检验医学 2017 年 8 月第 32 卷第 8 期 Laboratory Medicine,August 2017,Vol. 32,No equation showed that the range of cut-off values(cov)was mg

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1 686 检验医学 2017 年 8 月第 32 卷第 8 期 Laboratory Medicine,August 2017,Vol. 32,No. 8 文章编号 : (2017) 中图分类号 :R 文献标志码 :A DOI : /j.issn C1q 在自身免疫性疾病中的临床意义谭立明 1, 丁耀东 2, 陈娟娟 1, 李华 1, 将永清 1, 万雅妮 2, 王丽贇 2 2, 王田 (1. 南昌大学第二附属医院检验科, 江西南昌 ;2. 南昌大学公共卫生学院 2011 级, 江西南昌 ) 摘要 : 目的探讨补体 (C)1q 检测对自身免疫性疾病 (AID) 的临床意义方法选取 2014 年 5 月年 9 月在南昌大学第二附属医院住院的 AID 患者 203 例 [ 自身免疫性甲状腺疾病 (AITD)86 例系统性红斑狼疮 (SLE)56 例类风湿性关节炎 (RA)32 例其他结缔组织病 29 例 ] 及体检健康者 ( 对照组 )100 名, 采用免疫透射比浊法检测 C1q 免疫比浊法检测 C 反应蛋白 (CRP) 间接免疫荧光法(IIF) 检测抗核抗体 (ANA) 和抗双链 DNA(ds-DNA) 抗体线性免疫印迹法 (LIA) 检测抗 Sm 抗体, 并对结果进行分析结果与对照组比较,SLE 组 C1q 水平下降 (P<0.05),RA 组 C1q 水平升高 (P<0.05) C1q 的水平随 ANA 滴度升高而降低 (P<0.05) 抗 ds-dna 抗体 (+) 且抗 Sm 抗体 (+) 组 C1q 水平显著低于抗 ds-dna 抗体 (-) 且抗 Sm 抗体 (-) 组 (P<0.05) CRP 的水平在 AID 各组中均明显升高 (P<0.01) C1q 与 CRP 间的相关系数 > 0.300(P<0.05), 由二者的回归方程计算出 C1q 的临界值 (COV) 范围为 ~ mg/l 定性分析 C1q 与自身抗体的关系 :AID ANA 阳性组 C1q<COV 的异常率高于 ANA 阴性组,ANA(+) 且抗 ds-dna 抗体 (+) 组 C1q<COV 的异常率明显高于其他自身抗体分布模式组,ANA(+) 且抗 Sm 抗体 (+) 或抗 Sm 抗体和抗 ds- DNA 抗体同时阳性的患者 C1q<COV 的异常率明显升高,ANA 阴性组 C1q>COV 的异常率达 67.2% 结论 AID 患者 C1q 水平与 CRP 呈中度正相关,C1q 异常率与某些自身抗体的分布模式 AID 患者的病情相关,C1q 在 AID 中具有一定的临床意义关键词 : 补体 1q; 自身抗体 ; 自身免疫性疾病 ; 系统性红斑狼疮 Complement 1q determination for autoimmune diseases TAN Liming 1,DING Yaodong 2,CHEN Juanjuan 1,LI Hua 1,JIANG Yongqing 1,WAN Yani 2,WANG Liyun 2,WANG Tian 2.(1. Department of Clinical Laboratory,the Second Affiliated Hospital of Nanchang University,Nanchang ,Jiangxi,China;2. Grade 2011,School of Public Health,Nanchang University,Nanchang ,Jiangxi,China) Abstract:Objective To evaluate the role of complement (C)1q determination for autoimmune diseases(aid). Methods A total of 203 AID patients [86 cases of autoimmune thyroid disease(aitd),56 cases of systemic lupus erythematosus(sle),32 cases of rheumatoid arthritis(ra)and 29 cases of other connective tissue diseases] and 100 healthy subjects(healthy control