AS1201自动进样器

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2 目录 声明... 2 客户评价... 3 安全预防措施... 4 第 1 章简介 ELITE AAP 氨基酸分析系统 氨基酸基本常识 系统分析原理 分析系统特点 分析系统性能指标 正己烷萃取去除过量衍生试剂法 氮吹去除过量衍生试剂法 第 2 章安装 标准配置 可选配置 安装条件... 3 第 3 章氨基酸分析方法 主要试剂及配制方法 衍生方法 衍生方法 1 正己烷萃取去除过量衍生试剂 衍生方法 2 氮吹去除过量衍生试剂 色谱分离条件 典型分离谱图... 6 第 4 章注意事项 色谱柱 保护柱 色谱柱的保存 衍生过程注意事项 衍生物的稳定性... 5 第 5 章实际样品的氨基酸分析 游离氨基酸的参考测试方法 水解氨基酸的参考测试方法 实际样品测试谱图汇编

3 声明 本使用指南给用户提供了解 操作 维护依利特 Elite-AAP 氨基酸分析系统所需的相关指导 本使用指南内容如有更改, 恕不另行通知 依利特公司不对本解决方案及由此引出的任何商务和特殊用途承担责任 依利特公司对本解决方案中可能有的错误或与装置性能及材料使用有关内容而带来的意外伤害和问题不负任何法律责任 版权所有, 保留全部版权, 无出版者书面许可不得翻印此书之一部分或全部 使用前请仔细阅读该解决方案 2

4 客户评价 如果您有疑问 改进的建议或发现错误, 请与我们联系 您的评价将有助于我们提高说明书的质量 准确性以及编制 您可以通过以下方式与我们联系 电话 : 传真 : hplc.com 地址 : 大连市高新园区七贤岭学子街 2-2 号邮编 :

5 安全预防措施 当您安装 操作 保养和维修仪器时, 应遵守所有的安全预防措施, 否则将违反安全标准和仪器的设计用途 对于未遵守这些预防措施所引起的后果, 依利特公司将不承担任何责任 预防措施可能包括以下两类 : 警告 : 指示受伤或死亡危险 注意 : 指示可能损坏系统或设备的可能 4

6 第 1 章简介 1.1 Elite AAP 氨基酸分析系统 氨基酸是构成蛋白质的基本单位, 是生物 医药 卫生 农牧业 食品 饮料及饲料等行业生产和科研中必须的分析测试项目 由于氨基酸种类较多, 结构接近, 大部分没有紫外吸收或荧光响应, 使得氨基酸分析一直是高效液相色谱领域较难解决的问题之一 大连依利特分析仪器有限公司应用异硫氰酸苯酯 (PITC) 作为衍生试剂, 开发并推出氨基酸高效液相色谱 (HPLC) 柱前衍生分析的全套解决方案 衍生过程简单快速, 衍生产物单一, 稳定性可达 3 天 ; 具有较高灵敏度, 定量结果准确可靠 ; 而且分析成本低, 适合常规氨基酸的分析 Elite-AAP 氨基酸分析系统采用柱前衍生方法, 通过高精度二元梯度高效液相色谱系统, 提供精确的流动相组分控制, 配备专用 C18 键合固定相使 17 种氨基酸得到很好的分离, 并通过紫外检测器完成氨基酸的检测 以 P1201 二元高压梯度为基础的氨基酸分析系统如图 1-1 所示 图 1-1 系统实物图 1

7 1.2 氨基酸基本常识 氨基酸的定义 氨基酸 (Amino acid) 是即含有氨基又含有羧基的一类有机化合物的通称 是生物功能大分子蛋白质的基本组成单位, 是构成动物营养所需蛋白质的基本物质 氨基连在 α- 碳上的氨基酸称为 α- 氨基酸, 天然氨基酸均为 α- 氨基酸 在自然界中共有 300 多种天然氨基酸, 其中人体所必须的氨基酸有 21 种 氨基酸通过肽键连接起来成为肽与蛋白质, 是生物体的基础营养物质 某些氨基酸除可形成蛋白质外, 还参与一些特殊的代谢反应, 表现出某些重要特性 其结构式如图 1-2 所示 图 1-2 氨基酸结构式 其化学通式如图 1-3 所示 图 1-3 氨基酸化学通式 2

