10 冻干抗蝮蛇毒血清 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 10% ( 通则 渗透压摩尔浓度应为 mOsmol/kg( 通则 11 抗五步蛇毒血清 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 10% ( 通则

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1 附件 : 中国药典 2015 年版 ( 三部 ) 血液制品拟增修订内容 序号 品种名称 1 白喉抗毒素 2 冻干白喉抗毒素 3 破伤风抗毒素 冻干破伤风抗毒素 多价气性坏疽抗毒素 冻干多价气性坏疽抗毒素 7 肉毒抗毒素 8 冻干肉毒抗毒素 中国药典 2015 年版三部内容 9 抗蝮蛇毒血清 拟增修订内容 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 10% ( 通则 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 10% ( 通则 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 5% ( 通则 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 5% ( 通则 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 10% ( 通则 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 10% ( 通则 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 5% ( 通则 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 5% ( 通则 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 10% ( 通则 渗透压摩尔浓度应为 mOsmol/kg( 通则

2 10 冻干抗蝮蛇毒血清 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 10% ( 通则 渗透压摩尔浓度应为 mOsmol/kg( 通则 11 抗五步蛇毒血清 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 10% ( 通则 渗透压摩尔浓度应为 mOsmol/kg( 通则 12 冻干抗五步蛇毒血清 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 10% ( 通则 3122) 渗透压摩尔浓度应为 mOsmol/kg( 通则 13 抗银环蛇毒血清 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 10% ( 通则 渗透压摩尔浓度应为 mOsmol/kg( 通则 14 冻干抗银环蛇毒血清 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 10% ( 通则 渗透压摩尔浓度应为 mOsmol/kg( 通则 15 抗眼镜蛇毒血清 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 10% ( 通则

3 渗透压摩尔浓度应为 mOsmol/kg( 通则 16 冻干抗眼镜蛇毒血清 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 10% ( 通则 渗透压摩尔浓度应为 mOsmol/kg( 通则 17 抗炭疽血清 18 抗狂犬病血清 19 人血白蛋白 静注乙型肝炎人免疫球蛋白 (ph4) 冻干静注乙型肝炎人免疫球蛋白 (ph4) 渗透压摩尔浓度应为 mOsmol/kg ( 通则 4 保存 运输和有效期于 2~8 或室温避光保存或运输 3.3 成品检定除真空度 复溶时间 水分测定 装量差异检查外, 应按标示量加入灭菌注射用水, 复溶后进行其余各项检定 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 10% ( 通则 分子大小分布完整 IgG 与聚合物的含量之和应不高于 5% ( 通则 渗透压摩尔浓度应为 mOsmol/kg 或经批准的要求 ( 通则 4 保存 运输和有效期于 2~8 或室温避光保存或运输 室温保存的人血白蛋白可在 2~8 运输 IgA 残留量应不高于 200μg/ml( 通则 3428) 3.3 成品检定除真空度 复溶时间 水分测定 装量差异检查外, 加注射用水定量复溶至标示量 ; 或按标示量加注射用水复溶后进行各项检定, 其结果需按标示量进行折算 IgA 残留量应不高于 200μg/ml( 通则 3428)