group)were enrolled from the Second Affiliated Hospital of Nanchang University from May 2014 to September Using transmission turbidimetry,turbidimetric immunoassay,indirect immunofluorescence(iif)and linear immunoblot assay(lia),c1q,c-reactive protein(crp),antinuclear antibody(ana),anti-double-stranded DNA(ds-DNA)antibody and anti-sm antibody were determined respectively. Results Compared with healthy control group,c1q level in SLE group was decreased(p<0.05), and that in RA group was increased(p<0.05). The level of C1q decreased with the increasing of ANA titer degrees (P<0.05). The C1q levels in anti-ds-dna antibody positive and anti-sm antibody positive group were lower than those in anti-ds-dna antibody negative and anti-sm antibody negative group (P<0.05). CRP levels in AID groups were increased(p<0.01). The correlation coefficient between C1q and CRP was >0.300(P<0.05). Regression 基金项目 : 江西省卫生厅科研计划支持项目 ( ); 江西省教育厅学位与研究生教育改革项目 ( ,100125) 作者简介 : 谭立明, 男,1963 年生, 主任技师, 主要从事自身免疫性疾病的病因及抗体检测肿瘤分子生物学及实验室管理研究

2 检验医学 2017 年 8 月第 32 卷第 8 期 Laboratory Medicine,August 2017,Vol. 32,No equation showed that the range of cut-off values(cov)was mg/l. For C1q and autoantibodies, the abnormal rate(c1q<cov)was higher in ANA positive group than that in ANA negative group,that in ANA positive with anti-ds-dna positive group was higher than those of other autoantibody distribution types,and that in ANA positive with anti-sm antibody positive or with anti-sm and anti-ds-dna antibodies positive increased. The abnormal rate(c1q>cov)in ANA negative group was 67.2%. Conclusions For patients with AID,C1q has moderate correlation with CRP,the abnormal rate of C1q has correlations with some autoantibody distribution types and the status of patients' illness. Key words : Complement 1q ;Autoantibodies ;Autoimmune diseases ;Systemic lupus erythematosus 自身免疫性疾病 (autoimmune disease, AID) 是机体免疫系统受环境或遗传等因素作用产生针对自身成分的免疫应答而导致自身组织器官损伤或功能障碍的一类疾病 AID 发生的同时, 患者体内常伴有多种特异性自身抗体, 这些抗体对 AID 的临床诊断预后判断及疾病监视有着重要的意义 AID 的发病机制十分复杂, 其中补体 (complement,c) 缺陷或功能异常是 AID 的诱发病因之一 [1] C1q 作为起始分子 C1 的重要成分在 C 系统的经典途径中起到不可或缺的作用 [2] 此外,C1q 作为系统性红斑狼疮 (systemic lupus erythematosus,sle) 的一个诱导因子, 与 SLE 的发生发展存在极大的关联性 [3-4] C 反应蛋白 (C-reactive protein,crp) 除作为炎症反应性指标外, 其另一个重要特性是能与 C1q 结合, 激活经典 C 级联反应 [5] 本研究分析了 AID 患者 C1q 自身抗体和 CRP 水平及其相关性, 以探讨 C1q 在 AID 中的临床意义 1 材料和方法 1.1 研究对象选取南昌大学第二附属医院 2014 年 5 月年 9 月住院的 AID 患者 203 例, 其中自身免疫性甲状腺疾病 (autoimmune thyroid disease, AITD) 患者 86 例 ( 男 12 例, 女 74 例 ), 年龄 (41.73±13.41) 岁 ; SLE 患者 56 例 ( 男 4 例, 女 52 例 ), 年龄 (40.09±14.42) 岁 ; 类风湿性关节炎 (rheumatoid arthritis,ra) 患者 32 例 ( 男 9 例, 女 23 例 ), 年龄 (48.87±9.94) 岁 ; 其他结缔组织病患者 29 例 ( 男 9 例, 女 20 例 ), 年龄 (44.55±18.17) 岁, 其中皮肌炎 9 例混合性结缔组织病 6 例强直性脊柱炎 6 例干燥综合征 4 例硬皮病 2 例血管炎 2 例所有患者的临床诊断均符合国际相应的诊断标准对照组为来自南昌大学第二附属医院同期体检健康者 100 名 ( 男 36 名, 女 64 名 ), 年龄 (45.32±12.39) 岁 AID 患者在性别年龄等方面与对照组比较, 差异无统计学意义 (P>0.05) 1.2 试剂与检测方法 C1q 试剂盒由上海北加生化试剂有限公司生产, 在 AU5400 全自动生化分析仪 ( 免疫透射比浊法, 奥林巴斯产业株式会社 ) 上检测采用 IMMAGE800 全自动特定蛋白分析仪及配套试剂 ( 免疫比浊法, 贝克曼 - 库尔特公司 ) 对 CRP 进行检测自身抗体检测试剂均由欧蒙医学诊断公司提供, 采用间接免疫荧光法 (indirect immunofluoresecence,iif) 检测抗核抗体 (antinuclear antibody,ana) 及抗双链 DNA(double-stranded DNA,ds-DNA) 抗体, 其中在抗 dsdna 抗体的抗原基质片上包被绿蝇短膜虫, 并以异硫氰酸荧光素 (fluorescein isothiocyanate,fitc) 标记的羊抗人 IgG 抗体为荧光二抗, 二者均在尼康 E400 荧光显微镜下进行检测, 线性免疫印迹法 (linear immunoblot assay,lia) 采用抗核抗体谱检测试剂盒及欧蒙自动化免疫印迹仪 EUROBlotMasterⅡ 进行检测所有检测项目均严格按照南昌大学第二附属医院检验科标准操作程序文件中的标准程序及试剂说明书进行操作 1.3 观察指标比较各组血清 C 1 q C R P 自身抗体的水平及阳性率各项指标的参考值 :CRP 为 0~8 mg/ L;C1q 的参考值由 C1q 与 CRP 的回归方程计算得出 ; 自身抗体的定性和半定量结果根据试剂说明书上的标准进行判断 C1q 的测定值不在参考范围内为异常结果, 其他项目测定值高于参考值上限为阳性, 低于上限为阴性

3 688 检验医学 2017 年 8 月第 32 卷第 8 期 Laboratory Medicine,August 2017,Vol. 32,No 统计学方法采用 SPSS 22.0 软件进行统计分析正态分布的计量资料以 x±s 表示, 偏态分布数据在剔除最大值和最小值之后均以 x±s 表示, 多组间比较采用多样本的 SNK 和 LSD 方差分析,Cq1 与 CRP 进行 Pearson 简单相关分析及回归分析定性资料组间比较采用 χ 2 检验以 P<0.05 为差异具有统计学意义 2 结果 2.1 AID 各组 C1q 和 CRP 水平的比较与对照组比较, S L E 组 C 1 q 水平显著下降 ( P < ), R A 组 C 1 q 水平显著升高 ( P < ) ; 将 A I D 患者按 A N A 滴度水平分组, C 1 q 水平随着 A N A 滴度升高而降低 (P<0.05), 且在 ANA 各滴度组内 C1q 与 CRP 呈正相关 (r>0.300,p<0.05) 抗 ds-dna 抗体 (+) 且抗 Sm 抗体 (+) 组 C1q 水平明显下降 (P<0.05) AID 各组 CRP 水平均显著高于对照组 (P<0.01) 见表 1~ 表 3 表 1 AID 各组与对照组 C1q 和 CRP 水平的比较 (x±s) 例数 C1q(mg/L) CRP (mg/l) 对照组 ± ±0.81 * AITD 组 ± ±4.53 *## SLE 组 ±39.08 # 14.68±8.59 *## RA 组 ±65.44 # 27.23±10.04 *## 其他结缔组织病组 ± ±8.97 *## 注 :* 表示剔除最大值最小值之后的统计值 ; 与对照组比较,#P<0.05 ##P<0.01 表 2 不同 ANA 滴度的 AID 患者 C1q CRP 水平的比较及相关性分析例数 C1q(mg/L) CRP(mg/L) C1q 与 CRP 的相关性 r 值 P 值 ANA 阴性组 ± ±10.82 * ANA 组 ± ±7.32 *## ANA 组 ±51.81 # 18.95±9.24 *# ANA 组 ±53.03 ## 9.67±4.86 *## ANA 组 ±62.42 ## 10.05±6.43 *# 注 :* 表示剔除最大值最小值之后的统计值 ; 与 ANA 阴性组比较,#P<0.05 ##P<0.01; 与 ANA 组比较, P<0.05 P<0.01; 与 ANA 组比较, P<0.05 表 3 不同抗 ds-dna 抗体和抗 Sm 抗体分布模式的抗 ds-dna 抗体 AID 患者 C1q 和 CRP 水平的比较抗 Sm 抗体 (x±s) 例数 C1q(mg/L) CRP(mg/L) ± ± ±32.32 ** 15.41±4.67 ** ±28.85 ** 8.18±3.26 ** ±37.14 * 9.21±5.82 * 注 : 与抗 ds-dna 抗体 (-) 且抗 Sm 抗体 (-) 组比较, *P<0.05 **P< 例 AID 患者血清 CRP 与 C1q 的相关和回归分析对 203 例 AID 患者血清 CRP 和 C1q 的检测数据进行相关性分析,C1q 与 CRP 间的相关性不受组内疾病种类的影响 (AID 组 r =0.326,P=0.001; SLE 组 r =0.342,P=0.01; 非 SLE 组 r =0.366, P < ), 其 r 值均 > ( P < ), 均呈中度正相关, 进而用统计学方法建立 AID 组 CRP(X) 与 C1q(Y) 的回归方程 : Y=6.37X C1q 临界值 (cut-off value,cov) 的设定及对 203 例 AID 患者自身抗体和血清 C1q 的定性分析根据 x±3s 计算出 100 名体检健康者 CRP 的正常下限为 0.33 mg/l, 上限为 5.19 mg/l( 表 1), 再以回归方程 Y=6.37X 计算 C1q 的 COV 范围为 ~ mg/l AID 患者血清 C1q<COV 的异常率与 ANA 滴度呈正比 (r=0.64, P<0.05), 抗 ds-dna 抗体阳性率与 ANA 滴度呈正比 (r=0.72,p<0.05),ana 阴性组 C1q>COV 的异常率显著增加, 占 67.2% 见表 4

4 检验医学 2017 年 8 月第 32 卷第 8 期 Laboratory Medicine,August 2017,Vol. 32,No 表 4 不同 ANA 滴度的 AID 患者抗 ds-dna 抗体抗 Sm 抗体阳性率及 C1q 异常率的比较 [ 例 (%)] 例数抗 ds-dna 抗体阳性抗 Sm 抗体阳性 C1q<COV C1q>COV ANA 阴性组 119 0(0.0) 3(2.5) 9(7.6) 80(67.2) ANA 组 21 0(0.0) 1(4.8) 7(33.3) 8(38.1) ANA 组 24 3(12.5) 3(12.5) 10(41.7) 5(20.8) ANA 组 28 7(25.0) 3(10.7) 17(60.7) 3(10.7) ANA 组 11 6(54.5) 1(9.1) 8(72.7) 合计 (7.9) 11(5.4) 51(25.1) 96(47.3) 2.4 不同自身抗体分布模式的 AID 患者 C1q 水平的比较在不同自身抗体分布模式的 AID 患者中, 自身抗体全阴性组,C1q>COV 的患者占 69.0%; ANA(+) 且抗 ds-dna 抗体 (+) 组 C1q<COV 的异常率明显高于其他自身抗体分布模式组 (P<0.05); 其中 ANA 抗 ds-dna 抗体和抗 Sm 抗体同时阳性时,C1q<COV 的异常率最高, 占 75.0% 见表 5 表 5 不同自身抗体分布模式的 AID 患者 C1q 异常率的比较 [ 例 (%)] ANA 抗 ds-dna 抗 