8 中南大学学报 ( 医学版 ), 2018, 43(1) by tail veil. The ovarian tissues were collected for HE staining at 7 days after transplantation t

Size: px

Start display at page:

Download "8 中南大学学报 ( 医学版 ), 2018, 43(1) by tail veil. The ovarian tissues were collected for HE staining at 7 days after transplantation t"

积董
5 years ago
Views:

中南大学学报 ( 医学版 ) J Cent South Univ (Med Sci) 2018, 43(1) http://www.csumed.org 7 DOI:10.11817/j.issn.1672-7347.2018.01.002 www.csumed.org/xbwk/fileup/pdf/2018017.

1 中南大学学报 ( 医学版 ) J Cent South Univ (Med Sci) 2018, 43(1) 7 DOI: /j.issn 骨髓来源间充质干细胞对卵巢早衰小鼠的修复作用彭静, 肖娜, 程腊梅 ( 中南大学基础医学院生殖与干细胞研究所, 长沙 478 ) [ 摘要 ] 目的 : 研究小鼠同种异体骨髓来源间充质干细胞 (bone marrow derived mesenchymal stem cells,bmscs) 在环磷酰胺诱导的小鼠卵巢早衰 (premature ovarian failure,pof) 损伤中的修复作用及其机制方法 : 分离培养小鼠 BMSCs, 应用流式细胞术检测 BMSCs 表面标志 ; 小鼠腹腔注射 50 mg/(kg.d) 环磷酰胺, 连续 15 d, 建立 POF 模型建模后第 7 天, 按每只小鼠个 BMSCs 尾静脉注射移植到 POF 模型小鼠体内 ; 移植后第 7 天, 采用 HE 染色观察细胞移植治疗后小鼠卵巢结构变化,RT-PCR 检测 BMSCs 移植对 POF 小鼠卵泡发育相关基因 mrna 表达的影响结果 :BMSCs 高表达间充质干细胞标志 CD29 和 CD90, 低表达内皮细胞标志标志 CD31 和造血干 / 祖细胞标志 CD34 POF 模型小鼠各级发育卵泡数量明显减少, 闭锁卵泡数量明显增加 (P<0.05), 颗粒细胞凋亡降解与对照组比较,BMSCs 移植组小鼠卵巢窦状卵泡和次级卵泡数量明显增加, 闭锁卵泡数量明显减少 (P<0.05), 颗粒细胞数量明显增加, 但原始卵泡和初级卵泡数量两组间差异无统计学意义 (P>0.05);BMSCs 移植组卵巢组织卵泡发育相关基因 Nano3,Nobox,Lhx8 mrna 水平明显高于对照组 (P<0.05) 结论:BMSCs 能促进 POF 小鼠卵泡发育和卵巢组织结构恢复 [ 关键词 ] 环磷酰胺 ; 卵巢早衰 ; 骨髓来源间充质干细胞 Therapeutic potential of BMSCs for premature ovarian failure in mice PENG Jing, XIAO Na, CHENG Lamei ( Institute of Reproduction and Stem Cell Engineering, School of Basic Medical Science, Central South University, Changsha 478, China ) ABSTRACT Objective: To explore the therapeutic effects of bone marrow-derived mesenchymal stem cells (BMSCs) on premature ovarian failure (POF) in mice induced by cyclophosphamide (CTX) and the possible mechanisms. Methods: Mouse BMSCs were identified through detection of cell surface markers by flow cytometry. The model of mouse POF was induced by intraperitoneal injection of CTX at a dose of 50 mg/kg, once daily for 15 days. BMSCs were transplanted into POF mice at cells/mouse 收稿日期 (Date of reception): 第一作者 (First author): 彭静, @qq.com 通信作者 (Corresponding author): 程腊梅, mmlamei@163.com 基金项目 (Foundation item): 国家高技术研究发展计划 (863 计划 )(2011AA020113) This work was supported by the National High-tech R&D Program (863 Program), China (2011AA020113).

