیگراد به مدت 3 دقیقه سپس 35 چرخه حرارتی شامل واسرشتگی ثانویه در 95 درجه به مدمت 40 ثانیه اتصال آغازگرها به مدت 50 ثانیه براي ژن(" aac(6')ie/aph(2 در دماي 55 درجع سانتیگراد و براي ژنهاي aph(3')- و IIIa 50 ant(4')-ia ثانیه در دماي درجه 57 سانتیگراد نظر گرفته شد. تکثیر اولیه هم به مدت 40 ثانیه در دماي 72 درجه سانتیگراد لحاظ گردید. براي تکثیر نهایی هم در مدت زمان سانتیگراد استفاده شد. الکتروفورز اگارز /5 درصد محصولات 0 دقیقه PCR از دماي روي 72 درجه ژل محصولات PCR توسط الکتروفورز با استفاده از ژل آگارز /5 درصد شناسایی شدند. به این صورت که 5 میکرولیتر از محصول نهایی PCR در ژل اگارز /5 درصد در بافر 0/5X الکتروفورز گردید. براي رنگدهی به میکرولیتر 5 آن به ژل محلول Gel (ساخت Red Biotium آمریکا) اضافه شد و خوب هم زده شد. سپس در زیر نور ماوراي بنفش در طول موج 260 نانومتر توسط دستگاه ترانس ایلومیناتور مشاهده شدند. براي تعیین اندازه محصولات از نشانگر مولکولی فرمنتاز( Thermofisher آمریکا)با توالی 00 جفت بازي استفاده شد. در نهایت از ژل حاصل توسط دستگاه ژل داك Gel Documentation system CCD-Tab) CCD کیاژن ایران) عکسبرداري شد. تجزیه و تحلیل دادهها دادههاي به دست آمده از مطالعه حاضر با استفاده از نرم افزار SPSS نسخه 9 مورد بررسی تجزیه و تحلیل قرار گرفت. براي این منظور از روشهاي آماري توصیفی(تعیین فراوانی درصد و میانگین) استفاده شد. همچنین آزمون آماري K2 براي مقایسه یافتههاي کیفی و تست مثبت مستقل براي مقایسه یافتههاي کمی مورد استفاده قرار گرفتند. در این مطالعه مقدار 0/50 p معنیدار در نظرگرفته شد. یافتهها در این مطالعه براي غربالگري اولیه ایزولههاي مقاوم به متیسیلین در استافیلوکوك و استافیلوکوك از روش تعیین حداقل غلظت مهاري توسط نوارهاي E-test اوگزاسیلین و براي تعیین مقاومت به آمینوگلیکوزیدها از نوارهاي E-test جنتامایسین و آمیکاسین استفاده شد. در استافیلوکوك از 68 ایزوله (60/29 4 درصد) ایزوله داراي حداقل غظتهاي مهاري بیشتر از 0/5 میکروگرم بر میلیرلیتر براي اوگزاسیلین و 24 ایزوله (53/33 درصد) داراي حداقل غلظت مهاري بیشتر از 0/5 میکروگرم بر میلیلیتر بودند(جدول 2). در غربالگري اولیه براي تعیین مقاومت به آمینوگلیکوزیدها از 68 استافیلوکوك 5 ایزوله (22/05 درصد) داراي حداقل غلظت مهاري بیشتر از 6 میکروگرم بر میلیلیتر براي جنتامایسین 0 ایزوله( 6/8 درصد) داراي حداقل مهاري بیشتر از 64 میکروگرم بر میلیلیتر براي کانامایسین 9 ایزوله 5/6) درصد)داراي حداقل غلظت مهاري بیشتر از از 64 ایزوله و 3 ایزوله (4/4 درصد)داراي حداقل غلظت مهاري بیشتر از 6 میکروگرم ١٦ مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراك سال نوزدهم شماره بهمن 395

7 بررسی حضور ژنهاي aac(6')ie/aph(2") ant(4' aph(3')-iiia بر میلیلیتر بودند. از 45 6 هم ایزوله استافیلوکوك ایزوله داراي حداقل غلظت مهاري بیشتر از 6 میکروگرم بر میلیلیتر براي جنتامایسین 8 ایزوله داراي حداقل مهاري بیشتر از کانامایسین 3 64 ایزوله (4/4 میکروگرم بر میلیلیتر براي درصد)داراي حداقل غلظت مهاري بیشتر از از 64 ایزوله و ایزوله( 2/2 درصد) داراي حداقل غلظت مهاري بیشتر از 6 میکروگرم بر میلیلیتر بودند(جدول 2). بیشترین ایزوله استافیلوکوك