人肺腺癌厄洛替尼耐药细胞系的建立及其特性钱静, 等 181 Keywords lung adenocarcinoma cell line was induced by continuously exposing human lung adenocarcinoma cell line to grad

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徵洽薛
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1 18 临床与病理杂志 J Clin Pathol Res 215, 35(6) doi: /j.issn View this article at: 人肺腺癌厄洛替尼耐药细胞系的建立及其特性钱静, 陈不尤, 刘贤称, 顾红梅, 姚宁华 ( 南通大学附属医院肿瘤放疗科, 江苏, 南通 2261) [ 摘要 ] 目的 : 构建厄洛替尼耐药人肺腺癌细胞模型, 观察单用人表皮生长因子受体 (epithelial growth factor receptor,egfr) 酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼或联合胰岛素样生长因子受体 1 (insulinlike growth factor receptor 1,IGF1R) 酪氨酸激酶抑制剂苦鬼臼毒 (picropodophyllotoxin,ppp) 作用于该细胞后, 该细胞对厄洛替尼耐药性的影响, 并探讨耐药相关机制方法 : 选择人肺腺癌细胞株, 采用逐步递增厄洛替尼浓度的方法体外诱导构建耐药株 CCK-8 法检测耐药指数 ; 细胞计数法绘制和的生长曲线, 并计算出两细胞系的倍增时间 ; 流式细胞术检测两细胞系的细胞周期 ;Western Blot 法检测 p-egfr 及 p-igf1r 的表达水平, 并进一步检测厄洛替尼及 PPP 单独或联合作用于后, 各组 Akt,ERK,p-Akt 及 p-erk 的表达水平结果 :/ ER 细胞株的耐药指数是 72.3 细胞生长曲线显示, 细胞生长较亲代细胞慢, 与 / ER 细胞的倍增时间分别为 32.9 及 36.9 h (P=.3) 与相比, 细胞的 G1 期细胞增多 (P=.1), 而 S 期细胞则明显下降 (P=.15) Western Blot 结果表明, 细胞中 p-igf1r 表达比亲代细胞明显增多 (P=.16), 而 p-egfr 无明显变化 (P=.152) 在亲代及耐药细胞系, 厄洛替尼联合 PPP 组均较其他组更能显著的抑制细胞增殖 (P<.5); 且 Western Blot 法表明联合用药组 EGFR 下游磷酸化的 Akt ERK 的表达水平明显减少结论 : 成功构建了人肺腺癌厄洛替尼耐药细胞株,IGF1R 通路可能与肺腺癌 EGFR-TKI 获得性耐药有关 [ 关键词 ] 非小细胞肺癌 ; 人表皮生长因子受体 ; 胰岛素样生长因子受体 1; 苦鬼臼毒 ; 厄洛替尼 Establishment and characterization of a erlotinib drug resistant variant of human lung adenocarcinoma cell line QIAN Jing, CHEN Buyou, LIU Xiancheng, GU Hongmei, YAO Ninghua (Department of Oncology, Affiliated Hospital of Nantong University, Nantong 2261, China) Abstract Objective: To establish a human lung adenocarcinoma cell line that is resistant to erlotinib; to observe the effect of erlotinib alone or in combination with PPP (a tyrosine kinase inhibitor of insulin-like growth factor receptor 1) on and to discuss its possible mechanism. Methods: A erlotinib resistant human 收稿日期 (Date of reception): 通信作者 (Corresponding author): 钱静, qianjingbyf26@163.com 基金项目 (Foundation item): 南通市科技项目资助 (BK21359) This work was supported by Nantong Science and Technology Project Foundation (BK21359), P. R. China.

