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1 农药学学报 ２０１５ １７ ２ １７２ １７８ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｈｔｔｐ ｗｗｗ ｎｙｘｘｂ ｃｏｍ ｃｎ 研究论文 ＤＯＩ １０ ３９６９ ｊ ｉｓｓｎ １００８ ７３０３ ２０１５ ０２ ０８ 植物内生枯草芽孢杆菌 Ｅ１Ｒ ｊ 脂肽类 化合物的分离鉴定及抑菌作用 姬婧媛 ａ ｂ 杨 洁 ｂ ｃ 高小宁 ｂ ｃ 黄丽丽 ｂ ｃ 康振生 ｂ ｃ 西北农林科技大学 ａ 生命科学学院 ｂ 旱区作物逆境生物学国家重点实验室 ｃ 植物保护学院 陕西 杨凌 ７１２１００ 摘 要 植物内生枯草芽孢杆菌 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ 菌株 Ｅ１Ｒ ｊ 分离自小麦根部 以小麦全蚀病菌作 为靶标菌 采用酸沉淀 快速蛋白液相色谱 ＦＰＬＣ 和基质辅助激光解吸附飞行时间质谱 ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＴＯＦ ＭＳ 技术 对该菌发酵液中的抗真菌活性物质进行分离鉴定和抑菌活性研究 结果表 明 菌株 Ｅ１Ｒ ｊ 产生的抗菌活性物质由 Ｐ１ Ｐ２ Ｐ３ 和 Ｐ４ ４ 类组分组成 其中 Ｐ３ 起主要抑菌作用 ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＴＯＦ ＭＳ 分析结果显示 Ｐ３ 为 ｆｅｎｇｙｃｉｎｓ 经试验发现 Ｐ３ 对温度稳定 １２１ 下放置 ３０ ｍｉｎ 仍可保持抑菌活性 电子显微境观察发现 Ｐ３ 对小麦全蚀病菌菌丝生长有强烈的抑制作 用 同时还可造成菌丝细胞畸形 细胞壁溃解 细胞质外渗等 关键词 植物内生细菌 枯草芽孢杆菌 脂肽类化合物 分离鉴定 抑菌活性 中图分类号 Ｓ４３５ ６５４ 文献标志码 Ａ 文章编号 １００８ ７３０３ ２０１５ ０２ ０１７２ ０７ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｅ１Ｒ ｊ ａｎｄ ｉｔｓ ａｎｔｉ ｆｕｎｇａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｓｔｕｄｉｅｓ Ｊｉ Ｊｉｎｇｙｕａｎ ａ ｂ Ｙａｎｇ Ｊｉｅ ｂ ｃ Ｇａｏ Ｘｉａｏｎｉｎｇ ｂ ｃ Ｈｕａｎｇ Ｌｉｌｉ ｂ ｃ Ｋａｎｇ Ｚｈｅｎｓｈｅｎｇ ｂ ｃ ａ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｅｉｎｃｅｓ ｂ Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｃｒｏｐ Ｓｔｒｅｓｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｆｏｒ Ａｒｉｄ Ａｒｅａｓ ｃ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ Ａ Ｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｙａｎｇｌｉｎｇ ７１２１００ Ｓｈａａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｔｈｅ ｅｎｔｏｐｈｙｔｉｃ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｅ１Ｒ ｊ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｗｈｅａｔ ｒｏｏｔｓ Ｔｈｅ ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗａｓ ｔｏ ｉｓｏｌａｔｅ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｂ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｓｔｒａｉｎ Ｅ１Ｒ ｊ ｕｓｉｎｇ ａｃｉｄ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ ＦＰＬＣ ａｎｄ ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＴＯＦ ＭＳ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ Ｆｏｕｒ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ Ｐ１ Ｐ２ Ｐ３ ａｎｄ Ｐ４ ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｐ３ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｓｈｏｗｎ ｔｏ ｂｅａｒ ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒａ ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐ３ ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ ｏｆ ｆｅｎｇｙｃｉｎｓ Ｔｈｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ ｔｈａｔ Ｐ３ ｗａｓ ｓｔａｂｌｅ ｔｏ ｈｉｇｈ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｅｖｅｎ ｒｅｍａｉｎｅｄ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｔ １２１ ｆｏｒ ３０ ｍｉｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ Ｐ３ ｓｔｒｏｎｇｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｍｙｃｅｌｉａｌ Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ ｉｔ ｃａｎ ａｌｓｏ ｃａｕｓｅ ｄｅｆｏｒｍｉｔｉｅｓ ｏｆ ｍｙｃｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｗａｌｌ 收稿日期 ２０１４ １１ １９ 录用日期 ２０１５ ０２ ０９ 作者简介 姬婧媛 女 博士研究生 Ｅ ｍａｉｌ ｊｉｎｇｙｕａｎ ｊｉ １２６ ｃｏｍ 康振生 通信作者 Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ 男 教授 主要从事植物 病原真菌与寄主互 作 关 系 的 分 子 细 胞 学 和 分 子 生 物 学 研 究 Ｅ ｍａｉｌ ｋａｎｇｚｓ ｎｗｓｕａｆ ｅｄｕ ｃｎ 黄 丽 丽 共 同 通 信 作 者 Ｃｏ ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ 女 教授 主要从事植物病害综合治理研究 Ｅ ｍａｉｌ ｈｕａｎｇｌｉｌｉ ｎｗｓｕａｆ ｅｄｕ ｃｎ 基金项目 国家重点基础研究规划 ９７３ 项目 ２０１３ＣＢ１２７７００ 国家小麦产业技术体系 ＣＡＲＳ ３ １ １１ 十二五 国家支撑计划子课题 ２０１２ＢＡＤ９１Ｂ０４ １４ 高等学校学科创新引智计划 Ｂ０７０４９
2 No. 2 姬 婧 媛 等 : 植 物 内 生 枯 草 芽 孢 杆 菌 E1R j 脂 肽 类 化 合 物 的 分 离 鉴 定 及 抑 菌 作 用 173 the leakage of cytoplasm and so on. Keywords: endophytic bacteria; Bacillus subtilis; lipopeptide; isolation and identification; antifungal activity 由 禾 顶 囊 壳 小 麦 变 种 Gaeumannomyces graminis var. tritici( 简 称 Ggt) 引 起 的 小 麦 全 蚀 病 是 小 麦 生 产 上 的 毁 灭 性 病 害 之 一, 对 农 业 生 产 造 成 严 重 损 失 由 于 缺 乏 抗 性 品 种 和 对 环 境 友 好 的 化 学 药 剂, 因 此, 生 物 防 治 成 为 防 治 小 麦 全 蚀 病 的 主 要 措 施 之 一 [1] 植 物 内 生 细 菌 是 一 类 普 遍 分 布 于 健 康 植 物 组 织 或 细 胞 间 隙 多 样 性 丰 富 的 微 生 物 类 群 [2] 目 前, 已 经 从 不 同 种 类 的 植 物 中 分 离 得 到 包 括 54 个 属 129 种 内 生 细 菌, 其 中 芽 孢 杆 菌 最 为 常 见 [3] 植 物 内 生 芽 孢 杆 菌 由 于 其 具 有 对 人 畜 低 毒 对 环 境 低 污 染 的 特 性, 是 较 为 理 想 的 生 防 资 源, 已 成 为 生 防 菌 剂 开 发 的 热 点 枯 草 芽 孢 杆 菌 Bacillus subtilis 是 一 类 广 泛 分 布 的 好 氧 性 革 兰 氏 阳 性 杆 状 细 菌 [4], 通 过 竞 争 拮 抗 和 诱 导 植 物 抗 性 来 起 到 生 物 防 治 的 作 用 [5] 枯 草 芽 孢 杆 菌 能 够 产 生 两 大 类 抗 菌 物 质 : 一 是 核 糖 体 合 成 的 抗 菌 蛋 白 和 抗 菌 肽 ; 二 是 非 核 糖 体 合 成 的 脂 肽 类 化 合 物 [6 10], 主 要 包 括 surfactin [11 12] fengycin [13 14] 和 iturin [12,15] 3 大 类 脂 肽 类 化 合 物 一 般 是 由 1 个 β 羟 基 脂 肪 酸 与 7 ~ 10 个 氨 基 酸 肽 链 通 过 内 酯 键 形 成 环 状 结 构 [6] surfactin 除 具 有 表 面 活 性 外, 还 具 有 抑 制 细 菌 病 毒 和 支 原 体 的 作 用, fengycin 对 丝 状 真 菌 有 强 烈 的 抑 制 作 用,iturin 主 要 抑 制 真 菌 生 长 [16] 生 防 细 菌 E1R j 是 从 小 麦 根 部 分 离 到 的 一 株 内 生 枯 草 芽 孢 杆 菌 [17], 具 有 良 好 的 植 物 病 害 生 防 效 果, 其 菌 悬 液 可 以 使 小 麦 全 蚀 病 在 温 室 和 田 间 的 发 病 率 分 别 降 低 70 7% 和 55 3% [18], 其 去 菌 发 酵 滤 液 除 了 对 小 麦 条 锈 菌 夏 孢 子 萌 发 的 抑 制 率 高 达 84 1% [19] 外, 还 对 萝 卜 白 菜 幼 苗 具 有 明 显 的 促 进 生 长 作 用 [20] 此 外, 有 研 究 表 明,E1R j 不 仅 能 够 产 生 抗 菌 蛋 白, 还 有 部 分 小 分 子 物 质 也 具 有 很 高 的 抑 菌 活 性, 推 测 其 可 能 为 脂 肽 类 化 合 物 [21] 为 了 进 一 步 明 确 该 菌 株 产 生 的 抗 菌 物 质 的 种 类 及 作 用 机 理, 笔 者 对 其 抑 菌 活 性 物 质 进 行 了 分 离 纯 化 及 结 构 分 析, 并 利 用 扫 描 电 镜 技 术 研 究 了 其 对 小 麦 全 蚀 病 菌 菌 丝 的 影 响 1 材 料 和 方 法 1 1 供 试 菌 株 及 培 养 枯 草 芽 孢 杆 菌 菌 株 E1R j, 由 西 北 农 林 科 技 大 学 旱 区 作 物 逆 境 生 物 学 国 家 重 点 实 验 室 分 离 所 得, 具 体 培 养 方 法 为 : 接 种 一 环 菌 株 E1R j 于 100 ml 的 LB 液 体 培 养 基 中, r / min 下 培 养 12 h, 种 子 液 按 体 积 分 数 为 3 0% 的 接 种 量 接 入 50 ml Landy 培 养 基 ( 葡 萄 糖 20 0 g,l 谷 氨 酸 钠 5 0 g, MgSO g, KCl 0 5 g, KH 2 PO g, CuSO g,feso g, MnSO g,h 2 O ml) 28,180 r / min 培 养 72 h 小 麦 全 蚀 病 菌 Gaeumannomyces graminis var. tritici 苹 果 树 腐 烂 病 菌 Valsa mali 番 茄 灰 霉 病 菌 Botrytis cinerea 番 茄 早 疫 病 菌 Alternaria solani 苹 果 炭 疽 病 菌 Glomerella cingulata, 均 由 西 北 农 林 科 技 大 学 旱 区 作 物 逆 境 生 物 学 国 家 重 点 实 验 室 保 存, 病 菌 按 常 规 方 法 在 PDA 平 板 培 养 基 上 繁 殖 保 存 备 用 1 2 脂 肽 类 化 合 物 的 提 取 和 分 离 采 用 酸 沉 淀 法 进 行 提 取 将 上 述 发 酵 液 于 r / min 下 离 心 30 min 后, 去 除 菌 体, 收 集 发 酵 上 清 液, 用 6 mol / L 的 盐 酸 调 节 ph 至 2 0, 在 4 下 静 置 24 h 后 于 r / min 离 心 20 min, 收 集 沉 淀, 冷 冻 干 燥 后 用 甲 醇 多 次 抽 提, 合 并 抽 提 液 作 为 粗 提 液 备 用 采 用 快 速 蛋 白 液 相 色 谱 ( FPLC) 梯 度 洗 脱 进 行 分 离 [16] 利 用 AKTA Purifier 10 液 相 分 析 系 统, 选 择 RESOURCE TM RPC 反 相 色 谱 柱 ( 30 mm 6 4 mm,15 μm ) 流 动 相 A 为 含 体 积 分 数 为 0 1% 三 氟 乙 酸 ( TFA) 的 水 溶 液 ; 流 动 相 B 为 含 0 09% TFA 的 乙 腈 溶 液 流 速 为 1 ml / min; 检 测 波 长 为 215 nm; 洗 脱 过 程 为 40 min 内 流 动 相 B 的 体 积 分 数 由 10% 增 加 到 60% 分 别 收 集 各 保 留 时 间 所 对 应 的 组 分, 置 于 超 净 台 中 室 温 下 吹 干, 分 别 用 1 ml 甲 醇 溶 解, 备 用 1 3 抑 菌 活 性 测 定 [22] 采 用 牛 津 杯 法 测 定 将 靶 标 真 菌 小 麦 全 蚀 菌 从 试 管 中 转 接 到 新 鲜 的 PDA 平 板 中 央, 于 25 恒 温 培 养 箱 中 培 养 3 d 后, 沿 菌 丝 边 缘 打 取 直 径 为 5 mm 的 菌 饼, 转 接 到 新 鲜 的 PDA 平 板 上 ( 距 培 养 皿 中 心 25 mm 的 两 侧 ) 于 25 培 养 1 d 后, 在 接 有 靶 标 菌 的 平 板 中 央 放 置 灭 菌 牛 津 杯, 分 别 加 入 200 μl 1 2 节 收 集 到 的 不 同 组 分 和 甲 醇 粗 提 液,