4 22 23 静注人免疫球蛋白 (ph4) 冻干静注人免疫球蛋白 (ph4) 24 人纤维蛋白原 25 人纤维蛋白粘合剂 3.3 成品检定除真空度 复溶时间 水分测定 装量差异检查外, 应按标示量加入灭菌注射用水, 复溶后进行其余各项检定 凝固活力于反应管内加入已预热至 37 的凝血酶溶液 (3 IU/ml)0.5ml, 再加入用生理氯化钠溶液稀释成 3mg/ml 的供试品溶液 0.5ml, 摇匀 置 37 记录凝固时间 人凝血酶效价将人凝血酶国家标准品按标示量用注射用水复溶后, 用生理氯化钠溶液稀释成不同的浓度,, 用自动血凝仪记录凝集时间 将供试品按标示量用注射用水复溶后, 用生理氯化钠溶液稀释成不同的浓度,.., 同法操作 人凝血因子 XⅢ 效价分别取人凝血因子 ⅩⅢ 缺乏纤维蛋白原或血浆 不同稀释度的标准人血浆或供试品 ( 1 : 2 ~ 1:256) 人凝血酶/CaCl2 溶液 ( 用 0.05mol/L CaCl2 复溶冻干人凝血酶至 50IU/ml,) 各 0.1ml 混 IgA 残留量应不高于 200μg/ml( 通则 3428) 3.3 成品检定除真空度 复溶时间 水分测定 装量差异检查外, 加注射用水定量复溶至标示量 ; 或按标示量加注射用水复溶后进行各项检定, 其结果需按标示量进行折算 IgA 残留量应不高于 200μg/ml( 通则 3428) 凝固活力用生理氯化钠溶液分别稀释凝血酶溶液至 3 IU/ml, 供试品溶液至 3mg/ml 备用 于反应管内加入已预热至 37 的凝血酶溶液 ( 3 IU/ml) 适量, 再加入等量的的供试品溶液 (3mg/ml), 摇匀 置 37 用自动检测仪器记录凝固时间 人凝血酶效价将人凝血酶国家标准品按标示量用注射用水复溶后, 用含 1% 人血白蛋白的生理氯化钠溶液稀释成不同的浓度,, 用自动血凝仪记录凝集时间 将供试品按标示量用注射用水复溶后, 用含 1% 人血白蛋白的生理氯化钠溶液稀释成不同的浓度,.., 同法操作 人凝血因子 XⅢ 效价分别取人凝血因子 ⅩⅢ 缺乏纤维蛋白原或血浆 用含 0.4% 人血白蛋白的生理氯化钠溶液稀释成不同稀释度的标准人血浆或供试品 (1:2~ 1:256) 人凝血酶/CaCl2 溶液 ( 用 0.05mol/L CaCl2 复溶冻干人凝血酶至

5 匀, 即形成凝块 50IU/ml,) 各 0.1ml 混匀, 即形成凝块 抗毒素 / 抗血清制品分子大小分布测定法 3428 人免疫球蛋白类制品 IgA 残留量测定法 具体内容附后 具体内容附后

6 3128 抗毒素 / 抗血清制品分子大小分布测定法 本法系用分子排阻色谱法测定抗毒素抗血清制品中完整 IgG 和聚合体的相对含量 照分子排阻色谱法 ( 通则 0514) 测定 色谱条件与系统适用性试验 用亲水硅胶高效体积排阻色谱柱 (SEC 排阻极 限 500KD, 粒度 5μm), 柱直径 7.8mm, 长 30 cm 以含 1% 异丙醇的 ph7.0,0.2mol/l 磷酸盐缓冲液 [ 量取 0.5mol/L 磷酸二氢钠 200ml 0.5mol/L 磷酸氢二钠 420ml 异丙醇 15.5ml 及水 914.5ml, 混匀 ] 为流动相, 检测波长为 280nm, 流速为每分钟 0.6ml 分别取每 1ml 含蛋白质为 12mg 的人免疫球蛋白 人血白蛋白溶液各 20ul, 分别注入色谱柱, 记录色谱图 ( 标准图谱见图 1~2) 人免疫球蛋白单体峰与裂解体峰的分离度应大于 1.5, 人血白蛋白单体峰与二聚体峰的分离度应大于 1.5, 拖尾因子按人血白蛋白单体峰计算应为 0.95~1.40 测定法取供试品适量, 用流动相稀释成每 1ml 约含蛋白质 12mg 的溶液, 取 20ul, 注入色谱柱, 记录色谱图 40 分钟 ( 标准图谱见图 3~4) 按面积归一化法计算色谱图中 F(ab )2 IgG 单体和聚体的相对含量 图谱各峰的界限为两峰间最低点到基线的垂直线 主峰为 F(ab )2, 相对保留时间约 0.93 的峰为 IgG 单体, 相对保留时间约 0.86 及之前的峰均为聚体 mau 图 1 破伤风抗毒素标准图谱