2 人肺腺癌厄洛替尼耐药细胞系的建立及其特性钱静, 等 181 Keywords lung adenocarcinoma cell line was induced by continuously exposing human lung adenocarcinoma cell line to gradually increased doses of erlotinib. The drug resistant ability to erlotinib was measured by CCK-8 assay. The growth curve and cell cycle of and were compared. The expression of Akt, ERK, p-egfr, p-igf1r, p-akt and p-erk was measured by Western Blot in different groups. Results: The drug resistant index of to erlotinib was Double time of and were 32.9 and 36.9 h (P=.3), respectively, as evaluated by the growth curve. Figures in G1 phase was decreased in than (P=.1). The expression of p-igf1r significantly increased in (P=.16) but not p-egfr (P=.152). More significant inhibition of cell proliferation than other groups was observed in combination group that erlotinib combination with PPP (P<.5). The expression of p-akt and p-erk was decreased in combination group. Conclusion: The resistant cell model is established and IGF1R may associate with drug resistance to EGFR-TKI. non-small cell lung cancer; epithelial growth factor receptor (EGFR); insulin-like growth factor receptor 1 (IGF1R); picropodophyllotoxin; erlotinib 肺癌是临床最常见的恶性肿瘤之一, 也是目前对人类健康与生命构成威胁最大的恶性肿瘤在许多国家, 肺癌是首位的癌症致死原因, 给患者及家庭造成了极大痛苦肺癌由遗传和环境等诸多因素相互作用所致, 其发展是一个多步骤过程, 涉及大量基因结构和表达调控的改变目前研究的肺癌生物标志非常多, 如 :EGFR, VEGFR, PDGFR, C-KIT, PI3K, RAS/RAF/ MEK/ERK,mTOF,COX,IGF1R,PKC 等等 [1] 针对这些基因的靶向治疗在临床治疗中显示出了强大的优势, 大大提高了患者的生活质量及总生存期尤其是靶向 EGFR 药物如吉非替尼厄洛替尼等在肺腺癌治疗中最为成功但是研究显示 5% 的肺腺癌患者经过 EGFR-TKI 治疗有效 6~12 个月后出现获得性耐药其中一个机制就是抑制 EGFR 活性的信号通路下游发生了改变, 例如 IGF1R 途径的持续激活等, 但具体机制尚未见报道 [2-3] 因此有必要针对这些耐药原因寻找突破, 研究其机制, 进而寻找新的分子靶向治疗药物来延缓或阻断其耐药本研究选择人肺腺癌细胞株, 体外诱导构建厄洛替尼耐药株, 并进一步观察对照组厄洛替尼组 PPP (picropodophyllotoxin,ppp) 组厄洛替尼联合 PPP 组的细胞增殖情况 ;Western Blot 分析细胞中下游 Akt ERK 及 p-akt p-erk 表达情况, 探讨厄洛替尼耐药可能发生的机制 1 材料和方法 1.1 细胞及主要试剂人细胞购自上海博谷生物细胞所 ;164 培养基胎牛血清 (FBS) 胰酶均购自美国 Gibco 公司 ;CCK-8 试剂盒购自日本同仁公司 ; 细胞周期试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司 ;Akt ERK 及磷酸化 Akt ERK EGFR IGF1R 抗体均购自美国 sigma 公司 ;PPP 由南通大学附属医院临床研究中心馈赠 ; 厄洛替尼购自联科生物有限公司 PPP 及厄洛替尼溶解于 DMSO, 制成浓度为 1 μmol/l 的溶液, 分装后保存于 2 冰箱中备用实验时用培养液稀释至目标浓度, 使其 DMSO 体积分数 <.5% 1.2 细胞培养及耐药株的建立细胞培养 : 选择人肺腺癌细胞株, 细胞贴壁生长于含 1% 胎牛血清的 RPMI-164 完全培养基, 在 37 5% CO 2 饱和湿度培养箱中常规培养,2~3 天换液传代一次, 取对数生长期细胞做后续实验耐药株的建立 : 采用逐渐增加细胞培养基中厄洛替尼浓度的方法诱导耐药细胞的产生, 厄洛替尼的初始浓度为 1. μmol/l, 体外连续培养 4 周后, 耐药株稳定生长于终浓度 μmol/l 厄洛替尼在不含厄洛替尼的培养基中培养 8 周后耐药性仍维持稳定, 将该耐药细胞系命名为 1.3 CCK8 法检测细胞增殖及耐药情况 CCK8 法测定不同浓度厄洛替尼对肺腺癌细胞生长抑制作用 : 取对数生长期的细胞接种于 96 孔培养板内,24 h 后每孔分别加入含不同浓度的厄洛替尼, 培养 48 h 后向每孔加入 1 μl CCK-8 溶液, 继续培养箱孵育 2 h 后用酶标仪测定在 45 nm 处吸光度, 分析结果, 结果以存活率表示按下列公式计算肿瘤细胞存活率 : 肿瘤细胞存活率 =( 加药