![tritici( 简 称 Ggt) 引 起 的 小 麦 全 蚀 病 是 小 麦 生 产 上 的 毁 灭 性 病 害 之 一, 对 农 业 生 产 造 成 严 重 损 失 由 于 缺 乏 抗 性 品 种 和 对 环 境 友 好 的 化 学 药 剂, 因 此, 生 物 防 治 成 为 防 治 小 麦 全 蚀 病 的 主 要 措 施 之 一 [1] 植 物 内 生 细 菌 是 一 类 普 遍 分 布](/docs-images/43/23122699/images/page_2.jpg "于 健 康 植 物 组 织 或 细 胞 间 隙 多 样 性 丰 富 的 微 生 物 类 群 [2] 目 前, 已 经 从 不 同 种 类 的 植 物 中 分 离 得 到 包 括 54 个 属 129 种 内 生 细 菌, 其 中 芽 孢 杆 菌 最 为 常 见 [3] 植 物 内 生 芽 孢 杆 菌 由 于 其 具 有 对 人 畜 低 毒 对 环 境 低 污 染 的 特 性, 是 较 为 理 想")
3 １７４ Ｖｏｌ １７ 农 药 学 学 报 ２５ 下培养 ３ ｄ 后测量抑菌圈的直径 计算平均抑 菌带宽 以甲醇作对照 每个处理重复 ３ 次 １ ４ 抗菌活性组分的初步鉴定 采用 基 质 辅 助 激 光 解 吸 附 飞 行 时 间 质 谱 ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＴＯＦ ＭＳ 对收集到的活性组分样品 进行分析 初步鉴定其成分 由上海中科公司代为 测定 １ ５ 热稳定性测定方法 取纯化后的各抑菌活性组分 ５０ μｌ 分别在 ２５ ４０ ６０ ８０ 和 １００ 水浴中处理 ３０ ｍｉｎ 和 １２１ 下高压处理 ３０ ｍｉｎ 按照 １ ３ 节的方法进行抑菌活 性测定 １ ６ 抗菌活性组分的抑菌作用研究 １ ６ １ 抗菌活性组分对小麦全蚀病菌菌丝生长的 影响 采用平板对峙培养法 １８ 测定 取小麦全蚀 病菌菌饼 直径 ５ ｍｍ 置于 ＰＤＡ 平板中央 将纯化 后的抗菌活性组分接种于距离平板中央 ２５ ｍｍ 处 每处理重复 ３ 皿 以不接种活性组分的处理为对 照 ２５ 培养 ３ ｄ 后 分别于正常和被抑制菌丝的 边缘取样 １０ ｍｍ １０ ｍｍ 参照康振生 ２３ 的方法 进行扫描样品加工 在扫描电镜下观察菌丝特征 １ ６ ２ 抗菌活性组分对其他植物病原真菌的抑制 作用 按照 １ ３ 节牛津杯法分别以番茄早疫病菌 苹果炭疽病菌 番茄灰霉病菌和苹果树腐烂病菌作 为靶标菌 测定抗菌活性组分的抑菌作用 ２ 结果与分析 ２ １ 脂肽类化合物的分离 ＦＰＬＣ 层析分析结果 图 １ 表明 在 Ｅ１Ｒ ｊ 菌株 图 １ 枯草芽孢杆菌菌株 Ｅ１Ｒ ｊ 脂肽类化合物的 ＦＰＬＣ 洗脱峰 Ｆｉｇ １ ＦＰＬＣ ｅｌｕｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｓｔｒａｉｎ Ｅ１Ｒ ｊ 发现不同组分对小麦全蚀病菌抑菌作用不同 其中 Ｐ３ 抑制效果最好 平均抑菌带宽为 ３２ ５１ ｍｍ Ｐ１ 次之 平均抑菌带宽为 ２９ ５３ ｍｍ Ｐ２ 和 Ｐ４ 仅有微 弱的抑制作用 图 ２ 说明其主要抑菌活性成分为 Ｐ３ ２ ３ 组分 Ｐ３ 的相对分子质量及鉴定 采用 ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＴＯＦ ＭＳ 对 抑 菌 活 性 较 好 的 Ｐ１ 和 Ｐ３ 组分进行分析 Ｐ１ 由于成分复杂而未能 成功鉴定 而 Ｐ３ 的一级质谱显示为组分 １ Ｍ Ｈ １ ４７７ ８４６ １ ４９１ ８９８ １ ５０５ ９６０ 和 组 分 ２ Ｍ Ｈ １ ５１３ ９６４ １ ５２７ ９９２ 的两组同系物 图 ３Ａ 其中组分 １ 的 相 对 分 子 质 量 依 次 相 差 １４ 即恰好一个 ＣＨ２ 推测其属脂肪酸链上差一个亚 甲基或是肽链 ６ 位上 Ａｌａ 被 Ｖｌａ 代替所导致 该物 质与已报道的脂肽类化合物 ｆｅｎｇｙｃｉｎｓ 的相对分子 产生的甲醇粗提物中至少有 ４ 类组分 即 Ｐ１ Ｐ２ Ｐ３ 质量一致 ２４ ｆｅｎｇｙｃｉｎｓ 是枯草芽孢杆菌脂肽中重 分均不是单一物质 这也符合 Ｂ ｓｕｂｔｉｌｉｓ 产生的脂 一条 β 羟基脂肪酸链和 １０ 个氨基酸残基的小肽组 和 Ｐ４ 并且每类组分都不是单一的峰 表明这 ４ 类组 肽类物质通常有很多结构相似的同系物或异构体 因 此很难分离得到单一的某类脂肽物质的特性 １６ ２ ２ 主要抑菌活性物质的确定 通过对所分离的 ４ 类组分进行抑菌活性追踪 要的一类物质 具有强烈抑制真菌的作用 一般由 成 分为 ｆｅｎｇｙｃｉｎｓ Ａ 和 ｆｅｎｇｙｃｉｎｓ Ｂ 两种类型 当肽 链第 ６ 位上的氨基酸是 Ａｌａ 时 属于 ｆｅｎｇｙｃｉｎｓ Ａ 而 当肽链第 ６ 位上的氨基酸是 Ｖａｌ 时则属于 ｆｅｎｇｙｃｉｎｓ Ｂ ２５ 目前 关于 ｆｅｎｇｙｃｉｎｓ 化合物的鉴定主要是依 Ａ 对照 ｃｏｎｔｒｏｌ Ｂ Ｐ１ Ｃ Ｐ２ Ｄ Ｐ３ Ｅ Ｐ４ Ｆ 脂肽粗提物 ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅ ｅｘｒａｃｔ 图 ２ 枯草芽孢杆菌菌株 Ｅ１Ｒ ｊ 所产脂肽对小麦全蚀病菌的抑制作用 Ｆｉｇ ２ Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｂ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｓｔｒａｉｎ Ｅ１Ｒ ｊ ｔｏ Ｇａｅｕｍａｎｎｏｍｙｃｅｓ ｇｒａｍｉｎｉｓ ｖａｒ ｔｒｉｔｉｃｖｉ
4 Ｎｏ ２ 姬婧媛等 植物内生枯草芽孢杆菌 Ｅ１Ｒ ｊ 脂肽类化合物的分离鉴定及抑菌作用 １７５ Ａ Ｐ３ 的一级质谱图 Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ Ｆ 分别是 １ ４７７ ８４６ １ ４９１ ８９８ １ ５０５ ９６０ １ ５１３ ９６４ 和 １ ５２７ ９９２ 的二级质谱图 Ａ ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆ Ｐ３ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ Ｆ ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＴＯＦ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆ ｐｒｏｃｕｒｅｓ ｉｏｎｓ ｏｆ １ ４７７ ８４６ １ ４９１ ８９８ １ ５０５ ９６０ １ ５１３ ９６４ ａｎｄ １ ５２７ ９９２ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ 图 ３ 枯草芽孢杆菌菌株 Ｅ１Ｒ ｊ 脂肽类化合物 Ｐ３ 的 ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＴＯＦ ＭＳ 分析 Ｆｉｇ ３ ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＴＯＦ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆ ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｐ３ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｂ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｓｔｒａｉｎ Ｅ１Ｒ ｊ 据其 质 谱 分 子 峰 及 特 征 离 子 峰 ２５ 进 一 步 用 ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＴＯＦ ＭＳ 分析本研究得到的上述具有 ５ 种 相对分子质量的肽片段 分别获得了相应肽片段 Ｈ 分别为 １ ５００ ０４１ １ ５１３ ８３９ 和 １ ５２７ ５６６ 的 化合物相似 推断其应该为一类新的化合物 其结构 尚待确认 的 ＭＳ ＭＳ 图 Ｍ Ｈ 为 １ ４７７ ８４６ 组分 其特征 ２ ４ 活性组分 Ｐ３ 的热稳定性 征离子 峰 一 致 Ｍ Ｈ 分 别 为 １ ４９１ ８９８ 和 １ ５０５ ９６０ 的组分 其特征离子峰分别为 ９９４ 和 １ １０８ 处理 ３０ ｍｉｎ 以及 １２１ 高压灭菌处理 ３０ ｍｉｎ 后 离子峰为 ９６６ 和 １ ０８０ 图 ３Ｂ 这与 ｆｅｎｇｙｃｉｎｓ Ａ 的特 ２５ 活性组分 Ｐ３ 在 ２５ ４０ ６０ ８０ 和 １００ 水浴中 其抑菌活性均未明显下降 图 ４ 说明其具有热稳 图 ３Ｃ 和 ３Ｄ 这与 ｆｅｎｇｙｃｉｎｓ Ｂ 的特征峰一致 组 分 ２ Ｍ Ｈ 分 别 为 １ ５１３ ９６４ 和 ２ ５ 组分 Ｐ３ 对小麦全蚀病菌菌丝的影响 子峰为 １ １３０ 图 ３Ｅ 和 ３Ｆ 这类化合物与张晓云 全蚀病菌菌丝纤细直长 粗细均匀一致 表面光滑 ２５ １ ５２７ ９９２ 的相对分子质量同样相差 １４ 其特征离 等 ２６ 在 萎 缩 芽 孢 杆 菌 ＣＡＢ １ 中 鉴 定 到 的 Ｍ 定性 电子显微镜观察结果 图 ５ 显示 正常的小麦 而经 Ｐ３ 处理后 菌丝生长明显受到抑制 表现为菌
5 １７６ Ｖｏｌ １７ 农 药 学 学 报 图 ４ 脂肽类化合物 Ｐ３ 经不同温度处理后 对小麦全蚀菌的抑制效果 Ｆｉｇ ４ Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｐ３ ｏｎ ｔｈｅ ｗｈｅａｔ ｔａｋｅ ａｌｌ ｄｉｓｅａｓｅ ａｆｔｅｒ ｂｅｉｎｇ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ 丝分枝增多 且不规则弯曲 菌丝细胞膨大 细胞壁 溃解 使得细胞质外溢 进而丧失活力 ２ ６ 组分 Ｐ３ 对其他病原真菌的抑制作用 测定结果 图 ６ 表明 Ｐ３ 组分对供试 ４ 种病原 真菌的抑制效果不同 其中对番茄早疫病菌的作用 最强 平均抑菌带宽达 ２５ ２０ ｍｍ 对番茄灰霉病菌 和苹果 树 腐 烂 病 菌 次 之 平 均 抑 菌 带 宽 分 别 为 １９ ０８ ｍｍ 和 １７ ２８ ｍｍ 对苹果炭疽病菌则没有明 显的抑制作用 ３ 结论与讨论 Ａ 正常菌丝 Ｂ 菌丝断裂 Ｃ 菌丝膨大 表面粗糙 Ｄ 细胞质外渗 Ａ Ｈｙｐｈａ ｏｆ Ｇｇｔ ｕｎｔｒｅａｔｅｄ Ｂ Ｍｙｃｅｌｉｕｍ ｂｒｅａｋ Ｃ Ｓｗｏｌｌｅｎ ｈｙｐｈａｌ ａｎｄ ｒｏｕｇｈ ｍｙｃｅｌｉｕｍ ｓｕｒｆａｃｅ Ｄ Ｃｙｔｏｐｌａｓｍ ｅｘｏｓｍｏｓｉｓ ｏｆ ｈｙｐｈａｅ 图 ５ Ｐ３ 对小麦全蚀病菌菌丝形态的影响 Ｆｉｇ ５ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｐ３ ｏｎ ｔｈｅ ｈｙｐｈａ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｇ ｇｒａｍｉｎｉｓ 原菌的抑菌活性 质谱分析发现 活性组分 Ｐ３ 可 分 为 两 组 组 分 １ 分 别 是 含 有 １７ 个 碳 原 子 的 ｆｅｎｇｙｃｉｎｓ Ａ 含有 １６ 个碳原子的 ｆｅｎｇｙｃｉｎｓ Ｂ 和含有 通过盐酸沉淀 甲醇萃取及反向高效液相色谱 等技术 从枯草芽孢杆菌 Ｂ ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｅ１Ｒ ｊ 菌株的发 １７ 个碳原子的 