8 Elite AAP氨基酸分析系统用户使用指南 1.3 系统分析原理 采用反相色谱分离模式 反相色谱具有分离效率高 应用范围广 性能稳定等特点 是目前 HPLC 中 应用最为广泛的分离模式 专用的反相 C18 氨基酸分析柱对 17 种氨基酸都具有良好的选择性 系统分离 效果好 配备原装进口的 UNIGUARD 直联式保护柱套及保护柱芯 有效提 高色谱柱使用寿命 降低分析成本 图 1-4 为 Elite-AAP 氨基酸专用分析柱及保护柱的实物图 图 1-4 Elite-AAP 氨基酸专用分析柱及保护柱 1) Hypersil ODS2 专用保护柱芯 10mm 4.0mm i.d. 2) UNIGUARD 直联式保护柱套 3) Elite-AAP 氨基酸专用分析柱 250mm 4.6mm i.d. 采用二元高压梯度输液系统 3

9 利用自主设计研发的系统软硬件, 精确控制梯度输液比例, 能提供极高的梯度准确性, 确保了 17 种基本氨基酸色谱峰的良好分离 图 1-5 是依利特 P1201 二元梯度系统, 进行 10% 台阶增量的测试结果, 测量值与设定值的偏差小于 1%, 说明仪器具有可靠的输液准确性 Signal (mv) Time (min) 图 % 台阶增量梯度测试谱图 采用异硫氰酸苯酯 (PITC PITC) 作为柱前衍生试剂 4

10 目前最为常用的氨基酸分析方法是在分离之前使氨基酸与带疏水性基团的衍生试剂反应生成利于在反相柱上保留 分离的化合物, 经柱分离后, 通过相应的检测器定性 定量, 即柱前衍生法 Elite-AAP 氨基酸分析系统采用异硫氰酸苯酯 (PITC) 作为柱前衍生试剂, 在碱性条件下氨基酸与 PITC 反应生成具有紫外吸收的苯氨基硫代甲酰胺 (PTC) 衍生物, 再进行分离与检测 该种衍生方法不仅操作简单, 衍生产物稳定, 且样品定性 定量准确 其缺点是衍生试剂对色谱柱寿命有影响, 胱氨酸线性不好 具体反应方程式如图 1-6 所示 N C S + H 2 N CHR C O - ph=9~10 O H N S CH H O N CHR C O - 图 1-6 氨基酸衍生反应方程式 5

11 1.4 分析系统特点 两种衍生方法 正己烷萃取和氮吹两种去除过量 PITC 的方法, 两种衍生方法均经过系统验证, 方法准确性和重复性良好 客户可根据分析要求进行选择 正己烷萃取去除 PITC 方法操作简便省时 氮吹去除 PITC 方法检测灵敏度高, 同时可以根据分析要求, 减小富溶体积, 进一步提高检测灵敏度 分离效果好 PITC 柱前衍生与梯度程序结合能够很好地分离 17 种氨基酸 极好的系统稳定性 系统稳定性好, 连续七次进样,17 种氨基酸的保留时间 RSD 0.40%, 峰面积 1.0% 环境污染小 衍生体系只有 400µL, 试剂用量极小, 将环境污染降至最低 仪器成本低 柱前衍生与配置常规紫外检测器的 HPLC 系统检测, 不需附加设备, 降低了成本 一机多用 该氨基酸分析系统能够作为常规 HPLC 系统使用 运行成本低 缓冲盐和有机溶剂作流动相, 不需要特殊试剂, 衍生试剂用量小, 使得分析成本非常低 有力的技术支持 公司的色谱仪器专家和分析化学专家为用户提供可靠的技术支持 6