182 临床与病理杂志, 215, 35(6) http://www.lcbl.net 细胞 OD 值一空白对照 OD 值 )/( 对照细胞 OD 值一空白对照 OD 值 ) 1% 每一项实验至少重复 3 次, 求出细胞存活率的平均值绘制药物浓度 - 细胞存活率曲线, 耐药指数 = 耐药细胞株厄洛替尼药物 IC5/ 亲代细胞株厄洛替尼药物 IC5 1.

增至 N T 所用的时间,N 为接种时的细胞数,N T 为培养 T 小时后的细胞数 1.5 细胞周期分析及细胞培养 24 h, 弃去 RPMI-164 完全培养基,PBS 洗涤 ; 胰酶消化, 收集细胞于离心管中, 预冷 PBS 洗 2 次, 弃 PBS; 加入 1 ml 预冷 7% 乙醇, 轻轻吹匀细胞,4 固定 24 h;1 g 5 min 离心弃上清,PBS 洗涤一次 ; 加入.

3 182 临床与病理杂志, 215, 35(6) 细胞 OD 值一空白对照 OD 值 )/( 对照细胞 OD 值一空白对照 OD 值 ) 1% 每一项实验至少重复 3 次, 求出细胞存活率的平均值绘制药物浓度 - 细胞存活率曲线, 耐药指数 = 耐药细胞株厄洛替尼药物 IC5/ 亲代细胞株厄洛替尼药物 IC5 1.4 细胞生长曲线的绘制将对数生长期的细胞经胰蛋白酶消化后制成 /ml 的单细胞悬液, 分别接种于 24 孔板, 1 ml/ 孔, 接种后第 1,3,5,7 天计数细胞, 每次各计数 3 孔, 求出其平均值, 绘制细胞生长曲线按 Patterson 公式计算细胞在对数生长期的倍增时间 :T d = Tlg2/lg (N T /N ),T d 为倍增时间 (h),t 为细胞数由 N 增至 N T 所用的时间,N 为接种时的细胞数,N T 为培养 T 小时后的细胞数 1.5 细胞周期分析及细胞培养 24 h, 弃去 RPMI-164 完全培养基,PBS 洗涤 ; 胰酶消化, 收集细胞于离心管中, 预冷 PBS 洗 2 次, 弃 PBS; 加入 1 ml 预冷 7% 乙醇, 轻轻吹匀细胞,4 固定 24 h;1 g 5 min 离心弃上清,PBS 洗涤一次 ; 加入.5 ml 碘化丙啶染色,37 避光静置 3 min, 流式细胞仪 488 nm 处检测红色荧光, 分析结果 1.6 Western Blot 分析细胞中 p-igf1r p-egfr AKT MEK 及 p-akt p-mek 的表达情况首先蛋白提取及 BCA 法蛋白浓度测定 : 六孔板中加入含 PMSF 的 RIPA 细胞裂解液, 冰上充分裂解,4 13 rpm 离心 1 min, 取上清即为细胞总蛋白根据 BCA 试剂盒操作说明测蛋白浓度 Western Blot 主要步骤包括洗板制胶电泳转膜封闭孵一抗孵二抗显像 1.7 统计学处理所有计量资料以均数 ± 标准差表示, 样本均数间的比较用 t 检验或方差分析, 方差分析先进行方差齐性检验, 方差相等时采用方差分析 ; 方差不齐时采用 Games-Howell 检验以 GrapPad Prism5. 统计绘图软件处理分析数据绘制图形, 以 SPSS 17. 统计软件求出 P 值, 以 P<.5 表示差异有显著性 2 结果 2.1 形态学改变倒置光学显微镜下可见, 亲代细胞生长良好, 形态规则, 大小一致, 透光性好 ; 在诱导耐药的过程中, 其形态出现不同程度变化, 形态各异, 大小不一, 透光性减弱 ( 图 1) 2.2 耐药株的建立及其耐药指数 CCK8 法测出的厄洛替尼药物 IC5 为 2.43 μmol/l, 而的厄洛替尼药物 IC5 为 μmol/l(p=.), 细胞的耐药指数是 72.3 的 PPP IC5 为 5.7 μmol/l, 的 PPP IC5 为 8.8 μmol/l 两细胞的生长曲线见图 2 A B 图 1 亲代和耐药细胞株的细胞形态图 ( 2) Figure 1 Cell morphology diagram of parental and resistant cell line ( 2) A: ; B:.