از بخشهاي اطفال و بیماران سرپایی به دست آمده که مربوط به نمونههاي زخم و ادرار بودند(جدول 4). همچنین بیشترین میزان جداسازي این باکتري از بیماران مونث بود(جدول درصد)داراي ژن 3). از این مقدار 39 meca ایزوله( 57/35 بودند. علاوه بر این 3 ایزوله( 9/ درصد) داراي ژن aac(6')ie/aph(2") 9 ایزوله( 3/23 درصد) داراي ژن aph(3')-iiia 2 و ایزوله( 2/2 درصد) داراي ژن ant(4')-ia بودند(نمودار ). از نظر فراوانی ژنها بر اساس نمونههاي بالینی بیشتري میزان ژنها از نمونههاي زخم و ادرار و خون جداسازي شدند که از بیماران بخشهاي اطفال ICU 45 و بیماران مراجعه کننده به صورت سرپایی گرفته شده بودند(جدول 3). از دست ایزوله بالینی استافیلوکوك به آمده از بخشهاي مختلف بیمارستانی و همچنین بیماران سرپایی مراجعه کننده بیشترین نمونههاي مربوط به زخم و ادرار بود. علاوه بر این 8 ایزوله( 7/77 درصد) داراي ژن 4 aac(6')ie/aph(2") ایزوله( 8/8 درصد) داراي ژن aph(3')-iiia و 2 ایزول 4/4 درصد) داراي ژن ant(4')-ia بودند(نمودار ). جدول 2. الگوي حساسیت ایزولههاي بالینی استافیلوکوك و استافیلوکوك با روش تعیین حداقل غلت مهاري با استفاده از نوارهاي E-test آنتی بیوتیک حداقل غلظت مهار کنندگی استافیلوکوکوك هاي کواگولاز منفی ( n=3) (n=45) (n=68) حساس نیمه حساس مقاوم حساس نیمه حساس مقاوم 53/33)24 (% /68) (% 60/29) 4 (% 0 36/7) 27 (% اوگزاسیلین 3/33)6 (% 2 4/4) (% 37 82/22) (% 5 22/05) (% 4 5/8) (% 72/05) 49 (% آمیکاسین 7/77)8 (% 24/44) (% 26 57/77) (% 0 6/8) (% 3 4/4) (% 82/35) 56 (% جنتامایسین 6/6)3 (% 7 5/55) (% 35 77/77) (% 9 5/6) (% 6 8/8) (% 77/94) 53 (% کانامایسین 2/2) (% 2/2) (% 43 95/55) (% 4/4) 3 (% 0 95/58) 65 (% توبرامایسین ١٧ مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراك سال نوزدهم شماره بهمن 395

8 بررسی حضور ژنهاي aac(6')ie/aph(2") ant(4' aph(3')-iiia جدول 3. فراوانی حضور ژنهاي aac(6')ie/aph(2") ant(4')-ia aph(3')-iiia و meca و استافیلوکوك بر اساس نمونه هاي بالینی جدا شده در ایزولههاي بالینی استافیلوکوك استافیلوکوکوك هاي کواگولاز منفی ( n=3) بخش جداشده (n=9) 4 % 4 % 8 % 8 ant (4')-Ia (n=48) (n=29) aph (3')-IIIa (n=) (n=42) (n=3) aac (6 ) Ie/aph (2") (n=3) (/6) 0 (n=45) (n=32) (% ) (% 8) (n=23) (/6) meca (n=62) (n=39) 4 (% 8/) خون ادرار 0 0 کاتاتر 0 0 زخم ترشحات 0 0 ١٨ مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراك سال نوزدهم شماره بهمن 395

9 بررسی حضور ژنهاي aac(6')ie/aph(2") ant(4' aph(3')-iiia meca و ant(4')-ia aph(3')-iiia جدول 4. فراوانی حضورژنهاي aac(6')ie/aph(2") و استافیلوکوك بر اساس بخش هاي جدا شده در ایزوله هاي بالینی استافیلوکوك استافیلوکوکوك هاي کواگولاز منفی ( n=3) بخش جداشد ه (n=9) 4 % 4 % 8 % 8 ant (4')-Ia (n=48) (n=29) aph (3')-IIIa (n=) (n=42) (n=3) aac (6 ) Ie/aph (2") (n=9) (/6) 0 (n=45) (n=29) (% ) (% 8) (n=) (/6) meca (n=62) (n=3) 4 (% 8/) اطفال 0 0 ICU داخلی جراحی P- ICU 0 0 N- ICU (% 0) 9 (3/66) 23 (% 46/93) بیماران سرپایی زنان 8 3 (% 26/53) خون شناسی ١٩ مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراك سال نوزدهم شماره بهمن 395