2 8 中南大学学报 ( 医学版 ), 2018, 43(1) by tail veil. The ovarian tissues were collected for HE staining at 7 days after transplantation to observe the changes of ovarian structure and real-time PCR was performed to detect the folliculogenesis gene expression. Results: BMSCs showed positive expression of CD29 and CD90 while low expression for endothelial and hematopoietic cell markers CD31 and CD34. The numbers of primodial follicle, primary follicle, secondary follicle and antral follicle were significantly decreased, but the numbers of atretic follicle were significantly increased in CTX induced-pof mice (P<0.05). BMSCs transplantation effectively repaired the structure of damaged ovary. The significant reduction of atretic follicle and significant increase of antral follicle and secondary follicle were observed in ovaries of BMSCs-treated mouse(p<0.05). BMSCs-transplanted mouse ovaries showed the increased mrna expression levels of Nano3, Nobox, and Lhx8 (P<0.05). Conclusion: BMSCs could effectively repair ovarian structure and promote follicle development in CTX-induced POF mouse. KEY WORDS cyclophosphamide; premature ovarian failure; bone marrow derived mesenchymal stem cells 卵巢早衰 (premature ovarian failure,pof) 是女性在 40 岁之前出现以持续性闭经雌激素缺乏促性腺激素水平升高为临床特征的一类疾病 [1] 近年来, 肿瘤的发生率明显增加, 因化疗导致卵巢功能低下和不孕不育的患者日渐增多, 成为 POF 发病的主要原因之一 [2] 环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX) 是临床常用于恶性肿瘤治疗的烷化剂, 在杀灭肿瘤细胞的同时也损伤卵巢颗粒细胞和卵子, 导致卵巢皮质纤维化和血管损伤 [3] 据统计,83% 的接受 CTX 治疗的乳腺癌患者出现完全闭经 [4] 因此, 对于育龄期的肿瘤患者, 在使用放化疗杀灭肿瘤细胞的同时, 如何维持患者的生殖和性腺功能是肿瘤治疗面临的挑战临床上治疗 POF 常用的方法为激素替代疗法给予外源性的激素以模拟人工周期, 能够改善低雌激素引起的并发症, 下调卵泡刺激素 (follicle-stimulating hormone,fsh) 和黄体生成素 (luteinizing hormone, LH) 水平, 提高排卵率, 有利于妊娠但长期的激素治疗难以达到合理的剂量, 并且增加乳腺癌子宫内膜癌等妇科肿瘤的风险 [5] 其他的保留生育能力的方法, 如卵巢组织卵子和胚胎的冻存, 患者可以待肿瘤治愈后借助辅助生殖手段生育, 但需要患者性发育成熟或有固定性伴侣, 应用有其局限性 [6] 多种组织来源的间充质干细胞 (mesenchymal stem cells, MSCs) 在组织损伤动物模型中均显示出良好的修复和重建受损组织的作用, 并且没有观察到致瘤性等不良反应 [7-9] 本研究探讨同种异体小鼠骨髓来源间充质干细胞 (bone marrow derived mesenchymal stem cells, BMSCs) 在 CTX 诱导的 POF 小鼠损伤中的修复作用及其机制, 试图为临床 POF 的治疗提供新的思路和方法 1 材料与方法 1.1 动物无特定病原体 (SPF) 级雌性 C57 小鼠,8~10 周龄, 体重 18~22 g, 由中南大学实验动物学部提供饲养环境清洁, 室温 18~22,12 h 白昼与 12 h 黑夜 12 h 轮换, 实验前适应性喂养 1 周动物实验内容及操作均获中南大学动物实验伦理委员会许可 1.2 主要试剂与仪器注射用 CTX 购自中国山西普德药业股份有限公司 ; 流式抗体 PE anti-mouse CD29,PE anti-mouse CD90,PE anti-mouse CD34,PE anti-mouse CD31 购自美国 Biolegend 公司 ;D/F12 培养基胎牛血清 (fetal bovine serum,fbs) 胰蛋白酶购自美国 Gibco 公司 ; 反转录试剂盒购自瑞士 Roche 公司倒置相差显微镜购自日本 Olympus 公司 ; 恒温培养箱购自美国 Thermo 公司 ; 流式细胞仪购自西班牙 Becton Dickinson 公司 ; 台式高速离心机购自德国 Eppendorf 公司 ;real-time PCR 扩增仪购自瑞士 Roche 公司 1.3 方法小鼠 BMSCs 的分离与培养用脱臼法处死小鼠后, 无菌条件下取股骨与胫骨, 穿刺法冲出骨髓离心后用 DMEM 培养基反复吹打制备成单细胞悬液, 接种于含有 10% FBS 的 D/ F12 培养基中每 3 天换液 1 次, 细胞生长至 80% 融合后传代, 第 3 代 (P3 代 ) 细胞用于细胞生物学分析和移植