4 人肺腺癌厄洛替尼耐药细胞系的建立及其特性钱静, 等 183 Cell survival rate (%) Log Erlotinib Concentration (μmol/l) 2.3 细胞生长曲线及肿瘤倍增时间图 2 和的厄洛替尼药物浓度 - 细胞存活率曲线 Figure 2 Drug concentration-cell survival rate curve of and 细胞生长曲线显示, 两种细胞增殖存在一定差异细胞生长较亲代细胞慢, 其细胞倍增时间为 36.9 h, 与亲代 32.9 h 相比有延长 (P=.3) 两细胞的存活曲线见图 3 Cell number ( 1 4 ) Time (d) 图 3 和细胞的存活曲线 Figure 3 Survivl curve of and 2.4 细胞周期分析如图 4 及表 1 显示, 与相比, 细胞的 G 1 期细胞明显增多 (P=.1), 而 S 期细胞则明显下降 (P=.15),G2 期无明显变化 (P=.142) 2.5 和细胞中 p-egfr 及 p-igf1r 的表达 Western Blot 及表达半定量分析图见图 5A B, 结果表明, 细胞中 p-igf1r 表达比亲代细胞明显增多 (P=.16), 而 p-egfr 无明显变化 (P=.152) 2.6 厄洛替尼单独或联合 PPP 作用于细胞后的细胞增殖情况 PPP( 最佳浓度 5 μmol/l) 单独或联合厄洛替尼 ( 最佳浓度 15 μmol/l) 作用于细胞后,48 h 后采用 CCK-8 法分析各组细胞增殖的变化如图 6 所示, 厄洛替尼联合 PPP 组细胞存活率明显较其他各组低, 差别有统计学意义 (P<.5) 2.7 厄洛替尼单独或联合 PPP 作用于后细胞中 Akt ERK 及 p-akt p-erk 的表达水平 Western Blot 结果显示 ( 见图 7),PPP 单独作用于细胞, 其 p-akt 及 p-erk 蛋白表达水平下降较厄洛替尼单独作用明显, 当两者联合作用时抑制作用更为明显, 细胞的 p-akt 及 p-erk 蛋白表达水平较其他三组明显下降而 Akt 及 ERK 在各组无明显变化 Dip G1 Dip G2 Dip S 4 Dip G1 Dip G2 Dip S Number Number Channels (FL2-A) Channels (FL2-A) 图 4 及的细胞周期中各时相分布的差异 Figure 4 Cell cycle differentiation between and

184 临床与病理杂志, 215, 35(6) http://www.lcbl.net 表 1 及的细胞周期中各时相分布 Table 1 Cell cycle differentiation between and 变量 G1 S G2 43.88±3.22 31.78±1.4 22.9±.34 58.88±.6 a 27.3±1.26 b 21.2±1.76 c a 与组相比 P=.

p-egfr p-lgf1r 图 5 和细胞中 p-egfr p-igf1r 蛋白表达水平 Figure 5 Expression of p-egfr p-igf1r in and A: Western blot analysis of the expression of p-egfr and p-igf1r; B: Semi-quantitative analysis of the

Cell survival rate (%) 1 8 6 4 2 Untreated PPP Erlotinib Erlotinib+PPP 图 6 不同组别和细胞存活率 Figure 6 Cell survival rate of and in different groups *Compare to other groups, P<.

