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1 第 34 卷第 5 期西南大学学报 ( 自然科学版 ) 2012 年 5 月 Vol.34 No.5 JournlofSouthwestUniversity (NturlScienceEdition) My 2012 文章编号 : (2012) 高效液相色谱法测定苏丹红的研究 张洁, 黄玉明 西南大学化学化工学院, 三峡库区生态环境教育部重点实验室, 重庆 摘要 : 建立了一种简单 快速的基于高效液相色谱分离的测定苏丹红的方法. 探讨了流动相组成 流速 柱温等对苏丹红分离的影响, 优化后的苏丹红分离条件为 : 流动相为 100% 甲醇, 流速为 1.0 ml/min, 柱温为 30. 测定苏丹红 Ⅰ~Ⅳ 的线性范围为 0.01~40mg/L, 相对标准偏差均小于 5%, 检出限在 0.01~0.02mg/L 之间. 用于实际水样和食品中苏丹红的分析获得满意结果. 关键词 : 高效液相色谱 ; 苏丹红 ; 环境分析 ; 食品分析中图分类号 :O657 文献标志码 :A [1] 苏丹红是一种人工合成的染料, 广泛用于如溶剂 油 蜡 汽油的增色以及鞋 地板等的增光. 苏丹 红是亲脂性偶氮苯化合物, 主要包括 Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ 和 Ⅳ 4 种类型, 由于具有潜在的致癌性, 中国和欧盟都禁止 [2] 将其作为食品添加剂. 但因苏丹红成本低 着色性好, 仍被很多商家非法使用, 食品中检测出苏丹红的 报道时有发生, 因此有必要建立简单 快速 高效的苏丹红分析检测方法. 目前测定苏丹红的方法主要是 高效液相色谱法 [3-7], 此外还有各种电化学法 毛细管电泳法 免疫分析法 化学发光分析以及等离子体共 [8-11] [12-14] 振光散射法等. 电化学法需要预处理 ; 而以往报道的高效液相色谱法均使用乙腈作为流动相, 成 本较高, 且样品的处理过程较为复杂. 本文利用廉价的甲醇作为流动相建立了一种高效快速的色谱分析方 法, 检测速度快, 检出限低, 实现了对苏丹红混合物 ( 包括苏丹红 Ⅰ-Ⅳ) 的分离分析, 成功应用于环境水样 和食品中苏丹红的分析测定, 并且样品处理过程简单 快速. 1 实验部分 1.1 实验材料与仪器 高效液相色谱仪 (JscoLC-2000, 日本东京 ); 分析柱为 HypersilODS 柱 (150 mm 4.6 mm,5μm) (Wters 公司, 美国 ). 苏丹红单标储备液由通过将苏丹红化合物溶解于甲醇中配制而得, 质量浓度为 100 mg/l, 混合标准溶液由单标储备液稀释得到, 其中苏丹红 Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ 和 Ⅳ 的质量浓度分别为 1,1, 2,4 mg/l; 色谱纯甲醇 (SchrluChemieS.A.,Spin.); 其它试剂均为分析纯. 1.2 实验条件 在以下条件下进行实验 : 流动相为 100% 甲醇, 流速为 1.0mL/min, 柱温为 30, 进样量 20μL, 分 离后的目标物用 UV 检测, 检测波长为 506nm. 1.3 实际水样分析 本实验中选择两种水样作为实际样品, 分别为自来水水样和嘉陵江水样. 自来水水样采自实验室, 嘉 1 收稿日期 : 基金项目 : 重庆市科技攻关资助项目 (CSTC,2009AB7028). 作者简介 : 张洁 (1986 ), 女, 山西吕梁人, 硕士研究生, 主要从事环境分析研究.