12 1.5 分析系统性能指标 正己烷萃取去除过量衍生试剂法 线性相关性 表 1-1 氨基酸线性相关性 氨基酸 线性方程 线性相关系数 (R) 天冬氨酸 y = 2, x 谷氨酸 y = 2, x 丝氨酸 y = 2, x 甘氨酸 y = 2,949.92x 组氨酸 y = 2, x 精氨酸 y = 2,879.73x 苏氨酸 y = 2, x 丙氨酸 y = 2, x 脯氨酸 y = 5, x 酪氨酸 y = 3, x 缬氨酸 y = 3, x 蛋氨酸 y = 3, x 异亮氨酸 y = 1.23 x 亮氨酸 y = x 苯丙氨酸 y = x 赖氨酸 y = 5, x

13 方法重复性 17 种氨基酸低 中 高 3 个浓度水平均具有良好的重复性 表 1-2 分析方法重复性 (n=5) 氨基酸 峰面积 RSD(%) 0.025µmol/mL 0.25µmol/mL 1.0µmol/mL 天冬氨酸 谷氨酸 丝氨酸 甘氨酸 组氨酸 精氨酸 苏氨酸 丙氨酸 脯氨酸 酪氨酸 缬氨酸 蛋氨酸 异亮氨酸 亮氨酸 苯丙氨酸 赖氨酸

14 方法准确性 表 1-3 分析方法准确性 加标浓度 0.25µmol/mL,n=5 氨基酸 加标回收率 (%) 天冬氨酸 谷氨酸 丝氨酸 甘氨酸 组氨酸 精氨酸 苏氨酸 丙氨酸 脯氨酸 酪氨酸 缬氨酸 蛋氨酸 异亮氨酸 亮氨酸 苯丙氨酸 赖氨酸

15 系统稳定性 柱前衍生与依利特 HPLC 系统和色谱工作站控制软件结合, 使在梯度条件下也可提供高重现性的分离结果, 确保氨基酸的完美分离 表 1-4 保留时间及峰面积的重现性 (n=7) 氨基酸 保留时间 RSD(%) 峰面积 RSD(%) 天冬氨酸 谷氨酸 丝氨酸 甘氨酸 组氨酸 精氨酸 苏氨酸 丙氨酸 脯氨酸 酪氨酸 缬氨酸 蛋氨酸 异亮氨酸 亮氨酸 苯丙氨酸 赖氨酸

16 最低测试浓度 以 Asp 为例, 最低测试浓度为 mol/l 11

17 1.5.2 氮吹去除过量衍生试剂法 线性相关性 表 1-5 氨基酸线性相关性 氨基酸线性方程线性相关系数 (R) 天冬氨酸 y = 7, x 谷氨酸 y = 7, x 丝氨酸 y = 8, x 甘氨酸 y = 8, x 组氨酸 y = 7, x 精氨酸 y = 5, x 苏氨酸 y = 5, x 丙氨酸 y = 12, x 脯氨酸 y = 8, x 酪氨酸 y = 8, x 缬氨酸 y = 8, x 蛋氨酸 y = 9, x 异亮氨酸 y = 8, x 亮氨酸 y = 9, x 苯丙氨酸 y = 8, x 赖氨酸 y = 16, x

18 方法重复性 富溶体积为 400µL 和 100µL 时方法重复性均良好 表 1-6 分析方法重复性 (n=5) 峰面积 RSD(%) 氨基酸 400µL 100µL 天冬氨酸 谷氨酸 丝氨酸 甘氨酸 组氨酸 精氨酸 苏氨酸 丙氨酸 脯氨酸 酪氨酸 缬氨酸 蛋氨酸 胱氨酸 异亮氨酸 亮氨酸 苯丙氨酸 赖氨酸

19 方法准确性 表 1-7 分析方法准确性 加标浓度 0.25µmol/mL,n=5 氨基酸 加标回收率 (%) 天冬氨酸 谷氨酸 丝氨酸 甘氨酸 组氨酸 精氨酸 苏氨酸 丙氨酸 脯氨酸 酪氨酸 缬氨酸 蛋氨酸 异亮氨酸 亮氨酸 苯丙氨酸 赖氨酸