5 184 临床与病理杂志, 215, 35(6) 表 1 及的细胞周期中各时相分布 Table 1 Cell cycle differentiation between and 变量 G1 S G ± ± ± ±.6 a 27.3±1.26 b 21.2±1.76 c a 与组相比 P=.1; b 与组相比 P=.15; c 与组相比 P=.142 A p-egfr p-igf1r B Relative density ** * GAPDH. p-egfr p-lgf1r 图 5 和细胞中 p-egfr p-igf1r 蛋白表达水平 Figure 5 Expression of p-egfr p-igf1r in and A: Western blot analysis of the expression of p-egfr and p-igf1r; B: Semi-quantitative analysis of the expression of p-egfr and p-igf1r protein. *Compare to group, P=.16; **Compare to group, P=.152. Cell survival rate (%) Untreated PPP Erlotinib Erlotinib+PPP 图 6 不同组别和细胞存活率 Figure 6 Cell survival rate of and in different groups *Compare to other groups, P<.5; **Compare to other groups, P<.5. p-akt Akt p-erk1/2 Erk1/2 GAPDH PPP Erlotinib 图 7 细胞中 Akt ERK p-akt 及 p-erk 蛋白表达水平 Figure 7 Expression of Akt, ERK, p-akt and p-erk in different groups ** * 3 讨论肺癌是目前对人类健康与生命构成威胁最大的恶性肿瘤肺癌中非小细胞肺癌约占 85%, 靶向 EGFR 药物如吉非替尼厄洛替尼及西妥昔单抗等在非小细胞肺癌治疗中非常成功对于 EGFR 突变的非小细胞肺癌患者来说, 更能从吉非替尼厄洛替尼等获益但是研究显示 5% 的肺腺癌患者经过 EGFR-TKI 治疗有效 6-12 个月后出现获得性耐药目前研究显示,EGFR 获得性耐药的原因有很多, 主要概括为 :1)EGFR 基因突变或靶点缺失, 常常与第二位点 T79M 突变相关 ;2)Met 扩增 ; 3) 胞内 EGFR 下游信号蛋白激活 ;4) 绕开 EGFR 通路的其他 TK 受体的活化, 如 IGF1R VEGFR PDGFR 等 ;5) 肿瘤诱导的血管生成其中有部分耐药机制尚未被完全阐明因此有必要针对这些耐药原因寻找突破, 阐明其机制, 并积极寻找新的分子靶向治疗药物来阻止或延迟其耐药 [4] 体外诱导构建肺癌耐药细胞株是目前研究耐药比较可靠可行的一种方法本研究选用人肺腺癌细胞株, 构建厄洛替尼耐药株为 EGFR19 外显子突变型, 无 MET 基因扩增或 EGFR2 外显子突变 (T79M), 而且对厄洛替尼敏感, 因此可以在一定程度上模拟厄洛替尼继发性耐药的分子