2 第 5 期张洁, 等 : 高效液相色谱法测定苏丹红的研究 47 陵江水样采自于嘉陵江重庆北碚段. 所有水样分析之前均用 0.45μm 滤膜抽滤, 于 4 条件下保存. 1.4 食品分析实验中所用食品样品 辣椒粉和番茄酱购于超级市场. 处理方法如下 : 首先称取 1.0g 样品置于 10 ml 离心管中, 再加入 5 ml 无水乙醇, 振荡 15 min 使其混合均匀, 离心分离, 取上清液分析. 2 结果与讨论 2.1 色谱分离条件优化 流动相组成对色谱分离的影响分别选取甲醇所占的体积比为 95%,98%,100%, 考察对苏丹红 Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ 和 Ⅳ 混合物分离效果的影响. 结果表明甲醇比例为 95% 时, 苏丹红 Ⅰ 与体系中的杂质峰相重叠, 且分离时间较长. 随着甲醇的比例升高,4 种苏丹红得到了很好的分离, 且出峰时间缩短, 故实验选择甲醇的比例为 100%. 色谱条件 : 流速为 1.0mL/min; 柱温为 苏丹红 Ⅰ ;2. 苏丹红 Ⅱ ;3. 苏丹红 Ⅲ ;4. 苏丹红 Ⅳ. 图 1 甲醇比例对苏丹红色谱分离影响 流速的影响 试验了流动相的流速分别为 0.6,0.8,1.0,1.2 ml/min 时对分离的影响. 当流速为 0.6 ml/min 时, 苏丹红的分离时间为 16min. 当流速增加至 1.0,1.2mL/min 时, 分离时间也随之降低, 分别为 8,6 min.

3 48 西南大学学报 ( 自然科学版 ) htp://xj.swu.cn 第 34 卷 但当流速过大时, 色谱柱的压力也会随之增大, 对色谱柱的使用寿命极为不利. 因此综合考虑以上因素, 本实验选择 1.0mL/min 作为最优流速 柱温的影响 试验了 25,30,40,50 的柱温对分离的影响. 当柱温为 25 时, 苏丹红的分离时间为 10min. 随着柱 温升至 50, 分离时间可缩短为 5min, 但当柱温过高时, 重现性变差, 而且可能会影响色谱柱的寿命. 综 合以上因素, 本实验选择 30 作为最佳柱温. 2.2 方法分析特性 在上述优化条件下测定苏丹红混合物, 线性范围为 0.01~40 mg/l, 测定苏丹红 Ⅰ 苏丹红 Ⅱ 苏丹 红 Ⅲ 及苏丹红 Ⅳ 的相对标准偏差 (RSD) 分别为 1.39%,1.03%,0.43%,0.45%, 均小于 5%, 检出限在 0.01~0.02mg/L 之间 ( 表 1). 化合物 线性范围 表 1 线性关系及检出限 RSD 线性方程 R 2 (n=6) 检出限 苏丹红 Ⅰ y=1.34x 苏丹红 Ⅱ y=1.29x 苏丹红 Ⅲ y=1.09x 苏丹红 Ⅳ y=1.45x 实际水样中苏丹红的分析 在优化的苏丹红色谱分离条件下, 对已处理的自来水水样及嘉陵江水样进行测定, 实验结果见表 2. 从表 2 可以看出, 自来水水样和嘉陵江水样中均未检测出苏丹红染料, 所测定的实际水样中苏丹红的加标 在 71.4%~109.6% 之间. 表 2 实际水样中苏丹红的测定结果 化合物名称 (A) 自来水水样 (B) 嘉陵江水样 苏丹红 Ⅰ 苏丹红 Ⅱ 苏丹红 Ⅲ 苏丹红 Ⅳ ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±2.9 注 :.3 次测量平均值 ;.3 次测量平均值 ± 标准偏差. 2.4 食品中苏丹红的分析在优化的苏丹红色谱分离条件下, 对已经过预先处理的食品进行分析测定, 实验结果见表 3. 从表 3 可以看出, 所测定的食品中未检出苏丹红, 食品中苏丹红的加标在 73.7%~110.9% 之间.

