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- 矮缮 江
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4 2 CHP50 3 CHP50 CHP50 CHP50 Ji Chuanranxinghouqiguanyan HuoyimiaoCHP50 Zhu Laryngotracheitis VaccineLiveStrain CHP50 CHP50 SPF 100EID 50 /0.1ml2 1: SPF 5 0.2ml SPF ml PBS 1 /0.2ml SPF 5 0.2ml EID EID SPF
5 ml10 3 EID 50 ILT-PA.VSD-171-ET-( ) / [LABORATORIOS HIPRA,S.A. ] Avda. La Selva, Amer (Girona) Spain CHP50 PBS ph ml/ CHP50 CHP50 Laryngotracheitis VaccineLiveStrain CHP50 Ji Chuanranxinghouqiguanyan HuoyimiaoCHP50 Zhu 5
6 CHP EID ml ml / 10 / [LABORATORIOS HIPRA,S.A. ] Avda. La Selva, Amer (Girona) Spain
7 CHP50 CHP / CH/80 CH/80 (CH/80 ) Ji Chuanranxingfashinangbing HuoyimiaoCH/80 Zhu lnfectious Bursal Disease VaccineLiveStrain CH/80 CH/80 SPF ml 4.5ml ml ml
8 710 SPF %CO 2 7 CPE Reed-Muench TCID SPF / BID BC6/ /22500 / CH/80 CH/80 Infectious Bursal Disease VaccineLiveStrain CH/80 Ji Chuanranxingfashinangbing HuoyimiaoCH/80 Zhu CH/ TCID ml ml 8
9 1/ L L L /22500 / 10 / LABORATORIOS HIPRA,S.A. Avda. La Selva, Amer (Girona) Spain CH/80 CH/ /
10 C C C Zizhu C Xing Chanqijiamosuojunbing Dachangganjunbing Erlian Miehuoyimiao Clostridium Perfringens Type C - Escherichia Coli Bacterin-Toxoid K88pPS002 K99NL-1005 NADC 1471 F41NADC P NADC 1413 LT B NL-1001 C NL-1003 C 8 0.5ml7 ELISA K88K99F41 987P ELISA LT B 1.00R.P. C ml/25 10ml/310 20ml/ ml/525 50ml/ ml/ : l K88 ELISA 10
11 RELPOT mol/LpH 9.6±±±±0.1) g g 100 ml PBS ph 7.2±±±± mol/LpH 9.3±±±± g 94 ml 10mol/L ph 9.3±±±±0.1 67m PBST0.05Tween 20 PBS PBST K K K K ABTS A B Kirkegaard & Perry
12 K88 100μμμμμμμμl ±±±± PBST ml K88 6ml r/min 60±±±± K ml l1 lml r/min 60±±±± PBST BH 125μμμμμμμμl K A 250μμμμμμμμl A 125μμμμμμμμl B 2 G H PBST * l128 * μμμμμμμμl 12
13 r/min 30±±±± PBST PBST K88 100μμμμμμμμl r/min 30±±±± PBST ABTS A B ll 100μμμμμμμμl A 2A 405nm 1.300±±±± nm 490nm RELPOT OD OD OD OD l RELPOT l0.822 l l OD 13
14 RELPOT R.P. 1.3 K88 1.4l R.P R.P OD RELPOT RELPOT OD
15 K99 ELISA RELPOT mol/LpH 9.6±±±± g g 100 ml PBS ph 7.2±±±± mol/LpH 9.3±±±± g 94 ml 10mol/L ph 9.3±±±±0.1 67ml /PBST0.05Tween 20 PBS K K K K99 15
16 ABTS A B Kirkegaard & Perry K99 100μμμμμμμμl ±±±± PBST K ml lml r/min 60±±±± K ml l1 lml r/min 60±±±± PBST BH 125μμμμμμμμl K99 l A 250μμμμμμμμl A 125μμμμμμμμl B 2 G H PBST *
17 l l1024 l l1024 * μμμμμμμμl ±±±± r/min 30±±±± PBST K99 l00μμμμμμμμl r/min 30±±±± PBST ABTS A B l1 l00μμμμμμμμl A 2A 405nm l.3±±±± nm 492nm RELPOT l OD OD OD OD RELPOT R.P. 2.3 K R.P. 1.00R.P. 17
18 OD RELPOT RELPOT OD
19 3 F4l ELISA RELPOT mol/LpH 9.6±±±± g g 100 ml PBS ph 7.2±±±± mol/LpH 9.3±±±± g 94 ml l0mol/l ph 9.3±±±±0.1 67m /PBST0.05Tween20 PBS BSA PBST PBST F F F F