6 人肺腺癌厄洛替尼耐药细胞系的建立及其特性钱静, 等 185 作用过程, 为耐药细胞株的建立提供理论依据首先测定细胞对厄洛替尼的最低耐受剂量, 选取活性好, 生长旺盛的细胞进行药物诱导, 待被诱导的细胞损伤恢复, 生长旺盛的时候再进行浓度递增采用 CCK8 法测药物 IC5, 的厄洛替尼药物 IC5 为 2.43 μmol/l, 而的厄洛替尼药物 IC5 为 μmol/l, 细胞的耐药指数是亲代细胞的 72.3 倍的耐药性非常稳定, 经无厄洛替尼的培养基中连续培养 8 周后, 耐药倍数仍保持不变细胞增殖实验结果显示, 细胞生长较亲代细胞慢, 其倍增时间为 36.9 h, 与亲代 32.9 h 相比也有延长细胞周期结果显示细胞的 G 1 期细胞明显增多 (P=.1), 而 S 期细胞则明显下降 (P=.15), G2 期无明显变化 (P=.142), 说明细胞的 DNA 合成减慢, 增殖和分裂低于以上结果表明, 在厄洛替尼长期诱导下, 产生了显著的厄洛替尼耐药性, 而且在细胞特性方面也与亲本细胞有一定差异, 表明已经成功建立耐药株本研究在成功构建耐药株后, 进一步检测亲代及耐药株细胞中 p-egfr 及 p-igf1r 的表达 Western Blot 结果表明, 细胞中 p-igf1r 表达比亲代细胞明显增多, 而 p-egfr 无明显变化表明耐药株中 IGF1R 磷酸化水平增加可能和耐药相关 IGF1R 与 EGFR 一样, 属于受体酪氨酸激酶 (RTK) 成员, 目前研究显示已在许多恶性肿瘤比如乳腺癌肝癌大肠癌前列腺癌肺癌等组织中均表达上调, 与肿瘤的恶性转化增殖浸润转移系密切, 还能与其他细胞因子相互作用促进肿瘤的发展 [5-6] 本研究选用 IGF1R 的小分子酪氨酸激酶抑制剂 PPP 进行下一步研究 PPP 是口服高活性抑制剂, 研究发现能增加肺癌细胞放疗敏感性,Ⅱ 期临床试验表明其联合化疗较单独化疗病人的生存期显著延长, 其中 78% 的鳞癌及 57% 的腺癌患者从中获益 PPP 现已进入 Ⅲ 期临床试验我们已经成功构建厄洛替尼耐药人肺腺癌细胞模型, 进一步观察厄洛替尼和 PPP 单独或联合处理亲代及细胞后, 对细胞增殖的影响以及对信号通路蛋白表达的抑制作用结果表明与单药组相比, 厄洛替尼联合 PPP 组 / ER 细胞存活率明显较其他各组低, 差别有统计学意义 (P<.5) Western Blot 结果显示, 厄洛替尼和 PPP 联合作用时, 细胞中 EGFR 下游基因 p-akt 及 p-erk 蛋白表达水平明显下降, 抑制作用非常明显, 单用 PPP 或厄洛替尼无明显抑制作用而 Akt 及 ERK 在各组无明显变化 ; 表明厄洛替尼与 PPP 联用能有效抑制 Akt 的激活, 提示 IGF1R 信号通路影响 Akt 磷酸化在耐药细胞中可能发挥更为重要的作用,IGF1R 抑制剂 PPP 可能是通过间接抑制下游靶基因磷酸化而影响细胞增殖研究发现在 EGFR-TKI 原发性耐药肺癌细胞株 H165 中,IGF1R 小分子酪氨酸激酶抑制剂 α-ir3 及 AG124 能增加吉非替尼抗肿瘤细胞增殖及促凋亡作用, 并能下调磷酸化 Akt, 提示其耐药可能和 Akt 的持续活化有关,IGF1R 小分子酪氨酸激酶抑制剂可增加耐药细胞对吉非替尼的敏感性 [7-8], 和本研究结果一致 EGFR-TKI 获得性耐药仍然是目前的主要临床问题, 耐药机制的阐明有利于临床用药其中 IGF1R 通路对下游基因的活化可能是目前临床厄洛替尼耐药的一个重要原因 [9], 抑制 IGF1R 信号通路可能阻止或延迟厄洛替尼耐药的产生总之, EGFR-TKI 耐药原因很多, 拮抗 EGFR-TKI 耐药必须从多途径多层次研究入手, 这也将是今后研究的一个重要方向参考文献 1. Sachdev D, Zhang X, Matise I, Gaillard-Kelly M, et al. The type I insulin-like growth factor receptor regulates cancer metastasis independently of primary tumor growth by promoting invasion and survival[ J]. Oncogene, 21, 29(2): Bianconi F, Baldelli E, Ludovini V, et al. Computational model of EGFR and IGF1R pathways in lung cancer: a Systems Biology approach for Translational Oncology[ J]. Biotechnol Adv, 212, 3(1): Murakami A, Takahashi F, Nurwidya F, et al. Hypoxia increases gefitinib-resistant lung cancer stem cells through the activation of insulin-like growth factor 1 receptor[ J]. PLoS One, 214, 9(1): e Weickhardt A, Doebele R, Oton A, et al. A phase I/II study of erlotinib in combination with the anti-insulin-like growth factor-1 receptor monoclonal antibody IMC-A12 (cixutumumab) in patients with advanced non-small cell lung cancer[ J]. J Thorac Oncol, 212, 7(2): Spiliotaki M, Markomanolaki H, Mela M, et al. Targeting the insulinlike growth factor I receptor inhibits proliferation and VEGF production of non-small cell lung cancer cells and enhances paclitaxelmediated anti-tumor effect[ J]. Lung Cancer, 211, 73(2):