4 第 5 期张洁, 等 : 高效液相色谱法测定苏丹红的研究 49 表 3 食品中苏丹红的测定结果 (A) 辣椒粉 (B) 番茄酱 化合物名称 苏丹红 Ⅰ 苏丹红 Ⅱ 苏丹红 Ⅲ 苏丹红 Ⅳ ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ±1.3 注 :.3 次测量平均值 ;.3 次测量平均值 ± 标准偏差. 2.5 结论建立了一种苏丹红的快速液相色谱分离分析方法, 实现了对苏丹红 Ⅰ~Ⅳ 混合物的分离分析, 用于实际水样和食品中苏丹红的分析获得了较为满意的结果. 参考文献 : [1] VANESSAC,YASMINEG,GOEDELE M,etl.DevelopmentofFstAnlyticlMethodfortheDetermintionof SudnDyesinChilindCurry-ContiningFoodstufsy HigẖPerformnceLiquidChromtogrphy-Photodiode Arry Detection [J].JAgrFoodChem,2006,54: [2] ZHANG Yu-ping,ZHANG Yi-jun,GONG Weṉjun,etl.RpidSeprtionofSudnDyesyReverse-PhseHighPeṟ formnceliquid Chromtogrphy Through Sttisticly Designed Experiments [J].J Chromtogr A,2005,1098: [3] FAN Yuṉchng,CHEN Meiḻn,CHAO Sheṉtu,etl.IonicLiquidsExtrctionofPrRedndSudnDyesfrom ChiliPowder,ChiliOilndFoodAdditiveCominedwith HighPerformnceLiquidChromtogrphy [J].AnlChim Act,2009,650: [4] LIC,WU YL,SHENJZ.UPLC-ESI-MS/MSAnlysisofSudnDyesndPrRedinFood[J].FoodAdditContm, 2010,27(9): [5] QIAOJiṉdong,YAN Hong-yun,WANG Hui,etl.SimultneousDetermintionofFourSudnDyesinEggYolksy MoleculrlyImprintedSPECoupledwithLC-UV Detection [J].Chromtogrphi,2011,73: [6] BESSONONV V V,PEREDERIAEV OI,KHROMCHENKOVA EP,etl.SelectionoftheOptimlMethodofExtrctionndDetermintionofDyeSudnⅠ-Ⅳ ndprredyhigẖperformnceliquidchromtogrphy[j].voprosy Pitniy,2010,79(2): [7] WU Yiṉling,LICun,XIA Xi,etl.DevelopmentndVlidtionofConfirmtoryHPLC MethodforSimultneous DetermintionofSudnDyesinAnimlTissuesndEggs[J].JChromtogrSci,2010,48(1): [8] RIN R,IVO L,SERGEIY,etl.A ReviewofAnlyticlTechniquesforDetermintionofSudn Ⅰ-Ⅳ DyesinFood Mtrixes[J].JChromtogrA,2010,1217: [9] YANG Xio-feng,HEDi-hu.RpidDetermintionofBnnedSudn ⅠinFoodstufsUsing MesoporousSiO2 Modi-

5 50 西南大学学报 ( 自然科学版 ) htp://xj.swu.cn 第 34 卷 fiedelectrode[j].foodcomposaddit,2010,93(5): [10]XIAOFei,ZHANGNingḏn,GU Hong-jie,etl.A MonoclonlAntiody-BsedImmunosensorforDetectionofSudn Ⅰ UsingElectrochemiclImpednceSpectroscopy[J].Tlnt,2011,84: [11]CHAILAPAKUL O,WONSAWAT W,SIANGPROH W,etl.AnlysisofSudnⅠ,SudnⅡ,SudnⅢ,ndSudn ⅣinFoodyHPLC withelectrochemicldetection:comprisonofglssycronelectrodewithcronnnotue-ionicliquidgelmodifiedelectrode[j].foodchem,2008,109(4): [12] 张裕平, 张毅军, 袁倬斌, 等. 高效液相色谱法测定红辣椒制品中的苏丹红 [J]. 生命科学仪器,2005,3(3): [13] 李兰, 杨曙明, 索德成, 等. 高效液相色谱法测定饲料中的苏丹红 Ⅰ~Ⅳ [J]. 食品安全,2009,45(14): [14] 李勇竞. 高效液相色谱法快速测定辣椒酱中的苏丹红 [J]. 安徽预防医学杂志,2010,16(5): DetermintionofSudnDyesy High-PerformnceLiquidChromtogrphy ZHANG Jie, HUANG Yu-ming SchoolofChemistryndChemiclEngineering,theKeyLortoryoftheThreeGorgesReservoirRegion seco-environments, SouthwestUniversity,MinistryofEduction,Chongqing400715,Chin Astrct:Asimplendrpidhigẖperformnceliquidchromtogrphicmethodwsdevelopedforthenḻ ysisofsudndyesinthepresentstudy.theefectsofthecompositionofthemoilephse,flowrtend columntempertureonsudndyeseprtionweretestedndtheoptimlseprtionconditionswereoḇ tinedsfolows:100% methnolsthemoilephse,theflowrteof1.0ml/minndthecolumntempertureof30.thelinerrngesforsudni~iv were mg/l withnrsdoflessthn5% ndlimitofdetectionof mg/l.theproposedmethodhseensuccessfulyppliedtothenlysisofsudndyesinnturlwterndfoodstufswithstisfctoryresults. Keywords:HPLC;Sudndye;environmentnlysis;foodnlysis 责任编辑 潘春燕

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