ｆｅｎｇｙｃｉｎｓ Ｂ 可见 ｆｅｎｇｙｃｉｎｓ Ｂ 是这 酵上清液中分离到了具有抗菌活性的脂肽类化合物 Ｐ３ 并研究了其对小麦全蚀病菌及其他 ４ 种供试病 质谱特征峰为 １ １３０ 目前尚未见相似报道 具体的 组 ｆｅｎｇｙｃｉｎｓ 同系物中的主要类型 组分 ２ 的二级 Ａ 未处理的番茄早疫病菌 Ｂ Ｐ３ 处理的番茄早疫病菌 Ｃ 未处理的苹果炭疽病菌 Ｄ Ｐ３ 处理的苹果炭疽病菌 Ｅ 未处理的番茄灰霉病菌 Ｆ Ｐ３ 处理的番茄灰霉病菌 Ｇ 未处理的苹果树腐烂病菌 Ｈ Ｐ３ 处理的苹果树腐烂病菌 Ａ Ｕｎｔｒｅａｔｅｄ Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉ Ｂ Ａ ｓｏｌａｎｉ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｐ３ Ｃ Ｕｎｔｒｅａｔｅｄ Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａ ｃｉｎｇｕｌａｔａ Ｄ Ｇ ｃｉｎｇｕｌａｔａ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｐ３ Ｅ Ｕｎｔｒｅａｔｅｄ Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ Ｆ Ｂ ｃｉｎｅｒｅａ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｐ３ Ｇ Ｕｎｔｒｅａｔｅｄ Ｖａｌｓａ ｍａｌｉ Ｈ Ｖ ｍａｌｉ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｐ３ 图 ６ 枯草芽孢杆菌菌株 Ｅ１Ｒ ｊ 产生的脂肽类化合物 Ｐ３ 对 ４ 种靶标菌的抑制作用 Ｆｉｇ ６ Ｔｈｅ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅ Ｐ３ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｂ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｓｔｒａｉｎ Ｅ１Ｒ ｊ ｔｏ ｆｏｕｒ ｔａｒｇｅｔ ｍｉｃｒｏｂｅｓ
6 No. 2 姬 婧 媛 等 : 植 物 内 生 枯 草 芽 孢 杆 菌 E1R j 脂 肽 类 化 合 物 的 分 离 鉴 定 及 抑 菌 作 用 177 分 子 结 构 有 待 进 一 步 确 定, 有 望 发 现 新 的 脂 肽 化 合 物 同 系 物 的 结 构 有 研 究 表 明,fengycins 对 丝 状 真 菌 有 明 显 的 抑 菌 效 果, 其 抑 菌 机 制 主 要 有 两 种 [27] : 在 低 浓 度 时, 通 过 在 生 物 膜 中 形 成 孔 道, 从 而 导 致 膜 的 通 透 性 改 变 而 发 挥 作 用 ; 在 高 浓 度 时, 通 过 去 污 剂 的 作 用 方 式 破 坏 生 物 膜 的 结 构, 丧 失 半 透 性 的 作 用, 使 细 胞 内 的 重 要 代 谢 物 质 外 渗 本 研 究 结 果 表 明, 枯 草 芽 孢 杆 菌 E1R j 菌 株 发 酵 液 中 产 生 的 抗 菌 活 性 物 质 对 小 麦 全 蚀 病 菌 的 菌 丝 生 长 发 育 的 影 响, 主 要 表 现 为 菌 丝 畸 形 和 细 胞 质 外 渗 等, 这 与 已 有 的 对 芽 孢 杆 菌 所 产 生 的 脂 肽 类 物 质 的 对 植 物 病 原 真 菌 菌 丝 生 长 抑 制 的 报 道 一 致 [13] ; 此 外,P3 对 高 温 的 耐 受 性 很 好, 这 也 与 之 前 报 道 的 有 关 fengycins 家 族 的 理 化 特 性 相 一 致 [28] 目 前, 有 关 枯 草 芽 孢 杆 菌 产 生 脂 肽 类 化 合 物 的 报 道 很 多, 一 般 具 有 抗 真 菌 和 抗 细 菌 抗 病 毒 抗 支 原 体 抗 昆 虫 活 性 以 及 表 面 活 性 剂 的 特 性, 其 抗 菌 谱 广, 稳 定 性 高, 对 热 不 敏 感 [28] [29] 张 翼 等 研 究 表 明, 内 生 枯 草 芽 孢 杆 菌 YS45 对 油 菜 菌 核 病 菌 的 主 [30] 要 抑 菌 活 性 物 质 为 fengycins 同 系 物 ; 曹 小 红 等 发 现, 纳 豆 芽 孢 杆 菌 Bacillus natto TK 1 发 酵 产 生 的 脂 肽 类 化 合 物 具 有 较 为 广 泛 的 抑 菌 谱, 对 灰 霉 以 及 [31] 镰 胞 霉 的 抑 菌 效 果 尤 为 明 显 ; 黄 现 青 等 对 枯 草 芽 孢 杆 菌 fmbj 菌 株 发 酵 产 生 的 脂 肽 类 化 合 物 进 行 了 抗 菌 谱 分 析, 发 现 其 对 革 兰 氏 阳 性 菌 革 兰 氏 阴 性 菌 及 真 菌 均 有 不 同 程 度 的 抑 制 效 果 然 而, 有 关 利 用 植 物 内 生 细 菌 发 酵 产 生 的 脂 肽 类 物 质 防 治 小 麦 全 蚀 病 菌 的 研 究 较 少 本 研 究 发 现, 枯 草 芽 孢 杆 菌 B. subtilis E1R j 菌 株 产 生 的 脂 肽 类 物 质 对 小 麦 全 蚀 病 菌 苹 果 树 腐 烂 病 菌 番 茄 灰 霉 病 菌 和 番 茄 早 疫 病 菌 均 有 一 定 的 抑 制 作 用, 尤 其 对 小 麦 全 蚀 病 菌 和 番 茄 早 疫 病 菌 有 很 高 的 抑 制 作 用, 显 示 了 其 在 植 物 疾 病 防 治 方 面 的 应 用 潜 力 参 考 文 献 (Reference): [1] Cook R J. Take all of wheat[ J]. Physiolog Molec Plant Pathol, 2003, 62(2): [2] Ryan R P, Germaine K, Franks A, et al. Bacterial endophytes: recent developments andapplications [ J]. FEMS Microbiol Lett, 2008, 278(1): 1-9. [3] 石 晶 盈, 陈 维 信, 刘 爱 媛. 植 物 内 生 菌 及 其 防 治 植 物 病 害 的 研 究 进 展 [J]. 生 态 学 报, 2006, 26(7): Shi Jingying, Chen Weixin, Liu Aiyuan. Advances in the study of endophytes and their effects on control of plant diseases[ J]. Acta Ecologica Sinica, 2006, 26 ( 7 ): ( in Chinese) [4] 刘 雪. 枯 草 芽 孢 杆 菌 B 332 菌 株 发 酵 条 件 及 其 抗 菌 物 质 分 离 纯 化 的 研 究 [D]. 北 京 : 中 国 农 业 科 学 院, Liu Xue. Research onthe ferrentation mediaof Bacillus Subtilis and the purification of its antifungal substances [ D]. Beijing: Chinese Academy of Agricultural Sciences, ( in Chinese) [5] 陈 中 义, 张 杰, 黄 大 昉. 植 物 病 害 生 防 芽 孢 杆 菌 抗 菌 机 制 与 遗 传 改 良 研 究 [J]. 植 物 病 理 学 报, 2003, 33(2): Chen Zhongyi, Zhang Jie, Huang Dafang. Research progress on antimicrobial mechanism and genetic engineering of Bacillus for plant diseases biocontrol [ J]. Acta Phytopathol Sinicia, 2003, 33(2): (in Chinese) [6] Ongena M, Jacques P. Bacillus lipopeptides: versatile weapons for plant disease biocontrol [ J]. Trends Microbiol, 2008, 16 (3): [7] Zhao Xin, Zhou Zhijiang, Han Ye, et al. Isolation and identification of antifungal peptides from Bacillus BH072, a novel bacterium isolated from honey [ J]. Microbiol Res, 2013, 168(9): [8] 黄 曦, 许 兰 兰, 黄 荣 韶, 等. 枯 草 芽 孢 杆 菌 在 抑 制 植 物 病 原 菌 中 的 研 究 进 展 [J]. 生 物 技 术 通 报, 2010(1): Huang Xi, Xu Lanlan, Huang Rongshao, et al. Research advance in controlling plant diseases by Bacillus subtilis [ J]. Biotechnol Bull, 2010(1): (in Chinese) [9] Falardeau J, Wise C, Novitsky L, et al. Ecological and mechanistic insights into the direct and indirect antimicrobial properties of Bacillus subtilis lipopeptides on plant pathogens [J]. J Chem Ecol, 2013, 39(7): [10] Jacques P. Surfactin and Other Lipopeptides from Bacillus spp. [ M] Soberón Chávez G. Biosurfactants. Berlin, Heidelberg: Springer, 2011: [11] 别 小 妹, 陆 兆 新, 吕 凤 霞, 等. Bacillus subtilis fmbr 抗 菌 物 质 的 分 离 和 鉴 定 [ J]. 中 国 农 业 科 学, 2006, 39 (11): Bie Xiaomei, Lu Zhaoxin, Lü Fengxia, et al. Isolation and identification of the antimicrobial substance produced by Bacillus subtilis fmbr[ J]. Scientia Agricultura Sinica, 2006, 39(11): ( in Chinese) [12] Ahimou F, Jacques P, Deleu M. Surfactin and iturin A effects on Bacillus subtilis surface hydrophobicity [ J]. Enzyme Microb Technol, 2000, 27(10): [13] Vanittanakom N, Loeffler W, Koch U, et al. Fengycin a novel antifungal lipopeptide antibiotic produced by Bacillus subtilis F 29 3 [J]. J Antibiot, 1986, 39(7): [14] Liu J, Zhou T, He D, et al. Functions of lipopeptides bacillomycin D and fengycin in antagonism of Bacillus amyloliquefaciens C06 towards Monilinia fructicola [ J]. J Molec Microbiol Biotechnol, 2011, 20(1): [15] Yu G Y, Sinclair J B, Hartman G L, et al. Production of iturin A by Bacillus amyloliquefaciens suppressing Rhizoctonia solani [J]. Soil Biol Biochem, 2002, 34(7):
![j 菌 株 发 酵 液 中 产 生 的 抗 菌 活 性 物 质 对 小 麦 全 蚀 病 菌 的 菌 丝 生 长 发 育 的 影 响, 主 要 表 现 为 菌 丝 畸 形 和 细 胞 质 外 渗 等, 这 与 已 有 的 对 芽 孢 杆 菌 所 产 生 的 脂 肽 类 物 质 的 对 植 物 病 原 真 菌 菌 丝 生 长 抑 制 的 报 道 一 致 [13] ; 此 外,P3 对 高 温 的 耐](/docs-images/43/23122699/images/page_6.jpg "受 性 很 好, 这 也 与 之 前 报 道 的 有 关 fengycins 家 族 的 理 化 特 性 相 一 致 [28] 目 前, 有 关 枯 草 芽 孢 杆 菌 产 生 脂 肽 类 化 合 物 的 报 道 很 多, 一 般 具 有 抗 真 菌 和 抗 细 菌 抗 病 毒 抗 支 原 体 抗 昆 虫 活 性 以 及 表 面 活 性 剂 的 特 性, 其 抗 菌 谱 广, 稳 定 性 高,")