10 بررسی حضور ژنهاي aac(6')ie/aph(2") ant(4' aph(3')-iiia نمودار.توزیع فراوانی ژن هاي aac(6')ie/aph(2") ant(4')-ia aph(3')-iiia و meca هاي کوگولاز منفی در ایزوله هاي بالینی استافیلوکوك شکل. انجام PCR بر روي ژنant(4')-Ia با طول 95 جفت باز. چاهک 6 : کنترل مثبت سویه استافیلوکوك. ATCC2228 چاهک 4 کنترل منفی سویه 2 3 7: نمونه هاي مثبت از نظر حضور ژن استافیلوکو استافیلوکو ژن هاي مورد مطالعه استاندارد استافیلوکوك اوري وسATCC25923 ۴۵ ایزوله هاي بالینی استافیلوکوك هاي کوگولاز منفی ۴٠ ٣۵ ٣٠ ٢۵ ٢٠ ١۵ ١٠ ۵ ٠. M :مارکر 00 جفت بازي. چاهک هاي شکل 2. انجام PCR بر روي ژن aac(6')ie/aph(2") با طول 45 جفت باز. چاهک 5 کنترل منفی سویه استاندارد استافیلوکوك اوري وسATCC ATCC2228 تا 4 و 7 : نمونه هاي مثبت از نظر ژن. چاهک 6 : کنترل مثبت سویه استافیلوکوك. M :مارکر 00 جفت بازي. چاهک هاي ٢٠ مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراك سال نوزدهم شماره بهمن 395

11 بررسی حضور ژنهاي aac(6')ie/aph(2") ant(4' aph(3')-iiia شکل 3. انجام PCR بر روي ژنaph(3')-IIIa. ATCC2228 چاهک کنترل منفی سویه 3 تا 7 : نمونه هاي مثبت از نظر ژن. بحث آمینوگلیکوزیدها از آن دست از آنتی بیوتیکها میباشند که حتی با داشتن عوارض جانبی مانند سمیتهاي کلیوي و اختلالات شنوایی که با مصرف آنها پدیدار میشود کماکان در درمان عفونتهاي استافیلوکوکی کاربرد دارند که ارزش بالاي این آنتی بیوتیکها را نشان میدهد. آمینوگلیکوزیدها همچنین با خاصیت هم افزایی خود در مواقعی که با آنتی بیوتیکهاي بتالاکتامی و گلیکوپپتیدي استفاده میشوند میتوانند اثر بخشی خود را اقزایش دهند. این امر باعث شده است که در برخی موارد مقاومتهاي بتالاکتامی زمینه مساعدي را براي مقاومتهاي آمینوگلیکوزیدي فراهم کند. نتایج حاصل از این مطالعه بیان کننده مقاومت بالاي بتالاکتامی در ایزولههاي استافیلوکوك و استافیلوکوك اپی درمیدیس میباشد. این در حالی است که ارتباط معنیداري بین نوع نمونههاي اخد شده و گونه باکتریایی جدا شده یافت نشد( p 0/05 ). بیشترین موارد جدا شده از ایزولههاي بالینی جدا شده از بیماران داراي جنسیت مونث بود که بیش از 60 درصد از نمونههاي داراي مقاومت به متی سیلین از زنان جدا شد همچنین بین جنسیت بیمارانی که از آنها نمونه باکتریایی به دست آمده بود و نوع باکتري جداسازي شده ارتباطی دیده با طول 242 جفت باز. چاهک 2 : کنترل مثبت سویه استافیلوکوك استاندارد استافیلوکوك اوري وسATCC M :مارکر 00 جفت بازي. چاهک هاي نشد( p 0/05 ). جهت سنجش اولیه مقاومت به متی سیلین در ایزولههاي استافیلوکوك و استافیلوکوك از روش تعیین حداقل غلظت مهاري به واسطه نوارهاي E-test اوگزاسیلین استفاده شد. در این میان از 68 ایزوله استافیلوکوك جدا شده از نمونههاي بالینی 36 ایزوله( 52/94 درصد) داراي مقاومت به متی سیلین بودند و از 45 ایزوله بالینی استافیلوکوك 24 ایزوله( 54/33 درصد) داراي مقاومت فنوتیپی به متی سیلین بودند که از این نظر با مطالعه سبزهالی و همکاران در سال 205 در تهران و قوتاسلو و همکاران در تبریز در سال 204 انجام شده بود مطابقت دارد( 27 28). به اینکه دلیل آنزیمهاي محدود کننده آنتی بیوتیکهاي بتالاکتامی گروه خاصی از آنتی بیوتیکها را تخریب میکنند براي تعیین