7 mau 175 VWD1 A, Wavelength=280 nm (ZH \SEQ D) 图 2 抗五步蛇毒血清制品标准图谱

8 3428 人免疫球蛋白类制品 IgA 残留量测定法 本法用于测定人免疫球蛋白类制品中 IgA 残留量, 包括紫外 - 可见分光光度法 酶联免疫法和散射比浊法 首次采用本法检测供试品中 IgA 残留量时, 应根据不同样品基质及 IgA 残留量的水平选择适宜的测定方法并做相应方法学验证 紫外 - 可见分光光度法和酶联免疫法中 IgA 残留量的效价单位可根据标准品标签说明换算成质量单位 第一法紫外 - 可见分光光度法 ( 仲裁法 ) 本法系依据免疫球蛋白 A (IgA) 与相应的抗体特异性结合后, 在适宜的电解质 温度 ph 条件下, 产生凝集反应, 形成抗原 - 抗体复合物, 用比浊法测定供试品中 IgA 的残留量 试剂 (1) 缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷 (Tris) g 氯化钠 9g 聚乙二醇 g 牛血淸白蛋白(BSA) lg 叠氮化钠(NaN 3 ) l g, 加水适量使溶解, 用 lmol/l 盐酸溶液调节 ph 值至 7.4, 用水稀释至 1000ml 如缓冲液中不添加叠氮化钠, 应临用新制 (2) 抗人 IgA 血清取抗人 IgA 血清 ( 应为全血清经过一定纯化技术分离制得的特异性抗体 ) 适量, 加缓冲液稀释至抗体最终效价为 1 : 4 ( 例如抗人 IgA 血清效价为 1:100, 量取原液 2ml 加抗体缓冲液 48ml), 充分混匀,0.45μm 滤膜滤过, 作为工作抗体液,4 C 保存备用 IgA 标准品溶液的制备按 IgA 标准品使用说明书加水复溶, 精密量取适量, 用 0.9% 氯化钠溶液定量稀释制成每 1ml 中含 IgA25 IU 12.5 IU 6.25 IU IU IU 的溶液 供试品溶液的制备取供试品原液或将供试品用 0.9% 氯化钠溶液定量稀释制成适当浓度, 作为供试品溶液, 使其 IgA 残留量在标准曲线范围内 测定法分别取 IgA 标准品溶液和供试品溶液各 10μl, 加入已预热至 37 的工作抗体液 lml, 混匀, 平行做 2 管, 置 37 水浴中保温 1 小时, 放冷, 充分混匀, 照紫外 - 可见分光光度法 ( 通则 0401), 立即在波长 340nm 处分别测定吸光度 ( 全部反应管自水浴中取出后必须在 10 分钟内测量完毕 ) 同时以 0.9% 氯化钠溶液 10μl 替代供试品溶液, 同法操作, 作为空白对照

