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2

3 High Efficiency Particulate Air Filter HEPA

4 CO 2

5

6

7 74 30 min 2 min

8 CO CO 2 CO h) 3000

9

10

11

12

13 CO rpm Zeiss

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17

18

19

20

21 70

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23

24

25

26 NaOH min 7

27

28 160~180 2 h min Zeiss 75 1

29

30

31 BSS ph EDTA

32 a b c

33 TC199 MEM RPMI-1640 DMEM

34

35 5 10

36

37 Eagle Eagle Eagle s minimum essential medium MEM BEM Basal Eagle Medium DMEM Dulbecco MEM DMEM 4500 mg/l 1000 mg/l

38 RPMI 1640

39 Ham Ham F7 F10 Ham F12

40 NaHCO U/ml 100U/ml ph 7.0~7.2 PH m+0.45 m 4 10%

41 Serum free medium, SFM DNA

42

43 SFM

44 1975 Sato 20

45

46 56 30

47 1. 2. A ~0.5%

48 g/l 100

49 RPMI g 100 / 1000 ml, ph

50 1 2 3 RPMI

51

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55

56

57

58

59 0.2% min min 75%

60 30 min 75

61

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63

64

65

66

67 3T3-L1 3T3-L1

68 MG-63 MG-63

69 rpm/min

70 ml min /10 1/

71 Coulter

72

73

74 /ml 4 / %

75 Preparation of microscope/hemocytometer for cell counting. Position cover slip so that glass covers both counting areas equally (See figure below). Filling the hemocytometer chamber (Left).

76

77 Coulter = 4 x 10 4 x 4 = /ml

78 Growth of yeast at ph=7 (Number of cells count/ml vs.time) Number of cells count/ml 1.00E E E E+08 Control 1.00E Time (hr)

79

80 ml ml 0.4% 2 3 min 3 4

81 % = / x 100%

82 2 MTT MTT MTT formazan) DMSO formazan OD MTT

83 MTT / CO MTT 50 / 3 3 DMSO 150 / 10 4 OD 570 nm

84

85

86

87 /min /min

88 DMSO

89 1. 20% 10% DMSO DMSO 2., /ml) 3. 1 ml

90 /min /min > > ( )--->

91 min 2. 5 min rpm 4 min 4.

92

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97 µm µm

98 Chlamydia pneumoniae associated with macrophages (RAW cells). A. Typical pear shaped elementary bodies (EBs) (arrows) are shown at the macrophage surface. B. Intracellular EBs.

99 PCR Hayflick

100 Hayflick 3 5 ( M. hyorhinis)

101 bisbenzimide, Hoechst DNA Adenosine-Thymidine (A-T) rich DNA A-T 55 80%

102 PCR 16s 23s PCR

103 :

104

105 G+ 100 IU/ml G- 100 µg/ml G+, G- 200 µg/ml G+, G- 10 µg/ml G+, G- 50 µg/ml 2 µg/ml 25 µg/ml

106 PCR

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