3 骨髓来源间充质干细胞对卵巢早衰小鼠的修复作用彭静, 等流式细胞分析 P3 代细胞生长至 80% 融合后, 胰蛋白酶消化, 细胞计数调整细胞悬液密度至个 /ml, 取 μl 于 EP 管中, 每管分别加入 2 μl PE anti-mouse CD29, PE anti-mouse CD90,PE anti-mouse CD31,PE antimouse CD34,4 避光孵育 40 min, 洗涤后放入流式细胞仪检测 POF 小鼠模型建立小鼠随机分为对照组和造模组, 其中对照组 10 只, 造模组 30 只造模组用 50 mg/(kg.d)ctx 连续腹腔注射 15 d, 每天同一时间注射, 建立 POF 模型小鼠对照组不做任何处理 POF 造模完成后间隔 7 d 行细胞移植小鼠 BMSCs 移植 30 只造模组小鼠随机分为未治疗组和治疗组, 每组 15 只选择生长良好的 P3 代 BMSCs, 胰蛋白酶消化, 生理盐水重悬制备成密度为个 /ml 的单细胞悬液治疗组小鼠尾静脉注射个 BMSCs, 未治疗组注射等体积生理盐水卵巢组织 HE 染色卵巢组织经 Helly 固定液固定, 冲水后石蜡包埋, 切片厚 3~5 μm,he 染色显微镜下观察卵巢组织及卵泡形态, 计数各级卵泡数量卵泡分级标准如下 : 原始卵泡由单层鳞状的颗粒细胞包裹 ; 初级卵泡有增大的卵子, 由单层立方形的颗粒细胞包裹 ; 次级卵泡由 2~3 层立方形的颗粒细胞层包裹, 无窦状空间 ; 窦状卵泡由积云状的颗粒细胞包裹, 卵泡液丰富卵巢组织 RT-PCR 提取卵巢组织 RNA, 使用超微量分光光度计检测 RNA 浓度按照说明书要求反转录 1 μg RNA, 将产物保存于 20 备用 Real-time PCR 分析 mrna 表达水平引物序列见表 1 表 1 引物序列 Table 1 Primer sequences 基因引物序列 (5' 3') 长度 /bp Nobox 正义 :GGCACTAGTATCGCCTCACC 186 反义 :CATTGAGCTTGGGATGGGGT Nano3 正义 :CCGTGCCATCTATCAGTCCC 179 反义 :AATTCCGGGTGGTGTAGCAG Lhx8 正义 :GCCCTTGTTACCCCATCCAA 215 反义 :AGTGTCTTGCAGGCCAACTC 18S 正义 :GTAACCCGTTGAACCCCATT 202 反义 :CCATCCAATCGGTAGTAGCG 1.4 统计学处理采用 GraphPad Prism 5 统计学软件进行分析, 数据以均数 ± 标准差 (x±s) 表示, 两组间比较采用 t 检验, P<0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 细胞鉴定小鼠骨髓分离培养的细胞呈克隆状生长, 经传代培养后, 形态均一, 呈长梭形经流式细胞术检测 P3 代细胞表面标志, 结果显示细胞均高表达间充质干细胞的相关标志 CD29 和 CD90, 低表达内皮细胞标志 CD31 和造血干 / 祖细胞表面标志 CD34, 符合间充质干细胞的表型特征 ( 图 1) 2.2 POF 小鼠卵巢结构改变在 CTX 诱导小鼠 POF 后第 7 天, 取小鼠卵巢组织行 HE 染色, 结果显示 : 对照组小鼠卵巢组织结构完整, 分布着各级卵泡, 包括原始卵泡初级卵泡次级卵泡窦状卵泡和黄体颗粒细胞层排列紧密有序, 卵泡液丰富 ; 卵母细胞和透明带形态分明 ( 图 2A~2C); 模型组小鼠卵巢体积明显变小, 可见大量闭锁卵泡, 发育卵泡数量减少闭锁卵泡的卵母细胞变形透明带皱缩卵泡周围颗粒细胞凋亡降解, 卵巢皮质纤维化和血管损伤 ( 图 2D~2F) 统计结果显示 : 与正常对照组比较, 模型小鼠原始卵泡初级卵泡次级卵泡和窦状卵泡数量明显减少, 闭锁卵泡数量明显增加 ( 表 2), 符合 CTX 所致的 POF 特征 2.3 BMSCs 移植促进 POF 小鼠卵巢结构的恢复 BMSCs 移植治疗第 7 天, 取小鼠卵巢组织 HE 染色与未治疗组相比, 治疗组小鼠卵巢组织体积稍大, 可见窦状卵泡黄体和少量闭锁卵泡, 窦状卵泡周围包裹着多层的颗粒细胞, 卵泡液较丰富, 卵巢纤维化程度降低 ( 图 3) 统计各级卵泡数量结果显示 : 治疗组闭锁卵泡数量明显减少, 窦状卵泡和次级卵泡数量明显增加 (P<0.05, 表 3) 2.4 BMSCs 上调卵泡发育相关基因表达 RT-PCR 结果显示 : 治疗组小鼠卵巢组织卵泡发育相关基因 Nano3,Nobox,Lhx8 mrna 表达水平均明显高于未治疗组 (P<0.05, 图 4)