Sm 抗体抗体例数 C1q<COV C1q>COV (7.8) 80(69.0) (33.3) (23.4) 8(12.5) (66.7) 1(8.3) (50.0) (75.0) 3 讨论 AID 患者体内存在大量的自身反应性的 T 细胞和 / 或自身抗体, 自身抗体与游离抗原结合形成的抗原 - 抗体复合物, 特别是在抗原量略多时形成的中等大小的可溶性免疫复合物, 随血液循环在全身小血管基底膜或滑液囊沉积下来, 在局部激活 C, 促进免疫复合物和凋亡细胞的清除, 当 C 缺陷或功能异常导致免疫复合物及凋亡的细胞不能及时有效地被清除时, 易诱发 AID [6-8] CRP 是一种高灵敏的急性时相反应蛋白, 在组织损伤和炎症反应时,CRP 的水平迅速升高 [9-10] CRP 结合适当的抗体能通过经典的 C 途径, 激活 C 和增强吞噬细胞对细菌红细胞等的吞噬能力 [11], 此外,CRP 可与 C1q 直接结合而激活 C, 促进免疫复合物和凋亡细胞的清除, 也可结合核抗原并使自身抗原躲避免疫系统监视或加强其清除, 因此 CRP 可用于 AID 病情的评估 [5] C1 是 C 经典激活途径的第一 C 成分, 是一种多聚体分子复合物, 由一个 C1q 分子以钙离子依赖方式与 2 个 C1r 2 个 C1s 分子相连而成 C1q 是其中的一个亚基, 相对分子质量为 , 抗原 - 抗体复合物结合 C1q 后导致 C1q 构象改变从而启动 C 的经典激活途径,C1q 在其中充当起始分子的作用 [12] 血清 C1q 及其抗体与 SLE 狼疮肾炎相关性的研究已有很多报道 [13-15], 张岩等 [13] 发现 C1q 水平在 SLE 患者中下降, 与 ANA 滴度呈负相关, 这与本研究的结果相一致, 提示 C1q 与 SLE 患者病情活动度呈负相关 C1q 缺陷或功能异常, 则不能及时清除免疫复合物, 其沉积在血管壁及某些组织中会诱导自身抗体的产生, 是 SLE 的一个诱发因素 [16-17] C1q 的缺陷或功能异常除会诱发 SLE 外是否也与其他 AID 有关呢? 本研究显示,SLE 患者 C1q 水平低于对照组, 但非 SLE AID 患者血清 C1q 水平高于对照组, 自身抗体的滴度与 C1q 水平也有着一定的相关性, 抗体滴度越高,C1q 水平越低 ; CRP 作为急性时相反应的一个指标, 其水平明显高于对照组, 这与文献 [18-19] 报道的相似 AID 患者血清 C1q 水平与其 CRP 呈正相关, 提示 C1q 与 CRP 相似, 可能为炎症反应因子本研究利用 CRP 与 C1q 的相关性求出 C1q COV 的范围, 通过定性分析进一步发现自身抗体的滴度与患者 C1q<COV 的异常率呈正相关, 滴度越高,C1q<COV 的异常率越高,ANA 阴性

5 690 检验医学 2017 年 8 月第 32 卷第 8 期 Laboratory Medicine,August 2017,Vol. 32,No. 8 患者 C1q>COV 的异常率高达 67.2% 从这些结果可以看出 C1q 与自身抗体关系密切, 对诊断特异性表达抗 ds-dna 抗体和抗 Sm 抗体的 AID 有着重要的临床意义, 在非 SLE AID 患者血清中 C1q 的水平比正常值高, 但都与 CRP 水平呈正相关, 也随着自身抗体滴度的升高而下降上述结果提示,C1q 除了可作为 SLE 的一个诊断指标外, 还可能是一种与 CRP 类似的炎性反应分子, 同时其对与 SLE AID 相关自身抗体也存在着一定的相关性联合检测 C1q CRP 和自身抗体有助于其他 AID 的辅助诊断, 对疾病活动性的判断及预后评估亦具有一定的临床指导意义参考文献 [1] 李圣杰, 张爱平, 曹文俊. 补体缺陷及其疾病 [J]. 检验医学,2015,30(2): [2] NAYAK A,PEDNEKAR L,REID K B,et al. Complement and non-complement activating functions of C1q:a prototypical innate immune molecule[j]. Innate Immun,2012,18(2): [3] UWATOKO S,AOTSUKA S,OKAWA M,et al. Characterization of C1q-binding IgG complexes in systemic lupus erythematosus[j]. Clin Immunol Immunopathol,1984,30(1): [4] MANDERSON A P,BOTTO M,WALPORT M J. The role of complement in the development of systemic lupus erythematosus[j]. Annu Rev Immunol,2004,22: [5] 韩杨, 崔天盆, 程贵莲, 等. C 反应蛋白与自身免疫性疾病 [J]. 