20 IgGH L Kirkegaard & Perry ABTS A BKirkegaard & Perry F41 l00μμμμμμμμl ±±±± PBST ml F41 6ml r/min 60±±±± F PBS 116 6ml l 1 lml r/min 60±±±± PBST BH 125μμμμμμμμl F41 l A 250μμμμμμμμl A 125μμμμμμμμl B 2 G H PBST 170 l140 *
21 1280 l560 l l l2048 * μμμμμμμμl ELISA r/min 30±±±± PBST BSA PBST F41 l00μμμμμμμμl r/min 30±±±± PBST PBST IgG H L l00μμμμμμμμl r/min 30±±±± PBST ABTS A B ll l00μμμμμμμμl A 2A 405nm 1.300±±±± nm 492nm RELPOT OD OD OD 21
22 OD 170 l l560 l RELPOT l52.63 l l OD RELPOT R.P. 3.3 F R.P R.P OD
23 RELPOT RELPOT OD l P ELISA RELPOT mol/LpH 9.6±±±± g 23
24 0.293 g 100 ml PBS ph 7.2±±±± mol/LpH 9.3±±±± g 94 ml l0mol/l ph 9.3±±±±0.1 67ml /PBST0.05Tween20 PBS BSA PBST PBST P P P P IgGH L Kirkegaard & Perry ABTS A BKirkegaard & Perry P l00μμμμμμμμl ±±±± PBST ml 987P 24
25 6ml r/min 60±±±± P ml 11 lml r/min 60±±±± PBST BH 125μμμμμμμμl P l A 250μμμμμμμμl A 125μμμμμμμμl B 2 G H PBST l256 l512 l1024 * * μμμμμμμμl r/min 30±±±± PBST BSA PBST l P 1BB6-3D6 l00μμμμμμμμl r/min 30±±±± PBST 3 25
26 PBST IgG H L l5000 l00μμμμμμμμl r/min 30±±±± PBST ABTS A B l1 100μμμμμμμμl A 2A 405nm 1.300±±±± nm 492nm RELPOT OD OD OD OD RELPOT 116 l l l l OD RELPOT R.P P 1.44 R.P. 1.00R.P
27 OD RELPOT RELPOT OD LT B ELISA
28 RELPOT PBSpH7.0±±±± BSA PBS Tween20 PBSPBST mol/LpH 7.0±±±± g 17.37g l00ml A mol/l 0.17 mol/l 0.17mol/L 25mg 4-50ml 0.17mol/L B mol/L 99m1 lml 30H lml 0.3H ml 0.2mol/L A B mol/L mol/L LT B LT B A- 28
29 LT B (μμμμμμμμl) PBS (μμμμμμμμl) l l l ELISA 1 7.8m1 16 l00mm 2.0ml 2 1.0mol/L ph 12.0±±±±0.1 ph phl ±±±±0.05ml 4 0.5ml 0.5ml 1.0mol/L μμμμμμμμl 1900μμμμμμμμl PBS 13 l00mm ph PBS 8 ELISA 6 LT B 1 LT B 1.0μμμμμμμμg/ml 29
30 2 13 l00mm PBS LT B 2 l32 LT B ng/ μμμμμμμμg/ml l00μμμμμμμμl ±±±±2 2 ±±±± ±±±± PBS μμμμμμμμl 1BSA PBS ±±±± PBS LT B 50μμμμμμμμl3 / 50μμμμμμμμl2 / 30
31 50ng/= ±±±± PBST 1 PBS LT B 50μμμμμμμμl ±±±± BSA PBS A- 50μμμμμμμμl ±±±± PBS μμμμμμμμl ±±±± nm 1.0±±±± nm 630nm RELPOT OD OD OD OD 31
32 RELPOT OD RELPOT R.P. 5.3 LT B 1.62 R.P. 1.00R.P l OD RELPOT RELPOT 32
33 OD C lg 0.25g 100ml ph CF g lml IU/ml L0 10L L L
34 6.2.5 lml 10L ml l0 L L L BTN1 BTN2 BTN3 BTN IAU L0 L+ β L L
35 * * * * / 35
36 36 2 l * * * * /
37 ELISA l A B C D E F G H C C Clostridium Perfringens Type C - Escherichia Coli Bacterin-Toxoid Zizhu C Xing Chanqijiamosuojunbing Dachangganjunbing Erlian Miehuoyimiao K88K99F41987P LT B 1.00 RP C β 10 IU C 2ml
38 l ml /25 10ml /310 20ml / ml/525 50ml/ ml/ 150 /2100 / Division of Pfizer Inc 601 West Cornhusker HighwayLincolnNebraska 68521USA A l
39 C C / C m
2 Ji Chuanranxingfashinangbing HuoyimiaoD22 Zhu Infectious Bursal Disease VaccineLiveStrain D22 D22 SPF 1 /0.1ml 3760 1012 SPF 5 0.2ml5 0.1ml37168 3 710 SPF 20 10 10 21 3 15 /ml 10 10 2 10 3 10 4 3 1012
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