9 计算标准品和供试品溶液吸光度的均值 以标准品溶液 IgA 含量的对数对其相应的吸光度的对数作直线回归, 求得直线回归方程, 相关系数应不低于 0.99; 将供试品溶液吸光度的对数值代入直线回归方程, 求得值的反对数, 再乘以稀释倍数, 即得供试品中 IgA 残留量 第二法酶联免疫法本法系采用酶联免疫法测定供试品中 IgA 残留量 试剂按经验证的人 IgA 酶联免疫试剂盒说明书配制试剂 标准品溶液的制备取 IgA 标准品, 加适量水复溶, 用试剂盒中稀释液将复溶后标准品在每 1ml 含 ~ IU 范围内做适当的系列稀释 ( 通常做 5 个稀释度 ) 供试品溶液的制备取供试品适量, 用试剂盒中稀释液定量稀释制成适当浓度, 使其 IgA 含量在标准曲线范围内 测定法按试剂盒说明书进行, 分别设置 1 孔底物空白对照和稀释液对照, 标准品溶液及供试品溶液均做双孔平行测定 试剂盒底物空白对照和稀释液对照的吸光度应在试剂盒要求范围内, 试验有效 以标准品溶液的 IgA 含量的对数对其相应的吸光度的对数作直线回归, 求得直线回归方程, 相关系数应不低于 0.99; 将供试品溶液的吸光度代入直线回归方程, 求得值的反对数, 再乘以稀释倍数, 即得供试品中 IgA 含量 附注 (1) 本法测定范围为 ~ IU/ml, 每次测定可根据供试品中 IgA 含量, 在测定范围内适当调整标准品溶液浓度 当标准品溶液配制浓度较高时, 建议数据拟合模型选择半对数回归, 即以标准品溶液的 IgA 含量的对数对其相应的吸光度作直线回归 (2) 试剂盒的验证应至少包括线性 回收率试验和精密度试验等内容 线性回归的相关系数应不低于 0.99; 高 中 低浓度样品的平均回收率应在 80%~120%; 试剂盒批内相对标准偏差 (RSD) 不得过 10%, 批间相对标准偏差 (RSD) 不得过 15% 第三法散射比浊法本法系依据免疫球蛋白 A (IgA) 与包被着 IgA 特异性抗体的颗粒混合时, 包被着抗体的颗粒会发生聚集 这些聚集体会使穿过供试品的光束发生散射, 散射

10 光的强度与供试品中 IgA 浓度成正比, 与已知的 IgA 定标品浓度对比即可求出供试品中 IgA 含量 本法主要采用经批准的全自动蛋白分析仪及仪器自带的试剂盒对供试品中 IgA 残留量进行测定 仪器自带的试剂盒通常包括 IgA 定标品 质控品 IgA 抗体试剂及辅助试剂等 试剂 IgA 定标品和质控品溶液的制备按试剂盒说明书操作 供试品溶液的制备取供试品适量, 用稀释液稀释至每 1L 中约含 IgA 1 mg 的溶液, 上机后不再进行稀释, 直接测定 测定法按仪器使用说明书进行, 供试品应平行测定双份 试剂盒标准曲线的拟合偏差和质控品测定值应在试剂盒要求范围内, 试验有效 记录供试品溶液的报告值, 再乘以稀释倍数, 即得供试品中 IgA 残留量 附注 供试品溶液也可以采用全自动蛋白分析仪自动稀释至要求的浓度, 报告值即为供试品中 IgA 残留量

述缓冲液 (B ), 按 B1 S1 S2 S3 S4 T1 T2 T3 T4 T1 T2 T3 T4 S1 S2 S3 S4 B2 的顺序依次向各小管中分别精密加入 μl 相同体积 (V ) 的上述溶液 ; 每管精密加入相同体积 (V) 的抗凝血酶溶液, 混匀,37 C 平衡 2 分钟

述缓冲液 (B ), 按 B1 S1 S2 S3 S4 T1 T2 T3 T4 T1 T2 T3 T4 S1 S2 S3 S4 B2 的顺序依次向各小管中分别精密加入 μl 相同体积 (V ) 的上述溶液 ; 每管精密加入相同体积 (V) 的抗凝血酶溶液, 混匀,37 C 平衡 2 分钟 1208 肝素生物测定法 本法系用于肝素类产品的效价测定 测定方法分为抗 Ⅱa 因子 / 抗 Xa 因子效价测定法和凝血时间测定法, 凝血时间测定法又分为兔全血法 血浆复钙法 APTT 法 抗 Ⅱa 因子 / 抗 Xa 因子效价测定法 本法系通过微量显色法比较肝素标准品与供试品抗 Ⅱa 因子和抗 Xa 因子的活性, 以测定供试品的效价 抗 Ⅱa 因子测定法 试剂 (1) 三羟甲基氨基甲烷 - 聚乙二醇

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