7 178 农 药 学 学 报 Vol. 17 [16] 李 宝 庆, 鹿 秀 云, 郭 庆 港, 等. 枯 草 芽 孢 杆 菌 BAB 1 产 脂 肽 类 及 挥 发 性 物 质 的 分 离 和 鉴 定 [J]. 中 国 农 业 科 学, 2010, 43 (17): Li Baoqing, Lu Xiuyun, Guo Qinggang, et al. Isolation and identification of lipopeptides and volatile compounds produced by Bacillus subtilis strain BAB 1 [ J]. Scientia Agricultura Sinica, 2010, 43(17): (in Chinese) [17] 宫 宇 飞, 乔 红 萍, 魏 国 荣, 等. 内 生 枯 草 芽 孢 杆 菌 E1R J 发 酵 条 件 的 优 化 [J]. 西 北 农 业 学 报, 2008, 17(1): Gong Yufei, Qiao Hongping, Wei Guorong, et al. Optimizing of fermentation conditions of endophytic bacteria E1R J [ J]. Acta Agricultura Boreali Occident Sinica, 2008, 17 ( 1 ): (in Chinese) [18] Liu Bing, Qiao Hongping, Huang Lili, et al. Biological control of take all in wheat by endophytic Bacillus subtilis E1R j and potential mode of action [J]. Biol Contr, 2009, 49(3): [19] Li Hui, Zhao Jie, Feng Hao, et al. Biological control of wheat stripe rust by an endophytic Bacillus subtilis strain E1R j in greenhouse and field trials [ J]. Crop Prot, 2013, 43: [20] 王 心 选, 高 小 宁, 郑 刚, 等. 内 生 枯 草 芽 孢 杆 菌 E1R J 对 萝 卜 白 菜 促 生 作 用 [J]. 西 北 农 业 学 报, 2009, 18(6): Wang Xinxuan, Gao Xiaoning, Zheng Gang, et al. The growth promoting effect of endophytic bacteria E1R J on radish and cabbage [ J]. Acta Agricultura Boreali Occident Sinica, 2009, 18(6): (in Chinese) [21] 黄 保 全, 黄 丽 丽, 康 振 生, 等. 小 麦 内 生 枯 草 芽 孢 杆 菌 E1R j 胞 外 抗 菌 蛋 白 的 分 离 纯 化 和 性 质 [ J]. 西 北 农 业 学 报, 2009, 18(6): Huang Baoquan, Huang Lili, Kang Zhensheng, et al. Purification and characterization of an extracellular antifungal proteinfrom wheat endophytic Bacillus subilis strain E1R j [ J]. Acta Agricultura Boreali Occident Sinica, 2009, 18(6): (in Chinese) [22] 高 小 宁, 陈 金 艳, 黄 丽 丽, 等. 油 菜 菌 核 病 内 生 拮 抗 细 菌 的 筛 选 及 防 病 作 用 研 究 [ J]. 农 药 学 学 报, 2010, 12 (2): Gao Xiaoning, Chen Jinyan, Huang Lili, et al. Screening of antagonistic endophyhic bacteria and their roles in control of Sclerotinia sclerotiorum in canola [ J]. Chin J Pestic Sci, 2010, 12(2): (in Chinese) [23] 康 振 生. 植 物 病 原 真 菌 的 超 微 结 构 [M]. 北 京 : 中 国 科 学 技 术 出 版 社, Kang Zhensheng. Ultra Structure of Plant Pathogenic Fungi [ M]. Beijing: China Science and Technology Press, ( in Chinese) [24] Vater J, Kablitz B, Wilde C, et al. Matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry of lipopeptide biosurfactants in whole cells and culture filtrates of Bacillus subtilis C 1 isolated from petroleum sludge [ J]. Appl Environ Microbiol, 2002, 68(12): [25] Wang J, Liu J, Wang X, et al. Application of electrospray ionization mass spectrometry in rapid typing of fengycin homologues produced by Bacillus subtilis [ J ]. Lett Appl Microbiol, 2004, 39(1): [26] Zhang Xiaoyun, Li Baoqing, Wang Ye, et al. Lipopeptides, a novel protein, and volatile compounds contribute to the antifungal activity of the biocontrol agent Bacillus atrophaeus CAB 1 [ J ]. Appl Microbiol Biotechnol, 2013, 97 ( 21 ): [27] Deleu M, Paquot M, Nylander T. Fengycin interaction with lipid monolayers at the air aqueous interface implications for the effect of fengycin on biological membranes [ J]. J Coll Interf Sci, 2005, 283(2): [28] Sun Lijun, Lu Zhaoxin, Bie Xiaomei, et al. Isolation and characterization of a co producer of fengycins and surfactins, endophytic Bacillus amyloliquefaciens ES 2, from Scutellaria baicalensis Georgi [ J]. World J Microbiol Biotechnol, 2006, 22 (12): [29] 张 翼, 白 晨, 冉 国 华, 等. 柑 橘 内 生 细 菌 YS45 的 鉴 定 抗 菌 物 质 分 析 及 其 对 油 菜 菌 核 病 的 防 治 作 用 [ J]. 植 物 病 理 学 报, 2009, 39(6): Zhang Yi, Bai Chen, Ran Guohua, et al. Characterization of endophytic bacterial strain YS 45 from the citrus xylem and its biocontrol activity against Sclerotinia stem rot of rapeseed [ J]. Acta Phytopathologica Sinica, 2009, 39 (6 ): ( in Chinese) [30] 曹 小 红, 蔡 萍, 李 凡, 等. 利 用 响 应 面 法 优 化 Bacillus natto TK 1 产 脂 肽 发 酵 培 养 基 [ J]. 中 国 生 物 工 程 杂 志, 2007, 27 (4): Cao Xiaohong, Cai Ping, Li Fan, et al. Medium optimization for lipopeptide produced by Bacillus natto TK 1 using response surface methodology [ J]. China Biotechnol, 2007, 27 ( 4 ): (in Chinese) [31] 黄 现 青, 别 小 妹, 吕 凤 霞, 等. 枯 草 芽 孢 杆 菌 fmbj 产 脂 肽 抑 制 点 青 霉 效 果 及 其 桃 防 腐 试 验 [J]. 农 业 工 程 学 报, 2008, 24 (1): Huang Xianqing, Bie Xiaomei, Lü Fengxia, et al. Inhibitory effect of lipopeptides from Bacillus Subtilis fmbj on Penicillium notatum and its antisepsis to peach[ J]. Trans CSAE, 2008, 24 (1): (in Chinese) ( 责 任 编 辑 : 金 淑 惠 )
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H 2 SO ml ml 1. 0 ml C 4. 0 ml - 30 min 490 nm 0 ~ 100 μg /ml Zhao = VρN 100% 1 m V ml ρ g
16 6 2018 11 Chinese Journal of Bioprocess Engineering Vol. 16 No. 6 Nov. 2018 doi 10. 3969 /j. issn. 1672-3678. 2018. 06. 004 1 2 1 1 1. 330200 2. 330006 4 Box-Behnken 1 25 g /ml 121 92 min 2 6. 284%
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参 会 人 员 名 单 Last Name 姓 名 公 司 Tel Fax Bai 柏 煜 康 复 之 家 8610 8761 4189 8610 8761 4189 Bai 白 威 久 禧 道 和 股 权 投 资 管 理 ( 天 津 ) 有 限 公 司 8610 6506 7108 8610 6506 7108 Bao 包 景 明 通 用 技 术 集 团 投 资 管 理 有 限 公 司 8610
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林学 园艺
中国农学通报 2015,31(10):153-157 Chinese Agricultural Science Bulletin 蚬壳花椒资源繁育与有效成分研究进展 杨 辉 李 猛 王 平 孙吉康 代明龙 中南林业科技大学生命科学与技术学院 长沙 410004 摘 要 总结了蚬壳花椒的一般特性及生长发育特征 地理分布差异 组织培养 扦插嫁接 有性繁育 遗 传多样性分析 药用成分的种类 有效成分的分离纯化方法
Meet Results: 2015 CHN Nationals Baoji
2015 CHN Nationals Baoji April 9-16, 2015 Results Women Open 800 LCM Freestyle Entrant Age Affiliation Prelims Finals 1 Zhang, Yuhan 20 China 8:40.08 8:31.93 2 Cao, Yue 19 China 8:33.62 3 Xin, Xin 18 China
% 8. 48% 3 80 Alcalase Novozymes Alcalase 2. 4 L Bacillus licheniformis 2. 4 AU /g 1. 2 Hitachi S-4700 JEOL JEM-1200EX Olympus Bu