مقاومت آمینوگلیکوزیدي از 4 آنتی بیوتیک جنتامایسین توبرامایسین کانامایسین و آمیکاسین استفاده شد. حداقل غلظت مهاري این آنتی بیوتیکها که طیف کاملی از آنتی بیوتیکهاي تخریب شونده توسط آنزیمهاي مخرب تولید شده توسط سویههاي مقاوم به آمینوگلیکوزیدها میباشند با استفاده از نوارهاي E-Test تعیین شد. در ایزولههاي بالینی استافیلوکوك 5 ایزوله (22/05 درصد) داراي حداقل غلظت مهاري بیشتر از 6 میکروگرم بر میلیلیتر ٢١ مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراك سال نوزدهم شماره بهمن 395

12 بررسی حضور ژنهاي aac(6')ie/aph(2") ant(4' aph(3')-iiia براي جنتامایسین 0 ایزوله( 6/8 درصد) داراي حداقل مهاري بیشتر از 64 میکروگرم بر میلیلیتر براي کانامایسین 9 ایزوله( 5/6 درصد)داراي حداقل غلظت مهاري بیشتر از از ایزوله( 4/4 3 ایزوله و 64 درصد) داراي حداقل غلظت مهاري بیشتر از 6 میکروگرم بر میلیلیتر بودند. نتایج به دست آمده با نتایجی که کلینبرگ و همکاران در سال 200 در کویت ابدال و همکاران در قم در سال و قوتاسلو و همکاران در تبریز هر دو در سال 204 گزارش داده بودند تقریبا همخوانی داشته و با مطالعه رحیمی و همکاران که در سال 205 در اصفهان انجام شده بود همخوانی نداشت و میزان مقاومت به جنتامایسین و کانامایسین بالاتر از مواردي بود که در این مطالعه ایزوله استافیلوکوك مشاهده شد( 8 29). بررسی 45 از نظر مقاومت به آمینوگلیوزیدها هم نشان داد که (3/33 6 درصد) ایزوله داراي حداقل غلظت مهاري بیشتر از 6 میکروگرم بر میلیلیتر براي جنتامایسین 8 ایزوله (7/77 درصد) داراي حداقل مهاري بیشتر از کانامایسین 64 3 ایزوله 4/4) میکروگرم بر میلیلیتر براي درصد)داراي حداقل غلظت مهاري بیشتر از از 64 میکروگرم بر میلیلیتر و ایزوله( 2/2 درصد) داراي حداقل غلظت مهاري بیشتر از 6 میکروگرم بر میلیلیتر بودند. این نتایج به توجه به نتایج به دست آمده از مطالعات کلینبرگ و همکاران در کویت در سال 200 و قوتاسلو و همکاران در سال 204 در تبریز مطالبقت دارد( 8 22). از طرفی با مطالعات چوي ی و همکاران در سال 2003 در کره مطابقت نداشت. در این مطالعه مقاومت به آنتی بیوتیکهاي جنتامایسین بیش از 60 درصد گزراش شده بود که با مواردي که در مطالعه ما به دست آمد تفاوت قابل توجهی دارد( 30 ). این چنین تفاوتهایی که در برخی موارد در گزارشات گوناگون از مناطف مختلف دیده میشود را میتوان به تغییر سویه متناسب با موقعیت جغرافیایی نسبت داد. به طوري که در مطالعهاي که در سال 999 توسط اشمیتز در اروپا انجام شد شیوع فنوتیپی مقاومت به جنتامایسین و آمیکاسین را بیش از 30 درصد گزارش کرده بودند که با موارد مورد مطالعه در زاهدان کاملا تفاوت دارد( 3 ). بیشترین ایزوله استافیلوکوك و استافیلوکوك اطفال و بیماران سرپایی به از بخشهاي دست آمده که مربوط به نمونههاي زخم و ادرار بودند نتایج این موارد هم با مطالعات اشمیتز و همکاران در سال 999 همخوانی داشت. از نظر پراکنش ژنی در ایزولههاي استافیلوکوك 3 هم ایزوله( 9/ 9 aac(6')ie/aph(2") درصد) داراي ژن ایزوله( 3/23 درصد) داراي ژن aph(3')-iiia و 2 ایزوله( 2/2 درصد) داراي ژن ant(4')-ia بودند. موارد به دست آمده با نتایج سبزهالی و همکاران از نظر پراکنش ژنهاي aac(6')ie/aph(2") وaph(3')-IIIa مطابقت داشت و از نظر