中南大学学报 ( 医学版 ), 2018, 43(1) http://www.csumed.org 10 A C01 blank 2 Gate: P2 0.0% 82.3% PE-CD90-A A06 CD34 Gate: P2 150 90.3% 9.8% B03 CD90 Gate: P2 300 17.7% PE-CD29-A A04 CD31 Gate: P2 300 90.2% 99.

7% 50 PE-CD31-A PE-CD34-A C 图 1 细胞鉴定 Figure 1 Identification of BMSCs A, B: Morphology of BMSCs was spindle shaped and exhibited a rapid growth with colonies under light microscope ( 40,,

4 中南大学学报 ( 医学版 ), 2018, 43(1) 10 A C01 blank 2 Gate: P2 0.0% 82.3% PE-CD90-A A06 CD34 Gate: P % 9.8% B03 CD90 Gate: P % PE-CD29-A A04 CD31 Gate: P % 99.6% FL2-A C01 CD29 2 Gate: P % 600 % 800 B 9.7% 50 PE-CD31-A PE-CD34-A C 图 1 细胞鉴定 Figure 1 Identification of BMSCs A, B: Morphology of BMSCs was spindle shaped and exhibited a rapid growth with colonies under light microscope ( 40,, respectively). C: Phenotype of BMSCs. BMSCs showed positive expression of CD29 and CD90 and low expression for endothelial and hematopoietic cell markers CD31 and CD34 A B C D E F 图 2 小鼠卵巢组织 HE 染色 Figure 2 HE staining for mouse ovarian A-C: Healthy control mouse ovary (HE, 40,,, respectively). The ovary contains the follicles of different stages of development, including primodial follicle, primary follicle, secondary follicle, antral follicle and corpus luteum. Granulose cells are tightly stached in antral follicle (black arrow); D-F: POF mouse ovary (HE, 40,,, respectively). POF mouse ovary has many atretic follicles (red arrows), and astretic follicle contains shrunken oocyte and collapsing zone pellucid

骨髓来源间充质干细胞对卵巢早衰小鼠的修复作用彭静, 等 11 表 2 2 组小鼠卵巢各级卵泡数比较 (n=6,x±s) Table 2 Comparison of follicle number between the 2 groups (n=6, x±s) 组别原始卵泡初级卵泡次级卵泡窦状卵泡闭锁卵泡对照组 2.71±1.79 3.14±1.77 3.85±1.77 2.42±1.