2011 33 6 1117-1121 http / /xuebao. jxau. edu. cn Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis E - mail ndxb7775@ sina. com * 311400 Alcalase 2. 4 L TS225. 1 + 6 A 1000-2286 2011 06-1117 - 05 A Study on
Supporting_Information_revise
Supporting Information The Synthesis and Bioactivity Investigation of the Individual Components of Cyclic Lipopeptide Antibiotics A-Long Cui, Xin-Xin Hu, Yan Gao, Jie Jin, Hong Yi, Xiu-Kun Wang, Tong-Ying
Microsoft Word - 32--方卫东_new_.doc
46 5 Vol.46, No.5 2015 9 OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA Sep., 2015 FA08 * 1, 2 3 3 3 3 3 3 (1. 361021; 2. 363102; 3. 361005), FA08,, 16S rdna, FA08 (Bacillus licheniformis, GenBank : KM892857) FA08 ph,
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20 1 2010 10 Vol.20 Special 1 The Chinese Journal of Nonferrous Metals Oct. 2010 1004-0609(2010)S1-s0127-05 Ti-6Al-4V 1 2 2 (1. 710016 2., 710049) 500~1 000 20 Ti-6Al-4V(TC4) TC4 800 TC4 800 TC4 TC4 800
第 33 卷 第 2 期 2010 年 4 月 - 149 - 脱 蛋 白 较 好 的 方 法 是 Sevag 法, 它 是 根 据 蛋 白 质 在 氯 仿 等 有 机 溶 剂 中 变 性 的 特 点, 使 蛋 白 质 变 性 成 胶 状, 此 法 条 件 温 和, 可 避 免 多 糖 的 降 解
- 148 - Drug Evaluation Research Vol.33 No.2 April 2010 植 物 多 糖 的 研 究 进 展 陶 遵 威 1, 郑 夺 1, 邸 明 磊 2, 单 晓 菊 1 天 津 市 医 药 科 学 研 究 所, 天 津 300020; 2 天 津 中 医 药 大 学, 天 津 300073 2 摘 要 多 糖 是 由 单 糖 连 接 而 成 的 多 聚 物,
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中 国 科 学 院 重 点 实 验 室 年 报 (2010 年 度 ) 环 境 与 应 用 微 生 物 重 点 实 验 室 成 都 生 物 研 究 所 2011 年 3 月 1 日 一 基 本 信 息 实 验 室 中 文 名 称 : 中 国 科 学 院 环 境 与 应 用 微 生 物 重 点 实 验 室 ( 成 都 生 物 研 究 所 ) 实 验 室 英 文 名 称 :Key Laboratory
Technical Acoustics Vol.27, No.4 Aug., 2008,,, (, ) :,,,,,, : ; ; : TB535;U : A : (2008) Noise and vibr
8 8 Technical Acoustics Vol., No. Aug., 8,,, (, 8) :,,,,,, : ; ; : TB;U.+ 9 : A : -(8)--- Noise and vibration tests for fuel cell vehicel and noise sources identification SHEN Xiu-min, ZUO Shu-guang, CAI
Stock Transfer Service Inc. Page No. 1 CENTURY PEAK METALS HOLDINGS CORPORATION (CPM) List of Top 100 Stockholders As of 12/31/2015 Rank Sth. No. Name
Stock Transfer Service Inc. Page No. 1 CENTURY PEAK METALS HOLDINGS CORPORATION (CPM) List of Top 100 Stockholders As of 12/31/2015 Rank Sth. No. Name Citizenship Holdings Rank ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
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38 5 Vol 38 No 5 2014 9 Journal of Jiangxi Normal UniversityNatural Science Sep 2014 1000-5862201405-0501-05 1 1* 2 2 1 3300222 330052 Streptomyces lincolnensis 13 8 6% 12 4% Q 93 A 0 1 2 Streptomyces
* CUSUM EWMA PCA TS79 A DOI /j. issn X Incipient Fault Detection in Papermaking Wa
2 *. 20037 2. 50640 CUSUM EWMA PCA TS79 A DOI 0. 980 /j. issn. 0254-508X. 207. 08. 004 Incipient Fault Detection in Papermaking Wastewater Treatment Processes WANG Ling-song MA Pu-fan YE Feng-ying XIONG
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2005 年 第 25 卷 有 机 化 学 Vol. 25, 2005 第 7 期, 771~779 Chinese Journal of Organic Chemistry No. 7, 771~779 综 述 与 进 展 紫 草 素 的 全 合 成 研 究 进 展 徐 德 锋 管 鹏 健 毛 志 强 李 绍 顺 * ( 上 海 交 通 大 学 药 学 院 上 海 200030) 摘 要 综 述
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微 生 物 学 通 报 Microbiology China tongbao@im.ac.cn Apr. 20, 2016, 43(4): 793 797 http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150504 高 校 教 改 纵 横 生 物 工 程 专 业 发 酵 课 程 群 建 设 探 索 * 赵 宏 宇
10期(182-402)
中 国 农 学 通 报 2010,26(10):337-342 Chinese Agricultural Science Bulletin 香 蕉 栽 培 管 理 技 术 研 究 概 况 1,2 高 广 平, 易 干 军 1 1, 魏 岳 荣 ( 1 广 东 省 农 业 科 学 院 果 树 研 究 所, 广 州 510640; 2 江 西 农 业 大 学, 南 昌 330045) 摘 要 : 综 述
現代學術之建立 陳平 998 7-3-3592-6 美學十五講 淩繼堯 美學 23 7-3-643-4 論集 徐複觀 書店出版社 的方位 陳寶生 宣傳 敦煌文藝出版社 論集續篇 徐複觀 書店出版社 莊子哲學 王博 道家 7-3-666-3 的天方學 沙宗平 伊斯蘭教 7-3-6844- 周易 經傳十
東西方比較研究 範明生, 陳超南 物流發展報告 物流與採購聯合會 物流發展報告 物流與採購聯合會 物流發展報告 丁俊發 唯物史觀與歷史科學 地理學 社會科學院出版 23 23 物流 研究報告 2 物資出版社 22 7-547-88-5 物流 物資出版社 7-547-22-3 龐卓恒 歷史唯物主義 高等教育出版社 7-4-4333-X 周尚意, 孔翔, 朱竑 地理學 高等教育出版社 7-4-446-
5期xin
中 国 农 学 通 报 2014,30(5):23-27 Chinese Agricultural Science Bulletin 大 肠 杆 菌 生 物 膜 的 筛 选 及 生 长 曲 线 测 定 喻 华 英, 李 启 峰 ( 塔 里 木 大 学 动 物 科 学 学 院, 新 疆 阿 拉 尔 843300) 摘 要 : 为 探 究 犊 牛 腹 泻 病 中 大 肠 杆 菌 生 物 膜 的 形 成
合肥民商 2013 年第 10 期
2013 年 第 10 期 合 肥 民 商 合肥民商 2013 年第 10 期 KAN SHOU YU 刊 首 语 中 小 企 业 转 型 需 苦 练 创 新 内 功 多 位 专 家 和 业 内 人 士 11 月 2 日 在 出 席 第 22 届 中 外 管 理 官 产 学 恳 谈 会 时 表 示, 在 调 结 构 稳 增 长 的 宏 观 大 环 境 下, 中 国 的 经 济 增 长 速 度 可 能
绎 阴 元元 510515 Caco-2 Caco-2 P FX1.s92
知 识 目 标 : 了 解 药 物 鉴 别 的 意 义 学 习 目 标 理 解 药 物 鉴 别 试 验 的 项 目 掌 握 药 物 鉴 别 试 验 的 常 用 方 法 能 力 目 标 : 能 熟 练 应 用 药 物 鉴 别 的 常 用 方 法 对 药 物 进 行 鉴 别 第 一 节 概 述 药 物 的 鉴 别 试 验 是 根 据 药 物 的 组 成 分 子 结 构 和 理 化 性 质, 采 用 化
0f3fdf2bb8e55502b65cf5790db2b9fdf793fd84c5ee29b8d80ee7fb09a2cf82.xls
International Federation of Bodybuilding and Fitness 019 ``The Belt and Road`` Worldwide Bodybuilding and Fitness Championships 10-14.10.019, Xi`an, O F F I C I A L C O N T E S T R E S U L T S Men's Classic
填 表 说 明 1. 本 表 所 填 数 据 截 至 时 间 为 2011 年 9 月 底 2. 本 表 请 用 A4 纸 双 面 打 印, 加 盖 学 校 公 章 后 上 报 3. 表 内 所 填 数 据 请 学 校 认 真 核 实, 确 保 准 确 无 误 4. 建 设 完 成 情 况 对 照
填 表 说 明 1. 本 表 所 填 数 据 截 至 时 间 为 2011 年 9 月 底 2. 本 表 请 用 A4 纸 双 面 打 印, 加 盖 学 校 公 章 后 上 报 3. 表 内 所 填 数 据 请 学 校 认 真 核 实, 确 保 准 确 无 误 4. 建 设 完 成 情 况 对 照 表 等 相 关 表 格 栏 高 不 够 请 自 行 增 加 5. 表 格 中 填 写 的 相 关 量
92 China Biotechnology Vol. 32 No g 3 00ml 5ml 0. 5mol /L 24 % 24 ph NaOH Ca OH ml h 24h 48h 72h OD
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(CIP) : /. :, (/ ) ISBN T S H CI P (2006) CH IJIASH EN GXIAN G YINSHI WEN H U A Y U CHENGY U 1
(CIP) : /. :, 2006. 12 (/ ) ISBN 7-81064-917-5... - - - - -. T S971-49 H136. 3 CI P (2006) 116732 CH IJIASH EN GXIAN G YINSHI WEN H U A Y U CHENGY U 105 100037 68418523 ( ) 68982468 ( ) www. cnup. cnu.
DELE julio 2018
01665571 180703156001020001 SONG HAOWEN 01320735 180703156001020002 LI HUILING 01820246 180703156001020003 WANG MENGXIAO 01820248 180703156001020004 ZHANG YI 01820249 180703156001020005 LI HENGYANG 01821138
( CIP ) / :, ISBN I37 CIP (2006) : mm 1/ 32 : : : 5000 ISBN / I37 : 936.