پراکنش ژن ant(4')-ia مطابقت نداشت و توزیع آن بیش از 70 درصد گزارش شده بود که بیشتر از مطالعه حاضر است( 20 ). مطالعات آردیک و همکاران در سال 2006 در ترکیه نشان دهنده شیوع بیشتر این ژنها در استافیلوکوكها بود که با نتایج به دست آمده در مطالعه ما همخوانی نداشت( 32 ). از نظر فراوانی ژنها بر اساس نمونههاي بالینی بیشتري میزان ژنها از نمونههاي زخم و ادرار و خون جداسازي شدند که از بیماران بخش هاي اطفال ICU و بیماران مراجعه کننده به صورت سرپایی گرفته شده بودند که در مطالعات بهات و همکاران در هند در سال و بوتین و همکاران در فرانسه هر دو در سال 206 همخوانی دارد به طوري که در این مطالعات تعدد نمونههاي گرفته شده از بخشهاي مراقبتهاي ویژه بسیار بالا گزارش شده اند( 33.(34 از 45 دست ایزوله بالینی استافیلوکوك به آمده از بخشهاي مختلف بیمارستانی و همچنین بیماران سرپایی مراجعه کننده بیشترین نمونههاي مربوط به زخم و ادرار بود. علاوه بر این 8 ایزوله( 7/77 درصد) داراي ژن ژن 4 aac(6')ie/aph(2") ایزوله( 8/8 درصد) داراي ژن aph(3')-iiia و 2 ایزول 4/4 درصد) داراي ant(4')-ia فراوانی بیش از استافیلوکوكهاي ژن بودند. aac(6')ie/aph(2") 5 با درصد بیشترین شیوع را در بین و استافیلوکوك ٢٢ مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراك سال نوزدهم شماره بهمن 395

13 بررسی حضور ژنهاي aac(6')ie/aph(2") ant(4' aph(3')-iiia aminoglycoside antibiotics with plectasin are synergistic against methicillin-sensitive and methicillin-resistant Staphylococcus aureus. PloS one. 205;0(2) Zuo GY, Han ZQ, Hao XY, Han J, Li ZS, Wang GC. Synergy of aminoglycoside antibiotics by 3-Benzylchroman derivatives from the Chinese drug Caesalpinia sappan against clinical methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). Phytomedicine. 204;2(7): Martins A, Riboli DFM, Camargo CH, Pereira VC, de Almeida Sampaio R, de Souza da Cunha MdLR. Antimicrobial resistance and persistence of Staphylococcus epidermidis clones in a Brazilian university hospital. Diagnostic microbiology and infectious disease. 203;77(2): Krediet TG, Fleer A, Gerards LJ. Development of resistance to aminoglycosides among coagulasenegative staphylococci and enterobacteriaceae in a neonatal intensive care unit. The Journal of hospital infection. 993;24(): Becker K, Heilmann C, Peters G. Coagulase-Negative Staphylococci. Clinical Microbiology Reviews. 204;27(4): Piette A, Verschraegen G. Role of coagulase-negative staphylococci in human disease. Veterinary microbiology. 2009;34(-2): Tabata M, Shimizu M, Araake M, Ogawa H. [Relationship between arbekacin-susceptibility and aminoglycoside-resistant gene of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA)]. The Japanese journal of antibiotics. 2003;56(): Harrison EM, Paterson GK, Holden MT, Larsen J, Stegger M, Larsen AR, et al. Whole genome sequencing identifies zoonotic transmission of MRSA isolates with the novel meca homologue mecc. EMBO molecular medicine. 