20 最低测试浓度 以 Asp 为例, 最低测试浓度为 mol/l 15

21 第 2 章安装 2.1 标准配置 在安装 Elite-AAP 氨基酸分析系统之前, 请您仔细对照装箱单检查是否有遗漏的配件 如果缺少其中的一种或几种, 请您尽快与大连依利特分析仪器有限公司或当地经销商联系 表 2-1 Elite-AAP 氨基酸分析系统标准配置表 ( 以产品装箱单为准 ) 订货号名称数量 1 本 P1201 高压高压恒流泵 2 台 UV1201 紫外 - 可见检测器 1 台 ZWⅡ 型色谱柱恒温箱 1 套 Elite AAP 氨基酸专用色谱柱 1 支 专用保护柱套 1 个 或 专用保护柱芯 2 个 氨基酸试剂盒 1 套 氨基酸试剂盒组分如表 2-2 所示 表 2-2 氨基酸试剂盒组分表订货号名称规格数量 种氨基酸标准品 1mL 10/ 盒 1 盒 流动相 B 固体组分 100g/ 瓶 1 瓶 氨基酸衍生化试剂 10mL 1 瓶 1

22 2.2 可选配置 表 2-3 Elite-AAP 氨基酸分析系统可选配置表序号名称数量 1 氮吹仪 1 套 2 涡旋混合器 1 套 3 溶剂过滤装置 1 套 4 流动相超声装置 1 套 μm 针孔式微孔滤膜 1 套 6 5mL 水解用安瓿瓶 50 支 7 封口膜 1 卷 2

23 2.3 安装条件 为了正常 安全的使用 Elite-AAP 氨基酸分析系统, 必须注意以下注意事项 : 排风和防火 使用易燃或有毒溶剂时, 要保证室内有良好的通风 ; 当使用易燃溶剂时, 室内禁止明火 安装位置 为了使您的分析系统拥有较长的使用寿命, 请按下述原则选择合适的安装位置 : 必须避开腐蚀性气体和大量的灰尘 避免直接有热或冷源的地方 房间内相对湿度应低于 80% 系统应安装在平稳 无震动的坚固台面上 ; 作业面积至少有 5 平方米 3

24 第 3 章氨基酸分析方法 3.1 主要试剂及配制方法 0.2mol/L 异硫氰酸苯酯的乙腈溶液 准确移取 0.24mL 异硫氰酸苯酯至 10mL 容量瓶中, 用乙腈定容至刻度 mol/L 三乙胺的乙腈溶液 转却移取 1.45mL 三乙胺至 10mL 容量瓶中, 用乙腈定容至刻度 警告 异硫氰酸苯酯对眼和皮肤有刺激性 口服可致死亡 本品可燃, 有毒, 具刺激性 应急处理方法 皮肤接触 : 脱去污染的衣着, 用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤 眼睛接触 : 提起眼睑, 用流动清水或生理盐水冲洗 就医 吸入 : 迅速脱离现场至空气新鲜处 保持呼吸道通畅 如呼吸困难, 给输氧 如呼吸停止, 立即进行人工呼吸 就医 食入 : 就医 1

25 17 种氨基酸标准品 使用衍生方法 1(3.2.1) 时, 将氨基酸标准品稀释 5 倍使用 使用衍生方法 2(3.2.2) 时, 将氨基酸标准品稀释 10 倍使用 流动相 A 乙腈 - 甲醇 - 水 (60:20:20), 超声脱气 10~15min 流动相 B 准确称取流动相 B 固体组分 2.05g, 置于 1000 ml 烧杯中, 加水约 950mL, 用冰乙酸调 ph 至 6.5±0.05, 加水定容至 1000mL, 摇匀, 用 0.45μm 微孔滤膜过滤, 超声脱气 10~15min 2