( CIP ) / :,2006.2 ISBN 7-80702 - 247-7..........I37 CIP (2006)080143 : 8501168mm 1/ 32 : 280.5 :3800 2006 3 1 : 5000 ISBN 7-80702 - 247-7/ I37 : 936.00 (36 ) Mu Lu ( 1 ) ( 7 ) (13) (19) (25) (29) (34)
集結渦漩法在小板顫振分析之應用
工 程 科 技 與 教 育 學 刊 第 10 卷 第 1 期 第 83~88 頁 民 國 102 年 3 月 以 兩 相 流 動 提 高 超 過 濾 濃 縮 醱 酵 液 玻 尿 酸 之 回 收 率 蘇 芳 儀 陳 樹 人 * 國 立 高 雄 應 用 科 技 大 學 化 學 工 程 與 材 料 工 程 系 通 訊 作 者 電 子 郵 件 :E-mail : biochen@kuas.edu.tw 摘
李草 副教授 博士 1986 年 2 月出生于湖北监利 2007 年 6 月毕业于武汉大学化学与分子科学学院, 获理学学士学位 ; 随后进入武汉大学化学与分子科学学院生物医用高分子材料教育部重点实验室, 在张先正教授的指导下攻读博士学位 2012 年 7 月博士毕业后进入湖北大学材料科学与工程学院工
李草 副教授 博士 1986 年 2 月出生于湖北监利 2007 年 6 月毕业于武汉大学化学与分子科学学院, 获理学学士学位 ; 随后进入武汉大学化学与分子科学学院生物医用高分子材料教育部重点实验室, 在张先正教授的指导下攻读博士学位 2012 年 7 月博士毕业后进入湖北大学材料科学与工程学院工作 ;2016 年 7 月晋升为副教授 主要研究方向为用于药物及基因传递的生物医用高分子材料, 及用于二氧化碳捕获的环保高分子材料
4期
中 国 农 学 通 报 2013,29(04):39-43 Chinese Agricultural Science Bulletin 中 药 荆 芥 最 新 研 究 进 展 1,2 1,2 赵 立 子, 魏 建 和 ( 1 北 京 协 和 医 学 院 药 用 植 物 研 究 所, 北 京 100193; 2 中 草 药 物 质 基 础 与 资 源 利 用 教 育 部 重 点 实 验 室, 北 京
Ling Zhoujiu Shi Kuang
Ling lun Kui Ling Zhoujiu Shi Kuang Boya Kong Zi Confucius Li Yannian jing Fang Huan Tan Cai Yong Du Kui ji Kang Xun Xu He Chengtian Dai Yong Huan Yi Qian Lezhi Chen Zhongru Cao Miaoda Zheng Yi Wan
~ 4 mm h 8 60 min 1 10 min N min 8. 7% min 2 9 Tab. 1 1 Test result of modified
30 1 2013 1 Journal of Highway and Transportation Research and Development Vol. 30 No. 1 Jan. 2013 doi 10. 3969 /j. issn. 1002-0268. 2013. 01. 004 1 2 2 2 2 1. 400074 2. 400067 240 U416. 217 A 1002-0268
文章(copy)
农 学 学 报 016,6(5):18- Journal of Agriculture www.caaj.org 5 种 杀 菌 剂 防 治 番 茄 茎 腐 病 的 室 内 筛 选 和 田 间 使 用 效 果 任 凤 山 1, 高 亮 1, 张 博 ( 1 山 东 省 农 业 科 学 院 植 物 保 护 研 究 所 / 山 东 省 植 物 病 毒 学 重 点 实 验 室, 济 南 50; 山 东 农
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12 1 97 11 30 ( ) E-Mail wcho@mail.tajen.edu.tw 80 1000 26 (Trichoderma spp.) T20 T21 24 T21 T22 T26 46 63 33 19 600 100 800 800 1000 500 200 2000 Abstract In this study, chemical pesticide, antimicroorganisms
CIP /. 2005. 12 ISBN 7-5062 - 7683-6 Ⅰ.... Ⅱ.... Ⅲ. Ⅳ. G624.203 CIP 2005 082803 櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶櫶 17 710001 029-87232980 87214941 029-87279675 87279676 880 1230 1/64 4.0 110 2006 2 1 2006 2 1 ISBN
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发 展 视 窗 Fa Zhan Shi Chuang 关 注 发 展 动 向 感 受 发 展 节 拍 宝 钢 沪 上 固 废 资 源 综 合 利 用 业 务 整 合 启 动 6 月 17 日, 宝 钢 发 展 公 司 与 一 钢 公 司 在 宝 山 宾 馆 签 订 了 一 钢 公 司 拥 有 的 昌 新 钢 渣 公 司 和 开 拓 磁 选 金 属 公 司 等 两 家 钢 渣 处 理 公 司 的 股
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40 6 2011 6 Vol.40 No.6 Infrared and Laser Engineering Jun. 2011 808 nm 2000 W 1 1 1 1 2 2 2 2 2 12 (1. 710119 2. 710119) : bar 808 nm bar 100 W 808 nm 20 bar 2 000 W bar LIV bar 808 nm : : TN248.4 TN365
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3期
中 国 农 学 通 报 2014,30(3):15-19 Chinese Agricultural Science Bulletin 棉 花 叶 面 施 肥 研 究 进 展 李 永 旗, 李 鹏 程, 刘 爱 忠, 董 合 林 ( 中 国 农 业 科 学 院 棉 花 研 究 所 / 棉 花 生 物 学 国 家 重 点 实 验 室, 河 南 安 阳 455000) 摘 要 : 作 物 叶 面 施 肥
管 理 论 道 创 新 内 部 审 计 工 作 的 实 践 和 思 考 党 建 征 文 紧 跟 改 革 步 伐 勇 担 发 展 责 任 心 情 随 笔 那 些 年 和 字 母 恋 爱 的 美 好 时 光 SHENZHEN INVESTMENT HOLDINGS 深 圳 投 控 危 废 处 理 行 业 任 重 道 远 两 会 聚 焦 国 企 改 革 刘 仲 健 : 与 兰 为 伴, 创 新 不 止 深
1 GIS 95 Y = F y + (1 F) (1) 0 0 Y0 kg/hm 2 /day F y 0 y c kg/hm 2 /day [12] y m 20 kg/hm 2 /hour Y = cl cn ch G [ F( y ) T m yo + (2) (1 F)(
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24 1 Vol.24 No.1 94 2008 1 Transactions of the CSAE Jan. 2008 2008 1 100094 2 100035 3 100081 4 100081 5 100101 GIS ( ) 65.12 16.82 13.74 15.27 11.07 t/(hm 2 a) 10.93% 41.43% 46.93% 65.4%. Bi Jiye, Zhu
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ph ph ph Langmuir mg /g Al 2 O 3 ph 7. 0 ~ 9. 0 ph HCO - 3 CO 2-3 PO mg /L 5 p
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11 11 : 5339 () 111345 ACTA OPTICA SIN ICA Vol.,No. 11 November, 3 (, 371) : ;,,, : ; ; : TN53 : A 1,, [13 ] [4 1973, ], g E( r, t) = 5 E( r, t), 1974 5 t + 5 P ( r, t) 5 t, (1) Marcuse [5 ], P ( r, t)
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4 51 1 Scoones 1998 20 60 70 2002 2001 20 90 World Bank DFID Sussex IDS 2012 2 2. 1 UNDP CARE DFID DFID DFID 1997 IDS 2009 1 5
38 4 2014 7 Vol. 38 No. 4 July 2014 50 Population Research * 30 4 100872 Livelihood and Development Capacity of Families Obeying the Family Planning Policy in Rural China A Sustainable Livelihood Analytical
#4 ~ #5 12 m m m 1. 5 m # m mm m Z4 Z5
2011 6 6 153 JOURNAL OF RAILWAY ENGINEERING SOCIETY Jun 2011 NO. 6 Ser. 153 1006-2106 2011 06-0014 - 07 300142 ABAQUS 4. 287 mm 6. 651 mm U455. 43 A Analysis of Impact of Shield Tunneling on Displacement
~-' 一 ~ U 百 陳 子 展 ( ), 本 名 炳 聾, 字 子 展, 以 字 行 於 世, 湖 南 長 沙 人 幼 時 曾 在 私 塾 求 學, 後 入 長 沙 縣 立 師 範 學 校, 再 入 東 南 大 學 教 育 系, 因 病 輯 學 回 湖 南, 寄 住 長 沙
2 0 12 年 9 月 頁 1 65~ 19 0 臺 北 : 國 立 臺 灣 師 範 大 學 國 文 學 系 ISSN 1021-7 851 陳 子 展 研 究 詩 經 方 法 述 評 * 史 甄 陶 * * ( 收 稿 日 期 : 1 01 年 3 月 3 1 日 ; 接 受 刊 登 日 期 : 10 1 年 7 月 15 日 ) 提 要 本 文 探 討 陳 子 展 研 究 詩 經 的 方 法
1449 1 相 对 校 正 因 子 的 相 关 方 法 1.1 内 标 多 控 法 研 究 发 现, 在 中 药 各 成 分 间 存 在 着 一 定 的 比 例 关 系, 只 要 各 成 分 的 量 符 合 该 比 例 关 系, 中 药 的 多 [6] 指 标 质 量 控 制 可 以 依 此 法
![1449 1 相 对 校 正 因 子 的 相 关 方 法 1.1 内 标 多 控 法 研 究 发 现, 在 中 药 各 成 分 间 存 在 着 一 定 的 比 例 关 系, 只 要 各 成 分 的 量 符 合 该 比 例 关 系, 中 药 的 多 [6] 指 标 质 量 控 制 可 以 依 此 法](/thumbs/40/22057924.jpg "1449 1 相 对 校 正 因 子 的 相 关 方 法 1.1 内 标 多 控 法 研 究 发 现, 在 中 药 各 成 分 间 存 在 着 一 定 的 比 例 关 系, 只 要 各 成 分 的 量 符 合 该 比 例 关 系, 中 药 的 多 [6] 指 标 质 量 控 制 可 以 依 此 法")
1448 相 对 校 正 因 子 在 中 药 多 指 标 测 定 中 的 应 用 研 究 进 展 1, 罗 祖 良 2, 仇 峰 1 1,, 韦 日 伟 2 1,, 覃 禹 2, 张 坤 1, 覃 洁 萍 2, 杨 美 华 1. 北 京 协 和 医 学 院 药 用 植 物 研 究 所, 中 草 药 物 质 基 础 与 资 源 利 用 教 育 部 重 点 实 验 室, 北 京 100193 2. 广
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2007 Scientific and Technical Documents Publishing House 90 167 183 9 6000 2001 20052006 100100 100100 55 520105 5 (Essential Science IndicatorsESI) 14 (1)5 (2)5 (3)5 = 5 5 (4) = 5 5 (5)50% 50 49.80
戊 酸 雌 二 醇 片 联 合 宫 颈 注 射 利 多 卡 因 用 于 绝 经 后 妇 女 取 环 的 临 床 效 果 评 价 陆 琴 芬, 等 371 Keywords groups, no removal difficulties and failure, was statistically s
370 临 床 与 病 理 杂 志 J Clin Pathol Res 2015, 35(3) http://www.lcbl.net doi: 10.3978/j.issn.2095-6959.2015.03.009 View this article at: http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.2095-6959.2015.03.009 戊 酸 雌 二 醇 片 联
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 40 94 88 82 77 72 67 62 57 53 48 44 40 37 33 29 26 23 20 17 14 11 8 39 94 88 82 77 71 66 61 57 52 48 44 40 36 32 28 25 22 18 15 12 9 7 38 94 88
Microsoft Word - 王应东.doc
第 30 卷 第 2 期 2015 年 4 月 天 津 科 技 大 学 学 报 Journal of Tianjin University of Science & Technology Vol. 30 No. 2 Apr. 2015 DOI:10.13364/j.issn.1672-6510.20140058 抗 真 菌 乳 酸 菌 的 筛 选 及 其 对 馒 头 和 酸 奶 的 防 腐 实 验
[1] Nielsen [2]. Richardson [3] Baldock [4] 0.22 mm 0.32 mm Richardson Zaki. [5-6] mm [7] 1 mm. [8] [9] 5 mm 50 mm [10] [11] [12] -- 40% 50%
![[1] Nielsen [2]. Richardson [3] Baldock [4] 0.22 mm 0.32 mm Richardson Zaki. [5-6] mm [7] 1 mm. [8] [9] 5 mm 50 mm [10] [11] [12] -- 40% 50%](/thumbs/88/115539847.jpg "[1] Nielsen [2]. Richardson [3] Baldock [4] 0.22 mm 0.32 mm Richardson Zaki. [5-6] mm [7] 1 mm. [8] [9] 5 mm 50 mm [10] [11] [12] -- 40% 50%")
38 2 2016 4 -- 1,2, 100190, 100083 065007 -- 0.25 mm 2.0 mm d 10 = 0.044 mm 640 3 300. Richardson--Zaki,,, O359 A doi 10.6052/1000-0879-15-230 EXPERIMENTAL STUDY OF FLUID-SOLID TWO-PHASE FLOW IN A VERTICAL
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中 国 科 学 院 生 物 物 理 研 究 所 年 鉴 2010 生 物 物 理 研 究 所 二 〇 一 一 年 六 月 1 主 编 : 陈 长 杰 责 任 编 辑 : 姜 兆 林 封 面 设 计 : 汪 会 盛 摄 影 : 王 强 2 目 录 前 言... 6 总 类... 7 中 国 科 学 院 生 物 物 理 研 究 所 2010 年 度 总 结... 8 中 共 中 国 科 学 院 生 物
698 39,., [6].,,,, : 1) ; 2) ,, 14,, [7].,,,,, : 1) :,. 2) :,,, 3) :,,,., [8].,. 1.,,,, ,,,. : 1) :,, 2) :,, 200, s, ) :,.