中华检验医学杂志,2014,37 (11): [6] 王更银, 白云, 陈兴. 自身免疫性疾病的补体损伤机制及研究进展 [J]. 北京军区医药,2001,13 (3): [7] MOLLNES T E,HOGASEN K,DE CAROLIS C,et al. High-dose intravenous immunoglobulin treatment activates complement in vivo[j]. Scand J Immunol,1998,48(3): [8] CARROLL M C. The role of complement in B cell activation and tolerance[j]. Adv Immunol,2000, 74: [9] [10] [11] [12] [13] [14] [15] [16] [17] [18] [19] THIELE J R,ZELLER J,BANNASCH H,et al. Targeting C-reactive protein in inflammatory disease by preventing conformational changes[j]. Mediators Inflamm,2015,2015: DU CLOS T W. Pentraxins:structure,function, and role in inflammation[j]. ISRN Inflamm,2013, 2013: KOORTS A M,LEVAY P F,BECKER P J,et al. Pro- and anti-inflammatory cytokines during immune stimulation:modulation of iron status and red blood cell profile[j]. Mediators Inflamm,2011,2011: BALLY I,ANCELET S,MORISCOT C,et al. Expression of recombinant human complement C1q allows identification of the C1r/C1s-binding sites[j]. Proc Natl Acad Sci U S A,2013,110(21): 张岩, 杨琴, 连丽峰. 补体 C1q 的功能及其与系统性红斑狼疮的相关性 [J]. 检验医学与临床,2011, 8(2): 徐芳芳, 卜宪敏, 魏丽, 等. C1q 的沉积对 V 型狼疮性肾炎和原发性膜性肾病的鉴别诊断意义 [J]. 中国中西医结合肾病杂志,2013,14(4): HU S Y,JIA X Y,YANG X W,et al. Glomerular C1q deposition and serum anti-c1q antibodies in antiglomerular basement membrane disease[j]. BMC Immunol,2013,14:42. 肖慧捷, 徐可. 补体缺陷与系统性红斑狼疮发病机制的关系 [J]. 中华实用儿科临床杂志,2013,28 (5): 孙铀, 张凤山, 张志毅. 系统性红斑狼疮患者 C1q 受体和 C1q 抗体的表达及其与发病相关性的研究 [J]. 中华风湿病学杂志,2007,11(6): 王兰, 张丽, 江淑芳. C- 反应蛋白与自身免疫性疾病的关系 [J]. 检验医学与临床,2011,8(16): 张秋业, 柏翠. 自身免疫与炎症性疾病的实验室检查 [J]. 中华实用儿科临床杂志,2015,30(9): ( 收稿日期 : ) ( 本文编辑 : 姜敏 )

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600 现代药物与临床 Drugs & Clinic 第 31 卷第 5 期 2016 年 5 月 were significantly decreased, but the levels of IL-12 in two groups were significantly increa 现代药物与临床 Drugs & Clinic 第 31 卷第 5 期 2016 年 5 月 599 喘可治注射液联合细辛脑注射液治疗小儿毛细支气管炎的临床研究唐辉英, 佘定平, 马颐娇深圳市儿童医院呼吸科, 广东深圳 518026 摘要 : 目的探讨喘可治注射液联合