5 骨髓来源间充质干细胞对卵巢早衰小鼠的修复作用彭静, 等 11 表 2 2 组小鼠卵巢各级卵泡数比较 (n=6,x±s) Table 2 Comparison of follicle number between the 2 groups (n=6, x±s) 组别原始卵泡初级卵泡次级卵泡窦状卵泡闭锁卵泡对照组 2.71± ± ± ± ±1.13 造模组 0.50±0.76* 0±0* 0±0* 0.17±0.37* 11.50±3.30* 与对照组比较,*P<0.05 A B C D E F 图 3 BMSCs 移植治疗后 POF 小鼠卵巢结构 Figure 3 POF mouse ovarian structure after BMSCs transplantation A-C: Untreated mouse ovary (HE, 40,,, respectively). Ovary contains many atretic follicle (red arrows), lack of granulose cell and follicle at different development stages. D-F: BMSCs transplanted mouse ovary (HE, 40,,, respectively). Ovary contains antral follicleas (black arrow) and corpus luteum 表 3 BMSCs 治疗后小鼠各级卵泡数量 (n=6,x±s) Table 3 Changes of follicle number in POF mouse ovary after transplantation of BMSCs (n=6, x±s) 组别原始卵泡初级卵泡次级卵泡窦状卵泡闭锁卵泡未治疗组 0.67±1.21 0±0 0±0 0.17± ±5.54 治疗组 0.33±0.51 0±0 0.67±0.51* 1.33±1.21* 3.17±1.72* 与未治疗组比较,*P<0.05 mrna 相对表达量图 4 BMSCs 移植后 POF 小鼠卵泡发育相关基因 mrna 表达 (n=6) Nobox Lhx8 未治疗组治疗组 Figure 4 Expression of follicle development-related genes in POF mouse ovary after transplantation of BMSCs (n=6) RT-PCR demonstrated that the ovarian tissues in BMSCstransplanted mice expressed higher mrna levels of Nano3, Nobox, Lhx8 compared to the untreated mice (P<0.05) Nano3 3 讨论 CTX 是常见的烷化剂类抗肿瘤药物, 对肿瘤细胞产生细胞毒作用, 是白血病淋巴瘤乳腺癌肺癌卵巢癌常用的化疗药物 [10] ; 但 CTX 也影响卵泡的生长发育募集和成熟, 导致卵泡闭锁及间质纤维化 [11] 临床上常用激素替代疗法治疗化疗导致的卵巢功能衰竭, 但激素治疗仅有 5%~10% 的 POF 患者能够完成妊娠 BMSCs 是研究最广泛的一种成体干细胞在多种组织损伤的动物模型中,BMSCs 均显示出修复和重建受损组织的功能, 通过分泌多种细胞因子, 如血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor, VEGF), 肝细胞生长因子 (hepatocyte growth factor,