203;5(4): داشت. این افزایش فراوانی به دلیل حضور این ژن بر روي ترانسپوزون Tn400 میباشد که سبب گردش این ژن در بین استافیلوکوكها میشود. ژن aph(3')- aac(6')ie/aph(2") هم بعد از ژن IIIa بیشترین فراوانی را در هر دو گونه داشت. این نتایج با مطالعاتی که در کشورهاي هند مصر کره ترکیه و همان همخوانی داشت( 35-37). از نظر ژنتیکی این ژن بر روي ترانسپوزون Tn4505 حمل میشود که ممکن است در کروموزوم یا پلاسمید قرار گرفته باشد. در کنار این دو ژن ژن ant(4')- Ia کمترین فراوانی را در دو گونه مورد بررسی داشت. نتیجه گیري با توجه به مقطعی بودن این مطالعه و عدم دسترسی به نمونههاي بیشتر و زمان طولانیتر نمیتوان به قطعیت در مورد شیوع این ژنها در شهر زاهدان اظهار نظر کرد اما با توجه به نتایج به دست آمده و مقایسه آن با نتایجی که از سایر شهرها ایران گزارش شده است شهر زاهدان داراي وضعیتی به مراتب بهتر میباشد. البته نباید از این مورد چشم پوشی کرد که مقاومت به متی سیلین و حضور ژنها عامل مقاومت در این مطالعه به وفور دیده شد که ناشی از مصرف نادرست آنتی بیوتیکهاي بتالاکتامی میباشد. در نهایت باید با کنترل مصرف آنتی بیوتیکهاي بتالاکتامی در درمان عفونتهاي استافیلوکوکی در کم کردن این مقاومتها و ریشه کنی سویههاي مقاوم اقدام کرد. تشکر و قدردانی نویسندگان این مقاله از کارشناسان محترم گروه میکروب شناسی آقایان ده مرده و آتشگر همکاران بخش میکروب شناسی آزمایشگاه رفرانس و مرکز تحقیقات عفونی-گرمسیري دانشگاه علوم پزشکی زاهدان کمال تشکر را دارند. منابع. Hu Y, Liu A, Vaudrey J, Vaiciunaite B, Moigboi C, McTavish SM, et al. Combinations of beta-lactam or ٢٣ مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراك سال نوزدهم شماره بهمن 395

14 بررسی حضور ژنهاي aac(6')ie/aph(2") ant(4' aph(3')-iiia 0. Klingenberg C, Aarag E, Ronnestad A, Sollid JE, Abrahamsen TG, Kjeldsen G, et al. Coagulase-negative staphylococcal sepsis in neonates. Association between antibiotic resistance, biofilm formation and the host inflammatory response. The Pediatric infectious disease journal. 2005;24(9): Mombach Pinheiro Machado AB, Reiter KC, Paiva RM, Barth AL. Distribution of staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec) types I, II, III and IV in coagulase-negative staphylococci from patients attending a tertiary hospital in southern Brazil. Journal of medical microbiology. 2007;56(0): Greninger AL, Chatterjee SS, Chan LC, Hamilton SM, Chambers HF, Chiu CY. Whole-Genome Sequencing of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus Resistant to Fifth-Generation Cephalosporins Reveals Potential NonmecA Mechanisms of Resistance. PloS one. 206;(2): Couto I, de Lencastre H, Severina E, Kloos W, Webster JA, Hubner RJ, et al. Ubiquitous presence of a meca homologue in natural isolates of Staphylococcus sciuri. Microbial drug resistance. 996;2(4): Jacob J, Meers PD. Partial characterization of an endemic strain of a methicillin- and aminoglycoside-resistant Staphylococcus aureus (MARSA) homogeneously resistant to beta-lactam antibiotics. The Journal of hospital infection. 