26 3.2 衍生方法 衍生方法 1 正己烷萃取去除过量衍生试剂 精密量取氨基酸标准溶液 ( 或样品溶液 )200μL, 置一 5mL 塑料离心管中 精密加入 1.0mol/L 三乙胺乙腈溶液 100μL,0.2mol/L 异硫氰酸苯酯乙腈溶液 100μL, 涡旋混合 10s, 室温放置 1h 加入 0.6mL 正己烷, 漩涡 1min, 静置 10min 吸取下层溶液, 用 0.05mol/L 乙酸钠水溶液稀释 4 倍 10μL 进样分析 适用样品 : 氨基酸含量较高的样品 衍生方法 2 氮吹去除过量衍生试剂 精密量取氨基酸标准溶液 ( 或样品溶液 )200μL, 置一 1.5mL 塑料离心管中 精密加入 1.0mol/L 三乙胺乙腈溶液 100μL,0.2mol/L 异硫氰酸苯酯乙腈溶液 100μL, 涡旋混合 10s,10000rpm 离心 1min, 室温放置 1h 氮吹至干 加入 400µL 0.05mol/L 乙酸钠水溶液, 涡旋 1min 可根据灵敏度要求减小富溶体积, 最小可减至 100µL 10μL 进样分析 适用样品 : 氨基酸含量较低的样品 3

27 注意 衍生化比例, 不得随意更改, 否则会影响定量准确性 注意 进样量不得随意更改, 否则会影响关键峰对的分离效果 警告 进行样品衍生操作请务必做好以下防护措施 防护措施 眼睛防护 : 戴化学安全防护眼镜 身体防护 : 穿防毒物渗透工作服 手防护 : 戴橡胶手套 4

28 3.3 色谱分离条件 色谱柱为依利特公司 Elite AAP 氨基酸分析专用色谱柱 ; 柱温 :38 ; 采用二元梯度分析, 梯度程序如表 3-1 所示 ; 流动相总流量为 1.0mL/min; 检测波长 :254nm; 进样量 :10μL 表 3-1 梯度程序 序号 时间 (min) 流动相 A(%) 流动相 B(%) Composition (%) A Time (min) 图 3-1 氨基酸分析系统二元梯度程序示意图 5

29 3.4 典型分离谱图 图 3-2 是采用 Elite-AAP 氨基酸分析方法得到的 17 种基本氨基酸分离谱图, 由图可见,17 种氨基酸得到较好的分离, 完全满足氨基酸的定性和定量要求 Signal (mv) Retention time (min) 图 3-2 氨基酸典型分离谱图 1. Asp 天冬氨酸 ;2. Glu 谷氨酸 ;3. Ser 丝氨酸 ;4. Gly 甘氨酸 ;5. His 组氨酸 ;6. Arg 精氨酸 ;7. Thr 苏氨酸 ;8. Ala 丙氨酸 ;9. Pro 脯氨酸 ;10. Tyr 酪氨酸 ;11. Val 缬氨酸 ;12. Met 蛋氨酸 ;13. Cys 胱氨酸 ;14. Ile 异亮氨酸 ; 15. Leu 亮氨酸 ;16. Phe 苯丙氨酸 ;17. Lys 赖氨酸 6

30 第 4 章注意事项 4.1 色谱柱 Elite-AAP 氨基酸分析专用色谱柱具有极好的批间重复性和稳定性, 能够保证用户分析结果的高度可靠性 氨基酸 PITC 衍生物在 ODS 固定相上的保留强弱与分离效率不仅与 ODS 固定相表面 C18 官能团的键合量 键合所用单体的性质 键合反应催化剂 溶剂等条件有关, 同时与固定相所用硅胶微球的宏观和微观性质如粒度分布 平均孔径及孔径分布 孔容 比表面积 金属杂质含量等因素有关, 不同品牌的 ODS 固定相上, 氨基酸的分离情况会有很大差异, 更为重要的是氨基酸的出峰顺序发生变化, 导致分析结果的极大差异 新色谱柱第一次使用缓冲盐, 需充分平衡, 时间至少 1h 以上, 氨基酸样品前几次进样精氨酸和苏氨酸两个色谱峰分不开是正常现象, 随进样次数增加, 二者分离度逐渐增大, 至实现基线分离 1