7 186 临床与病理杂志, 215, 35(6) 6. Tognon CE, Sorensen PH. Targeting the insulin-like growth factor 1 receptor (IGF1R) signaling pathway for cancer therapy[ J]. Expert Opin Ther Targets, 212, 16(1): Gately K, Forde L, Cuffe S, et al. High coexpression of both EGFR and IGF1R correlates with poor patient prognosis in resected non-smallcell lung cancer[ J]. Clin Lung Cancer, 214, 15(1): Chen R, Sweet-Cordero EA. Two is better than one: combining IGF1R and MEK blockade as a promising novel treatment strategy against KRAS-mutant lung cancer[ J]. Cancer Discov, 213, 3(5): Suda K, Mizuuchi H, Sato K, et al. The insulin-like growth factor 1 receptor causes acquired resistance to erlotinib in lung cancer cells with the wild-type epidermal growth factor receptor[ J]. Int J Cancer, 214, 135(4): 本文引用 : 钱静, 陈不尤, 刘贤称, 顾红梅, 姚宁华. 人肺腺癌厄洛替尼耐药细胞系的建立及其特性 [ J]. 临床与病理杂志, 215, 35(6): doi: /j.issn Cite this article as: QIAN Jing, CHEN Buyou, LIU Xiancheng, GU Hongmei, YAO Ninghua. Establishment and characterization of a erlotinib drug resistant variant of human lung adenocarcinoma cell line [ J]. Journal of Clinical and Pathological Research, 215, 35(6): doi: /j.issn 本刊常用词汇英文缩写表 ( 按英文字母排序 ) 从 212 年第 1 期开始, 本刊对大家较熟悉的以下常用词汇, 允许直接使用缩写, 即首次出现时可不标注中文 ABC 法抗生物素蛋白 - 生物素酶复合物法 FN 纤连蛋白 NF-κB 核因子 -κb ACh 乙酰胆碱 GFP 绿色荧光蛋白 NK 细胞自然杀伤细胞 AIDS 获得性免疫缺陷综合征 GSH 谷胱甘肽 NO 一氧化氮 ALT 丙氨酸转氨酶 HAV 甲型肝炎病毒 NOS 一氧化氮合酶 AngII 血管紧张素 II Hb 血红蛋白 NS 生理氯化钠溶液 APTT 活化部分凝血活酶时间 HBcAb 乙型肝炎病毒核心抗体 PaCO 2 动脉血二氧化碳分压 AST 天冬氨酸氨基转移酶 HBcAg 乙型肝炎病毒核心抗原 PaO 2 动脉血氧分压 ATP 三磷酸腺苷 HBeAb 乙型肝炎病毒 e 抗体 PBS 磷酸盐缓冲液 bfgf 碱性成纤维细胞转化生长因子 HBeAg 乙型肝炎病毒 e 抗原 PCR 聚合酶链反应 BMI 体质量指数 HBsAb 乙型肝炎病毒表面抗体 PI3K 磷脂酰肌醇 