992;2(2): Abdal N, Ghaznavirad E, Hamidi A, Hosseini D. Prevalence of genes encoding aminoglycoside resistant in methicillinsensitive Staphylococcus aurous and coagulase-negative staphylococci isolated from hospital infectious. koomesh. 204;6(): Fatholahzadeh B, Emaneini M, Feizabadi MM, Sedaghat H, Aligholi M, Taherikalani M, et al. Characterisation of genes encoding aminoglycoside-modifying 9. Xu Z, Mkrtchyan HV, Cutler RR. Antibiotic resistance and meca characterization of coagulase-negative staphylococci isolated from three hotels in London, UK. Frontiers in microbiology. 205;6(2):94-7. enzymes among meticillin-resistant Staphylococcus aureus isolated from two hospitals in Tehran, Iran. International journal of antimicrobial agents. 2009;33(3): Ida T, Okamoto R, Shimauchi C, Okubo T, Kuga A, Inoue M. Identification of aminoglycoside-modifying enzymes by susceptibility testing: epidemiology of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Japan. J Clin Microbiol. 200;39(9): Fujimura S, Tokue Y, Takahashi H, Nukiwa T, Watanabe A. Specificity of 4'''- acetylation by an aminoglycosidemodifying enzyme in arbekacin-resistant strains of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Tohoku J Exp Med. 998;86(): Marshall SA, Wilke WW, Pfaller MA, Jones RN. Staphylococcus aureus and coagulase-negative staphylococci from blood stream infections: frequency of occurrence, antimicrobial susceptibility, and molecular (meca) characterization of oxacillin resistance in the SCOPE program. Diagnostic microbiology and infectious disease. 998;30(3): Pottumarthy S, Fritsche TR, Jones RN. Evaluation of alternative disk diffusion methods for detecting meca-mediated oxacillin resistance in an international collection of staphylococci: validation report from the SENTRY Antimicrobial Surveillance Program. Diagnostic microbiology and infectious disease. 2005;5(): CLSI. M00-S25 performance standards for antimicrobial susceptibility testing; Twenty-fifth informational supplement; Frigatto EAM, Machado AMO, Pignatari ACC, Gales AC. Is the Cefoxitin Disk Test Reliable Enough to Detect ٢٤ مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراك سال نوزدهم شماره بهمن 395

15 بررسی حضور ژنهاي aac(6')ie/aph(2") ant(4' aph(3')-iiia Oxacillin Resistance in Coagulase- Negative Staphylococci? Journal of Clinical Microbiology. 2005;43(4): Antunes A.L.S., Secchi C., Reiter K.C., et al. Feasible identification of Staphylococcus epidermidis using desferrioxamine and fosfomycin disks. APMIS, 2008;2(9): Noguchi N, Nakaminami H, Nishijima S, Kurokawa I, So H, Sasatsu M. Antimicrobial Agent of Susceptibilities and Antiseptic Resistance Gene Distribution among Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus Isolates from Patients with Impetigo and Staphylococcal Scalded Skin Syndrome. Journal of Clinical Microbiology. 