31 4.2 保护柱 在分析氨基酸这类复杂样品时, 样品及衍生试剂往往容易对色谱柱造成不可逆的损伤, 致使色谱柱失效, 最常见的情况是柱塌陷 为了避免在色谱分离过程中由于流动相或样品中部分盐 杂质等对色谱柱的破坏,HPLC 分析中多采用在分析色谱柱前连接一相同性质的保护柱, 保护柱能够有效延长色谱柱寿命, 保证分离工作的稳定性, 降低分离成本 Elite-AAP 氨基酸分析系统配备了原装进口的 UNIGUARD 直联式保护柱 一支保护柱芯的使用寿命约为 100 针, 请客户随时留意色谱柱使用过程中色谱峰参数的变化 若发现谱峰明显展宽, 请及时更换保护柱芯, 以免造成对分析柱的损伤 2

32 4.3 色谱柱的保存 由于分析流动相为含盐溶液的有机溶剂, 该溶剂长期存留在色谱柱中会导致色谱固定相的破坏, 建议用户在分析工作结束之后用一定浓度的甲醇与水的混合溶剂冲洗色谱柱后储存 冲洗色谱柱的每一种流动相体积不小于 30mL 若次日继续进行氨基酸分析 建议采用 20% 乙腈 / 水冲洗色谱柱 40min, 保存过夜 若较长时间不进行氨基酸分析 建议先用 20% 左右乙腈水溶液冲洗色谱柱, 然后用 80~100% 乙腈溶剂冲洗色谱柱后储存 连续进行氨基酸分析 由于衍生试剂对色谱柱有损伤, 连续实验室建议每隔 3 天用纯乙腈冲洗色谱柱 1h 以上 3

33 4.4 衍生过程注意事项 严格按照衍生方法操作 衍生液必须用涡旋混合器混匀, 否则天冬氨酸和谷氨酸色谱峰前有杂质峰 为保证衍生过程重复性, 正己烷萃取或富溶时涡旋时间用秒表计时 衍生用试剂保存于冰箱, 衍生前恢复至室温 衍生用试剂配制后, 使用时间为半个月 三乙胺 正己烷 缓冲盐分析纯即可, 高纯度更佳 PITC 纯度 >98% 4

34 4.5 衍生物的稳定性 同一样品, 连续 3 天进样, 每天进样 3 次, 计算各氨基酸 9 次进样峰面积的 RSD 值 结果表明衍生产物至少在 3 天内具有很好的稳定性 表 4-1 衍生产物稳定性 氨基酸 峰面积 RSD(%) 天冬氨酸 1.48 谷氨酸 1.36 丝氨酸 0.31 甘氨酸 0.62 组氨酸 1.96 精氨酸 0.73 苏氨酸 0.80 丙氨酸 0.46 脯氨酸 1.06 酪氨酸 0.94 缬氨酸 1.60 蛋氨酸 0.61 胱氨酸 6.63 异亮氨酸 1.56 亮氨酸 1.63 苯丙氨酸 1.08 赖氨酸 0.63 注意 衍生产物必须储存于冰箱中冷藏保存 5

35 第 5 章实际样品的氨基酸分析 5.1 游离氨基酸的参考测试方法 仪器与试剂 仪器 : 高速离心机, 氮吹仪 蛋白沉淀试剂 : 三氯乙酸 乙酸 乙醇 甲醇 乙腈 丙酮, 其中之一即可 其余仪器与试剂同氨基酸标准品 (3.1,3.2,3.3) 衍生分析方案 样品预处理 样品用 0.45μm 或 0.22μm 滤膜过滤, 滤液直接衍生, 例如啤酒, 果汁等 样品用水稀释 10 倍, 稀释后样品用 0.45μm 或 0.22μm 滤膜过滤, 滤液直接衍生, 例如黄酒 样品用 0.45μm 或 0.22μm 滤膜过滤, 取过滤后样品适量, 加入 4 倍体积的蛋白沉淀剂, 振荡均匀, 静置片刻 ; 离心 15min(10000r/min) 取样品上清液, 衍生, 例如酱油 醋等 1