3 激酶 BP 血压 HBsAg 乙型肝炎病毒表面抗原 PLT 血小板 BSA 牛血清白蛋白 HBV 乙型肝炎病毒 PT 凝血酶原时间 BUN 尿素氮 HCG 人绒毛膜促性腺激素 RBC 红细胞 BUN 血尿素氮 HCV 丙型肝炎病毒 RNA 核糖核酸 CCr 内生肌酐清除率 HDL-C 高密度脂蛋白胆固醇 ROS 活性氧 CCU 心脏监护病房 HE 苏木精 - 伊红染色 RT-PCR 反转录 - 聚合酶链反应 COX-2 环氧化酶 -2 HGF 肝细胞生长因子 SABC 法链霉抗生物素蛋白 - 生物素酶复合物法 Cr 肌酐 HIV 人类免疫缺陷病毒 SARS 严重急性呼吸综合征 CRP C - 反应蛋白 HRP 辣根过氧化物酶 SCr 血肌酐 CT 计算机 X 线断层照相技术 HSP 热休克蛋白 SO 2 血氧饱和度 CV 变异系数 IC 5 半数抑制浓度 SOD 超氧化物歧化酶 ddh 2 O 双蒸水 ICAM 细胞间黏附分子 SP 法标记的链霉抗生物素蛋白 - 生物素法 DMSO 二甲基亚砜 ICU 重症监护病房 STAT3 信号转导和转录激活因子 3 DNA 脱氧核糖核酸 IFN 干扰素 Tbil 总胆红素 ECG 心电图 IL 白细胞介素 TC 总胆固醇 ECL 增强化学发光法 inos 诱导型一氧化氮合酶 TG 三酰甘油 ECM 细胞外基质 IPG 固相 ph 梯度 TGF 转化生长因子 EDTA 乙二胺四乙酸 JNK 氨基末端激酶 Th 辅助性 T 细胞 EEG 脑电图 LDL-C 低密度脂蛋白胆固醇 TLRs Toll 样受体 EGF 表皮生长因子 LOH 杂合性缺失 TNF 肿瘤坏死因子 ELISA 酶联免疫吸附测定 LPS 内毒素 / 脂多糖 TT 凝血酶时间 enos 内皮型一氧化氮合酶 MAPK 丝裂原活化蛋白激酶 TUNEL 原位末端标记法 ERK 细胞外调节蛋白激酶 MDA 丙二醛 VEGF 血管内皮生长因子 ESR 红细胞沉降率 MMP 基质金属蛋白酶 VLDL-C 极低密度脂蛋白胆固醇 FBS 胎牛血清 MRI 磁共振成像 vwf 血管性血友病因子 FDA 美国食品药品管理局 MTT 四甲基偶氮唑盐微量酶反应 WBC 白细胞 FLTC 异硫氰酸荧光素 NADPH 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 WHO 世界卫生组织

738 中南大学学报 ( 医学版 ), 2013, 38(7) operator curve for SIPP (0.938) was greater than paraquat concentra

738 中南大学学报 ( 医学版 ), 2013, 38(7) operator curve for SIPP (0.938) was greater than paraquat concentra 中南大学学报 ( 医学版 ) J Cent South Univ (Med Sci) 2013, 38(7) http://www.csumed.org; http://xbyx.xysm.net 737 DOI:10.3969/j.issn.1672-7347.2013.07.014 http://xbyx.xysm.net/xbwk/fileup/pdf/201307737.pdf

人肺腺癌厄洛替尼耐药细胞系 的建立及其特性钱静, 等 181 Keywords lung adenocarcinoma cell line was induced by continuously exposing human lung adenocarcinoma cell line to grad

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