2006;44(6): Ghotaslou R, Aghazadeh M, Ahangarzadeh Rezaee M, Moshafi MH, Forootanfar H, Hojabri Z, et al. The prevalence of aminoglycoside-modifying enzymes among coagulase negative staphylococci in Iranian pediatric patients. Journal of infection and chemotherapy : official journal of the Japan Society of Chemotherapy. 204;20(9): Sabzehali F, Gudarzi M, Goudarzi H. Determination of antibiotic resistance in clinical isolates of coagulase negative Staphylococci from hospitalized patients in selected hospitals of Tehran ;6(2). 27. Glad T, Klingenberg C, Flaegstad T, Ericson JU, Olsvik O. Rapid detection of the methicillin-resistance gene, meca, in coagulase-negative Staphylococci. Scandinavian journal of infectious diseases. 200;33(7): Lim JA, Kwon AR, Kim SK, Chong Y, Lee K, Choi EC. Prevalence of resistance to macrolide, lincosamide and streptogramin antibiotics in Gram-positive cocci isolated in a Korean hospital. J Antimicrob Chemother. 2002;49(0) Shmitz FJ, Fluit AC, Gondolf M, Beyrau R, Lindenlauf E, Verhoef J, et al. The prevalence of aminoglycoside resistance and corresponding resistance genes in clinical isolates of staphylococci from 9 European hospitals. J Antimicrob Chemother 999; (43): Ardic N, Ozyurt M, Sareyyupoglu B, Haznedaroglu T. Investigation of erythromycin and tetracycline resistance genes in methicillin-resistant staphylococci. International journal of antimicrobial agents. 2005;26() Butin M, Rasigade JP, Martins-Simões P, Meugnier H, Lemriss H, Goering RV, et al. Wide geographical dissemination of the multiresistant Staphylococcus capitis NRCS-A clone in neonatal intensive-care units. Clinical Microbiology and Infection. 206;22(): Bhatt P, Tandel K, Singh A, Mugunthan M, Grover N, Sahni AK. Species distribution and antimicrobial resistance pattern of Coagulase-negative Staphylococci at a tertiary care centre. Medical Journal Armed Forces India. 206;72(): Duran N, Ozer B, Duran GG, Onlen Y, Demir C. Antibiotic resistance genes & susceptibility patterns in staphylococci. Indian J Med Res 202; (35): Liakopoulos A, Foka A, Vourli S, Zerva L, Tsiapara F, Protonotariou E, et al. Aminoglycoside-resistant staphylococci in Greece: prevalence and resistance mechanisms. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 20; (30): Sorour AE, El-Awady BA, Mukhtar AM. Co-existance of aminoglycoside modifying enzymes (AMEs) genes and meca gene among nosocomial isolates of Staphylococcus aureus in surgical intensive care units in kasr Al-Ainy hospitals, Cairo University. Int Arabic J Antimicrob Agents 203; 3:. ٢٥ مجله علمی پژوهشی دانشگاه علوم پزشکی اراك سال نوزدهم شماره بهمن 395