36 样品衍生化 衍生方法 1 精密量取样品溶液 200μL, 置一 5mL 塑料离心管中 精密加入 1.0mol/L 三乙胺乙腈溶液 100μL,0.2mol/L 异硫氰酸苯酯乙腈溶液 100μL, 涡旋 10s 混匀, 室温放置 1h 加入 0.6mL 正己烷, 漩涡 1min, 静置 10min 吸取下层溶液, 用 0.05mol/L 乙酸钠水溶液稀释 4 倍,10μL 进样分析 衍生方法 2 精密量取样品溶液 200μL, 置一 1.5mL 塑料离心管中 精密加入 1.0mol/L 三乙胺乙腈溶液 100μL,0.2mol/L 异硫氰酸苯酯乙腈溶液 100μL, 涡旋混合 10s,10000rpm 离心 1min, 室温放置 1h 氮吹至干 加入 400µL 0.05mol/L 乙酸钠水溶液, 涡旋 1min 可根据灵敏度要求减小富溶体积, 最小可减至 100µL 10μL 进样分析 2

37 5.2 水解氨基酸的参考测试方法 仪器与试剂 仪器 : 烘箱, 酒精灯, 氮吹仪 试剂 :6mol/L 盐酸, 浓盐酸与水 1:1(v/v) 配制 其余仪器与试剂同氨基酸标准品 (3.1,3.2,3.3) 衍生分析方案 样品预处理 取适量样品 ( 根据样品氨基酸含量确定, 样品溶液中氨基酸总量应小于 0.02mol/L)( 若待处理样品为块状固体, 需先用粉碎设备粉碎 ), 置于 5mL 安瓿瓶中, 加入 3mL 6mol/L 盐酸 酒精灯高温拉丝封口, 放入烘箱中 110±3 水解 24h 水解后样品氮吹至干, 并用水充分洗涤安瓿瓶, 合并洗涤液, 定容至 25mL 容量瓶中, 待衍生 样品衍生化 同游离氨基酸 注意 实际样品处理量, 以衍生用样品溶液中氨基酸总量应小于 0.02mol/L 为宜, 样品中蛋白含量在 10-40mg 之间 3

38 5.3 实际样品测试谱图汇编黄酒中游离氨基酸 Ala 200 Gly Pro Signal (mv) Glu Asp Ser Arg Aba His Thr Tyr Val Ile Leu Phe Trp Lys Retention time (min) 样品处理 : 取 1.0mL 黄酒样品, 加水稀释至 10mL, 用 0.45μm 或 0.22μm 滤膜过滤, 取 200µL 滤液衍生 啤酒中游离氨基酸 Pro Signal (mv) AspGlu Ala Arg Thr Gly His Try Val Retention time (min) Trp Phe Lys 样品处理 : 样品用 0.45μm 或 0.22μm 滤膜过滤, 取 200µL 滤液衍生 4

39 酱油中游离氨基酸 Hyp Signal (mv) Glu Pro Val Ile Leu Phe Retention time (min) 样品处理 : 取 0.5mL 样品, 加入 2mL 乙腈, 涡旋 20s, 离心 (10000 转 /min)15min, 取上清液, 衍生 蛋白质粉中水解氨基酸 Glu Pro Lys Signal (mv) Asp Ser Gly His Ala Arg Thr Tyr Val Met Cys Ile Retention time (min) Leu Phe 样品处理 : 准确称取适量样品, 置于 5mL 安瓿瓶中, 加入 3mL 6mol/L 盐酸, 酒精灯高温拉丝封口, 放入烘箱中 110±3 水解 24h, 水解后样品氮吹至干, 并用水充分洗涤安瓿瓶, 合并洗涤液, 定容至 25mL 容量瓶中, 取已过滤的样品液 200µL, 衍生 5

40 全脂奶粉中水解氨基酸 Signal (mv) Asp Glu Ser Pro Gly Thr His Ala Arg Tyr Val Met Ile Cys Retention time (min) Leu Lys Phe 样品处理 : 同上 牛奶中水解氨基酸 Glu Pro leu Phe Lys Signal (mv) Asp Ser Thr Gly Arg His Tyr Val Met Ile Retention time (min) 样品处理 : 同上 6

41 大连依利特分析仪器有限公司公司地址 : 大连市高新园区七贤岭学子街 2-2 号公司电话 : ( 总机 ); 客户服务专线 : (Elite) 公司传真 : 公司邮箱 :info@elitehplc.com 公司网址 : [ DEAIC 12]

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