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39 6 Vol. 39, No. 6 2013 6 ACTA AUTOMATICA SINICA June, 2013 1, 2,,,. DOI,,,., 2013, 39(6): 697 702 10.3724/SP.J.1004.2013.00697 Present Situation and Development Tendency of Aerospace Control Techniques
Supplementary Information LC-MS-guided isolation of anti-inflammatory 2-(2-phenylethyl)chromone dimers from Chinese agarwood (Aquilaria sinensis) Hui-
Supplementary Information LC-MS-guided isolation of anti-inflammatory 2-(2-phenylethyl)chromone dimers from Chinese agarwood (Aquilaria sinensis) Hui-Xia Huo #, Yu-Fan Gu #, Zhi-Xiang Zhu, Yun-Feng Zhang,
a b
38 3 2014 5 Vol. 38 No. 3 May 2014 55 Population Research + + 3 100038 A Study on Implementation of Residence Permit System Based on Three Local Cases of Shanghai Chengdu and Zhengzhou Wang Yang Abstract
(CIP) : /. :, (/ ) ISBN T S H CI P (2006) XIANGPIAOWANLI JIUW ENH UA YU CH ENGYU
(CIP) : /. :, 2006. 12 (/ ) ISBN 7-81064-916-7... - - - - -. T S971-49 H136. 3 CI P (2006) 116729 XIANGPIAOWANLI JIUW ENH UA YU CH ENGYU 105 100037 68418523 ( ) 68982468 ( ) www.cnup.cnu.cn E- mail cnup@
( CIP ) / :, ISBN I37 CIP (2006) : mm 1/ 32 : : : 5000 ISBN / I37 : 936.
( CIP ) / :,2006.2 ISBN 7-80702 - 247-7..........I37 CIP (2006)080143 : 8501168mm 1/ 32 : 280.5 :3800 2006 3 1 : 5000 ISBN 7-80702 - 247-7/ I37 : 936.00 (36 ) Mu Lu ( 1 ) (25) (25) (30) (43) (58) (68)
successful and it testified the validity of the designing and construction of the excavation engineering in soft soil. Key words subway tunnel
2011 11 11 158 JOURNAL OF RAILWAY ENGINEERING SOCIETY Nov 2011 NO. 11 Ser. 158 1006-2106 2011 11-0104 - 08 1 2 1. 200048 2. 200002 < 20 mm 2 1 788 TU470 A Design and Construction of Deep Excavation Engineering
892311B009006
R NSC 89 2311 B 9 6 89 8 1 9 7 31 has been noticed as functional food. This research is to investigate the influence of different environmental factors on the production of mycelium and polysaccharide
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6 9 Vol. 6 No. 9 2015 9 Journal of Food Safety and Quality Sep., 2015 马 姜 1, 高 原 1*, 王 红 静 2 (1.,, 100089; 2. ( ), 100080) 摘 要 : 目 的, 方 法 HORIBA LA-950 结 果,, 结 论, 关 键 词 : ; ; ; Application of particle
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PARTE ESCRITA PARTE ORAL NIVEL CÓDIGO APELLIDO NOMBRE FECHA HORA AULA FECHA Hora Prep Hora Ex AULA 13050315601020001 NI HUANMENG 25-may 13050315601020002 GUO YUANCHUN 25-may 13050315601020004 XU AI 25-may
PCA+LDA 14 1 PEN mL mL mL 16 DJX-AB DJ X AB DJ2 -YS % PEN
21 11 2011 11 COMPUTER TECHNOLOGY AND DEVELOPMENT Vol. 21 No. 11 Nov. 2011 510006 PEN3 5 PCA + PCA+LDA 5 5 100% TP301 A 1673-629X 2011 11-0177-05 Application of Electronic Nose in Discrimination of Different
2010 10 28 1 106 ... 5... 6... 7... 10... 15... 18... 18... 22... 25... 27... 27... 40... 40... 43... 50... 50... 59... 59... 68... 69 2 106 ... 71... 72... 73... 75... 76... 77... 77... 77... 78... 79...
2 : 111 ( Pinctada maxima), 13, 11,,,,,, 15, 25 cm, cm, 4 5 kg 1-2],,, 3-7] 24] 25-26],,, ] min, 1, 5 m 4 m, 20 m , 9-22],,, (
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12 2 2 0 1 6 4 South China Fisheries Science Vol. 12, No. 2 Apr., 2016 doi: 10. 3969/ j. issn. 2095-0780. 2016. 02. 016,,,, (,,, 510300) : ( Pinctada maxima),,,, 54. 55%, 0 0. 25 m - 2, 0 70. 31 gm - 2,
~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ % % ~ 20% 50% ~ 60%
33 202 67 ~ 79 The Chinese Journal for the History of Science and Technology Vol. 33 No. 202 896 ~ 949 404 00083 896 ~ 907-908 ~ 98-99 ~ 949 - - N092 TF-092 A 673-44 202 0-0067-3 R. F. Tylecote R. I. McCallum
DELE noviembre 2017
PARTE ESCRITA PARTE ORAL NIVEL CÓDIGO APELLIDO NOMBRE FECHA HORA AULA FECHA Preparación Examen AULA 171102156001020001 LI LINGWEN 171102156001020002 CHENG LIXIA 171102156001020003 YAN QI 171102156001020004
404 中 草 药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 2 期 2011 年 2 月 加 入 的 十 二 烷 基 磺 酸 钠 活 性 剂 1.23 g, 在 球 磨 机 转 速 600 r/min 的 条 件 下 球 磨 8 h, 所 得 粉
中 草 药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 2 期 2011 年 2 月 403 纳 米 技 术 在 中 药 领 域 的 研 究 进 展 1, 吴 芸 2 1,, 严 国 俊 2, 蔡 宝 昌 1, 2, 3* 1. 国 家 中 医 药 管 理 局 中 药 炮 制 标 准 重 点 研 究 实 验 室, 江 苏 南 京 210046 2. 国
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生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2010, September 25; 26(9): 1263 1268 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn 2010 CJB, All rights reserved. 发 酵 工 程 分 阶 段 ph 调 控 提 高 2-
380 研 究 论 文 发 酵 天 数 双 乙 酰 测 定 : 参 照 GB4927-4928-2001 标 准 发 酵 液 中 的 化 学 成 分 的 测 定 : 采 用 GC-8A 型 气 相 色 谱 测 定 1.5 离 子 注 入 方 法 [6] 把 待 处 理 的 菌 株 细 胞 均 匀 涂
![380 研 究 论 文 发 酵 天 数 双 乙 酰 测 定 : 参 照 GB4927-4928-2001 标 准 发 酵 液 中 的 化 学 成 分 的 测 定 : 采 用 GC-8A 型 气 相 色 谱 测 定 1.5 离 子 注 入 方 法 [6] 把 待 处 理 的 菌 株 细 胞 均 匀 涂](/thumbs/43/23114460.jpg "380 研 究 论 文 发 酵 天 数 双 乙 酰 测 定 : 参 照 GB4927-4928-2001 标 准 发 酵 液 中 的 化 学 成 分 的 测 定 : 采 用 GC-8A 型 气 相 色 谱 测 定 1.5 离 子 注 入 方 法 [6] 把 待 处 理 的 菌 株 细 胞 均 匀 涂")
中 国 细 胞 生 物 学 学 报 Chinese Journal of Cell Biology 2011, 33(4): 379-384 http://www.cjcb.org 全 小 麦 啤 酒 酵 母 菌 株 的 诱 变 育 种 及 应 用 研 究 袁 仲 1* 张 百 胜 1 张 慎 举 1 马 绮 云 2 陈 柯 羽 2 ( 1 商 丘 职 业 技 术 学 院 园 林 食 品 加 工 系,
<443A5CC2DBCEC45CB5DAD2BBC6DA5C3036D7DBCAF65CD2BBC6DA2DD7DBCAF6>
2006, Vol. 27, No. 01 263 周 建 新 ( 南 京 财 经 大 学 江 苏 省 粮 油 品 质 控 制 及 深 加 工 技 术 重 点 实 验 室, 江 苏 南 京 210003) : 回 顾 了 近 年 来 国 内 外 开 发 利 用 植 物 源 天 然 食 品 防 腐 剂 的 情 况 和 最 新 研 究 进 展, 分 析 了 目 前 开 发 植 物 源 天 然 食 品 防
研究报告
第 36 卷 第 3 期 206 年 6 月 Journal of Chinese Society for Corrosion and Protection Vol.36 No.3 Jun. 206 SRB 对 X70 管 线 钢 在 近 中 性 ph 溶 液 中 腐 蚀 行 为 的 影 响 宋 博 强 陈 旭 马 贵 阳 刘 睿 辽 宁 石 油 化 工 大 学 石 油 天 然 气 工 程 学 院
11 : 1345,,. Feuillebois [6]. Richard Mochel [7]. Tabakova [8],.,..,. Hindmarsh [9],,,,,. Wang [10],, (80 µm),.,. Isao [11]. Ismail Salinas [12],. Kaw
![11 : 1345,,. Feuillebois [6]. Richard Mochel [7]. Tabakova [8],.,..,. Hindmarsh [9],,,,,. Wang [10],, (80 µm),.,. Isao [11]. Ismail Salinas [12],. Kaw](/thumbs/93/114003806.jpg "11 : 1345,,. Feuillebois [6]. Richard Mochel [7]. Tabakova [8],.,..,. Hindmarsh [9],,,,,. Wang [10],, (80 µm),.,. Isao [11]. Ismail Salinas [12],. Kaw")
1344 E 2006, 36(11): 1344~1354 * ** (, 100022).,.,.,.,....,,,,,,,.,.,.,,,.,. Hayashi [1] :., [2] [3~5],,.,,.,. : 2006-03-22; : 2006-06-17 * ( : 50376001) ( : G2005CB724201) **, E-mail: liuzhl@bjut.edu.cn