6 12 中南大学学报 ( 医学版 ), 2018, 43(1) HGF), 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (granulocytemacrophage colony stimulating factor,gm-csf), 胰岛素样生长因子 (insulin-like growth factor 1,IGF-1) 等, 或趋化到受损组织部位发挥直接或间接的损伤修复作用, 且没有观察到成瘤性等不良反应 [12] [7] Liu 等报道, 化疗药物诱导的 POF 模型小鼠通过尾静脉移植 BMSCs, 部分移植细胞可迁移至受损卵巢的卵巢门和髓质的血管周围, 通过旁分泌作用促进卵泡发 [13] 育 Wang 等报道人脐带来源的 MSCs 可分泌一系列与 DNA 损伤修复转录和蛋白质修饰相关的细胞因子, 减少受损卵巢颗粒细胞的凋亡, 提示 BMSCs 通过旁分泌途径参与颗粒细胞的修复过程, 促进卵巢功能恢复在连续注射 CTX 15 d 后, 本研究观察到卵巢萎缩, 卵巢组织中发育卵泡数量明显降低, 闭锁卵泡数量明显增加, 表明 POF 小鼠模型建立成功移植同种异体来源的 BMSCs 1 周后, 卵巢窦状卵泡和次级卵泡数量明显增加, 闭锁卵泡数量明显减少, 黄体数量增加, 提示移植 BMSCs 促进了 POF 小鼠卵巢结构的恢复颗粒细胞是卵巢微环境的重要组成部分, 正常小鼠卵巢颗粒细胞能够合成孕激素, 调节排卵和黄体的退化, 为卵泡的发育提供营养 [14] 本研究结果表明注射 CTX 后, 卵巢颗粒细胞凋亡导致卵泡闭锁, 移植 BMSCs 1 周后, 颗粒细胞数量明显增加, 表明移植 BMSCs 促进了 POF 小鼠颗粒细胞的修复女性和大部分哺乳动物的生殖能力主要受原始卵泡池的影响, 正常情况下卵巢中大多数原始卵泡处于静止状态, 避免卵泡池的耗竭原始卵泡经历卵泡激活和一系列发育过程, 最终发育为成熟卵泡 [15] 多种分子参与调控卵泡激活生长和闭锁过 [16-18] 程研究显示卵泡发育相关基因 Nano3,Nobox, Lhx8 参与小鼠卵泡发育的调控过程,Nano3 促进 RNA 结合蛋白表达, 其作用于生殖细胞发育过程 ;Nobox 表达于卵母细胞, 在早期卵泡形成中发挥重要作用 ; 而 Lhx8 主要表达于生殖细胞, 作用于哺乳动物的卵子发生过程本研究结果显示 : 治疗组的卵泡发育相关基因 Nano3,Nobox,Lhx8 表达水平均明显高于未治疗组, 提示 BMSCs 移植可能通过上调卵泡发育相关基因的表达, 促进 POF 小鼠卵泡发育总之,BMSCs 移植治疗可明显增加 POF 小鼠卵巢发育卵泡和颗粒细胞数量, 减少闭锁卵泡数量, 促进卵巢结构恢复 ; 细胞移植后卵泡发育相关基因 Nano3,Nobox 和 Lhx8 表达均明显上调, 表明 BMSCs 移植能有效促进 POF 小鼠卵巢组织结构修复和卵泡发育, 为 BMSCs 应用于 POF 的临床治疗提供了实验依据参考文献 [1] Kalantaridou SN, Davis SR, Nelson LM. Premature ovarian failure[ J]. Endocrinol Metab Clin North Am, 1998, 27(4): [2] Yang BH, Parkin DM, Cai L, et al. Cancer burden and trends in the Asian Pacific Rim region[ J]. Asian Pac J Cancer Prev, 4, 5(2): [3] Fleischer RT, Vollenhoven BJ, Weston GC. The effects of chemotherapy and radiotherapy on fertility in premenopausal women[ J]. Obstet Gynecol Surv, 2011, 66(4): [4] Koyama H, Wada T, Nishizawa Y, et al. Cyclophosphamide-induced ovarian failure and its therapeutic significance in patients with breast cancer[ J]. Cancer, 1977, 39(4): [5] Antoine C, Ameye L, Paesmans M, et al. Systematic review about breast cancer incidence in relation to hormone replacement therapy use[ J]. Climacteric, 2014, 17(2): [6] Donnez J, Dolmans MM. Fertility preservation in women[ J]. N Engl J Med, 2017, 377(17): [7] Liu J, Zhang H, Zhang Y, et al. Homing and restorative effects of bone marrow-derived mesenchymal stem cells on cisplatin injured ovaries in rats[ J]. Mol Cells, 2014, 37(12): [8] Agung M, Ochi M, Yanada S, et al. Mobilization of bone marrow-derived mesenchymal stem cells into the injured tissues after intraarticular injection and their contribution to tissue regeneration[ J]. Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc, 6, 14(12): [9] Bi B, Schmitt R, Israilova M, et al. Stromal cells protect against acute tubular injury via an endocrine effect[ J]. J Am Soc Nephrol, 7, 18(9): [10] Khan TS, Sundin A, Juhlin C, et al. Vincristine, cisplatin, teniposide, and cyclophosphamide combination in the treatment of recurrent or metastatic adrenocortical cancer[ J]. Med Oncol, 4, 21(2): [11] 孙敏. 脂肪干细胞治疗小鼠卵巢早衰的初步研究 [D]. 西安 : 第四军医大学, SUN Min. Preliminary investigation of adipose-derived stem cells to treat premature ovary failure in mice[d]. Xi'an: Fourth Military Medical University, [12] Satti HS, Waheed A, Ahmed P, et al. Autologous mesenchymal stromal cell transplantation for spinal cord injury: A Phase I pilot study[ J]. Cytotherapy, 2016, 18(4): [13] Wang S, Yu L, Sun M, et al. The therapeutic potential of umbilical cord mesenchymal stem cells in mice premature ovarian failure[ J]. Biomed Res Int, 2013, 2013: [14] Tan SJ, Lee LJ, Tzeng CR, et al. Targeted anti-apoptosis activity for ovarian protection against chemotherapy-induced ovarian