115 的 大 量 废 弃 物 被 丢 弃 或 直 接 燃 烧 [3] 此 外, 海 南 省 文 昌 鸡 年 产 量 约 8 0 只, 鸡 粪 年 产 量 超 过 100 万 t 这 些 富 含 养 分 的 固 体 有 机 废 弃 物 不 进 行 处 理, 不 仅 会 极 大 浪 费 大 量 养 分
![115 的 大 量 废 弃 物 被 丢 弃 或 直 接 燃 烧 [3] 此 外, 海 南 省 文 昌 鸡 年 产 量 约 8 0 只, 鸡 粪 年 产 量 超 过 100 万 t 这 些 富 含 养 分 的 固 体 有 机 废 弃 物 不 进 行 处 理, 不 仅 会 极 大 浪 费 大 量 养 分](/thumbs/40/22009911.jpg "115 的 大 量 废 弃 物 被 丢 弃 或 直 接 燃 烧 [3] 此 外, 海 南 省 文 昌 鸡 年 产 量 约 8 0 只, 鸡 粪 年 产 量 超 过 100 万 t 这 些 富 含 养 分 的 固 体 有 机 废 弃 物 不 进 行 处 理, 不 仅 会 极 大 浪 费 大 量 养 分")
广东农业科学 16 43 6 114-118 Guangdong Agricultural Sciences doi 10.16768/j.issn.1004-874X.16.06.0 刘军 董存明 吕诗锦 等. 腐熟菌剂不同添加量对鸡粪椰糠高温堆肥的影响 [J]. 广东农业科学 16 43 6 114-118. 腐熟菌剂不同添加量对鸡粪 椰糠高温堆肥的影响 刘 军 董存明 吕诗锦 阮云泽 王蓓蓓
年 报 2014
年 报 2014 Report State Key Joint Laboratory of Environment Simulation and Pollution Control 国 家 重 点 联 合 实 验 室 环 境 模 拟 与 污 染 控 制 年 报 2014 前 言 2014 年, 环 境 模 拟 与 污 染 控 制 国 家 重 点 联 合 实 验 室 ( 以 下 简 称 实 验 室 ),
43 14. 45 3 7 220 1 2 cm /s 2 1. 5 3 1 4 c d 1 /40 1 /4 1 /9 600 0. 129 6 7 1 /6 400 1 /256 000 1. 5 2 2 2. 1 /m /Hz /kn / kn m 6 6 0. 1 ~ 50 600 1 80
43 14 2013 7 Building Structure Vol. 43 No. 14 Jul. 2013 * 1 1 1 2 3 3 3 2 2 1 100013 2 430022 3 200002 1 40 ETABS ABAQUS TU355 TU317 +. 1 A 1002-848X 2013 14-0044-04 Compairion study between the shaking
h ng g ng (tù) rù xiào sì y u k n yòu j j y nyun cu nduo hào cú) ch n yè r nr n sì ku zhuàng k chánnìng w n wéi r é d ng qiáo ch ng kuì ji n zhuó qì chí xiè dú l lil de zào y l chì yín
国家级虚拟仿真实验教学中心
国 家 级 虚 拟 仿 真 实 验 教 学 中 心 申 请 书 口 腔 医 学 虚 拟 仿 真 实 验 教 学 中 心 教 育 主 管 部 门 : 学 校 名 称 : 福 建 省 教 育 厅 福 建 医 科 大 学 学 校 管 理 部 门 电 话 : 0591-22862062 开 放 共 享 访 问 网 址 : 申 报 日 期 : kqxnfz.fjmu.edu.cn 20 15 年 7 月 10
吴根良 等 不同前作对设施草莓土壤环境动态变化和经济效益的影响 4 土传病害也因此日趋严重 严重影响草莓的产 量和品质 轮作尤其是水旱轮作是克服连作障 5 6 233 棚揭开大棚膜 其他大棚不揭膜 都按常规进行 水肥 农药的管理 8 月初前作结束后用产品名 碍的有效技术措施之一 其中有关水稻 草 7
24( 2) : 232 237 浙江农业学报 Acta Agriculturae Zhejiangensis 2012 http: / / www zjnyxb cn 2012 24( 2) : 吴根良 忻雅 童建新 等 不同前作对设施草莓土壤环境动态变化和经济效益的影响 J 浙江农业学报 232 237 不同前作对设施草莓土壤环境动态变化和经济效益的影响 1 吴根良 忻 ( 1 1 * 雅 童建新1
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附件2：
河 北 省 精 品 课 程 建 设 评 估 自 评 报 告 学 校 名 称 课 程 名 称 课 程 层 次 ( 本 / 专 ) 课 程 类 型 所 属 一 级 学 科 名 称 所 属 二 级 学 科 名 称 课 程 负 责 人 申 报 日 期 课 程 建 设 网 站 网 址 河 北 科 技 大 学 化 工 原 理 实 验 本 科 专 业 ( 技 术 ) 基 础 课, 实 践 课 工 学 化 工 与
Dan Buettner / /
39 1 2015 1 Vol. 39 No. 1 January 2015 74 Population Research 80 + /60 + 90 + 90 + 0 80 100028 Measuring and Comparing Population Longevity Level across the Regions of the World Lin Bao Abstract Appropriate
13期
中 国 农 学 通 报 2012,28(13):271-275 Chinese Agricultural Science Bulletin 磷 石 膏 改 良 基 质 中 Cd Zn 在 内 的 富 集 和 迁 移 特 征 王 运 长 1, 李 金 娟 1, 解 田 2, 杨 丽 萍 2 1, 郭 兴 强 ( 1 贵 州 大 学 资 源 与 环 境 工 程 学 院, 贵 阳 550025; 2 瓮
TGF-β AngⅡ B SD ~ 220g SPF. SCXK No SYXK ~ 25 40% ~ 70% OR37G-C
2017 7 43 4 Journal of Southwest Minzu University Natural Science Edition Jul. 2017 Vol. 43 No. 4 doi10. 11920 /xnmdzk. 2017. 04. 008 1 1 1 2 1 1 3 1. 610212 2. 6100413. 610031 AngⅡ TGF-β. SD 60 180 ~
卫生政策研究进展
卫 生 政 策 研 究 进 展 Progress in Health Policy Research 慢 性 病 管 理 专 刊 2013 年 第 3 期 ( 总 第 46 期 ) 上 海 市 卫 生 发 展 研 究 中 心 2013 年 5 月 25 日 编 者 按 慢 性 病 已 经 成 为 21 世 纪 全 球 各 国 发 展 面 临 的 主 要 挑 战 之 一 在 我 国, 慢 性 病 是
220 20, Vol. 32, No. 6 食 品 科 学 分 析 检 测 荡 体 系 被 用 来 检 测 和 鉴 别 组 成 极 其 复 杂 的 中 药 2007 年 [7-20] 张 泰 铭 等 提 出 了 中 药 非 线 性 化 学 指 纹 图 谱 的 概 念, 并 对 其 形 成 的 原
![220 20, Vol. 32, No. 6 食 品 科 学 分 析 检 测 荡 体 系 被 用 来 检 测 和 鉴 别 组 成 极 其 复 杂 的 中 药 2007 年 [7-20] 张 泰 铭 等 提 出 了 中 药 非 线 性 化 学 指 纹 图 谱 的 概 念, 并 对 其 形 成 的 原](/thumbs/42/22870184.jpg "220 20, Vol. 32, No. 6 食 品 科 学 分 析 检 测 荡 体 系 被 用 来 检 测 和 鉴 别 组 成 极 其 复 杂 的 中 药 2007 年 [7-20] 张 泰 铭 等 提 出 了 中 药 非 线 性 化 学 指 纹 图 谱 的 概 念, 并 对 其 形 成 的 原")
29 赵 哲, 张 泰 铭, *, 方 宣 启 2, 向 凤 琴, 乔 君 喜, 朱 蓉 (. 中 南 大 学 化 学 化 工 学 院, 湖 南 长 沙 40083;2. 湖 南 省 食 品 质 量 监 督 检 验 所, 湖 南 长 沙 40002) 通 过 向 稳 态 体 系 溴 酸 钠 - 硫 酸 锰 - 硫 酸 - 丙 酮 中 加 入 不 同 的 茶 饮 料, 获 得 来 自 不 同 产 家
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中 国 环 境 科 学 2012,32(5):933~941 China Environmental Science 系 统 动 力 学 在 空 港 区 域 规 划 环 境 影 响 评 价 中 的 应 用 刘 慧 1,2, 郭 怀 成 1*, 盛 虎 1, 都 小 尚 1,3, 李 娜 1 1, 杨 永 辉 (1. 北 京 大 学 环 境 科 学 与 工 程 学 院, 北 京 100871; 2.
22 Animal Husbandry & Veterinary Medicine 2011 Vol. 43 No % 3% 3% /% % 6. 67% 1. 71% 1. 11% 0. 14% 0.
2011 43 5 21 3 1 1* 1 2 3 1 1. 2. 3. 78. 68±2. 95 g 28 300 3 5 3% 3 1 ALT TP ALB AST 0. 05 P>0. 05 ALT TP ALB P>0. 05 AST 0. 05 GLOB P>0. 05 2 INS 0. 05 TSH T 3 0. 05 P>0. 05 GLU GH T4 IGF-I P>0. 05 S816.
NCCC Swim Team James Logan High school - 8/5/2018 Results - Adult Event 102 Mixed Yard Medley Relay Team Relay Finals Time 1 Beida-Zhonglian
NCCC Swim Team James Logan High school - 8/5/2018 Results - Adult Event 102 Mixed 60-69 200 Yard Medley Relay 1 Beida-Zhonglian B 3:11.63 2 Beida-Zhonglian A 3:18.29 HY-TEK's MEET MANAGER Event 103 Mixed
9 04 Vol. No. Serial No.6 China Brewing Research Report sanning electron microscope SEM g ml = 4 4h UV-800PC 0000r/min 5min SLY-B 0μL - LHS-50SC 7 6h.
04 6 9 DNAout [].. 5g/L g/l nattokinase NK g/l K HPO 4 0.5g/L KH PO 4 0.g/L [-4] MgSO 4 ph7.0~7. LB 0g/L 5g/L [5-7] 0g/L NaCl 5g/L ph7.0 urokinase UK streptokinase SK tissue-type plasminogenactivator t-pa
No 8 : 795, CH 3 CN2 ( ) H 2 O 2 2CH 3 CN2N2 252 ( ),, : 1a, H 2 O 2 2CH 3 CN2,, H 2 O 2 2CH 3 CN2N2 252 [9 11] g ml - 1,,
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2004 62 8, 794 798 ACTA CHIMICA SINICA http://wwwpapereducn Vol 62, 2004 No 8, 794 798 Ξ Ξ ( 200032),, : :H 2 O 2 2CH 3 CN2 ( ) H 2 O 2 2CH 3 CN2N2 252 ( ),,, IgG Study of New Chemiluminescence Technique
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2012 年 12 月 图 学 学 报 December 2012 第 33 卷 第 6 期 JOURNAL OF GRAPHICS Vol.33 No.6 工 程 图 学 计 算 机 辅 助 教 学 实 践 与 思 考 王 建 华, 郝 育 新, 刘 令 涛 ( 北 京 信 息 科 技 大 学 机 电 学 院, 北 京 100192) 摘 要 : 随 着 计 算 机 技 术 的 迅 猛 发 展 和
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微 生 物 学 通 报 FEB 20, 2008, 35(2) 306~30 Microbiology 2008 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@im.ac.cn 生 物 实 验 室 响 应 面 分 析 法 优 化 副 溶 血 性 弧 菌 生 长 条 件 刘 代 新 宁 喜 斌 * 张 继 伦 2 (. 200090) (2. 20202) 摘 要
目录 CONTENTS 24 2014年第12期 对话 Dialogue 技术与质量是GE植根中国的基础 专访 GE 可再生能源业务全球副总裁安妮 麦肯蒂 26 对话 Dialogue 自动润滑系统能更好适应海上风电润滑维护 专访华锐风电上海东海大桥现场经理余晓明 28 封面 Cover Artic
From The Editor 卷 首 语 开 启 能 源 革 命 新 时 代 文 秦 海 岩 回 顾 过 去 的 2014 年, 国 内 外 能 源 领 域 发 生 了 很 多 大 事, 国 际 油 价 持 续 大 幅 下 滑,APEC 构 筑 亚 太 能 源 合 作 新 格 局, 中 美 达 成 气 候 减 排 协 议, 德 国 推 动 能 源 转 型, 都 成 为 吸 睛 的 爆 点 而 这
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