7 骨髓来源间充质干细胞对卵巢早衰小鼠的修复作用彭静, 等 13 gonadotoxicity[ J]. Reprod Biomed Online, 2014, 29(5): [15] Bukovsky A, Caudle MR. Immunoregulation of follicular renewal, selection, POF, and menopause in vivo, vs. neo-oogenesis in vitro, POF and ovarian infertility treatment, and a clinical trial[ J]. Reprod Biol Endocrinol, 2012, 10: 97. [16] Choi Y, Ballow DJ, Xin Y, et al. Lim homeobox gene, lhx8, is essential for mouse oocyte differentiation and survival[ J]. Biol Reprod, 8, 79(3): [17] Wang Z, Lin H. Nanos maintains germline stem cell self-renewal by preventing differentiation[ J]. Science, 4, 303(5666): [18] Rajkovic A, Pangas SA, Ballow D, et al. NOBOX deficiency disrupts early folliculogenesis and oocyte-specific gene expression[ J]. Science, 4, 305(5687): ( 本文编辑彭敏宁 ) 本文引用 : 彭静, 肖娜, 程腊梅. 骨髓来源间充质干细胞对卵巢早衰小鼠的修复作用 [ J]. 中南大学学报 ( 医学版 ), 2018, 43(1): DOI: /j.issn Cite this article as: PENG Jing, XIAO Na, CHENG Lamei. Therapeutic potential of BMSCs for premature ovarian failure in mice[ J]. Journal of Central South University. Medical Science, 2018, 43(1): DOI: /j.issn 欢迎订阅 2018 年中南大学学报 ( 医学版 ) 中南大学学报 ( 医学版 ) 原名湖南医科大学学报, 创刊于 1958 年, 为教育部主管中南大学主办的医药卫生类综合性学术期刊该刊已被美国医学文献分析和联机检索系统 (Medline, PubMed) 及其医学索引 (IM) 荷兰医学文摘 (EM) 美国化学文摘 (CA) WHO 西太平洋地区医学索引 (WPRIM) 中国科学引文数据库 ( 核心库 ) (CSCD) 等国内外多家重要数据库和权威文摘期刊收录 ; 是中国科技论文统计源期刊中文核心期刊及中国期刊方阵双效期刊 ; 为中国高校百佳科技期刊中国精品科技期刊 RCCSE 中国权威学术期刊 (A+) 和湖南省十佳科技期刊本刊为月刊, 国际标准开本 (A4 幅面 ), 每月月末出版内芯采用进口亚光铜版纸印刷, 图片彩色印刷定价 30 元 / 册, 全年 360 元国内外公开发行国内统一刊号 :CN /R, 国际标准刊号 :ISSN ; 国内邮发代号 :42-10, 国外邮发代号 :BM422; 欢迎新老用户向当地邮局 ( 所 ) 订阅, 漏订或需增订者也可直接与本刊编辑部联系订阅欢迎投稿欢迎订阅地址 : 湖南省长沙市湘雅路 110 号湘雅医学院 75 号信箱邮编 :478 电话 : , xyxb5@vip.163.com; xyxb5@126.com 中南大学学报 ( 医学版 ) 编辑部

864 现代药物与临床 Drugs & Clinic 第 31 卷第 6 期 2016 年 6 月 of apoptosis related factors, decrease the incidence of adverse reactions, which is of great

864 现代药物与临床 Drugs & Clinic 第 31 卷第 6 期 2016 年 6 月 of apoptosis related factors, decrease the incidence of adverse reactions, which is of great 现代药物与临床 Drugs & Clinic 第 31 卷第 6 期 2016 年 6 月 863 曲妥珠单抗联合多西紫杉醇治疗 Her-2 阳性乳腺癌的临床研究 * 周永安, 刘训碧黄石市中心医院 ( 普爱院区 ) 乳腺肿瘤外科, 湖北黄石 435000 摘要 : 目的探析注射用曲